中国科学技术信息研究所--国家工程技术数字图书馆

[学位论文] 段菊兰广西医科大学 1999年硕士导师: 胡学超;章潭莉共811页

摘要 : 近年来,国外对Lyocell纤维生产工艺的理论研究和Lyocell纤维的工艺开发十分活跃.Lyocell纤维在奥地利、英国、美国等国家已实现了工业化生产. 与此同时,国内一些单位如东华大学(原中国纺织大学) 等研究了纤维素浆粕在NMMO/H<,2>O体系中的溶解性能及溶液的... 展开

关键词 : NMMO(N-甲基吗啉-N-氧化物) Lyocell纤维纺丝速度凝固浴浓度凝固浴温度皮芯结构

2. 猫豆产业链支撑技术研究

[学位论文] 蒋伟哲广西医科大学 2011年博士导师: 王乃平共589页

摘要 : 目的:以猫豆为原料生产左旋多巴有很大的市场潜力。研究猫豆产业链一套支撑技术，为广西打造猫豆产业奠定坚实基础。方法:通过对猫豆药材开展系列研究，包括猫豆的应用基础研究、猫豆药材种植技术研究、猫豆的应用研究、猫豆中左旋多巴提取工艺... 展开

关键词 : 猫豆左旋多巴提取工艺豆渣保鲜

[学位论文] 廖锡文广西医科大学 2019年博士导师: 彭涛共379页

摘要 : 研究内容:本研究分为五部分进行研究:1.乙肝相关性原发性肝细胞癌切除术后行TACE致ALT, AST变化的临床病理特征和预后分析及全外显子单核苷酸多态性特征筛查。2.乙肝相关性原发性肝细胞癌切除术后行TACE致ALT, AST变化的候选单核苷酸多态性位点高尔基... 展开研究内容:本研究分为五部分进行研究:1.乙肝相关性原发性肝细胞癌切除术后行TACE致ALT, AST变化的临床病理特征和预后分析及全外显子单核苷酸多态性特征筛查。2.乙肝相关性原发性肝细胞癌切除术后行TACE致ALT, AST变化的候选单核苷酸多态性位点高尔基体SNAP受体复合物成员2(golgi SNAP receptor complex member2，GOSR2)-rs197922的二期队列验证。3.基于全基因组数据集对GOSR2基因在原发性肝细胞癌中的临床应用价值及分子机制研究.4.乙肝相关性原发性肝细胞癌GOSR2表达水平和rs197922的临床病理特征及预后分析。5.GOSR2基因在原发性肝细胞癌中的生物学功能鉴定及其在正常肝细胞系中与ALT，AST的调控关系研究。第一部分乙肝相关性原发性肝细胞癌切除术后行TACE致ALT，AST变化的临床病理特征和预后分析及全外显子单核苷酸多态性特征筛查目的:本研究尝试通过GWAS方法对广西乙肝相关性原发性肝细胞癌切除术后行TACE致ALT, AST变化的全外显子单核苷酸多态性特征进行筛查，并分析其临床病理特征和预后。方法:收集49例在广西医科大学第一附属医院行肝切除术的乙肝相关性原发性肝细胞癌患者，且术后行TACE术。根据患者TACE术前和术后ALT和AST的变化进行分组，对这些患者癌组织进行全外显子芯片扫描并进行全外显子关联分析。结果:根据患者TACE术前和术后ALT和AST的变化进行全外显子关联分析，我们筛选了1247个P＜0.05的候选SNPs位点。通过ICSNPathway分析我们共鉴定出17个具有影响通路改变的SNPs位点(包括rs75387493，rs2271683, rs11768465, rs8207, rs28365927, rs1344642, rs1863704,rs10160013, rs4036, rs2235324, rs17183814, rs7973658, rs34550074,rs3740168，rs197922，rs3790525，rs41309181)，发现了4条SNP-Gene-Pathway的调控机制。通过生物信息学分析，利用GeneMANIA在线分析工具发现这些17个候选SNPs位点所在的基因与ALT和AST的编码基因具有共表达互作关系。通过GTEx数据库发现这17个SNPs中的高尔基体SNAP受体复合物成员2(golgi SNAP receptor complex member2，GOSR2)-rs197922在肝脏等多个正常组织中具有表达数量性状基因座关系。结论:本研究筛选出17个潜在具有SNP-Gene-Pathway调控潜力的SNPs，其中GOSR2-rs197922位点可能参与调控血清ALT和AST。第二部分乙肝相关性原发性肝细胞癌切除术后行TACE致ALT,AST变化的候选单核苷酸多态性立点GOSR2-rs197922的二期队列验证目的:本研究通过收集独立于一期GWAS队列的乙肝相关性原发性肝细胞癌患者进行全外显子关联分析结果的二期队列验证。材料方法:本研究收集于2014年至2017年在广西医科大学第一附属医院肝胆外科行肝脏肿瘤切除手术且术后行TACE术的乙肝相关性原发性肝细胞癌患者的癌组织，通过Sanger法对这些患者进行高尔基体SNAP受体复合物成员2(golgi SNAP receptor complex member2，GOSR2)-rs197922位点进行基因分型，分析候选位点与TACE术前术后血清ALT和AST变化的关系。结果:二期验证队列共纳入88例乙肝相关性原发性肝细胞癌接受肝切除术后行TACE治疗的患者，其中rs197922位点的基因型分布如下:AA基因型23例，AG基因型43例和GG基因型22例。通过卡方检验和Ligistic回归分析，我们未能观察到rs197922基因型分布与乙肝相关性原发性肝细胞癌患者肝切除术后接受TACE治疗后血清ALT和AST的变化相关。结论:由于纳入二期验证队列的乙肝相关性原发性肝细胞癌患者TACE化疗药物方案的改变，我们未能观察到rs197922位点的基因型与TACE术后ALT和AST水平变化显著相关。第三部分基于全基因组数据集对GOSR2基因在原发性肝细胞癌中的临床应用价值及分子机制研究目的:本研究的目的是基于GEO和TCGA数据库中原发性肝细胞癌的全基因组数据集对高尔基体SNAP受体复合物成员2(golgi SNAP receptorcomplex member2，GOSR2)基因的临床意义进行探索，及利用生物信息学方法对该基因在HCC中的分子机制进行分析。材料与方法:本研究分别纳入GSE14520和TCGA的212个和370个原发性肝细胞癌患者。通过诊断ROC和生存分析探索GOSR2基因的临床应用价值。随后基于全基因组数据对GOSR2进行差异表达基因、共表达基因和基因集富集分析等生物信息学方法探索其潜在的分子机制。结果:通过GSE14520和TCGA队列的验证，我们发现GOSR2基因在原发性肝细胞癌癌组织中表达量上调，高表达GOSR2基因的原发性肝细胞癌患者具有较短的无复发生存时间和总生存时间。通过比较高、低表达GOSR2基因的原发性肝细胞癌患者之间的全基因组表达谱数据，筛选两组之间的差异表达基因和进行基因集富集分析，以及GOSR2的共表达基因，以及通过生物信息学方法进行富集发现GSOR2可能通过调控细胞增殖、周期、NF-kB和Wnt等信号通路参与原发性肝细胞癌生物学行为的调控。结论:GOSR2可能具有作为原发性肝细胞癌诊断和预后生物标志物的潜力。其生物学功能可能涉及细胞增殖和周期等信号通路的调控。第四部分乙肝相关性原发性肝细胞癌GOSR2表达水平和rs197922的临床病理特征及预后分析目的:本研究通过评估高尔基体SNAP受体复合物成员2(golgi SNAPreceptor complex member2，GOSR2)免疫组化表达量和rs197922的基因型分布探索他们作为乙肝相关性原发性肝细胞癌生物标志物的潜在临床应用价值，同时分析rs197922在乙肝相关性原发性肝细胞癌中的表达数量性状基因座(expression Quantitative Trait Loci,eQTL)特性。材料方法:本研究通过免疫组化方法对乙肝相关性原发性肝细胞癌患者的癌组织进行GOSR2基因的免疫组化染色，以及对rs197922位点进行基因分型，比较不同GOSR2基因表达量和不同rs197922基因型患者之间的临床病理特征和预后差异。结果:本研究纳入342例广西乙肝相关性原发性肝细胞癌患者，通过多因素生存分析比较，我们发现GOSR2基因免疫组化阴性和阳性染色患者的无瘤生存和总体生存时间的差异未达到统计学显著性。但是，我们发现rs197922位点的基因型在非根治性切除等亚组的原发性肝细胞癌患者中与预后显著相关。结论:本研究中我们观察到GOSR2基因免疫组化表达水平与乙肝相关性原发性肝细胞癌患者预后无关，但是我们发现到rs197922基因型分布在特定的乙肝相关性原发性肝细胞癌亚组中具有作为预后分子标志物的潜力。第五部分 GOSR2基因在原发性肝细胞癌中的生物学功能鉴定及其在正常肝细胞系中与ALT，AST的调控关系研究目的:本研究通过在肝癌细胞株中沉默高尔基体SNAP受体复合物成员2(golgi SNAP receptor complex member2，GOSR2)基因探索其在原发性肝细胞癌中的生物学功能，并探索其在正常肝细胞中在TACE化疗药干预的条件下与ALT和AST的调控关系。材料方法:利用小干扰RNA(Small interfering RNA，siRNA)技术在肝癌细胞株(MHCC-97H，Hep-G2和HCC-M)和正常肝细胞株(HL-7702)中沉默GOSR2基因，通过Westem Blot，RT-PCR，细胞划痕、增殖、侵袭等实验验证GOSR2生物学功能。通过化疗药物(5-氟尿嘧啶，吡柔比星，顺铂和洛铂)干预探索GOSR2在正常肝细胞株中与ALT和AST的调控关系。结果:通过WB，RT-PCR验证siRNA在细胞株中的沉默GOSR2的效果，并通过细胞划痕、增殖、侵袭等实验证实在肝癌细胞株中抑制GOSR2基因的表达可以显著抑制肝癌细胞的迁移、增殖和侵袭能力。在正常肝细胞株中沉默GOSR2基因表达，我们未观察到经化疗药物干预后正常肝细胞株分泌ALT和AST有明显变化。结论:本研究证实GOSR2基因在肝细胞癌中可能起着一个癌基因的角色，但本研究并未观察到其表达量的变化与ALT和AST在正常肝细胞株中经化疗药干预后存在显著的直接调控关系。收起

