中国科学技术信息研究所--国家工程技术数字图书馆

[学位论文] 孙起翔广西医科大学 2016年硕士导师: 李超乾共76页

摘要 : 目的：探讨雾化吸入母牛分枝杆菌对小鼠支气管哮喘的预防作用及其与维生素D受体的关系。方法：将24只雄性Balb/c小鼠随机分为3组:正常对照组、哮喘模型组、母牛分枝杆菌雾化干预组，每组8只。哮喘组及干预组以卵清蛋白(ovalbumin，OVA)致敏制作... 展开

关键词 : 哮喘雾化吸入母牛分枝杆菌维生素D受体

2. 母牛分枝杆菌菌苗预防糖尿病并发结核的实验研究

[学位论文] 陈虹重庆医科大学 2001年硕士导师: 罗永艾共51页

摘要 : 目的:拟建立糖尿病合并结核的动物模型,并探讨母牛分枝杆菌(M.vaccae)菌苗对实验性糖尿病(DM)大鼠发生结核病(TB)有无预防作用.结论:1.在DM大鼠身上注射H<,37>Rv结核菌,成功地复制了大鼠DM+TB的动物模型.2.M.vaccae对DM大鼠发生TB有较好的预防作用.3.M.vac... 展开

关键词 : 母牛分枝杆菌结核杆菌糖尿病结核动物模型

3. 雾化吸入灭活母牛分枝杆菌调控γδT细胞降低哮喘小鼠气道高反应性的机制

[学位论文] 黄仲辰广西医科大学 2021年硕士导师: 李超乾共67页

摘要 : 本文主要从以下几方面进行论述：第一部分 TCR-β-/-小鼠雾化吸入母牛分枝杆菌后的气道炎症反应目的：探讨γδT细胞是否参与由雾化吸入母牛分枝杆菌引发的小鼠气道炎症及其特点，并制备小鼠脾脏γδT细胞悬液。方法：将24只SPF级雄... 展开本文主要从以下几方面进行论述：第一部分 TCR-β-/-小鼠雾化吸入母牛分枝杆菌后的气道炎症反应目的：探讨γδT细胞是否参与由雾化吸入母牛分枝杆菌引发的小鼠气道炎症及其特点，并制备小鼠脾脏γδT细胞悬液。方法：将24只SPF级雄性TCR-β-/-小鼠随机均分为2组：对照组和母牛分枝杆菌雾化组，每组12只。将两组小鼠分别置于雾化装置，对照组雾化采用10ml生理盐水，母牛分枝杆菌雾化组则将1支注射用母牛分枝杆菌制剂（22.5ug/瓶)溶解于10ml生理盐水雾化，两组均每天雾化20min，连续5天。最后一次雾化后24小时内取材。用苏木精—伊红（hematoxylin-eosinHE）染色法、过碘酸雪夫（PeriodicAcid-SchiffPAS）染色法观察小鼠肺部炎症情况；同时取脾脏并用磁珠分选法制取脾γδT细胞悬液，并用流式细胞术检测其纯度。结果：HE染色显示对照组小鼠支气管形态规整，上皮细胞无增生，管壁无明显增厚，肺泡间隔正常，肺泡壁无水肿充血，支气管及血管周围无或少许炎性细胞浸润，母牛分枝杆菌雾化组小鼠支气管壁形态略不规整，上皮粘膜稍增厚，支气管及血管周围有较多炎性细胞浸润，支气管管腔较对照组狭窄、管壁增厚。PAS染色显示对照组气道无粘液渗出，杯状细胞少甚至无；母牛分枝杆菌雾化组可见气道杯状细胞增生和粘液渗出。免疫磁珠法分选后所获得的小鼠脾脏γδT淋巴细胞，其纯度经流式细胞仪检测均大于80%，可继续用于第二部分过继免疫实验。结论：γδT细胞可能参与了由雾化吸入母牛分枝杆菌引起的气道炎症。免疫磁珠法可制备高纯度小鼠脾脏γδT细胞悬浮液。第二部分过继母牛分枝杆菌免疫的γδT细胞对小鼠哮喘模型的影响及机制研究目的：探讨鼠尾静脉注射过继经雾化吸入母牛分枝杆菌免疫的γδT细胞是否能够预防哮喘及其预防哮喘的机制。方法（1）制备TCR-β-/-小鼠脾脏γδT细胞悬浮液，详细操作方法见第一部分。（2）将32只SPF级雄性Balb/c小鼠随机均分为A、B、C、D4组，每组8只；A组为正常对照组，用PBS或生理盐水代替其它组的实验试剂进行干预，B、C、D组为常规哮喘模型组，用卵清蛋白(ovalbumin，OVA)构造哮喘模型，每组小鼠于第0天、7天和14天腹腔注射OVA-氢氧化铝悬液2ml/只（25μgOVA+1mg氢氧化铝凝胶混合于2mL磷酸盐缓冲液中（Phosphatebufferedsaline，PBS），第21-27天予以雾化吸入浓度为2%OVA+PBS缓冲液以激发形成哮喘模型；B组为哮喘免疫过继对照组，用生理盐水代替进行免疫过继对照；C组为TCR-β-/-小鼠生理盐水雾化后γδT细胞过继组（未经母牛分枝杆菌吸入免疫），在每次次腹腔注射的同时以及第21天开始雾化的同时，予以鼠尾静脉注射过继TCR-β-/-小鼠经生理盐水连续雾化5天后用磁珠分选提取的γδT细胞，每次鼠尾静脉注射106个γδT细胞，溶于1ml生理盐水中，过继2次；D组是TCR-β-/-小鼠母牛分枝杆菌雾化后γδT细胞过继组（经母牛分枝杆菌吸入免疫），在每次腹腔注射的同时以及第21天开始雾化的第一天，予以鼠尾静脉注射过继TCR-β-/-小鼠经母牛分枝杆菌连续雾化5天后用磁珠分选提取的γδT细胞，每次鼠尾静脉注射106个γδT细胞，溶于1ml生理盐水中，过继2次。末次雾化后24小时内测定气道反应性，之后取材用HE染色法和PAS染色法观察小鼠肺部炎症情况，免疫组化测定肺组织T-bet、GATA水平，ELSA法检测其支气管肺泡灌洗液（bronchoalveolarlavagefluid，BALF）IL-13和IL-5水平。