中国科学技术信息研究所--国家工程技术数字图书馆

[学位论文] 蒋伟哲广西医科大学 2011年博士导师: 王乃平共589页

摘要 : 目的:以猫豆为原料生产左旋多巴有很大的市场潜力。研究猫豆产业链一套支撑技术，为广西打造猫豆产业奠定坚实基础。方法:通过对猫豆药材开展系列研究，包括猫豆的应用基础研究、猫豆药材种植技术研究、猫豆的应用研究、猫豆中左旋多巴提取工艺... 展开

关键词 : 猫豆左旋多巴提取工艺豆渣保鲜

2. 大鼠Hrh1基因新发现的cSNP位点及相关研究

[学位论文] 杨天燕广西医科大学 2009年博士导师: 王乃平共159页

摘要 : 组胺是组胺酸在组胺酸脱羧酶(HDC)作用下形成的体内作用最广泛的单胺类物质之一，是I型超敏反应中的主要效应分子，组胺通过与其相结合的Hrh1(H1)参与机体内多种生理功能的调节。Hrh1是研究神经—内分泌—免疫—效应器轴的重要中介。Hrh1作为单拷贝基... 展开组胺是组胺酸在组胺酸脱羧酶(HDC)作用下形成的体内作用最广泛的单胺类物质之一，是I型超敏反应中的主要效应分子，组胺通过与其相结合的Hrh1(H1)参与机体内多种生理功能的调节。Hrh1是研究神经—内分泌—免疫—效应器轴的重要中介。Hrh1作为单拷贝基因，在大鼠基因组中定位于4号染色体，4q42区。直至最近的研究才发现，人类的Hrh1基因属于无内含子的结构基因。截至2009年4月，NCBI中报道的人类基因组无内含子基因约为180个，数量远远少于有内含子基因，但是，真核生物的无内含子基因在比较物种进化与基因组的遗传变异中起着重要的作用，近年来已逐渐引起人们的兴趣。大鼠Hrh1基因也是无内含基因，全长均为外显子。本研究选择大鼠Hrh1基因研究其基因组与转录产物mRNA的碱基突变，核苷酸多态性，为今后研究人类基因组Hrh1基因多态性，相关突变及与Hrh1表达产物(组胺H1受体)的遗传药理学与药物基因组奠定前期实验基础。本研究四个部分：第一部分实验，研究了大鼠Hrh1基因在大鼠全血基因组、大鼠脑组织转录产物mRNA以及大鼠肝组织转录产物mRNA中序列的碱基差异。主要实验操作方法为：从雄性SD大鼠中用碘化钾法提取全血基因组DNA，Trizole法提取大鼠脑组织与肝组织的总RNA。紫外分光光度法与琼脂糖凝胶电泳鉴定提取的核酸纯度与浓度合格后，以脑组织和肝组织的总RNA为模板，RevertAidTM First Strand cDNA Synthesis Kits逆转录合成cDNA第一链。根据NCBI公布的大鼠Hrh1基因组DNA(gi:62750804)及mRNA序列(gi:220770)，应用Vector NTI Suite10.0软件，针对Hrh1的蛋白编码区序列设计克隆编码区全长的引物，为便于今后研究Hrh1基因的表达，在上下游引物的5’引入不同的限制性酶酶切位点。使用保真度极高的PrimeSTARTM HS DNA Polymerase，以所提取的大鼠全血基因组DNA、脑组织cDNA以及肝组织cDNA为模板，使用聚合酶链反应(PCR)方法克隆大鼠Hrh1编码区全长。PCR产物纯化回收试剂盒对PCR反应的产物进行纯化。用限制性内切酶双酶切法对基因组DNA、脑cDNA、肝cDNA PCR纯化产物与克隆载体pUC19进行双酶切。小量胶回收试剂盒进行酶切产物的纯化回收。T4 DNA Ligase分别将基因DNA，脑cDNA，肝cDNA酶切产物与pUC19载体进行粘性末端的连接，构建pUC19-Hrh1重组载体。第二部分实验中，主要研究不同抗凝剂对全血基因组DNA提取的纯度和得率，尤其是下游的基因扩增的影响。在第一部分实验中，我们发现当使用肝素钠抗凝时，紫外分光光度法与琼脂糖凝胶电泳检测基因组DNA得率与纯度都令人满意，但PCR扩增时，结果并不稳定，效果亦不理想。在排除多种因素并查阅了相关资料后，推测有可能是抗凝血中抗凝剂的使用对基因组DNA的扩增效率产生影响。考虑到EDTA对PCR反应的催化剂Mg2+的螯合作用，我们没有选择EDTA作为抗凝剂，而是选用枸橼酸钠与肝素作为抗凝剂，分别对大鼠动脉血与静脉血抗凝后，进行实验比较。第三部分实验选择健康雄性SPF SD级大鼠7只，健康雌性SD大鼠6只，颈静脉取血，碘化钾法提取全血基因组DNA。紫外分光光法与琼脂糖电泳鉴定DNA的浓度与纯度。PrimeSTARTM HS DNAPolymerase高保真扩增大鼠Hrh1编码区全长，琼脂糖电泳鉴定PCR产物，小量胶回收试剂盒进行剩余PCR产物的纯化回收。纯化产物送北京诺赛基因组研究中心有限公司进行测序。通过分析13只大鼠的基因组Hrh1序列测序峰图，我们发现在大鼠Hrh1CDS全长1461 bp中，共有4个cSNP位点，分别为：237位C/T多态；928位A/G多态；1041位C/T多态；1342位G/A多态。并对13例样本4个cSNP位点用SPSS15.0进行了频率统计。第四部分实验中，探索了等位基因特异性扩增法(alleles specific amplification，ASA)检测928与1342位cSNP。选择第三部分实验中通过测序确定序列的1号(928 A/G1342 G/A)、2号(928G/G,1342A/A)、8号(928A/A,1342 G/G)大鼠做为测定样本。ASA PCR引物的设计至关重要。针对928位(A/G)和1342位(G/A)cSNP位点，应用Vector NTI Suite10.0软件设计引物。2个位点的引物都是在下游引物3’端设计相应的碱基探针，与探针相邻的碱基设计成错配。提取全血基因组DNA，高保真扩增Hrh1全长，PCR产物纯化回收，稀释后作为ASA PCR的反应模板。选择第一部分实验中通过测序确定的重组质粒Blood1(928A，1342 G)和Liver1(928 G1342A)做为阳性对照。验结果表明，PCR结果与预期结果一致，证明所设计ASA探针引物完全可行，建立ASA PCR反应体系可靠，为今后对大鼠的Hrh1基因进行分型，进行相应的Hrh1不同基因表型、遗传药理学与药物基因组学等相关实验奠定了前期的基础。收起

