中国科学技术信息研究所--国家工程技术数字图书馆

[学位论文] 王婷东南大学 2000年硕士导师: 陈宝安共58页

摘要 : 目的:该课题旨在探讨汉防己甲素(Tetrandrine,Tet)对阿霉素(Adriamycin,Adr)诱导的人急性髓性白血病细胞株HL-60/AR的增敏作用,以及诱导HL-60、HL-60/AR凋亡的作用机理,为Tet的临床应用提供理论依据.结论:①Tet可诱导HL-60、HL-60/AR细胞调亡,其机制... 展开

关键词 : 细胞凋亡耐药调节剂汉防己甲素阿霉素 HL-60细胞株 HL-60/AR细胞株 bcl-2基因 Bcl-2蛋白

2. 低氘水调控miR-143与miR-145诱导白血病细胞株K562与HL-60发生凋亡的作用研究

[学位论文] 陈楚言广东医学院 2016年硕士导师: 杨慧龄共54页

摘要 : 【目的】探讨低氘水调控miR-143与miR-145对人白血病K562与HL-60细胞株凋亡的影响，并初步探究其可能的相关机制。【方法】 1.通过CCK-8实验，探讨低氘水培养基对人白血病K562与HL-60细胞株活力的影响； 2.通过软琼脂克隆形成实... 展开

关键词 : 白血病低氘水 miR-143基因 miR-145基因 K562细胞株 HL-60细胞株细胞凋亡调控作用

3. Scd40l对白血病HL-60细胞株生物学行为的影响及机制

[学位论文] 李杰遵义医学院 2011年硕士导师: 陈琦共50页

摘要 : 目的：本研究旨在探讨可溶性CD40配体(sCD40L)对白血病HL-60细胞株生物学行为的作用及其机制，为thsCD40L应用于白血病的临床治疗提供一定的基础理论依据。方法：1）采用MTT法检测不同浓度sCD40L对白血病HL-60细胞体外增殖的影响，以确定最佳干... 展开目的：本研究旨在探讨可溶性CD40配体(sCD40L)对白血病HL-60细胞株生物学行为的作用及其机制，为thsCD40L应用于白血病的临床治疗提供一定的基础理论依据。方法：1）采用MTT法检测不同浓度sCD40L对白血病HL-60细胞体外增殖的影响，以确定最佳干预浓度；2）采用MTT法检测不同培育时间内sCD40L对白血病HL-60细胞体外增殖的影响；3）AnnexinV荧光标记法检测细胞凋亡；4）流式细胞术测定不同培育时期内CD95、Bcl-2凋亡相关因子的水平：5）ELISA测定白血病细胞培养上清液中与sCD40L不同培育时期内细胞因子IL-6水平的变化。结果：1）不同浓度sCD40L对HL-60细胞作用48h后有不同程度的增殖抑制作用，与三氧化二砷(As203)阳性组及HL-60阴性对照组比较，均有显著差异(P<0.05)。其中以2.00μg/ml、4.00μg/ml对白血病HL-60细胞的生长抑制作用最为明显。2）MTT法测sCD40L2.00μg/ml组、4.00μg/ml组、As203组、HL-60细胞对照组的OD值分别为1.290+0.006、0.568±0.012、0.799+0.013，2,154±0.004，组间相互比较均有显著差异(P<0.05)，其中以sCD40L4.00μg/ml组OD值最低。3)AnnexinV-FITC/PI双染色显示，HL-60细胞与sCD40L组共育后，均见明显凋亡，其中以sCD40L4.00μg/ml组作用48h的凋亡现象最为显著（凋亡率>20%），与As203组及HL-60细胞组比较均有显著差异(P<0.01)。4)流式细胞术测定各组CD95、Bcl-2的表达均有显著差异(P<0.05)，CD95的表达在sCD40L4.00μg/ml48h时上调最为显著(P<0.05)，Bcl-2的表达在sCD40L4.00μg/m148h时下调最为显著(P<0.05)。5)ELISA法检测不同组培养HL-60细胞上清中IL-6的水平，以48hsCD40L4.00μg/ml组IL-6水平最低(P<0.05)，其次是As203组，并且没有浓度时间依赖性(P>0.05)。结论：1）sCD40L在体外能够明显抑制HL-60细胞增殖，诱导HL-60细胞发生凋亡，本研究表明sCD40L最佳干预浓度为4.00μg/ml，最佳作用时间为48h．提示sCD40L作用具有浓度和时间依赖性；2）sCD40L抗白血病作用，诱导HL-60细胞凋亡可能是通过死亡受体途径和线粒体信号途径两条途经完成的；3）sCD40L在体外抑制HL-60细胞的增殖可能是与调节IL-6的表达水平有关。收起