关键词 : 原发性肝细胞癌经导管动脉化疗栓塞术谷丙转氨酶谷草转氨酶单核苷酸多态性

4. 卵巢恶性肿瘤治疗中几个热点问题的循证医学研究

[学位论文] 余冬青广西医科大学 2004年硕士导师: 李力;陈心秋共371页

摘要 : 卵巢癌是妇科肿瘤中死亡率最高的恶性肿瘤.许多卵巢上皮性癌在诊断时就已经是晚期.虽然肿瘤细胞减灭术和规则化疗已经成为标准的卵巢癌治疗措施,卵巢癌总的5年生存率仍只有30%左右.该研究就卵巢癌治疗中初次手术腹膜后淋巴结清扫、晚期卵巢癌先期化疗... 展开

关键词 : 循证医学卵巢癌妇科肿瘤肿瘤预后

5. 原发性肝癌切除术同期胆囊切除术必要性研究-广西医科大学第一附属医院真实世界研究（2013年-2016年）

[学位论文] 杨成昆广西医科大学 2020年博士导师: 彭涛共350页

摘要 : 关键:词原发性肝癌;胆囊病变;乙型肝炎病毒;肝切除术;复发研究内容:本研究分为下列4部分:1.围绕医疗大数据背景下探讨医院数据来源、系统分布及大数据分析存在的挑战;2.基于住院人群，探讨住院患者乙型肝炎流行趋势，并针对胆囊病变与临床因素、... 展开关键:词原发性肝癌;胆囊病变;乙型肝炎病毒;肝切除术;复发研究内容:本研究分为下列4部分:1.围绕医疗大数据背景下探讨医院数据来源、系统分布及大数据分析存在的挑战;2.基于住院人群，探讨住院患者乙型肝炎流行趋势，并针对胆囊病变与临床因素、手术、介入治疗、胆囊收缩功能、影像学漏诊率之间关联进行多维分析;3.依据真实世界研究方法鸟瞰肝细胞癌复发风险临床表观全景;4.利用跨平台数据库及全外显子关联分析初步窥探NM23在肝癌复发机制第一部分医院数据来源、系统分布及大数据分析存在的挑战目的:探讨广西医科大学第一附属医院信息流向、系统分布及数据优势，总结医疗大数据分析存在的困难和挑战。材料与方法:由计算机管理中心、病案信息科等多学科协助，了解医院信息管理构架、数据库归档差异。收集住院患者籍贯及住址信息绘制城市分布地图，饼图形式描述住院病人人数占比。统计各年度广西医科大学第一附属医院总住院人数、门急诊及医技科室年工作量。分析数字化医疗进程中需重视医疗大数据处理的困难和挑战。结果:广西医科大学第一附属医院门诊及住院患者信息流向各个不同系统，由计算机管理中心管理，影像系统缺乏身份辨识ID，早期电子化病历存在非实名制就诊给后期数据处理产生混淆。广西医科大学第一附属医院住院病例基本覆盖全区，南宁市内病例占比约50％。2013年-2018年各年度住院人数在2014年后超10万人次，2013年门急诊总人次突破300万，2014年-2016年门急诊总人次在330万左右且逐年增长，影像学每年数据量总和均在20万人次以上，而检验项目上则在2012年已超过3000万条数据，2016年检验总量达到4000万数据量。在保证数据安全性前提下，数据采集、质量控制及标准化处理需要跨领域多学科合作，以满足临床科研需求。结论:医院医疗资源丰富，满足开展医疗大数据分析的条件，但数据挖掘过程可能遇到的困难和挑战需要得到重视。第二部分基于住院人群肝炎流行、胆囊病变相关多维分析目的:基于广西医科大学第一附属医院住院病例数据探讨住院人群肝炎流行趋势、胆囊结石发生相关危险因素、HCC患者行肝切除术保留胆囊后胆囊病变发生率及发生时间差异。评价手术对胆囊收缩功能的影响并对临床实践中影像学胆囊结石漏诊率分析。材料与方法:1.收集广西医科大学第一附属医院2013年-2016年363199名行乙肝免疫学检测住院患者年龄、籍贯、肝炎检测、肝功能检查、抗病毒治疗病史进行统计描述;2.收集广西医科大学第一附属医院2013年-2016年253843人年龄大于18周岁住院病例的抽血检查项目（包括肝功能、血脂检查、空腹血葡萄糖等）及影像学报告、入院记录初步诊断与既往史。通过参数检验分析患有胆囊结石与未患胆囊结石的两组病例检验值差异，逻辑回归分析评估暴露因素与胆囊结石发生之间的关联强度。3.纳入行HCC切除术但胆囊保留者760例，追溯其首次行肝癌切除手术时影像学记录报告、现病史、既往史内容，逻辑回归分析评估相关因素与肝切保胆术后胆囊病变发生的关联强度，生存分析方法比较各因素亚组在肝切保胆术后胆囊病变发生时间差异及风险。4.对2018年7月-2019年12月广西医科大学第一附属医院肝胆外科228名住院治疗患者行胆囊收缩功能测定检查，收集脂餐前后胆囊径线，参数或非参数方法评估术前、术后胆囊收缩率差异。5.对2015年1月-2017年12月广西医科大学第一附属医院住院1695名行肝部分切除患者术前影像学再评估，分析影像学胆囊结石漏诊影响因素。结果:1.广西医科大学第一附属医院住院患者HBsAg阳性率为12.8％，HBsAg阳性住院病人主要来源于广西南宁市且主要在31周岁-70周岁年龄段，与中国CDC数据一致。所有HBsAg阳性住院病人中有22.7％病例正在使用或曾经使用抗病毒治疗，部分肝功能转氨酶异常者未进行抗病毒治疗。2.广西医科大学第一附属医院2013年-2016年住院病例胆囊结石阳性率为3.1％。校正年龄、性别、民族、吸烟饮酒史影响因素，多因素回归分析提示高血压病、超重、胆红素及肝功能酶谱升高、高空腹血糖、HBV感染为胆囊结石发生危险因素（P＜0.05）。3.行肝癌切除术但胆囊保留的HCC患者术前胆囊病变患病率12.6％，术后胆囊病变患病率36.6％。生存分析提示术前肝功能酶谱、总胆固醇异常的患者术后胆囊病变发生时间较短，为胆囊病变危险因素（P＜0.05）。对于术前已有非结石性胆囊病变的患者术后发生胆囊结石的时间缩短，胆囊结石风险明显升高（P＜0.05）。4.肝切除术时同期保留胆囊者在住院期间行B超检查胆囊泥沙样结石检出率14.3％，配对HCC患者术前与术后胆囊收缩率比较具有统计学差异，术后胆囊收缩率弱于术前，有胆囊病变的患者术前胆囊收缩率明显低于无胆囊病变的患者。5.对行肝切除术患者术前胆囊内胆囊结石影像学再评估，结果提示腹部B超及CT/MRI均有不同程度的胆囊结石漏诊，多种因素影响胆囊结石检出及报告。