关键词 : 体内组胺酸核酸多态性碱基突变基因定位

3. 六月青石油醚萃取物体外抗胃癌实验研究

[学位论文] 张志伟广西中医药大学 2008年硕士导师: 王乃平共132页

摘要 : 目的： 1.探究六月青石油醚萃取物（LYQPE）及其含药血清在体外抑制胃癌细胞SGC-7901和MKN-45生长的最适时间。 2.根据所得最适时间研究LYQPE及其含药血清在体外抑制胃癌细胞SGC-7901和MKN-45效应的部分作用机理。方法：根据预... 展开目的： 1.探究六月青石油醚萃取物（LYQPE）及其含药血清在体外抑制胃癌细胞SGC-7901和MKN-45生长的最适时间。 2.根据所得最适时间研究LYQPE及其含药血清在体外抑制胃癌细胞SGC-7901和MKN-45效应的部分作用机理。方法：根据预实验摸索出的药物作用浓度，直接加药法设40μg/ml、80μg/ml、160μg/ml和320μg/ml LYQPE四个剂量组；血清药理学法设3.75%、7.5%和15%三个 LYQPE大鼠含药血清剂量组，大鼠血清总含量为15%，不足的量用生理盐水大鼠血清补齐： 1.LYQPE及其含药血清在体外抑制胃癌细胞SGC-7901和MKN-45生长的最适时间：SGC-7901和MKN-45与LYQPE及其含药血清分别共同培养24h、48h和72h。MTT法结合倒臵显微镜下观察确定能显著抑制胃癌细胞SGC-7901和MKN-45增殖的最适时间。 2.LYQPE及其含药血清在体外对胃癌细胞SGC-7901和MKN-45细胞周期分布的影响和G0/G1期阻滞相关基因cyclin D1 mRNA表达的检测：SGC-7901和MKN-45与LYQPE及其含药血清分别共同培养48h。流式细胞仪检测细胞周期分布的变化；半定量RT-PCR检测LYQPE及其含药血清作用前后胃癌细胞SGC-7901和MKN-45的cyclin D1 mRNA相对表达量的改变。 3.LYQPE及其含药血清作用48h在体外对胃癌细胞SGC-7901和MKN-45细胞凋亡的影响：运用Hoechst33258荧光染料染色观察LYQPE及其含药血清作用前后胃癌细胞SGC-7901和MKN-45细胞凋亡的形态学改变，运用流式细胞术检测LYQPE及其含药血清作用前后胃癌细胞SGC-7901和MKN-45细胞凋亡及其相关基因P53蛋白表达的变化；运用半定量RT-PCR检测LYQPE及其含药血清作用前后胃癌细胞SGC-7901和MKN-45细胞凋亡相关基因P53 mRNA表达的变化；运用电子显微镜观察LYQPE160μg/ml及其含药血清15%作用前后胃癌细胞SGC-7901和MKN-45的超微结构的改变。 4.LYQPE及其含药血清作用48h在体外对胃癌细胞SGC-7901黏附基因CD44 mRNA的影响：采用半定量RT-PCR检测LYQPE及其含药血清作用前后胃癌细胞SGC-7901的黏附基因CD44 mRNA的变化。结果： 1.LYQPE及其含药血清在体外抑制胃癌细胞SGC-7901和MKN-45生长的最适时间：MTT检测显示，各作用时间各药物组都呈时间和剂量依赖性的抑制胃癌细胞SGC-7901和MKN-45增殖，综合考虑，48h是研究LYQPE及其含药血清在体外抗胃癌细胞SGC-7901和MKN-45的最适时间，24h达不到最佳效果，72h效果稍有增强，但周期太长，操作不容易控制；倒臵显微镜下观察，药物作用48h时，各药物组剂量越高，SGC-7901和MKN-45生长状态越差，细胞贴壁不完全，容易脱落，高剂量组细胞多漂浮。 