关键词 : sCD40L 白血病 HL-60细胞株细胞凋亡生物学行为

4. 抗细胞膜DNA抗体检测方法的建立及对系统性红斑狼疮诊断价值的临床应用研究

[学位论文] 赵越山西医科大学 2011年硕士导师: 张莉芸共30页

摘要 : 【背景】系统性红斑狼疮（SLE）是一种全身多系统损害的自身免疫病。免疫系统紊乱贯穿整个发病过程，T淋巴细胞的异常、B淋巴细胞的过度活化产生多种自身抗体，并由此导致组织和器官的损伤。其中抗双链DNA抗体（抗dsDNA抗体）、抗Sm抗体和抗核小... 展开【背景】系统性红斑狼疮（SLE）是一种全身多系统损害的自身免疫病。免疫系统紊乱贯穿整个发病过程，T淋巴细胞的异常、B淋巴细胞的过度活化产生多种自身抗体，并由此导致组织和器官的损伤。其中抗双链DNA抗体（抗dsDNA抗体）、抗Sm抗体和抗核小体抗体（AnuA）是SLE的相对特异性抗体。这些抗体特异性较高，但敏感性报道不一。抗核抗体（ANA）敏感性虽高，但特异性较低，均对SLE诊断具有局限性。近年来文献报道一种新的SLE相关自身抗体，称为抗细胞膜DNA抗体（抗cmDNA抗体），对SLE患者诊断敏感性高，特异性强。本实验室的初步研究亦得到相似结论。本课题在前述研究的基础上，分别以人B淋巴细胞株Raji、人早幼粒白血病细胞株HL60两种细胞株为底物检测抗cmDNA抗体，比较检测效果的优劣；并以大样本SLE患者为研究对象，进一步探讨抗cmDNA抗体对SLE诊断的临床应用价值。【目的】 1.比较以人B 淋巴细胞株Raji及人早幼粒白血病细胞株HL60两种细胞为底物对SLE患者抗cmDNA抗体检测的结果； 2.探讨抗cmDNA抗体对SLE患者的诊断价值； 3.研究抗cmDNA抗体与SLE 临床特点、实验室指标及SLEDAI 评分的相关性。【方法】本课题纳入306例SLE患者（均符合1982年美国风湿病学会SLE 修订分类标准）、192例疾病对照组患者（包括包括脊柱关节病(SPA)52例，类风湿关节炎(RA)70例，原发干燥综合征(PSS)30例，其它结缔组织病(CTD)40例，均符合目前公认的该类疾病国际分类诊断标准）和50例健康志愿者，详细记录人口学资料及SLE患者中178例患者的临床特点、实验室指标和SLEDAI 评分。建立检测抗cmDNA抗体的间接免疫荧光法(IIF)：a. Raji及HL60细胞株的培养；b. IIF法检测抗cmDNA抗体：c. 间接免疫荧光结果判断。分别计算以Raji及HL60细胞为底物检测抗cmDNA抗体的敏感性和特异性。比较以上述两种细胞为底物检测抗cmDNA抗体的优劣，评价抗cmDNA抗体对SLE患者的诊断价值，并进行抗cmDNA抗体与SLE 临床特点、实验室指标及SLEDAI 评分的相关性分析。用IIF 法测定ANA及抗ds-DNA抗体，联合应用免疫印迹法或免疫双扩散法测定抗Sm抗体，用ELISA法测定AnuA。【结果】 1.Raji细胞株较HL60细胞株更易复苏、荧光图形亮度更强，表达效果更好； 2.Raji细胞及HL60细胞为底物检测SLE患者抗cmDNA抗体的敏感性和特异性差异均无统计学意义（P＞0.05）。阳性预测值及阴性预测值差异亦无统计学意义（P＞0.05）； 3.以Raji细胞为底物检测抗cmDNA抗体的敏感性高于抗Sm抗体及抗dsDNA抗体（P＜0.01），特异性与抗dsDNA抗体相似（P＞0.05），但低于抗Sm抗体（P＜0.01）。抗cmDNA抗体的敏感性与AnuA 敏感性相似（P＞0.05）,特异性低于AnuA（P＜0.01）。ANA的敏感性高于抗cmDNA抗体（P＜0.01），但特异性明显低于抗cmDNA抗体（P＜0.01）； 4.分别将抗dsDNA抗体、抗Sm抗体及AnuA 3种自身抗体与抗cmDNA抗体两两联合检测，敏感性均明显高于抗dsDNA抗体、抗Sm抗体及AnuA 单独检测，差异有统计学意义（P＜0.05）； 5.抗cmDNA抗体与SLE患者的血尿、蛋白尿、新发皮疹、脱发、发热、CRP、白细胞、血小板、C3和C4 之间无相关性（P＞0.05），而粘膜溃疡的发生率在抗cmDNA抗体阳性组高于阴性组，差异有统计学意义（P＜0.05），ESR在抗cmDNA抗体阳性组高于阴性组，差异有统计学意义（P＜0.05）。抗cmDNA抗体与SLEDAI 评分无相关性（P＞0.05）。【结论】 1.选择Raji细胞株为底物检测抗cmDNA抗体较HL60细胞株更有优势； 2.抗cmDNA抗体对SLE 诊断的敏感性高，特异性强，与抗dsDNA抗体、抗Sm抗体及AnuA 联合检测可提高对SLE 诊断的敏感性； 3.粘膜溃疡、ESR与抗cmDNA抗体之间有相关性。抗cmDNA抗体与SLE患者的血尿、蛋白尿、新发皮疹、脱发、发热、CRP、白细胞、血小板、C3和C4 之间无相关性。与SLEDAI 评分也无相关性。收起