结果：（1）肺组织病理切片结果显示：A组小鼠HE染色可见其支气管形态规整，上皮细胞无增生，管壁无明显增厚，肺泡间隔正常，肺泡壁无水肿、充血，支气管及血管周围无或少许炎性细胞浸润，PAS染色见气道上皮杯状细胞少或无，无明显粘液渗出；B组HE染色可见支气管壁形态不规整，管壁增厚，管腔狭窄，上皮粘膜明显增厚、断裂，支气管及血管周围较多炎性细胞浸润，肺泡间隔明显断裂，肺泡壁水肿充血，可见许多炎性细胞。PAS染色可见粘液渗出和杯状细胞增生明显。C组HE染色可见血管及支气管周围炎性细胞浸润少于B组。PAS染色示支气管管壁稍厚，粘液渗出和杯状细胞数量稍减少。D组HE染色可见支气管及血管周围炎性细胞浸润降低明显少于C组，肺泡壁无明显充血水肿。PAS染色可见支气管管壁厚度及管腔形态基本恢复，粘液渗出和杯状细胞增生不明显。各组小鼠气道炎症水平：B组＞C组＞D组＞A组（p＜0.05）。（2）肺功能检测结果。 B组小鼠在6.25mg/ml、12.5mg/ml、25mg/ml、50mg/ml四个浓度的Mch激发后其气道反应性均高于A组小鼠(p＜0.05)；C组小鼠在6.25mg/ml和12.5mg/ml这两个浓度Mch激发后其气道反应性与A组小鼠相比无差异（p＞0.05），在25mg/ml和50mg/ml这两个浓度的Mch激发后其气道反应性高于A组小鼠（p＜0.05），C组小鼠在6.25mg/ml、12.5mg/ml、25mg/ml、50mg/ml四个浓度的Mch激发后其气道反应性均低于B组小鼠；D组小鼠在6.25mg/ml、25mg/ml、50mg/ml浓度的Mch激发后其气道反应性均低于C组小鼠（p＜0.05）。（3）小鼠肺组织免疫组化结果肺组织T-bet水平：A组：4.9?1.80、B组2.0?1.51、C组3.1?1.75、D组4.1?2.01，各组互相比较A＞D＞C＞B。A组小鼠肺组织T-bet主要表达于气道上皮细胞、气道周围及肺组织淋巴细胞等细胞胞浆和细胞核中。B组小鼠肺组织的T-bet表达强度明显低于A组，其表达范围也少于于A组(p＜0.05)。C组小鼠肺组织T-bet表达强度高于B组小鼠，表达范围明显大于B组小鼠(p＜0.05)；D组小鼠肺组织中的T-bet表达强度和表达范围与A组小鼠相比无明显差异(p＞0.05)，D组小鼠肺组织T-bet表达强度高于C组小鼠和表达范围明显大于C组小鼠(p＜0.05)。肺组织GATA3水平：A组2.6?1.92、B组5.8?1.39、C组4.7?1.51、D组3.9?1.64，各组互相比较B＞C＞D＞A。小鼠肺组织内GATA3主要表达于气道上皮细胞、气道周围及肺组织、肺间质中的淋巴细胞和巨噬细胞等炎性细胞的细胞胞浆和细胞核中，A组小鼠炎性细胞较少，GATA3表达不明显。B组小鼠肺组织炎性细胞多于A组，GATA3表达强度高于A组小鼠，表达范围大于A组小鼠(p＜0.05)，C组小鼠炎性细胞少于B组小鼠，肺组织中GATA3表达强度低于B组小鼠，其表达范围也少于B组小鼠(p＜0.05)。D组小鼠肺组织中GATA3表达强度低于C组，其表达范围也少于C组。(p＜0.05)。（4）ELISA法测定小鼠BALF结果 IL-13测定结果（单位pg/ml）：A组：最大值99.2、上四分位数84、中位数79.4、均值78.4、下四分位数66.2、最小值65.2、标准差13.2；B组：最大值364.6、上四分位数362.2、中位数355.2、平均值335.3、下四分位数290.8、最小值284.9；标准差52.9；C组：最大值213.9、上四分位数210.4、中位数192.8、平均值195.2、下四分位数180、最小值177.7、标准差22.5；D组最大值173.4、上四分位数161.7、中位数142.6、平均值139.1、下四分位数116.9、最小值108.7、标准差16.7，各组互相比较结果：B组＞C组＞D组＞A组(p＜0.05)。 IL-5测定结果（单位pg/ml）：A组：最大值184.3、上四分位数172.8、中位数165.8、平均值164.8、下四分位数162.4、最小值101.4、标准差7.7；B组：最大值360.7、上四分位数306.6、平均值274.4、中位数264.1、下四分位数231.8、最小值219.2、标准差55.4；C组：最大值262.1、上四分位数226.3、平均数190.2、中位数189.5、下四分位数174.6、最小值145.8、标准差38.3：D组最大值164.5、上四分位数157.6、中位数146.1、平均值146.1、下四分位数136.9、最小值125.4、标准差15.3，各组互相比较结果：B组＞C组＞A组＞D组(p＜0.05)。结论：鼠尾注射过继经母牛分支杆菌免疫的脾脏γδT细胞可以抑制小鼠哮喘模型形成。其机制可能与上调T-bet、下调GATA-3表达而调节T-bet/GATA-3平衡，从而升高Th1免疫活动水平，纠正哮喘引起Th1/Th2失衡，缓解气道炎症，降低气道反应性有关。收起