结论:1.广西地区HBV流行度较全国及部分城市高，30-60周岁人群为目前筛查及治疗重点人群，部分肝功能发生改变的HBsAg阳性患者需加强抗病毒治疗;2.住院患者胆囊结石发生可能与性别、年龄、BMI、民族、肝功能改变、血脂、空腹血糖及HBV感染相关，具有相关危险因素患者应重点随访;3.行肝肿瘤切除保留胆囊的HCC患者术后胆囊结石及胆囊病变比例及发生风险升高，临床医师在手术前应告知患者风险;4.肝切除术保留胆囊的患者术前与术后胆囊收缩率的比较有待进一步研究;5.人工智能手段可能有助于增强临床工作者提高影像学诊断能力，降低胆囊结石漏诊率。第三部分肝细胞癌复发风险临床全景分析-真实世界研究目的:利用真实世界研究方法描画HCC（Hepatocellularcarcinoma，肝细胞癌）复发相关危险因素临床表观全景。材料与方法:筛选入组2013年-2016年广西医科大学第一附属医院曾行HCC切除术的1814例住院患者，收集患者首次HCC切除手术术前、术中、术后指标，包括术前检验项目、影像学检查、手术记录、麻醉记录、术后并发症等。通过随访信息获取患者首次HCC复发部位、个数、治疗方式等信息。描述性分析入组病例各项指标占比及肿瘤在肝脏内分布信息，单因素生存分析用于比较各因素亚组复发时间及风险差异。结果:入组HCC病例中男女比例为6.4∶1，79％的病例血清HBsAg阳性，19.6％的病例有肝吸虫感染，705例(38.9％)患者AFP(Alphafetoprotein，甲胎蛋白)＜20ng/ml，Child-Pugh肝功能分级A级患者共1635例，大肝癌(≥10cm)315例，76.1％为单个肿瘤，BCLC分期0/A共1227例(67.6％)，术中出血低于500ml共936例(51.6％)，超过1/4的肝肿瘤切除手术时长短于3小时，76.2％为R0切除，经受过抗病毒治疗的患者有1228例。可查询发生术后并发症者855例，Clavien-Dindo分级Ⅲ级以上者230例，ISGLS肝功能不全、胆漏、术后出血B级以上发生率分别为1.8％、0.7％、1.9％，其他并发症以肺部感染、术后胸水居多。入组HCC病例中位随访时间为428天（四分位数间距为131天-1131天，平均值为750天），术后发生HCC肝内复发或肝外转移者961例(53.0％)，复发再手术271例(14.9％)。HCC患者原发灶位于/侵犯S7频次最高，单结节单肝段肿瘤S4占比最高(37.7％)，肿瘤首次复发肝段占比最高为S8(21.5％)，胆囊床旁(S4/5/6)复发病灶占比约为46％。生存分析提示不同BCLC、CNLC2017、HKLC分期中位复发时间存在差异，高AFP血清水平与MVI发生率在各分期越差则累积百分比越高。Cox生存分析提示术前异常检验指标、差的肝癌临床分期和病理检视、发生术后并发症等为影响HCC术后复发的危险因素，术中肝门阻断时间、手术总用时不影响术后复发。利用多因素与分层生存分析，结果提示胆囊切除并不是HCC患者肝切术后肿瘤复发的独立危险因素。结论:通过多种临床证据进行整合，描画HCC患者首次行肝肿瘤切除术后的临床表观全景分析，展示了术前、术中、术后各项可能影响HCC患者术后复发的危险因素，为HCC患者预后评估及后续治疗提供了方向。第四部分全外显子关联分析NM23在肝癌转移复发机制的初步探讨目的:利用公共数据库及全外显子关联分析探讨HCC组织中抗肿瘤转移基因NM23(NME/NM23nucleosidediphosphatekinase1，NME/NM23核苷二磷酸激酶1)表达水平和相关影响遗传因素。材料与方法:通过多平台表达谱数据库分析NM23在HCC组织癌和癌旁表达差异并评估其组织区分能力及预后价值。利用全基因组表达数据进行GSEA分析对NM23表达水平在HCC发生发展进程涉及基因、通路进行探索。纳入从2005年至2013年在广西医科大学第一附属医院住院治疗的424例行NM23免疫组织化学染色检查的HBV相关HCC患者，利用全外显子芯片扫描组织样本得到SNPs（singlenucleotidepolymorphismsites，单核苷酸多态性位点）信息，经关联分析及生物信息学处理质量控制后样本和SNPs获取影响NM23表达候选SNPs及母本基因。利用回归模型分析候选SNPs及单倍体探讨其与NM23表达水平的关联，生存分析评估候选SNPs、单倍体及母本基因在HBV相关HCC患者的预后价值。运用GTEx数据库对候选SNPs组织中的表达数量性状基因座进行定位及转录水平分析。结果:在28个HCC数据集中，26个数据集的HCC癌组织NM23表达水平高于癌旁组织，ROC曲线分析显示其中25个数据集NM23表达水平在诊断HCC癌组织具有高的区分度且有统计学差异（P＜0.05）。GSEA显示NM23对HCC转移抑制体现在RNA转录及蛋白翻译过程。对质量控制后筛选的候选样本及SNPs进行全外显子关联分析，确定了位于候选基因PSORS1C1基因6个位点和STARD3基因2个位点为候选SNPs。有序分类logistics回归分析结果提示候选SNPs及单倍体对NM23表达水平具有累积效应。候选基因PSORS1C1与NM23表达水平呈负相关，而STARD3与NM23表达水平为正相关关系（P＜0.05）。生存分析显示候选基因PSORS1C1上的SNP位点rs541820233、rs556285588、rs560052000和rs3095301与HBV相关HCC患者预后相关，不同基因型及单体型在总生存和无瘤生存中预后存在差异（P＜0.05）。经GTEx数据库筛选，候选SNPs位点rs1877031、rs3095302、rs3131003、rs11869286不同基因型在肝组织中具有表达数量性状基因座关系。结论:候选基因PSORS1C1和STARD3中的SNPs与HBV相关HCC患者的NM23表达水平和临床结局有关，这可能是HCC患者潜在的生物标志物和治疗靶点。收起