关键词 : 红斑狼疮系统性自身抗体抗cmDNA 抗体 Raji 细胞株 HL60细胞株

5. 白血病多药耐药机理及逆转的实验研究

[学位论文] 龚玉萍上海交通大学 2000年博士导师: 欧阳仁荣;方智雯共96页

摘要 : 该课题分三部分.第一部分,对DNR在Pgp介导的白血病耐药细胞株K562R亚细胞结构分布的研究发现,DNR在耐药细胞核及周边胞浆的不均匀分布明显不同于敏感细胞核、浆弥温分布,DNR被分隔在耐药细胞线粒体内.这种异常分布方式使DNR远离作用靶点细胞核,促进了... 展开

关键词 : 多药耐药 K562耐药细胞株 P糖蛋白 HL60耐药细胞株多药耐药 brefeldin A 核酶

6. 甘肃猫儿眼提取物体内外抗肿瘤作用研究及其活性成分的GC-MS法检测

[学位论文] 俞发荣兰州大学 2004年博士导师: 王锐;李仁德共110页

摘要 : 目的:在前人工作的基础上,对甘肃猫儿眼化学成分及其抗肿瘤活性和可能的作用机制进行实验研究,为临床预防和治疗肿瘤提供实验资料,为甘肃猫儿眼的进一步开发利用提供科学依据.结论:猫儿眼提取物对肿瘤细胞增殖具有显著的抑制作用,效果随给药浓度的增加... 展开