关键词 : 哮喘灭活母牛分枝杆菌雾化吸入 &gamma &delta T细胞气道炎症免疫调控

4. 雾化吸入母牛分枝杆菌预防小鼠哮喘的时效性研究

[学位论文] 陈丽丹广西医科大学 2017年硕士导师: 李超乾共45页

摘要 : 目的：研究雾化吸入母牛分枝杆菌预防哮喘小鼠的形成及其时效关系，探讨其预防机制原理。方法：48只雌性Balb/c小鼠按随机数字表法分为6组，每组8只:正常对照组(A)、哮喘模型组(B)、预防组(C2、C3、C4、C5)。B组和预防组用卵清蛋白(ovalbumin，... 展开目的：研究雾化吸入母牛分枝杆菌预防哮喘小鼠的形成及其时效关系，探讨其预防机制原理。方法：48只雌性Balb/c小鼠按随机数字表法分为6组，每组8只:正常对照组(A)、哮喘模型组(B)、预防组(C2、C3、C4、C5)。B组和预防组用卵清蛋白(ovalbumin，OVA)致敏、激发刺激制造哮喘模型，A组用PBS溶液替代。预防组在制造哮喘模型前2周雾化吸入母牛分枝杆菌，每天1次，分别连续雾化2-5天。各组均在末次激发24小时内行无创肺功能检测小鼠气道反应性;肺组织行苏木精-伊红染色(hematoxylin-eosin staining，HE染色)和过碘酸雪夫染色（periodic acid-sciff staining，PAS染色），观察气道结构和病理改变;酶联免疫吸附法(ELISA)检测小鼠血清细胞因子IFN-γ、IL(interleukin，IL)-4、IL-5和IL-17A浓度。免疫组化检测肺组织γδTCR的表达水平。结果：各预防组肺部气道炎症和γδTCR的表达水平较哮喘组减少。C5组气道炎症和粘液分泌显著低于C2、C3、C4组，与A组比较无显著差异。C3、C4、C5组γδTCR水平显著低于C2组。C4、C5组气道阻力明显低于哮喘组。C5组气道阻力显著低于C4组，与A组比较无统计学意义。C4、C5组血清IL-4、IL-5和IL-17A浓度显著降低，IFN-γ显著升高。C5组血清IL-4、IL-5浓度显著低于C4组。C5组血清IL-4、IL-5、IL-17A和IFN-γ浓度与A组比较无统计学意义。血清IL-17A与哮喘小鼠在Mch刺激的AHR呈正相关。结论：血清IL-17A水平与哮喘小鼠AHR相关。雾化吸入母牛分枝杆菌能预防OVA诱导的支气管哮喘小鼠的形成，并存在时效关系。随着雾化母牛分枝杆菌时间的延长，其预防哮喘的效果越明显。其机制可能与其降低肺组织γδT细胞表达和血清IL-17A水平，介导Th1/Th2平衡，调节Th2/Th17平衡免疫机制有关。其预防效应与作用时间密切相关。收起