2.LYQPE及其含药血清在体外对胃癌细胞SGC-7901和MKN-45细胞周期分布的影响和G0/G1期阻滞相关基因cyclin D1 mRNA表达的检测：LYQPE及其含药血清各剂量组作用48h后，与各自对照组相比较，SGC-7901和MKN-45 G0/G1期细胞不同比例的增加，且有明显的量效关系，除直接加药40μg/ml对SGC-7901 G0/G1期细胞的增加没有统计学意义，其他皆有显著差异（P<0.01），G2/M和S期细胞数量比例变化不规律；与各自对照组相比较，LYQPE及其含药血清各剂量组作用48 h后，SGC-7901和MKN-45cyclin D1的mRNA相对表达量呈剂量依赖性降低，对于SGC-7901，除了直接加药的40μg/ml和含药血清的3.75%两个剂量，其他都有统计学差异(P<0.05或P<0.01），对于MKN-45，只有直接加药的40μg/ml没有明显的统计学差异，其他都有显著统计学差异（P<0.01）。 3.LYQPE及其含药血清在体外对胃癌细胞SGC-7901和MKN-45细胞凋亡的影响：药物作用48h后，Hoechst33258检测细胞凋亡发现，随着LYQPE及其含药血清浓度的增加，SGC-7901和MKN-45细胞凋亡率逐渐上升，与各自对照组相比，除了SGC-7901含药血清的3.75%，其余都有统计学差异（P<0.05或 P<0.01）；流式细胞术检测凋亡发现，与各自对照组相比，LYQPE及其含药血清各药物剂量组SGC-7901和MKN-45细胞凋亡状况变化皆有统计学差异（P<0.01），且正常细胞比例呈剂量依赖性下降，对于SGC-7901，直接加药凋亡高峰剂量为80μg/ml，含药血清为15%，对于MKN-45，直接加药凋亡高峰剂量为320μg/ml，含药血清为7.5%；流式细胞术检测P53蛋白显示，LYQPE及其含药血清在体外有减少SGC-7901 P53蛋白表达，增加MKN-45 P53蛋白表达的作用，与各自对照组比较，除了直接加药对MKN-45的40μg/ml，其他组都有显著的统计学差异（P<0.01）；RT-PCR检测P53显示，LYQPE及其含药血清在体外有减少SGC-7901 P53 mRNA表达，增加MKN-45 P53 mRNA表达的作用，与流式细胞术检测P53蛋白所得结果趋势相同，与各自对照组比较，低剂量只有直接加药对MKN-45有差异，其他组的低剂量效果均不明显，但高剂量都有统计学差异（P<0.05或P<0.01）；透射电镜下SGC-7901和MKN-45各对照组标本的绝大部分细胞结构完整，胞质、核质匀称，细胞器丰富清晰，加药组的标本中可见细胞结构被不同程度的破坏，细胞器模糊，大量气泡，核变形，碎裂，消失，可见凋亡细胞和坏死细胞。 4.LYQPE及其含药血清在体外对胃癌细胞 SGC-7901黏附基因CD44的影响：与各自对照组相比较，LYQPE及其含药血清各剂量组作用48h后，SGC-7901 CD44的mRNA相对表达量呈剂量依赖性降低，除了直接加药的40μg/ml，其他都有统计学差异（P<0.05或P<0.01）。结论： 1.LYQPE及其含药血清在体外能够显著抑制胃癌细胞SGC-7901和MKN-45的增殖，其作用强度与浓度和作用时间密切相关，48h是进行后续研究的最适时间。 2.LYQPE及其含药血清在体外对胃癌细胞SGC-7901和MKN-45有G0/G1期阻滞作用，且可能跟下调cyclin D1 mRNA转录有关。 3.LYQPE及其含药血清在体外可诱导胃癌细胞SGC-7901和MKN-45凋亡，高浓度可致其坏死，下调P53 mRNA转录和翻译水平可能是其相关分子机制之一。 4.LYQPE及其含药血清在体外可影响胃癌细胞SGC-7901和MKN-45的超微结构，从而抑制其增殖。 5.LYQPE及其含药血清在体外可减少胃癌细胞SGC-7901 CD44的mRNA表达强度，可能是导致细胞脱落漂浮的机制之一。收起