7. 人肝细胞株HL-7702在HBV-AFB1双暴露下的基因组、转录组特征识别及相关分子机制的初步探索

[学位论文] 王向坤广西医科大学 2021年博士导师: 彭涛共301页

摘要 : 本文主要从以下几个部分展开论述：第一部分慢病毒介导过表达HBX基因于永生化人肝细胞株HL-7702的稳转细胞株构建及体外功能实验目的:构建稳定过表达HBX（hepatitisBvirusX，HBX）基因于永生化人肝细胞株HL-7702的稳转细胞株并进行体外功... 展开本文主要从以下几个部分展开论述：第一部分慢病毒介导过表达HBX基因于永生化人肝细胞株HL-7702的稳转细胞株构建及体外功能实验目的:构建稳定过表达HBX（hepatitisBvirusX，HBX）基因于永生化人肝细胞株HL-7702的稳转细胞株并进行体外功能实验观察HBX基因功能。材料与方法:将HBX基因的质粒通过活化、筛选、扩增后提取质粒DNA，然后转染到293T细胞内，收集48h及72h病毒液浓缩，然后转染进HL-7702细胞株内，使用潮霉素B抗性筛选从而获得稳转细胞株。通过荧光显微镜观察、实时荧光定量PCR及westernblot实验分别验证HL-7702细胞株HBX的表达水平。通过体外功能实验，包括MTT、Transwell、细胞划痕和平板克隆实验观察HBX基因在HL-7702细胞株内细胞增殖、侵袭、迁移和克隆形成能力的变化。结果:1.实时荧光定量PCR及westernblot结果均证明HBX基因已转染进HL-7702细胞株，与空载质粒组和阴性对照组相比，差异达统计学显著性（所有p＜0.05），空载质粒组和阴性对照组组间差异未达到统计学显著性(p＞0.05)。 2.细胞划痕、Transwell、MTT和平板克隆实验结果提示HBX基因过表达对照组细胞的迁移、侵袭、增殖和克隆形成能力均显著高于HBX基因过表达组，差异均达到统计学显著性（所有p＜0.05）。结论:通过慢病毒转染方法已获得稳定表达HBX基因的HL-7702细胞株，HBX呈现出抑癌基因的作用。第二部分全转录组测序识别HBX基因稳转细胞株HL-7702转录组水平分子表达变化及相关机制的初步探索目的:通过全转录组测序识别过表达HBX基因的HL-7702细胞株转录组水平分子表达变化及其相关分子机制的初步探索。材料与方法:提取稳转细胞株RNA样本送公司进行全转录组测序。通过表达水平分析及差异显著性分析并获得差异表达的mRNA、miRNA、lncRNA和circRNA分子。将差异表达的miRNA、lncRNA和circRNA进行靶基因预测，通过差异表达mRNA分子和靶基因进行基因本体(geneontology，GO)、京都基因和基因组百科全书(KyotoEncyclopediaofGenesandGenomes，KEGG)通路及反应组(Reactome)通路富集分析，探索这些差异表达分子可能通过何种途径介导HBX基因发挥作用。结果:1.全转录组测序发现的差异表达分子包括285个mRNA(101个上调，184个下调)，9个miRNA（4个上调，5个下调），78个lncRNA(39个上调，39个下调)，117个circRNA（56个上调，61个下调）。 2.差异表达RNA的GO结果主要包括上皮细胞和血管形态发生、血管发育、细胞外基质和结构组织、伤口愈合的调节等;KEGG通路结果主要包括细胞色素P450对异生物素的代谢、类固醇激素的生物合成、淀粉和蔗糖代谢及戊糖和葡萄糖醛酸的相互转化等;Reactome通路包括细胞外基质组织、弹性纤维形成和Netrin-1信号等（所有padj≤0.05）。 3.LncRNA靶基因、circRNA靶基因、miRNA靶基因GO富集分析主要包括L-抗坏血酸代谢过程、血清素受体信号通路、戊糖和葡萄糖醛酸相互转化等;Reactome通路富集分析包括异生物素、生物氧化血小板脱粒、粘结蛋白聚糖相互作用等（所有padj≤0.05）。