关键词 : 肝细胞癌肝切除术真实世界研究临床分期

6. 急性等容血液稀释对血流动力学及氧代谢的影响

[学位论文] 刘敬臣广西医科大学 1999年硕士导师: 谭冠先共332页

摘要 : 研究术前急性等容血液稀释对血流动力学及氧代谢的影响,探讨安全的血液稀释方法 .两组病人各时点的血流动力学均无显著变化(P>0.05).A组血液稀释前后,SI、CI和SVR无明显升高和降低(P>0.05),DO<,2>随Hb的降低而下降(P<0.01),但仍在安全范围,VO2、ERP2无明显改变(P>0.05),动脉血乳酸无显著升高(P>0.05),但... 展开

关键词 : 血液稀释血流动力学氧代谢

7. 单肺通气麻醉在胸科手术中应用的临床与实验研究

[学位论文] 黄冰广西医科大学 2012年博士导师: 唐步坚共327页

摘要 : 第一部分:单肺通气麻醉在胸外科的应用及其机械通气相关性肺损伤（文献综述）单肺通气麻醉技术的发展和进步，对胸外科手术的开展和进步产生了巨大的影响，使得气管、支气管成形术、支气管袖状切除术得以飞速发展，也为肺癌根治术、食管癌根治术... 展开第一部分:单肺通气麻醉在胸外科的应用及其机械通气相关性肺损伤（文献综述）单肺通气麻醉技术的发展和进步，对胸外科手术的开展和进步产生了巨大的影响，使得气管、支气管成形术、支气管袖状切除术得以飞速发展，也为肺癌根治术、食管癌根治术提供了良好的手术条件，近年来更是电视辅助胸腔镜技术发展的根本保证。但是，在单肺通气麻醉的过程中，少数病人发现了与单肺通气有关的并发症，如:通气期间的低氧血症、肺萎陷后的复张性肺水肿，学科内有对单肺通气安全性的疑问。我们因此对该专题做了文献复习，包括了单肺通气麻醉对胸外科的影响;单肺通气麻醉的不良反应和麻醉后并发症;国内外对单肺通气麻醉的临床研究;单肺通气麻醉在动物体内试验的研究情况。同时，为了寻找对单肺通气麻醉相关性肺损伤的研究方法，我们还复习了与机械通气相关性肺损伤的研究进展和研究方法，以其为进一步的进行单肺通气相关性肺损伤的研究寻找立项依据和技术路线。第二部分:单肺通气麻醉的临床资料回顾及系统评价同第一章胸科手术患者手术后恢复时间延长的多因素非条件logistic回归分析目的:研究胸科手术病人在麻醉科PACU（麻醉后恢复室）滞留时间（从进入恢复室到送出恢复室）延长的相关因素，了解单肺通气(OLV)麻醉是否成为胸科手术的独立风险。方法:在麻醉科档案室查出2004年8月至2008年10月所有胸科手术病人的麻醉记录单，共得495例记录完善的病历。在麻醉记录单、病案室存档病例、电子医嘱上摘录所需的各项指标，以PACU滞留时间作为因变量(Y)，建立自变量(X1……n)表（表1-1），按logistic回归分析模型的要求进行量化和赋值，其中OLV麻醉赋值为X=1，双肺通气(TLV)通气麻醉赋值为X=0。将所有信息逐条输入Excel表格，建立自变量数据库。使用SPSS13.0软件包对数据进行单因素、多因素非条件logistic回归分析。结果:以PACU时间(Y)≧150min取值为1，Y＜150min取值为0。495病例中，男:女比例为2.36(348/147)，其中113例Y=1，总检出率为22.8％(113/495)。单因素及多因素分析结果提示，引起病人PACU滞留时间延长的主要危险因素是年龄(OR=0.000)、手术方式(OR=0.094)、尿量(OR=0.000)、ASA分级(OR=0.004)、心血管活性药物使用(OR=0.002)共5项。结论:影响胸科病人手术麻醉后恢复的主要原因是，病人年龄、手术方式以及器官功能状况。麻醉医生以及恢复室护士均应该对这些因素引起重视。第二章单肺通气和双肺通气麻醉在胸科手术中的安全性比较:a metaanalysis 目的:系统评价胸科手术麻醉中单肺通气和双肺通气安全性。方法:计算机检索Cochrane图书馆、Embase、PubMed和CBM，搜集所有非心脏手术的胸科手术麻醉中分组为单肺通气组和双肺通气组临床对照试验，按Cochrane系统评价的方法评价纳入研究质量，并使用RevMan5.0软件对纳入研究进行Meta分析。结果:最终纳入5个研究，包括3个RCT，1个非随机对照试验，1个回顾性试验。Mata分析结果显示，单肺通气组和双肺通气组与血气相关的并发症（包括低氧血症，高碳酸血症）[OR=0.68，95％CI[0.31-1.51]P=0.46]、与气管内插管相关的并发症（包括导管异位，肺分隔不良，声音嘶哑）[OR值153，95％CI[0.25-9.58] P=0.65]、循环系统并发症（包括血流动力学不稳，心律失常）[OR=1.00，95％CI[0.17-6.05]，P=1.00]、呼吸系统并发症（包括肺炎，肺水肿，肺不张，ARDS）[OR=0.68，95％CI[0.31-1.51] P=0.35]差异无统计学意义。结论:按现有证据单肺通气组和双肺通气组与血气相关的并发症、与气管内插管相关的并发症、循环系统并发症、呼吸系统并发症相似，但是血液系统并发症、外科并发症等尚不能判断，需要更多更好的临床试验来进一步证实。第三部分:单肺通气麻醉在胸科手术中应用的临床研究第一章单肺通气麻醉行肺科手术期间动脉血中细胞因子和氧自由基的变化第一节单肺通气麻醉行肺科手术期间动脉血中IL-6和IL-8的变化目的:观察单肺通气(OLV)麻醉肺叶切除术患者动脉血中IL-6、IL-8的变化，探讨OLV对肺内炎症反应的影响。方法:择期行肺叶切除术的病人20例，ASAⅠ～Ⅱ级，随机分为单肺通气组（O组）和双肺通气组（D组），两组采用统一的术前用药、麻醉用药和检测手段。单肺组于麻醉诱导插管后即采取单肺通气，胸内操作结束后即双肺通气。分别于麻醉前(T0)、机械通气(MV)后30min(T1)、机械通气后1h(T2)、机械通气后2h(T3)、胸内操作结束后1h(T4)、胸内操作结束后2h(T5)、术后24h(T6)、术后48h(T7)采取动脉血3ml迅速离心，取上层血浆于-70℃超低温冰箱保存，用ELISA法测定血浆中IL-6、IL-8水平，另采取动脉血2ml送检验科查红细胞压积(Hct)。