关键词 : 六月青石油醚萃取物胃癌 SGC-7901细胞 MKN-45细胞生长抑制

4. 广西海带多糖L01提取纯化与抗血栓作用机制研究

[学位论文] 谢露广西医科大学 2005年博士导师: 王乃平共126页

摘要 : 　海带多糖是海带中的活性成分，实验研究已经表明其具有多种药理作用。但海带多糖成分复杂，其分子量、糖链长度、单糖的组成和连接形式可因海带的产地不同、提取部位不同及提取分离方法不同而不同，结构不同就会产生不同的药理作用。本研究... 展开

关键词 : 海带多糖抗血栓血小板聚集血液凝固血小板粘附

5. 短尾蝮蛇毒磷脂结合抗凝蛋白的生物化学、药理学和分子生物学的研究

[学位论文] 黎渊弘广西医科大学 2007年博士导师: 王乃平共112页

摘要 : 目的:蛇毒是一种含有多种蛋白和多肽的混合物，其中不少毒性蛋白影响凝血功能(血液凝固、纤溶系统和血小板聚集)，这些毒素是蛋白质或酶。如L-氨基酸氧化酶、磷脂酶A、核苷酸酶、类凝血酶、纤溶酶、蛋白酶C：而有些是非酶蛋白，如解离素、Carinatin、... 展开