结论:测序结果提示HBX基因可能通过差异表达的RNA分子在上皮细胞和血管形态发生、细胞外基质组织、RNA转运等途径发挥功能。第三部分 HBV相关性差异表达分子的ceRNA网络构建及部分差异表达分子的初步验证目的:通过乙型肝炎病毒相关性差异表达的mRNA、miRNA、lncRNA、circRNA分子及分子靶向调节关系构建竞争性内源性RNA(competingendogenousRNA，ceRNA)网络及通过RT-PCR初步验证部分差异表达的RNA分子。材料与方法:通过差异表达的4种RNA分子及相互调节关系分别构建lncRNA-miRNA-mRNA、circRNA-miRNA-mRNA的ceRNA网络。并且对前10个差异表达的mRNA、全部9个差异表达的miRNA、前5个差异表达的lncRNA分子通过RT-PCR方法进行验证。RNA的相对表达水平使用2-△△CT方法计算。结果:1.构建了lncRNA-miRNA-mRNA分子的包括LINC00670-205/PDCD11-207/-has-miR-3180-3P/has-miR-767-5P/-PDE7A/RPL29等分子在内的ceRNA网络。 2.构建了circRNA-miRNA-mRNA分子的包括has-circ-0007750/has-circ-000620-has-miR-3180-3P/has-miR-3180-RPL29/RPTOR等分子在内的ceRNA网络。 3.10个差异表达的mRNA(PSMD1表达上调，ACACA、GIPC1、ITPR3、MEMO1、PDE10A、PLCB1、PRL29、PTPRM及YES1均表达下调）;5个差异表达的lncRNA（LINC80表达下调，PTK7-215、LINC00511-274、MIR924HG-206、SLC2A3-205均表达上调）;8个差异表达的miRNA(hsa-miR-625-3p、hsa-miR-3615、hsa-miR-625-5p、hsa-miR-6842-3p表达上调，hsa-miR-1268a、hsa-miR-3180、hsa-miR-139-5p、hsa-miR-767-5p均表达下调）与测序结果一致（所有p≤0.05），但PCR验证的hsa-miR-3180-3p的结果(HBX组高表达)与测序结果相反。结论:HBX基因可能通过差异表达RNA分子构建的ceRNA网络发挥其作用。第四部分 AFB1暴露下未干预组及HBX基因稳转组HL-7702细胞株的单/双暴露细胞株模型构建目的:在已构建HBX基因稳转株HL-7702基础上，构建H-BX和黄曲霉毒素B1(aflatoxinB1，AFB1)慢性（干预周期≥3月）双暴露及单一AFB1慢性暴露的细胞株模型。材料与方法:使用AFB1+NADPH+肝微粒体建立AFB1暴露的细胞株干预体系，肝微粒体与NADPH的比例为0.5mg/ml∶1mmol/L，干预组别为①HL-7702(HBX)+AFB1;②HL-7702(control)+AFB1;（③HL-7702+AFB1，该体系干预细胞24小时后换用完全培养基继续培养24-48小时后再次干预。在HBX-AFB1双暴露及单一AFB1干预1、2、3月后分别提取细胞DNA进行TP53基因第249密码子测序，观察其是否发生突变。结果:1.本研究建立了AFB1干预浓度为0.05、0.02、0.01、0.005mmol/L的浓度梯度，构建了HBX-AFB1慢性双暴露及单一AFB1慢性暴露的细胞株模型。 2.在AFB10.05和0.02umol/1干预1月后，细胞株发生了第249密码子（第三位碱基）AGG＞AGT的常见突变。 3.本研究还发现TP53基因第249密码子AGG＞AGA和AGG＞AGC的突变，以及第247密码子AAC＞AGC突变和第250密码子CCC＞ACC突变。结论:本研究构建了HBX-AFB1双暴露及单一AFB1暴露的细胞株模型，此模型出现AFB1暴露引起TP53基因常见位点的突变。收起