关键词 : 支气管哮喘母牛分枝杆菌雾化吸入预防效应药理机制

5. 雾化吸入母牛分枝杆菌对小鼠哮喘模型及呼吸道合胞病毒感染的影响及机制研究

[学位论文] 姜晓红广西医科大学 2015年博士导师: 李超乾共289页

摘要 : 目的:研究母牛分枝杆菌雾化吸入对小鼠哮喘模型及呼吸道合胞病毒感染的防治作用，探讨其作用机制。方法:予OVA致敏制作Balb/c哮喘模型、呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus，RSV)滴鼻制作RSV感染模型，分别于模型制作前后予母牛分枝杆... 展开目的:研究母牛分枝杆菌雾化吸入对小鼠哮喘模型及呼吸道合胞病毒感染的防治作用，探讨其作用机制。方法:予OVA致敏制作Balb/c哮喘模型、呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus，RSV)滴鼻制作RSV感染模型，分别于模型制作前后予母牛分枝杆菌（商品名:微卡）雾化或腹腔注射。哮喘预防组于哮喘模型制作前1个月分别予微卡雾化或腹腔注射，哮喘模型制作成功后处死小鼠;哮喘治疗组于哮喘模型制成后雾化吸入微卡，分别于治疗前、治疗3天、治疗5天处死小鼠;RSV感染预防组分别从量—效关系和时—效关系研究，时—效关系于RSV感染模型制作前1个月或1周分别予微卡雾化吸入或腹腔注射，用106PFU RSV感染制作病毒感染模型。量—效关系于RSV感染模型制作前1周分别用1支或3支微卡雾化吸入，分别用106PFU和105PFURSV感染制作病毒感染模型。感染后第4天处死小鼠;RSV感染治疗组于RSV感染后第1天雾化吸入微卡，治疗第5天处死小鼠。以上各组均设正常对照组和模型对照组。所有小鼠处死前予无创肺功能仪检测气道反应性，哮喘组病理观察气道炎症，ELISA检测BALF中IL-9、OVA-IgE浓度，流式细胞术检测肺γδTCR+CD3+、IL-9+CD3+、IL-10+CD3+、IL-9+γδTCR+、IL-10+δTCR+淋巴细胞百分数，荧光定量PCR法测定肺IL-9R mRNA水平，哮喘预防组同时予免疫组化检测肺BDNF、NF09、Acetylcholine表达，荧光定量PCR检测肺NGF mRNA水平;病毒组除了以上方法外予电镜、肺免疫荧光法观察肺RSV感染情况，荧光定量PCR检测肺IL9R、PU.1、PD-L2、JAK1、STAT1、STAT5A、RSV、IFN-γ、TLR7、TLR8mRNA水平，免疫组化监测肺EGFR、NF09、Acetylcholine含量。结果:与哮喘对照组相比，哮喘预防组气道反应性均明显下降、气道炎症明显减轻;肺IL-9、OVA-IgE、IL-9R mRNA、NGF mRNA水平明显下降、IL-10水平明显增高;肺BDNF、NF09、Acetylcholine表达明显下降。哮喘治疗组气道炎症明显减轻、肺IL-9水平明显下降、IL-10水平明显增高。RSV预防和治疗组较对照组比较电镜下RSV明显减少、免疫荧光示肺抗RSV明显减弱、RSV mRNA明显下降，机制研究发现微卡干预后IL-9水平明显下降、IL-10水平明显增高;IL-9-JAK1-STAT通路研究结果示JAK1、STAT1、STAT5A水平明显增高;TLR7、TLR8mRNA水平明显增高，PU.1mRNA水平明显降低，肺免疫组化NF09、Acetylcholine、EGFR表达明显下降。以小剂量微卡短期雾化吸入效果最佳。RSV感染治疗组同时发现微卡雾化后肺γδT细胞明显增多，但IL-9+γδT细胞明显减少。结论:实验剂量微卡雾化吸入可用于小鼠哮喘的防治，与其调节Th9细胞、γδT细胞、BDNF、NF09、Acetylcholine有关;实验剂量微卡雾化吸入可用于小鼠RSV感染的防治，与其调节Th9细胞、γδT细胞、IL-9-JAK-STAT通路、TLR7、TLR8、PU.1、神经机制、EGFR等有关。收起