关键词 : 蛇毒磷脂血液流变基因克隆分子生物学

6. 月光花豆乙醇提取物抗炎作用及其机制研究

[学位论文] 唐秀能广西中医药大学 2008年硕士导师: 王乃平共106页

摘要 : 目的: 研究月光花豆乙醇提取物（CABE）的体内抗炎作用，并初步探讨其作用机制，为研究开发月光花提供实验依据和理论基础。方法: 1.采用二甲苯致小鼠耳廓肿胀、醋酸诱发小鼠腹腔毛细血管通透性增加、角叉菜胶致小鼠足肿胀、角叉菜胶... 展开目的: 研究月光花豆乙醇提取物（CABE）的体内抗炎作用，并初步探讨其作用机制，为研究开发月光花提供实验依据和理论基础。方法: 1.采用二甲苯致小鼠耳廓肿胀、醋酸诱发小鼠腹腔毛细血管通透性增加、角叉菜胶致小鼠足肿胀、角叉菜胶致大鼠足肿胀、外伤致小鼠足趾淤血水肿、棉球致小鼠肉芽肿、棉球致大鼠肉芽肿等模型，观察CABE对急、慢性炎症的抗炎作用；采用小鼠足肿胀模型及大鼠足肿胀模型，观察CABE对角叉菜胶致小鼠肿胀足中MDA含量、SOD活性及大鼠血清中细胞因子TNF-α、IL-1、IL-6含量的影响，同时测量大鼠肿胀足PGE2、NO的含量，初步探讨其抗炎作用机制。 2.采用角叉菜胶致大鼠急性胸膜炎模型，观察CABE对大鼠急性胸膜炎渗出液量、炎症渗出液中白细胞游走数、总蛋白质的含量及渗出液中PGE2的含量。 3.采用二甲苯致去肾上腺小鼠耳廓肿胀模型，并对大鼠用药后血清中皮质醇含量、肾上腺中维生素C（Vit C）及胆固醇含量进行测定，研究CABE抗炎作用与下丘脑-垂体-肾上腺皮质轴（HPAA）的关系。 4.采用酵母混悬液诱发的大鼠急性肺损伤模型，以免疫组化法测定大鼠肺组织中核因子-κB/p65（NF-κB/p65）的表达、ELISA法测定肺组织白介素-1β（IL-1β）的含量，同时观察肺组织病理形态、肺组织的湿干比重和肺组织髓过氧化物酶（MPO）的活性，研究药物对急性肺损伤的影响及其机制。 5.采用醋酸致小鼠扭体法、小鼠热板法及小鼠温浴法，观察其镇痛作用。 6.利用分光光度法测定小鼠血中残存刚果红含量和炭粒浓度来研究药物对免疫功能的影响。结果： 1. CABE对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀、醋酸诱发小鼠腹腔毛细血管通透性增加、角叉菜胶所致小鼠足肿胀、角叉菜胶致大鼠足肿胀、外伤致小鼠足趾淤血水肿、棉球致小鼠肉芽肿、棉球致大鼠肉芽肿等急、慢性炎症模型均有明显抑制作用（p<0.05或 p<0.01）；显著降低足肿胀模型小鼠肿胀足MDA含量及抑制SOD活性；显著降低足肿胀模型大鼠血清中细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6含量及大鼠肿胀足PGE2的含量（p<0.05或p<0.01），但对NO含量无显著影响（P>0.05）。 2. CABE可显著减少大鼠急性胸膜炎渗出液量、炎症渗出液中白细胞游走数、总蛋白质的含量及渗出液中PGE2的含量。 3. CABE高剂量组能使正常大鼠肾上腺中Vit C、胆固醇含量降低，血清皮质醇含量升高（P<0.05）。受试动物切除双侧肾上腺后，月光花豆乙醇提取物对二甲苯致去肾上腺小鼠耳肿胀度也有明显抑制作用，但与假手术组比较，抑制作用明显降低。 4.与模型对照组比较，CABE组肺组织损伤减轻，IL-1β含量减少，肺湿干比和MPO活性降低，NF-κB/p65表达降低（P<0.05）。 5. CABE能显著减少醋酸致小鼠扭体反应的扭体次数，显著延长小鼠热板舔足反应潜伏期及温浴致小鼠缩尾反应潜伏期（p<0.05或p<0.01）。 6. CABE能增强小鼠对刚果红和廓清碳粒的吞噬功能(p<0.05或p<0.01）。结论: 月光花豆乙醇提取物具有抗炎、镇痛和免疫调节等作用，抗炎机制可能与激动HPAA轴，抑制炎症介质的产生、释放，减少氧自由基的生成、加快其清除，干扰NF-κB途径从而抑制TNF-α、IL-1β、IL-6生成有关。收起