关键词 : HL-7702细胞株 HBV-AFB1双暴露 HBX基因转录组特征识别分子机制

8. 蝌蚪提取液对人白血病HL-60细胞相关癌基因表达的影响

[学位论文] 杜晓宇郑州大学 1998年硕士导师: 白经修;牛富文共80页

摘要 : 白血病是造血系统常见的一种恶性疾病,严重危害着人类身体的健康.现在认为,白血病不仅是增殖、分化异常导致的疾病,也是细胞凋亡调节紊乱导致的疾病.分子生物学的研究表明,癌基因和抑癌基因不仅调控着细胞增殖和分化,也调控细胞凋亡.阐明这些基因参与... 展开

关键词 : 蝌蚪提取液 HL-60细胞株分化凋亡原位杂交斑点印迹基因表达

9. RANTES/CCL5表达与mCD99L2-A20细胞构建糖尿病鼠类HL模型的初步研究

[学位论文] 刘瀪荣南方医科大学 2011年博士导师: 赵彤共112页

摘要 : 背景：经典型霍奇金淋巴瘤(classical Hodgldn lymphoma,cHL)是组织形态非常特殊的一类淋巴瘤,其肿瘤细胞-H/RS细胞约占肿瘤组织的1/100,该细胞Küppers等通过单细胞分析和IgH基因重排证实它起源于生发中心残疾B细胞,背景的炎症免疫细胞(包括T细胞、B... 展开背景：经典型霍奇金淋巴瘤(classical Hodgldn lymphoma,cHL)是组织形态非常特殊的一类淋巴瘤,其肿瘤细胞-H/RS细胞约占肿瘤组织的1/100,该细胞Küppers等通过单细胞分析和IgH基因重排证实它起源于生发中心残疾B细胞,背景的炎症免疫细胞(包括T细胞、B细胞、浆细胞、中性粒细胞、嗜酸性粒细胞和肥大细胞等)及其细胞因子是H/RS细胞赖以生存的基础条件。因此,研究cHL既要注意肿瘤细胞H/RS,还要注重其背景免疫细胞及其细胞因子构成的微环境。 H/RS细胞周围微环境的炎症免疫细胞对H/RS细胞的生存是必需的,其炎症免疫细胞以CD4+T淋巴细胞为主,已有证据表明H/RS细胞生存明显依赖其周围细胞释放的生存信号:背景细胞死亡,H/RS细胞消亡。因此,原发肿瘤的H/RS细胞在体外极难培养；HL初发在淋巴结,建立H/RS细胞与背景细胞共同存在的体系,模拟淋巴结内肿瘤状态及生存环境,则是理想的细胞系。但目前均无来自cHL淋巴结的瘤细胞系,且屈指可数的细胞系均来自晚期HL患者的外周血、骨髓或腹水,如L428,L540,L591,DEV,HD-LM2,KM-H2,这些细胞系虽然不能模拟淋巴结内肿瘤状态,但提示H/RS细胞可以离开淋巴结生存；当H/RS细胞转移到其它器官中,背景细胞依然类似淋巴结内病变；H/RS细胞在异种移植的免疫正常小鼠中很难生存(免疫排斥所致),H/RS细胞移植到严重免疫缺陷SCID鼠可以存活与增生,形成移植瘤,但该瘤无cHL的免疫背景细胞,所以目前国际上没有真正体现cHL特点的动物模型。与此同时,cHL必需依赖趋化因子募集免疫背景细胞。本课题组前期经生物信息学分析cHL与弥漫性大B细胞淋巴瘤(diffuse large B cell lymphoma,DLBCL)趋化因子的差异,发现cHL高表达的趋化因子有RANTES/CCL5、CCL17、CCL22等,在复杂的因子网络关系中RANTES处于较中心的位置,H/RS细胞依赖趋化因子RANTES对CD4+T细胞等背景细胞产生趋化作用。国外和我们前期的实验表明cHL微环境细胞中最显著的是CD4+T细胞,特别是Treg(CD4+CD25+FOXP3+T细胞)细胞的重要作用,它和CD4+T细胞一起能抑制cHL微环境中的细胞毒性T淋巴细胞,从而有利于cHL的形成。国外研究表明,cHL的发生、发展和NF-кB活性异常增高有关,我们前期的研究结果表明H/RS细胞为CD99基因低表达和NF-кB信号持续活化。本课题组前期构建的mCD99L2-A20细胞亚系,低表达鼠CD99基因,经鉴定其的确具有H/RS细胞的表型,然而mCD99L2-A20细胞RANTES的表达和NF-кB活性如何?这些方面是否与H/RS相类似? 要想完整准确地研究cHL,最可行的就是建立类似人cHL病理特征的活体实验动物模型,满足模拟cHL背景环境的细胞多样性和因子复杂性,从而在此背景微环境基础上才能进行cHL,的相关研究,课题组前期将mCD99L2-A20细胞尾静脉注射BALB/c小鼠未能成瘤,所以构建HL动物模型陷入了困境。本研究考虑到cHL为免疫系统恶性肿瘤,其发生与机体免疫缺陷有着密切的关系,糖尿病能降低机体免疫力,有研究证实1型糖尿病并发淋巴瘤的风险较正常人高(男性高8％,女性高12％)。