结果:(1) IL-6:双肺组和单肺组均在机械通气后1h(T2)开始明显上升（P＜0.01）、胸内操作结束后2h(T5)达高峰、术后24h(T6)回降、术后48h(T7)仍未恢复到麻醉前水平（P＜0.05）。组间比较，T2、 T3、T4、T5、T6单肺组高于双肺组(P＜0.05)，T0、T1、 T7两组间无明显差异(P＞0.05)。(2) IL-8:双肺组和单肺组均在机械通气1h后(T2)开始上升（P＜0.05）、胸内操作结束后2h(T5)达高峰、术后24h(T6)回降、术后48h(T7)仍未恢复到麻醉前水平(P＜0.05)。组间比较，T3、T4、T5、T6单肺组高于双肺组(P＜0.05)，T0、T1、T2、 T7两组间无明显差异（P＞0.05）。结论:①机械通气，包括双肺通气和单肺通气都引起了术中和术后IL-6、IL-8水平的升高，说明了两种机械通气都引发了肺组织的炎症反应。②机械通气一段时间后，单肺通气组IL-6、IL-8水平大于双肺通气组，表明术中单肺通气时所引起的肺部炎症反应比双肺通气时更加严重。③单肺组IL-6和IL-8的表达水平在术后48小时回降到与双肺组同等水平，说明在本研究的持续单肺通气时间内，单肺通气所导致的肺部炎症反应在手术后恢复期并不比双肺通气麻醉更严重。第二节单肺通气麻醉行肺科手术期间动脉血中XOD、MPO和PMN的变化目的:观察全身麻醉行肺叶切除术患者单肺通气(One-lung Ventilation，OLV)和双肺通气(Total-lung Ventilation，TLV)不同通气模式下血黄嘌呤氧化酶(XanthineOxidase，XOD)、过氧化物酶(Myeloperoxidase，MPO)活性改变和PMN计数，了解OLV行肺叶切除术体内氧自由基代谢的情况。方法:肺癌行肺叶切除术患者20例，随机分为OLV实验组（O组）和TLV对照组（D组），每组10例。A组在手术开始后OLV，手术结束恢复TLV;B组在手术开始后一直使用TLV。两组患者分别在术前(T0)、手术开始0.5h(T1)、1h(T2)、2h(T3)、手术结束后1h(T4)、2h(T5)、术后24h(T6)、48h(T7)8个时点采血行多形核白细胞（Polymorphonuclear leucocyte，PMN）计数，测XOD和MPO的活性。结果:(1)O组PMN计数升高较D组早，但两组间PMN计数无差异。(2)O组XOD活性在OLV过程中升高，但两组间XOD活性无差异。(3)O组的MPO活性高于D组（P＜0.05）。结论: OLV较TLV行肺叶切除术围麻醉期有更多的氧自由基生成。第二章单肺通气下肺切除术患者血流动力学、血管外肺水及术后近期肺功能的变化第一节应用PiCC0技术监测单肺通气下肺切除术患者血流动力学和血管外肺水的变化目的:应用脉搏指示剂连续心排出量(PiCCO)技术监测单肺通气(OLV)下肺叶切除术患者术中、术后血流动力学和血管外肺水(EVLW)的变化，探讨OLV是否为影响该术患者术中、术后EVLW的独立因素。方法:20例因肺癌行肺叶切除加区域淋巴结清扫手术的患者，手术部位相同的两例随机分入OLV组和TLV（双肺通气）组。所有患者股动脉穿刺并置入热敏导管，连接到PiCCO监护仪，于手术开始前，通气15min、30min、60min、120min、150min，术后30min、1h、2h、3h、5h、7h、20h监测并记录中心静脉压(CVP)、心排出量(CO)、平均肺动脉压(MAP)、系统血管阻力指数（SVRI）、血管外肺水指数(EVLWI)、全心舒张末期容量指数(GEDVI)、胸腔内血容量指数(ITBVI)、肺血管通透性指数(PVPI)等血流动力学指标。结果:各血流动力学指标两组之间比较差异均无统计学意义(P＞0.05)。CO拔管前增加，拔管后稳定在较高心排出量水平;CVP在术后两小时内有倒“V”型变化;MAP术中增加，术后下降，但维持在比术前较高的水平;SVRI术前减低，术中增加，术后迅速回落至术前水平。EVLWI、PVPI随时间延长均呈逐渐降低趋势。GEDVI、ITBVI随时间变化无趋势表现。EVLWI与PVPI及GEDVI呈正相关，与CO、CVP、MAP、SVRI、ITBVI无相关性。结论:OLV对肺癌肺叶切除患者EVLW影响轻微，是一项安全的麻醉操作。第二节单肺通气下肺切除术患者术后近期肺功能的变化目的:探讨单肺通气(OLV)是否为影响肺叶切除术患者术后近期肺功能的独立因素。方法:20例因肺癌行肺叶切除加区域淋巴结清扫手术的患者，手术部位相同的两例随机分入OLV组和TLV（双肺通气）组。所有患者于手术前，术后第一天、第二天、第三天、第四天、第五天、第六天、第七天、第八天、第九天、第十天进行肺功能测定并记录:用力肺活量占预测值的百分比(FVC％)，第1秒用力呼气量占预测值的百分比(FEV1％)，用力呼气中期流速占预测值的百分比(MMF％)，最大通气量占预测值的百分比(MVV％)，第1秒用力呼气量占用力肺活量的百分比(FEV1/FVC％)。结果:除MMF％(P＜0.05)外，各肺功能指标两组之间比较差异均无统计学意义(P＞0.05)。从术后第一天始，各指标均呈缓慢上升趋势，除FEV1/FVC％外余指标观察期间均未达到术前水平。结论:OLV对肺癌肺叶切除患者肺功能影响轻微，不是其肺功能独立影响因素。第四部分:单肺通气麻醉的动物实验研究第一章不同单肺通气方式对大鼠肺AQP-5表达影响的对比研究目的:研究两种单肺通气(OLV)方式下大鼠肺组织水通道蛋白-5（aquaporin-5，AQP-5）表达的变化方法:雄性SD大鼠60只，体重200～250g。分为夹闭左侧肺门OLV组（A组），过深插管OLV组（B组），双肺通气对照（C组），空白对照组（D组）。A、B、C组分别按不同通气时间再分三个亚组，用excel随机函数表随机分配，各亚组和空白对照组每组6只，免疫组化法及免疫印记法检测肺AQP-5的表达。结果:免疫组化结果:A、B、C组AQP-5的表达均较D组减少(P＜0.05);A、B、C组组内各亚组比较差异均有统计学意义（P＜0.05）;A1、B1、C1及A2、B2、C2组间比较差异均无统计学意义(P＞0.05); A3、B3、C3组间比较，A3和B3均较C3组减少（P＜0.05），A3比B3减少（P＜0.05）。Western blot结果:A、收起