关键词 : 哮喘呼吸道合胞病毒感染雾化吸入母牛分枝杆菌

6. 母牛分枝杆菌菌苗对哮喘豚鼠的免疫预防作用

[学位论文] 赵云峰重庆医科大学 2005年博士导师: 罗永艾共123页

摘要 : 　　支气管哮喘病理特点包括慢性气道炎症、气道高反应性及可逆性气流阻塞，其发病与Th1/Th2失衡有密切关系，表现为Th2反应增强(Th2细胞数量增多和功能亢进)，而Th1反应减弱(Th1细胞数量减少和功能减弱)，因此通过调节Th1/Th2平衡，把以Th2型为主的免... 展开

关键词 : 哮喘母牛分枝杆菌菌苗免疫预防嗜酸粒细胞肺功能

7. 雾化吸入母牛分枝杆菌预防小鼠支气管哮喘的效果观察

[学位论文] 谭柳红广西医科大学 2016年硕士导师: 李超乾共49页

摘要 : 目的: 探讨雾化吸入母牛分枝杆菌对小鼠支气管哮喘的预防作用及相关机制。方法: 40只雌性BALB/C小鼠按随机数字表法分为5组，每组8只，（22.5ug预防组（A组）、45.0ug预防组（B组）、67.5ug预防组（C组）、正常对照组（D组）和哮喘模... 展开目的: 探讨雾化吸入母牛分枝杆菌对小鼠支气管哮喘的预防作用及相关机制。方法: 40只雌性BALB/C小鼠按随机数字表法分为5组，每组8只，（22.5ug预防组（A组）、45.0ug预防组（B组）、67.5ug预防组（C组）、正常对照组（D组）和哮喘模型组（E组））。用鸡卵清蛋白(ovalbumin，OVA)腹腔注射致敏和雾化吸入激发制作小鼠支气管哮喘模型，每只小鼠每周腹腔注射1次OVA混合试剂致敏，连续3周，第4周开始予OVA·PBS液雾吸激发，每次30分钟，隔日1次，连续5次。预防组（A、B、C组）在哮喘模型制作前2周连续5天雾化吸入母牛分枝杆菌混合液10ml，每天1次。所有小鼠在模型制作后24小时内予无创肺功能仪检测小鼠气道反应性，随后处死小鼠，收集标本。病理HE染色、AB-PAS染色观察肺脏炎症情况，并进行半定量分析;液相芯片法检测血清及肺泡灌洗液中IL-4、IL-5、IL-17A、IFN-γ表达水平;免疫组织化学染色法检测肺IL-4、IL-5、IL-17A、IFN-γ及γδ-TCR表达水平。结果: 与哮喘模型组比较，母牛分枝杆菌雾化吸入预防组小鼠气道反应性降低，肺组织炎症减轻，肺IL-4、IL-5、IL-17A、γδ-TCR表达水平降低(P值均＜0.05)，IFN-γ表达水平升高(P＜0.05)，三个预防组中以67.5ug预防组效果最明显(P＜0.05)。各预防组免疫组化结果:IL-4、IL-5、γδ-TCR表达水平，67.5ug预防组明显低于22.5ug、45.0ug预防组（P值均＜0.05）;IL-17A表达水平呈量-效负相关，差异有统计学意义(P＜0.05);IFN-γ表达水平67.5ug预防组明显高于22.5ug、45ug预防组(P＜0.05)。结论: 雾化吸入母牛分枝杆菌可以明显降低支气管哮喘小鼠气道反应性，减轻气道炎症，用于支气管哮喘的预防，其机制可能与其减少支气管哮喘小鼠肺部γδ-T细胞聚集，纠正Th1/Th2失衡，抑制Th17型优势应答有关，其作用呈量-效负相关。收起