关键词 : 月光花豆乙醇提取物抗炎机制激动HPAA轴

7. 灯盏乙素改善胰岛素抵抗的作用及其机制研究

[学位论文] 刘舒凌广西中医药大学 2008年硕士导师: 王乃平共106页

摘要 : 目的：观察灯盏乙素对实验性胰岛素抵抗的影响及其作用机制。方法： 1.观察灯盏乙素对正常小鼠血糖的影响。小鼠灌胃给药7d后，取血测定血糖水平。 2.小鼠灌胃灯盏乙素7d后，灌胃葡萄糖溶液建立高血糖模型，观察灌糖后0.5h、1h... 展开目的：观察灯盏乙素对实验性胰岛素抵抗的影响及其作用机制。方法： 1.观察灯盏乙素对正常小鼠血糖的影响。小鼠灌胃给药7d后，取血测定血糖水平。 2.小鼠灌胃灯盏乙素7d后，灌胃葡萄糖溶液建立高血糖模型，观察灌糖后0.5h、1h、2h血糖水平的变化情况。 3.小鼠灌胃灯盏乙素7d后，腹腔注射肾上腺素建立高血糖模型，观察注射后0.5h、1h血糖水平的变化情况。 4.肌肉注射地塞米松诱导大鼠IR，同时灌胃灯盏乙素进行治疗，检测大鼠空腹血糖（FBG）、空腹血清胰岛素（FINS）、血清总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）水平。 5.采用高糖高脂饲料联合腹腔注射链脲佐菌素（STZ）诱导IR大鼠模型，造模后灌胃灯盏乙素进行治疗，实验期间观察大鼠饮食饮水量、体重等一般情况，实验结束后检测大鼠体重（BW）、空腹血糖（FBG）、空腹血清胰岛素（FINS），血清总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白（HDL）、低密度脂蛋白（LDL）、尿素氮（BUN）、肌酐（Cr）、超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、一氧化氮（NO）、肿瘤坏死因子（TNF-α），血浆内皮素（ET）水平，胰腺组织HE染色光镜下观察病理变化。结果： 1.灯盏乙素对正常小鼠血糖无明显影响。 2.灯盏乙素对灌胃葡萄糖所致的小鼠高血糖无明显影响。 3.灯盏乙素能明显抑制腹腔注射肾上腺素后0.5h和1h小鼠血糖水平的升高。 4.灯盏乙素能显著降低地塞米松诱导的IR大鼠FBG、FINS水平，升高胰岛素敏感指数（ISI），降低TC含量，对TG的升高有一定抑制作用，可以改善地塞米松诱导的胰岛素抵抗。 5.灯盏乙素能抑制STZ+高脂高糖膳食诱导的IR大鼠的BW降低，改善多饮、多食、多尿等一般状况；降低血清FBG、FINS水平，升高ISI，改善糖代谢；降低血清TC含量，升高HDL含量，对TG、LDL的升高有一定抑制作用，改善脂质代谢；降低血清BUN和Cr含量，改善肾功能；升高血清SOD活性，降低血清MDA和NO含量，提高机体抗氧化能力，减少氧自由基的侵袭；降低血浆ET含量，降低ET/NO比值，改善内皮功能；降低血清TNF-α含量，减少炎症因子的释放；光镜下观察胰腺形态显示，灯盏乙素对于长期高糖高脂膳食加STZ腹腔注射诱导的胰岛体积缩小，形态欠规则，边界不清，胰岛内细胞数量减少，细胞核固缩、空泡变性等现象具有改善作用。结论：灯盏乙素改善胰岛素抵抗的作用与其降低应激血糖水平，调整糖脂代谢紊乱，改善胰岛素敏感性，保护胰腺，改善肾功能，改善内皮分泌功能，提高机体抗氧化能力，减少炎症因子的释放有关。实验表明，灯盏乙素对胰岛素抵抗的治疗有潜在的应用和研究价值。收起