关键词 : 单肺通气麻醉胸科手术蛋白质组 iTRAQ技术血清生物学标志物临床应用

8. 大数据先验模式构建膀胱癌非编码RNA全景图谱及SCARNA12的分子机制研究

[学位论文] 何融泉广西医科大学 2019年博士导师: 王秋雁共309页

摘要 : 数据先验的理念正在改变各行各业的行为模式，其中以临床大数据为支撑的人工智能医疗在临床影像学、临床病理学等诊断疾病上展示出了超高的诊断效力。值得一提的是，生物组学大数据在个性化分析复杂性疾病中展示出独特的优势，有利于研究者深入全面了... 展开数据先验的理念正在改变各行各业的行为模式，其中以临床大数据为支撑的人工智能医疗在临床影像学、临床病理学等诊断疾病上展示出了超高的诊断效力。值得一提的是，生物组学大数据在个性化分析复杂性疾病中展示出独特的优势，有利于研究者深入全面了解疾病的概貌，发现个性化信息，为基础实验研究和临床治疗策略提供更加精细的指导，这也进一步巩固了组学技术近年来在精准医疗领域不可撼动的地位。然而遗憾的是，大数据先验模式在实验生物学领域推广却较为缓慢。国际大型生物组学大数据计划已经积累了海量数据，组学检测成本的降低使得生物学数据呈指数增长，利用好组学大数据，不仅能够为实验生物学节约研究成本，而且能够研究者提供更加多维全面的信息，达到缩短研究周期，推动基础实验更加高效地发现问题和解决问题。膀胱癌是严重威胁人类健康的一种恶性肿瘤类型，但目前对膀胱癌分子机制的研究依然不清，导致临床预防、监测和治疗捉襟见肘。组学大数据让人们认识到非编码RNA在控制基因表达，转录、转录后修饰和信号转导等诸多方面的重要性，大量非编码RNA已被鉴定为主要肿瘤类型中的致癌驱动因子和肿瘤抑制因子。遗憾的是，目前缺乏针对膀胱癌转录组学大数据多水平个性化高精度地分析。本论文利用大数据先验和实验学后验的模式对膀胱癌两种小分子事件进行研究。在大数据先验部分构建了研究较为成熟的长链非编码RNA(long non-coding RNA，lncRNA)和目前研究相对空白的核仁小分子RNA（small nucleolar RNA，snoRNA）表达全景图，同时也首次构建了膀胱癌mRNA以及本课题组感兴趣的卡哈尔体（Cajal body，CB)相关核小分子RNA（Cajal body small nucleolar RNA，scaRNA）的相关转录因子全景图及可变剪切表达全景图，在此过程中提供了若干计算分析框架。在实验后验部分通过对多细胞系水平及临床肿瘤组织水平RT-qPCR验证，CRISPR-Cas9敲低实验，mRNA高通量测序，原位杂交，裸鼠成瘤及RNA纯化染色质分离技术(ChIRP)等实验手段，对数据先验的结果进行了生物学意义的验证。第一部分工作获取了TCGA数据库中膀胱癌最新注释共13，918个lncRNA的测序表达数据，构建了膀胱癌中差异lncRNA表达(differentially expressed lncRNAs，DELs)谱，通过系统地整合预后信息，更新并构建了膀胱癌DELs预后预测模型。新预后模型在预测肿瘤患者预后、肿瘤大小、淋巴结浸润和病理分期上较单一指标效果提升显著，值得一提的是，该指数可成为膀胱癌预后独立的影响因素。最后，本部分在细胞系和组织样本水平对计算获取的DELs稳固性进行了部分验证。这部分工作提供了膀胱癌中DELs更为全面的解读，为lncRNA实验研究提供了详尽的参阅信息。第二部分工作利用膀胱癌组织1，232个小RNA-seq水平的数据，全面精确绘制了膀胱癌中研究空白的snoRNA表达谱。结果显示，这类目前在膀胱癌中尚未引起研究者足够重视的小分子在肿瘤组织和正常组织中的表达存在明显差异，并且数目多达230个，部分snoRNA对预判膀胱癌具有较高价值，提示部分snoRNA可能对膀胱癌的生物学行为具有重要贡献。根据数据先验的结果，对部分snoRNA的计算可靠性结果进行细胞和组织水平qPCR验证，为膀胱癌snoRNA研究提供了参选点依据。根据数据先验的提示，选取了与本课题组前期研究Cajal body相关，并且在膀胱癌中显著高表达以及具有较高疾病预判能力的SCARNA12进行深入研究。本部分利用real time RT-qPCR在临床膀胱癌组织和多细胞系水平验证了SCARNA12的表达水平，采用原位杂交进一步确定了SCARNA12在组织层面的分布特征。通过“表达相关基因最有可能是互相调控和影响”的理论，本课题首次构建了以SCARNA12为代表的SCARNA小分子功能分析框架，基因富集分析算法解析了SCARNA12在膀胱癌中发挥作用的主要潜在方式。第三部分工作中，本课题首次利用CRISPR-Cas9基因编辑技构建T24细胞系SCARNA12敲低模型进行功能探索。SCARNA12敲低后，显著抑制了膀胱癌细胞生长，癌细胞停滞在G0/G1期，不能完全进入细胞周期S期，从而导致了细胞增殖速度减慢。SCARNA12对膀胱癌细胞的生长抑制也可能通过诱导凋亡而实现，SCARNA12敲低后，晚期凋亡显著增加。此外，还发现敲低后的T24细胞侵袭能力降低。裸鼠成瘤实验瘤体有缩小的趋势。目前，世界上尚无关于SCARNA在膀胱癌的研究方案可参考，膀胱癌中也无类似指标的研究可推测SCARNA发挥生物学功能的方式，首次通过实验验证了数据先验的稳固性，并全面展示了SCARNA12体内外水平的功能。第四部分工作尝试对SCARNA12的分子机制进行解读。首次利用RNA-seq技术在全基因组转录水平检测SCARNA12敲低前后转录组的变化。SCARNA12敲低显著影响了多达1，155个基因的表达量，并且与细胞外基质相关的通路富集频率最高，与大数据分析结果吻合，这是首次以高通量测序数据在mRNA层面阐明SCARNA12发挥功能的方式。然后，成功的首次使用RNA纯化染色质分离技术(ChIRP)获取了SCARNA12互作结合调控的蛋白，发现组蛋白家族成员H2AFZ(H2A histone family member Z,H2AFZ)与MYCN(MYCN proto-oncogene,BHLH transcription factor)等蛋白与SCARNA12存在物理空间位置的结合。特别意思的是，本课题首次结合转录因子算法(Binding Analysis for Regulation of Transcription，BART)发现H2AFZ与MYCN均非常可能是SCARNA12敲低以后的差异基因的上游调控的因子。在首次整合现所有公开针对组蛋白相关基因H2AFZ与转录因子MYCN ChIP-seq大数据分析时发现，H2AFZ潜在靶基因为E3泛素蛋白连接酶(deltex E3ubiquitin ligase3，DTX3)，MYCN潜在靶基因为连接粘附分子2(junctional adhesion molecule2，JAM2)和核因子Ⅸ(nuclear factorⅨ，NFⅨ)。这为以SCARNA12为代表的snoRNA在基因层面转录调控深入分析提供了参考标准。第五部分工作首次展示了膀胱癌细胞水平SCARNA12敲低后可变剪切事件谱以及膀胱癌大数据组织水平可变剪切的全貌。可变剪切事件分析是较mRNA水平更加精确的分析，在敲低SCARNA12后共发生了多达156个显著的可变剪接事件，并且出现了6个未见任何报道的新的剪接体。结合临床膀胱癌组织水平数据，整合膀胱癌预后信息，发现了在9，731个基因中共检测到高达39，508个mRNA剪接事件，提示膀胱癌组织中可变剪切事件的发生并非偶然事件。其中基因细丝蛋白A(filamin A，FLNA)在组织和细胞水平均发生了外显子跳跃的可变剪接事件，并且具有预后评估的价值。这部分工作为后续膀胱癌以及SCARNA12可变剪切研究策略的制定提供了有力的证据支持。收起