关键词 : 支气管哮喘母牛分枝杆菌雾化吸入预防作用动物模型

8. 过继免疫γδT细胞和雾化吸入母牛分枝杆菌对哮喘小鼠气道炎症和细胞因子的影响

[学位论文] 陈晓菊广西医科大学 2019年博士导师: 李超乾共102页

摘要 : 本文主要从以下几方面进行论述：第一部分雾化吸入注射用母牛分枝杆菌调控γδT细胞对哮喘小鼠的影响目的:通过提取经雾化吸入注射用母牛分枝杆菌干预的TCR-β-/-小鼠的γδT细胞过继免疫治疗哮喘小鼠，探讨注射用母牛分枝杆菌是否通过调... 展开本文主要从以下几方面进行论述：第一部分雾化吸入注射用母牛分枝杆菌调控γδT细胞对哮喘小鼠的影响目的:通过提取经雾化吸入注射用母牛分枝杆菌干预的TCR-β-/-小鼠的γδT细胞过继免疫治疗哮喘小鼠，探讨注射用母牛分枝杆菌是否通过调控γδT细胞影响哮喘小鼠的气道炎症及影响下游细胞因子IL-4、IFN-γ。方法:按随机数字表法将40只雄性Balb/c小鼠分为4组:正常组(A)、哮喘组(B)、哮喘治疗对照组(C)和哮喘治疗干预组(D)。（TCR-β-/-小鼠分为对照组和治疗干预组:治疗干预组每天1次，连续5天雾化吸入注射用母牛分枝杆菌。对照组予雾化吸入生理盐水10ml。末次取脾，分离γδT细胞悬液鼠尾静脉注射到BALB/C雄性小鼠体内，得到哮喘治疗对照组(C)、哮喘治疗干预组(D)。)模型组和治疗对照组、治疗干预组各组均经卵清蛋白(OVA)致敏和激发制成小鼠支气管哮喘模型。C、D组激发后给予尾静脉注射提取的经雾化吸入生理盐水干预和雾化吸入注射用母牛分枝杆菌干预γδT细胞，每天一次到激发结束。采用肺功能仪检查各组小鼠肺功能后处死提取肺组织和支气管肺泡灌洗液(BALF)。病理HE染色观察肺组织支气管肺炎症。离心BALF行炎症细胞计数;BALF中IFN-γ和IL-4表达水平用ELISA法检测;肺组织单个核细胞IL-4、IFN-γ占γδT细胞百分比用流式细胞术检测。结果:哮喘组小鼠气道反应性均高于正常组小鼠，哮喘组小鼠气道反应性均高于哮喘治疗对照组和治疗干预组。哮喘治疗干预组小鼠气道炎症病变较哮喘治疗对照组减轻。ELISA结果显示，哮喘组BALF中IL-4水平与正常组相比明显升高，而IFN-γ水平较之明显降低;哮喘治疗对照组与治疗干预组BALF中IL-4水平与哮喘组相比明显降低，而IFN-γ水平教之升高，差异有统计学意义(p＜0.05)。流式细胞术结果显示:哮喘组小鼠γδT淋巴细胞分泌的IL-4与正常组相比明显增高，IFN-γ明显降低，显示向Th2细胞分化的特征，差异具有统计学意义(p＜0.05)。哮喘治疗对照组与治疗干预组小鼠肺内的γδT细胞分泌IL-4与哮喘组对比明显减低，IFN-γ明显增高，显示向Th1细胞分化的特征，差异均有统计学意义(p＜0.05)。结论:雾化吸入母牛分枝杆菌可以减轻OVA致敏引起的Th2优势免疫应答，调节哮喘Th1/Th2免疫失衡。雾化吸入注射用母牛分枝杆菌通过调控γδT细胞影响哮喘小鼠的气道炎症反应，其效应与调节细胞因子分泌有关。第二部分过继免疫γδT细胞对哮喘小鼠气道炎症及对细胞因子的影响目的:通过鼠尾静脉过继免疫γδT细胞干预哮喘小鼠模型，探讨过继免疫γδT细胞对哮喘小鼠气道炎症及对细胞因子IFN-γ、IL-1β、IL-4和IL-18的影响。方法:按随机数字表法将24只雄性Balb/c小鼠分为3组:正常组(A)、哮喘组(B)、哮喘治疗组(C)，每组8只。