若将来自BALB/c鼠的mCD99L2-A20细胞接种同类糖尿病鼠,既能避免种群排斥,又能避免健康BALB/c鼠的免疫排斥,还能提供处于免疫抑制状态的免疫炎症细胞来源,可以用来成瘤并有助于反应背景细胞的募集。为此,本研究采用荧光定量、共聚集显微镜、免疫细胞与免疫组织化学、ELISA、共培养实验、Western blotting、流式细胞术、体内成瘤的方法,首先观测了cHL细胞及瘤组织的RANTES的表达,探究RANTES在cHL形成中的作用；同时检测RANTES在类人H/RS细胞mCD99L2-A20细胞的表达,进行同源BALB/c糖尿病鼠接种形成移植瘤,以期获得鼠源性的早期类人cHL模型。目的： 1.观测cHL和DLBCL细胞及瘤组织RANTES的表达的情况,比较分析RANTES在cHL形成中的作用。 2.检测HL细胞株L428细胞上调CD99基因前后(IA28与L428-CD99)、鼠DLBCL细胞株A20细胞下调CD99基因前后(A20与mCD99L2-A20)RANTES的表达,探究RANTES表达与CD99基因及NF-кB信号通路的关系。 3.构建链脲佐菌素(Streptozotocin,STZ)诱导BALB/c小鼠1型糖尿病模型,观测外周血RANTES分泌水平。 4.比较mCD99L2-A20类人H/RS细胞株在1型糖尿病BALB/c小鼠和正常BALB/c小鼠中成瘤情况,观测外周血中RANTES分泌水平。方法： 1.HL和DLBCL中RANTES表达的检测HL细胞株L428与DLBCL细胞株OCI-Ly1、OCI-Ly8、OCI-Ly10细胞进行细胞培养,观察细胞的形态,提取RNA,荧光定量检测RANTES mRNA的表达,共聚集显微镜检测细胞内RANTES蛋白的表达,免疫细胞化学检测细胞、免疫组织化学检测HL与DLBCL组织的RANTES蛋白表达情况,IPP6.0软件分析阳性细胞光密值数据,酶联免疫吸附实验(ELISA)检测细胞分泌的RANTES蛋白,共培养实验观测L428分泌的RANTES对CD4+的趋化作用。 2.RANTES与CD99、NF-кB信号通路的关系L428与L428-CD99、A20与mCD99L2-A20细胞培养,观察细胞的形态；提取RNA,荧光定量检测CD99 mRNA、RANTES mRNA的表达；共聚集显微镜检测细胞CD99、RANTES蛋白的表达；ELISA检测细胞RANTES蛋白的分泌,Western blotting检测CD99和p-iкBα蛋白的表达。 3.BALB/c小鼠1型糖尿病模型的建立及外周血RANTES蛋白的检测将60只雄性BALB/c小鼠随机分为A、B、C、D四组,每组15只,A组采用一次性腹腔注射150 mg/kg STZ,B组采用一次性腹腔注射与A组等量无菌柠檬酸缓冲液,C组采用200 mg/kg STZ分5次腹腔注射,D组采用与C组等量无菌柠檬酸缓冲液分5次腹腔注射,监测不同时点空腹血糖变化,A、B、C、D四组均自由饮食。用流式细胞术检测糖尿病鼠与正常鼠外周血CD4+CD25+Treg细胞数,ELISA检测糖尿病鼠与正常鼠外周血RANTES蛋白的分泌情况。 4.1型糖尿病BALB/c小鼠类HL模型的构建将类人H/RS细胞(mCD99L2-A20细胞)经尾静脉注射接种1型糖尿病BALB/c小鼠和正常BALB/c小鼠各20只,观察动物成瘤时间、成瘤率、瘤体生长速度；取瘤组织做HE染色观察病理学形态、免疫组化检测RANTES的表达；肿瘤组织进行原代培养,DNA-PCR检测载体的整合；流式细胞仪检测成瘤糖尿病鼠与未成瘤糖尿病鼠外周血CD4+CD25+Treg细胞的比例；ELISA检测成瘤糖尿病鼠与未成瘤糖尿病鼠外周血RANTES蛋白的分泌情况。结果： 1.HL和DLBCL中RANTES的表达 (1)以OCI-Ly1为对照,L428、OCI-Ly8和OCI-Ly10细胞的RANTESmRNA表达水平分别是OCI-Ly1的8.154±0.809、0.990±0.062和1.008±0.0565倍,L428细胞中RANTES的mRNA的表达高于OCI-Ly1、OCI-Ly8和OCI-Ly10细胞,两者相比较均有统计学差异(P=0.000)；OCI-Ly1与OCI-Ly8(P=0.959)、OCI-Ly1与OCI-Ly10(P=0.968)、OCI-Ly8与OCI-Ly10(P=0.927),两两相比较均无统计学差异。 (2)L428细胞中RANTES的表达高于OCI—Ly1、OCI—Ly8或OCI-Ly10细胞,两者相比较均有统计学差异(p=000)；cHL组织中RANTES的表达高于DLBCL,两者相比较均有统计学差异(P=0.000),cHL组织中RANTES的表达高于L428细胞中的表达,两者相比较均有统计学差异(P=0.000)；DLBCL组织中RANTES的表达高于OCI-Ly1、OCI—Ly8或OCI-Ly10细胞中的表达,两者相比较均有统计学差异(P=0.000)；OCI-Ly1与OCI-Ly8(P=0.811)、OCI-Ly1与OCI—Ly10(P=0.279)、OCI-Ly8与OCI-Ly10(P=.397),两两相比均无统计学差异。 (3)L428细胞中RANTES的分泌高于OCI-Ly1、OCI—Ly8或OCI-Ly10细胞,两者相比较均有统计学差异(P=.000);OCI-Ly1与OCI-Ly8(P=0.885)、OCI-Ly1与OCI-Ly10(P=0.979)、OCI-Ly8与OCI-Ly10(P=0.906),两两相比较均无统计学差异。 (4)与L428共培养时趋化的CD4+T细胞(340.556±15.852),高于与OCI-Ly1共培养能趋化的CD4+T细胞(79.333±10.782),两者相比有统计学意义(P=0.000)；同时若向L428培养基中加RANTES,可导致趋化的CD4+T细胞增加(571.111±14.049),若向L428培养基中加anti-RANTES抗体,可导致趋化的CD4+T细胞减少(149.222±16.092),两者相比有统计学意义(P=0.000)。 2.RANTES与CD99、NF-кB信号通路的关系 (1)在传代过程中发现与A20细胞相比较,mCD99L2-A20细胞的大细胞数量明显增多,胞浆较丰富,细胞核明显增大,出现较多双核、多核细胞；与L428细胞相比较,L428-CD99细胞中的大细胞数量明显减少,细胞更具有一致性。 (2)RT-PCR及荧光定量PCR检测:mCD99L2-A20细胞的mCD99基因,为A20细胞的0.519±0.004倍,呈低水平表达,两者相比有统计学意义(P=0.000)；mCD99L2-A20细胞的mRANTES mRNA,为A20细胞的15.224±0.984倍,两者相比有统计学意义(P=0.000)；L428-CD99细胞的hCD99基因是L428细胞的24.503±0.681倍,两者相比有统计学意义(P=0.000)；L428-CD99细胞的hu-RANTES mRNA较L428细胞减少80.932±2.062倍,两者相比有统计学意义(P=0.000)。 (3)荧光共聚集检测:mCD99L2-A20细胞内RANTES蛋白的表达高于A20细胞,L428-CD99细胞内RANTES蛋白的表达低于L428细胞； (4)Western blotting检测:mCD99L2-A20细胞mCD99蛋白弱于A20细胞,p-iкBα蛋白强于A20细胞；mCD99L2-A20细胞经NF-kB信号通路抑制剂BAY处理对mCD99蛋白无影响,但p-iкBα蛋白表达明显下降；A20细胞经NF-kB信号通路激活剂LPS处理对mCD99蛋白无影响,但p-iкBα蛋白表达明显增强。L428细胞hCD99蛋白弱于L428-CD99细胞；L428细胞经NF-kB信号通路抑制剂BAY处理对hCD99蛋白无影响,但p-iкBα蛋白表达明显下降；L428-CD99细胞经NF-kB信号通路激活剂LPS处理对hCD99蛋白无影响,但p-iкBα蛋白表达明显增强。 (5)mCD99L2-A20细胞分泌RANTES的量为432.722±10.735,高于A20细胞分泌RANTES的量39. 收起

关键词 : 霍奇金淋巴瘤 HL细胞株L428 淋巴瘤细胞株A20 CD99基因细胞因子糖尿病

10. 维甲酸、三氧化二砷诱导NB4细胞TRAILmRNA表达的研究

[学位论文] 王玲玲山东大学 2002年博士导师: 张茂宏;徐从高共56页

摘要 : 全文共两部分.一、维甲酸、三氧化二砷诱导NB4细胞TRAILmRNA表达的研究.目的：研究全反式维甲酸和三氧化二砷诱导急性早幼粒细胞白血病NB4细胞TRAILmRNA表达及其治疗APL的机制.我们同时检测了原代白血病细胞和正常人外周血淋巴细胞TRAILmRNA的表达,以... 展开

关键词 : TRAILmRNA RT-PCR NB4细胞株维甲酸三氧化二砷 Apo2L DR5mRNA HL-60细胞株白血病细胞凋亡抗肿瘤制剂