关键词 : 膀胱癌病理机制非编码核糖核酸全景图谱卡哈尔体相关核仁小分子RNA12 转录调控

9. 人肝细胞株HL-7702在HBV-AFB1双暴露下的基因组、转录组特征识别及相关分子机制的初步探索

[学位论文] 王向坤广西医科大学 2021年博士导师: 彭涛共301页

摘要 : 本文主要从以下几个部分展开论述：第一部分慢病毒介导过表达HBX基因于永生化人肝细胞株HL-7702的稳转细胞株构建及体外功能实验目的:构建稳定过表达HBX（hepatitisBvirusX，HBX）基因于永生化人肝细胞株HL-7702的稳转细胞株并进行体外功... 展开本文主要从以下几个部分展开论述：第一部分慢病毒介导过表达HBX基因于永生化人肝细胞株HL-7702的稳转细胞株构建及体外功能实验目的:构建稳定过表达HBX（hepatitisBvirusX，HBX）基因于永生化人肝细胞株HL-7702的稳转细胞株并进行体外功能实验观察HBX基因功能。材料与方法:将HBX基因的质粒通过活化、筛选、扩增后提取质粒DNA，然后转染到293T细胞内，收集48h及72h病毒液浓缩，然后转染进HL-7702细胞株内，使用潮霉素B抗性筛选从而获得稳转细胞株。通过荧光显微镜观察、实时荧光定量PCR及westernblot实验分别验证HL-7702细胞株HBX的表达水平。通过体外功能实验，包括MTT、Transwell、细胞划痕和平板克隆实验观察HBX基因在HL-7702细胞株内细胞增殖、侵袭、迁移和克隆形成能力的变化。结果:1.实时荧光定量PCR及westernblot结果均证明HBX基因已转染进HL-7702细胞株，与空载质粒组和阴性对照组相比，差异达统计学显著性（所有p＜0.05），空载质粒组和阴性对照组组间差异未达到统计学显著性(p＞0.05)。 2.细胞划痕、Transwell、MTT和平板克隆实验结果提示HBX基因过表达对照组细胞的迁移、侵袭、增殖和克隆形成能力均显著高于HBX基因过表达组，差异均达到统计学显著性（所有p＜0.05）。结论:通过慢病毒转染方法已获得稳定表达HBX基因的HL-7702细胞株，HBX呈现出抑癌基因的作用。第二部分全转录组测序识别HBX基因稳转细胞株HL-7702转录组水平分子表达变化及相关机制的初步探索目的:通过全转录组测序识别过表达HBX基因的HL-7702细胞株转录组水平分子表达变化及其相关分子机制的初步探索。材料与方法:提取稳转细胞株RNA样本送公司进行全转录组测序。通过表达水平分析及差异显著性分析并获得差异表达的mRNA、miRNA、lncRNA和circRNA分子。将差异表达的miRNA、lncRNA和circRNA进行靶基因预测，通过差异表达mRNA分子和靶基因进行基因本体(geneontology，GO)、京都基因和基因组百科全书(KyotoEncyclopediaofGenesandGenomes，KEGG)通路及反应组(Reactome)通路富集分析，探索这些差异表达分子可能通过何种途径介导HBX基因发挥作用。结果:1.全转录组测序发现的差异表达分子包括285个mRNA(101个上调，184个下调)，9个miRNA（4个上调，5个下调），78个lncRNA(39个上调，39个下调)，117个circRNA（56个上调，61个下调）。 2.差异表达RNA的GO结果主要包括上皮细胞和血管形态发生、血管发育、细胞外基质和结构组织、伤口愈合的调节等;KEGG通路结果主要包括细胞色素P450对异生物素的代谢、类固醇激素的生物合成、淀粉和蔗糖代谢及戊糖和葡萄糖醛酸的相互转化等;Reactome通路包括细胞外基质组织、弹性纤维形成和Netrin-1信号等（所有padj≤0.05）。 3.LncRNA靶基因、circRNA靶基因、miRNA靶基因GO富集分析主要包括L-抗坏血酸代谢过程、血清素受体信号通路、戊糖和葡萄糖醛酸相互转化等;Reactome通路富集分析包括异生物素、生物氧化血小板脱粒、粘结蛋白聚糖相互作用等（所有padj≤0.05）。结论:测序结果提示HBX基因可能通过差异表达的RNA分子在上皮细胞和血管形态发生、细胞外基质组织、RNA转运等途径发挥功能。第三部分 HBV相关性差异表达分子的ceRNA网络构建及部分差异表达分子的初步验证目的:通过乙型肝炎病毒相关性差异表达的mRNA、miRNA、lncRNA、circRNA分子及分子靶向调节关系构建竞争性内源性RNA(competingendogenousRNA，ceRNA)网络及通过RT-PCR初步验证部分差异表达的RNA分子。材料与方法:通过差异表达的4种RNA分子及相互调节关系分别构建lncRNA-miRNA-mRNA、circRNA-miRNA-mRNA的ceRNA网络。并且对前10个差异表达的mRNA、全部9个差异表达的miRNA、前5个差异表达的lncRNA分子通过RT-PCR方法进行验证。RNA的相对表达水平使用2-△△CT方法计算。结果:1.构建了lncRNA-miRNA-mRNA分子的包括LINC00670-205/PDCD11-207/-has-miR-3180-3P/has-miR-767-5P/-PDE7A/RPL29等分子在内的ceRNA网络。 2.构建了circRNA-miRNA-mRNA分子的包括has-circ-0007750/has-circ-000620-has-miR-3180-3P/has-miR-3180-RPL29/RPTOR等分子在内的ceRNA网络。 3.10个差异表达的mRNA(PSMD1表达上调，ACACA、GIPC1、ITPR3、MEMO1、PDE10A、PLCB1、PRL29、PTPRM及YES1均表达下调）;5个差异表达的lncRNA（LINC80表达下调，PTK7-215、LINC00511-274、MIR924HG-206、SLC2A3-205均表达上调）;8个差异表达的miRNA(hsa-miR-625-3p、hsa-miR-3615、hsa-miR-625-5p、hsa-miR-6842-3p表达上调，hsa-miR-1268a、hsa-miR-3180、hsa-miR-139-5p、hsa-miR-767-5p均表达下调）与测序结果一致（所有p≤0.05），但PCR验证的hsa-miR-3180-3p的结果(HBX组高表达)与测序结果相反。结论:HBX基因可能通过差异表达RNA分子构建的ceRNA网络发挥其作用。第四部分 AFB1暴露下未干预组及HBX基因稳转组HL-7702细胞株的单/双暴露细胞株模型构建目的:在已构建HBX基因稳转株HL-7702基础上，构建H-BX和黄曲霉毒素B1(aflatoxinB1，AFB1)慢性（干预周期≥3月）双暴露及单一AFB1慢性暴露的细胞株模型。材料与方法:使用AFB1+NADPH+肝微粒体建立AFB1暴露的细胞株干预体系，肝微粒体与NADPH的比例为0.5mg/ml∶1mmol/L，干预组别为①HL-7702(HBX)+AFB1;②HL-7702(control)+AFB1;（③HL-7702+AFB1，该体系干预细胞24小时后换用完全培养基继续培养24-48小时后再次干预。在HBX-AFB1双暴露及单一AFB1干预1、2、3月后分别提取细胞DNA进行TP53基因第249密码子测序，观察其是否发生突变。结果:1.本研究建立了AFB1干预浓度为0.05、0.02、0.01、0.005mmol/L的浓度梯度，构建了HBX-AFB1慢性双暴露及单一AFB1慢性暴露的细胞株模型。 2.在AFB10.05和0.02umol/1干预1月后，细胞株发生了第249密码子（第三位碱基）AGG＞AGT的常见突变。 3.本研究还发现TP53基因第249密码子AGG＞AGA和AGG＞AGC的突变，以及第247密码子AAC＞AGC突变和第250密码子CCC＞ACC突变。结论:本研究构建了HBX-AFB1双暴露及单一AFB1暴露的细胞株模型，此模型出现AFB1暴露引起TP53基因常见位点的突变。收起