制成小鼠支气管哮喘模型(卵清蛋白(OVA)致敏和激发）。C组激发后给予鼠尾静脉过继免疫γδT细胞治疗，每天一次到激发结束。采用肺功能仪检查各组小鼠肺功能后处死提取肺组织和支气管肺泡灌洗液(BALF)。病理HE染色观察肺组织支气管肺炎症。离心BALF行炎症细胞计数;检测各组小鼠BALF中IL-1β、IL-18、IL-4和IFN-γ表达水平采用酶联免疫吸附(ELISA)实验;肺组织单个核细胞IL-4、IFN-γ占γδT细胞百分比采用流式细胞术检测。结果:哮喘组小鼠气道反应性均高于正常组小鼠，哮喘组小鼠气道反应性高于哮喘治疗组。哮喘治疗组小鼠气道炎症病变较哮喘组减轻。ELISA结果显示，哮喘组BALF中IFN-γ水平与正常组相比明显降低，而BALF中IL-1β、IL-4和IL-18水平与正常组相比明显升高;哮喘治疗组BALF中IFN-γ水平与哮喘组相比明显升高，而BALF中IL-1β、IL-4和IL-18水平与哮喘组相比明显降低，差异有统计学意义(p＜0.05)。流式细胞术结果显示:哮喘组小鼠γδT淋巴细胞分泌的IFN-γ与正常组对比明显降低，IL-4明显增高，显示向Th2细胞分化的特征，差异具有统计学意义(p＜0.05)。哮喘治疗组小鼠肺内的γδT细胞分泌IFN-γ与哮喘组对比明显增高，IL-4明显减低，显示向Th1细胞分化的特征，差异均有统计学意义(p＜0.05)。结论:鼠尾静脉过继免疫γδT细胞能减轻哮喘小鼠气道炎症，降低IL-1β、IL-4和IL-18水平，升高IFN-γ水平，减轻OVA致敏引起的Th2优势免疫应答。第三部分雾化吸入注射用母牛分枝杆菌对哮喘小鼠NLRP3炎症小体及IL-1β和IL-18的影响目的:观察雾化吸入注射用母牛分枝杆菌对哮喘小鼠外周血中单个核细胞中NLRP3炎症小体表达水平及血清中下游因子白细胞介素1β(IL-1β)和白细胞介素18(IL-18)水平变化，探讨雾化吸入注射用母牛分枝杆菌对哮喘小鼠NLRP3炎症小体及血清中IL-1β和IL-18的影响。方法:按随机数字表法将40只雄性Balb/c小鼠分为4组:正常组(A)、哮喘组(B)、哮喘治疗组(C)和哮喘干预组(D)。制成小鼠支气管哮喘模型(卵清蛋白(OVA)致敏和激发）。C组激发后给予雾化吸入注射用母牛分枝杆菌，每天一次。D组激发前给予注射用母牛分枝杆菌雾化吸入，每天一次。采用肺功能仪检查各组小鼠肺功能后处死提取肺组织和支气管肺泡灌洗液(BALF)。病理HE染色观察肺组织支气管肺炎症。离心BALF行炎症细胞计数;检测各组小鼠外周血单个核细胞中NLRP3用实时荧光定量PCR法。检测各组小鼠血清中IL-1β和IL-18水平用酶联免疫吸附(ELISA)实验。结果:哮喘组小鼠气道反应性均高于正常组小鼠，哮喘组小鼠气道反应性均高于小鼠哮喘治疗组和干预组。哮喘组小鼠外周血单个核细胞中NLRP3、血清中IL-1β和IL-18水平均高于正常组小鼠(P＜0.01);哮喘组小鼠外周血单个核细胞中NLRP3及血清中IL-1β和IL-18水平均高于小鼠哮喘模型治疗组和干预组(P＜0.05)。结论:哮喘小鼠外周血NLRP3炎症小体及下游因子IL-1β和IL-18水平升高，NLRP3炎症小体通路可能促进了哮喘的发病过程。雾化吸入注射用母牛分枝杆菌能减轻支气管哮喘小鼠气道炎症，其效应与调节NLRP3炎症小体及血清中IL-1β和IL-18有关。收起