关键词 : HL-7702细胞株 HBV-AFB1双暴露 HBX基因转录组特征识别分子机制

10. 雾化吸入母牛分枝杆菌对小鼠哮喘模型及呼吸道合胞病毒感染的影响及机制研究

[学位论文] 姜晓红广西医科大学 2015年博士导师: 李超乾共289页

摘要 : 目的:研究母牛分枝杆菌雾化吸入对小鼠哮喘模型及呼吸道合胞病毒感染的防治作用，探讨其作用机制。方法:予OVA致敏制作Balb/c哮喘模型、呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus，RSV)滴鼻制作RSV感染模型，分别于模型制作前后予母牛分枝杆... 展开目的:研究母牛分枝杆菌雾化吸入对小鼠哮喘模型及呼吸道合胞病毒感染的防治作用，探讨其作用机制。方法:予OVA致敏制作Balb/c哮喘模型、呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus，RSV)滴鼻制作RSV感染模型，分别于模型制作前后予母牛分枝杆菌（商品名:微卡）雾化或腹腔注射。哮喘预防组于哮喘模型制作前1个月分别予微卡雾化或腹腔注射，哮喘模型制作成功后处死小鼠;哮喘治疗组于哮喘模型制成后雾化吸入微卡，分别于治疗前、治疗3天、治疗5天处死小鼠;RSV感染预防组分别从量—效关系和时—效关系研究，时—效关系于RSV感染模型制作前1个月或1周分别予微卡雾化吸入或腹腔注射，用106PFU RSV感染制作病毒感染模型。量—效关系于RSV感染模型制作前1周分别用1支或3支微卡雾化吸入，分别用106PFU和105PFURSV感染制作病毒感染模型。感染后第4天处死小鼠;RSV感染治疗组于RSV感染后第1天雾化吸入微卡，治疗第5天处死小鼠。以上各组均设正常对照组和模型对照组。所有小鼠处死前予无创肺功能仪检测气道反应性，哮喘组病理观察气道炎症，ELISA检测BALF中IL-9、OVA-IgE浓度，流式细胞术检测肺γδTCR+CD3+、IL-9+CD3+、IL-10+CD3+、IL-9+γδTCR+、IL-10+δTCR+淋巴细胞百分数，荧光定量PCR法测定肺IL-9R mRNA水平，哮喘预防组同时予免疫组化检测肺BDNF、NF09、Acetylcholine表达，荧光定量PCR检测肺NGF mRNA水平;病毒组除了以上方法外予电镜、肺免疫荧光法观察肺RSV感染情况，荧光定量PCR检测肺IL9R、PU.1、PD-L2、JAK1、STAT1、STAT5A、RSV、IFN-γ、TLR7、TLR8mRNA水平，免疫组化监测肺EGFR、NF09、Acetylcholine含量。结果:与哮喘对照组相比，哮喘预防组气道反应性均明显下降、气道炎症明显减轻;肺IL-9、OVA-IgE、IL-9R mRNA、NGF mRNA水平明显下降、IL-10水平明显增高;肺BDNF、NF09、Acetylcholine表达明显下降。哮喘治疗组气道炎症明显减轻、肺IL-9水平明显下降、IL-10水平明显增高。RSV预防和治疗组较对照组比较电镜下RSV明显减少、免疫荧光示肺抗RSV明显减弱、RSV mRNA明显下降，机制研究发现微卡干预后IL-9水平明显下降、IL-10水平明显增高;IL-9-JAK1-STAT通路研究结果示JAK1、STAT1、STAT5A水平明显增高;TLR7、TLR8mRNA水平明显增高，PU.1mRNA水平明显降低，肺免疫组化NF09、Acetylcholine、EGFR表达明显下降。以小剂量微卡短期雾化吸入效果最佳。RSV感染治疗组同时发现微卡雾化后肺γδT细胞明显增多，但IL-9+γδT细胞明显减少。结论:实验剂量微卡雾化吸入可用于小鼠哮喘的防治，与其调节Th9细胞、γδT细胞、BDNF、NF09、Acetylcholine有关;实验剂量微卡雾化吸入可用于小鼠RSV感染的防治，与其调节Th9细胞、γδT细胞、IL-9-JAK-STAT通路、TLR7、TLR8、PU.1、神经机制、EGFR等有关。收起

关键词 : 哮喘呼吸道合胞病毒感染雾化吸入母牛分枝杆菌