关键词 : 哮喘过继免疫 &gamma &delta T细胞雾化吸入母牛分枝杆菌气道炎症细胞因子

9. 分枝杆菌种间及种内不同株之间16S rRNA基因和16S-23S rRNA ITS序列分析

[学位论文] 闫李侠兰州大学 2008年硕士导师: 居军;王国治共73页

摘要 : 目的：1.建立鉴定分枝杆菌不同种及种内不同株的16S rRNA基因和16S-23SrRNA ITS序列分析方法，进一步了解16S rRNA基因和16S-23S rRNA ITS在菌种和菌株鉴定中的应用价值，了解其能鉴定的分枝杆菌种类和数量。2.掌握123种共213株分枝杆菌参考菌株的16S... 展开目的：1.建立鉴定分枝杆菌不同种及种内不同株的16S rRNA基因和16S-23SrRNA ITS序列分析方法，进一步了解16S rRNA基因和16S-23S rRNA ITS在菌种和菌株鉴定中的应用价值，了解其能鉴定的分枝杆菌种类和数量。2.掌握123种共213株分枝杆菌参考菌株的16S rRNA基因5′端和16S-23S rRNA ITS序列，补充基因数据库的不足。方法：1.根据分枝杆菌16S rRNA基因和16S-23S rRNA ITS序列属特异性保守区设计引物，对123种(共213株)分枝杆菌的16S rRNA基因5′端和16S-23S rRNA ITS序列分别进行PCR扩增、序列测定，用Clustalx 1.83软件对不同种及种内不同株分枝杆菌的16S rRNA基因5′和16S-23S rRNA ITS分别进行同源性多序列比对，并用邻位相连法(Neighbour Joining，N-J法)绘制聚类分析树状谱，使用DNA STAR的MegAlign软件计算种间及种内不同株之间的相似性百分比。结果： 1.完成119种共包括209株分枝杆菌的16S rRNA基因测序工作，完成123种共包括213株分枝杆菌的16S-23S rRNA ITS测序工作。 2.在做种间分析时发现3株鸟分枝杆菌复合群成员的16S rRNA基因序列、16S-23SrRNAITS分别完全相同；5株结核分枝杆菌复合群成员的16S rRNA基因、16S-23S rRNAITS分别完全相同；海分枝杆菌与溃疡分枝杆菌16S rRNA基因、16S-23S rRNA分别完全相同；两种靶基因均不能将以上分枝杆菌相互鉴别。 16S rRNA基因不能鉴别的还有结核分枝杆菌95052(ATCC35810)与其他5株结核分枝杆菌复合群成员；胃分枝杆菌与堪萨斯分枝杆菌；产鼻疽分枝杆菌与塞内加尔分枝杆菌：龟分枝杆菌与脓肿分枝杆菌；猪分枝杆菌与M.boenickei；母牛分枝杆菌(95050)与南非分枝杆菌；M.peregrinum与M.septicum：M.vanbaalenii与母牛分枝杆菌(95051)；M.frederiksbergense与浅黄分枝杆菌：M.murale与东海分枝杆菌；但16S-23S rRNA ITS可以将以上分枝杆菌相互鉴别。 16S-23S rRNAITS不能鉴别的还有副结核分枝杆菌与鸟分枝杆菌复合群；千田分枝杆菌、田野分枝杆菌与5个结核分枝杆菌复合群成员；金色分枝杆菌与东海分枝杆菌；抗热分枝杆菌与副偶然分枝杆菌；M.vanbaalenii与南非分枝杆菌；微黄分枝杆菌与灰尘分枝杆菌；奥布分枝杆菌与母牛分枝杆菌；杜氏分枝杆菌与猪分枝杆菌；M.hassiacum与M.pyrenivorans：但16S rRNA基因可以将以上分枝杆菌相互鉴别。 3.在对其中7种包括97株分枝杆菌进行种内不同株序列分析时发现16S rRNA基因可将13株草分枝杆菌分为3个基因型，18株偶发分枝杆菌分为6个基因型，17株耻垢分枝杆菌分为4个基因型，8株戈登分枝杆菌分为3个基因型，9株龟分枝杆菌龟亚种分为3个基因型，15株堪萨斯分枝杆菌分为2个基因型，17株产鼻疽分枝杆菌分为1个基因型；而16S-23S rRNA可依次将上述分枝杆菌分为3个，15个，7个，3个，4个，3个，5个基因型。结论 1.16S rRNA基因和16S-23S rRNA ITS序列分析是分枝杆菌菌种鉴定的良好方法，两种方法结合可在很短时间内将除鸟分枝杆菌复合群、结核分枝杆菌复合群、海分枝杆菌与溃疡分枝杆菌之外的大部分(123种中的113种)分枝杆菌鉴定到种。2.16S-23S rRNA ITS的种内多态性较16S rRNA基因强，不仅能鉴别16S rRNA.基因能鉴别的菌株，还能鉴别16S rRNA基因无法鉴别的菌株。与16S rRNA基因相比16S-23SrRNA ITS更适合种内不同株的分型和鉴定。3.所有菌株的基因序列均可做为临床上分枝杆菌鉴定的标准参考序列，补充了基因数据库的不足，为下一步分枝杆菌菌种鉴定探针的设计、基因芯片的研究打下良好基础，并为分枝杆菌背景资料研究提供重要的基础资料。收起

10. 母牛分枝杆菌菌苗对结核病小鼠Th1/Th2细胞动力学及诱导型一氧化氮合成酶表达影响的研究

[学位论文] 张立群河北医科大学 1999年硕士导师: 王保法;马伟路共50页

摘要 : 工作人员建立结核病动物模型,在探讨结核病小鼠病程中IFN-γ,IL-4及iNOS表达的变化与组织损伤关系的同时,通过观察母牛分枝杆菌菌苗作用于不同状态的小鼠后IFN-γ,IL-4和iNOS表达的变化和肺部病变的程度,以进一步探讨结核病的发病机制和母牛菌苗的免疫... 展开

关键词 : 母牛分枝杆菌菌苗结核现动物模型小鼠发病机制细胞动力学 iNOS表达