关键词 : 灯盏乙素胰岛素抵抗血糖水平抗氧化能力

8. 胍丁胺抗抑郁作用的受体及信号通路研究

[学位论文] 蒋先仲广西中医学院 2007年硕士导师: 王乃平共99页

摘要 : 目的: 探讨胍丁胺在抗抑郁作用中与相关受体的关系及其对受体后信号通路的影响。方法: 1.采用小鼠悬尾实验观察5-HT1A/1B受体拮抗剂（吲哚洛尔）、a2肾上腺素受体拮抗剂（育亨宾）、β肾上腺素受体拮抗剂（普萘洛尔）、咪唑啉受体拮抗... 展开目的: 探讨胍丁胺在抗抑郁作用中与相关受体的关系及其对受体后信号通路的影响。方法: 1.采用小鼠悬尾实验观察5-HT1A/1B受体拮抗剂（吲哚洛尔）、a2肾上腺素受体拮抗剂（育亨宾）、β肾上腺素受体拮抗剂（普萘洛尔）、咪唑啉受体拮抗剂（咪唑克生）、5-HT3受体拮抗剂（曲匹西隆）对胍丁胺抗抑郁活性的影响。 2.采用小鼠强迫游泳实验观察5-HT1A/1B受体拮抗剂（吲哚洛尔）、a2肾上腺素受体拮抗剂（育亨宾）、咪唑啉受体拮抗剂（咪唑克生）对胍丁胺抗抑郁活性的影响。 3.通过放射免疫方法测定胍丁胺对离体和在体正常大鼠海马、前额皮层、下丘脑的突触膜蛋白环磷腺苷产生量的影响。 4.通过给予幼年小鼠腹腔注射氟西汀观察成年后小鼠抑郁样行为改变，并灌胃给予胍丁胺3w，考察胍丁胺对其行为改变的影响。结果: 1.在小鼠悬尾实验中胍丁胺(40mg/kg，i.g)明显缩短小鼠悬尾累计不动时间，具有抗抑郁活性。吲哚洛尔（20mg/kg，i.p）、育亨宾(5、10、20mg/kg，i.p)、咪唑克生(4mg/kg，i.p)对胍丁胺的抗抑郁活性具有显著拮抗效应，明显延长胍丁胺作用后的累计不动时间;而普萘洛尔(5、10、20、40mg/kg，i.p)、曲匹西隆(5、10、20、40mg/kg，i.p)对胍丁胺的抗抑郁活性无影响。 2.在小鼠强迫游泳实验中胍丁胺(10、20、40mg/kg，i.g)明显缩短小鼠悬(毛)累计不动时间，具有抗抑郁活性。吲哚洛尔（20mg/kg，i.p）、育亨宾(5、10mg/kg，i.p)、咪唑克生（4mg/kg，i.p）对胍丁胺的抗抑郁活性具(有)显著拮抗效应，明显延长胍丁胺作用后的累计不动时间。 3.在()体实验中胍丁胺6.4μM能显著提高正常大鼠前额皮层提取突触膜蛋白cAMP的产生量，而在海马、下丘脑却降低cAMP的产生量。 4.在整体实验中，经胍丁胺(10mg/kg，i.g，q.d)连续给药2w后海马和下丘脑AC活性与正常组比较差异不明显，前额皮层AC活性被增强。经Gpp(NH)P共同孵育后，前额皮层和海马的AC活性均被增强。 5.在离体拮抗实验中，在海马和下丘脑吲哚洛尔(1μM)、育亨宾（1μM）、WAY100635(0.1μM)均能逆转胍丁胺(6.4μM)对AC活性的抑制作用。在前额皮层则抑制胍丁胺（6.4μM）对AC活性的增强作用。 6.幼年腹腔注射氟西汀小鼠成年后在开场实验中活动性明显减少，在新奇抑制摄食实验中进食潜伏期明显延长，模型小鼠有抑郁样行为改变。经过3w的胍丁胺和氟西汀治疗后再用开场实验和新奇抑制摄食实验来评价，发现模型小鼠的抑郁样改变得到逆转。结论: 胍丁胺可能通过作用于5-HT1A/1B受体、a2肾上腺素受体产生抗抑郁作用，并与其对受体后AC-cAMP-PKA信号通路的进一步调控有关。收起

关键词 : 胍丁胺抗抑郁机制药理作用信号通路化学活性

9. 氯化两面针碱对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用及其机制的研究

[学位论文] 韦锦斌广西医科大学 2006年博士导师: 王乃平共89页

摘要 : 目的：心肌缺血再灌注(myocardialischemiareperfusion，MIR)损伤是近年来研究的热点。及时、有效地恢复缺血心肌的再灌注是治疗心肌缺血的根本措施。但再灌注本身也可引起缺血心肌新的损伤，即缺血再灌注损伤，导致心律失常、心脏摄氧障碍、心功能恢... 展开目的：心肌缺血再灌注(myocardialischemiareperfusion，MIR)损伤是近年来研究的热点。及时、有效地恢复缺血心肌的再灌注是治疗心肌缺血的根本措施。但再灌注本身也可引起缺血心肌新的损伤，即缺血再灌注损伤，导致心律失常、心脏摄氧障碍、心功能恢复延缓(心肌顿抑)、心肌组织超微结构改变等，可严重危及病人生命。发病机制包括自由基损伤、钙超载、中性粒细胞浸润、能量代谢障碍等。其中，氧自由基及其引起的脂质过氧化是造成心肌损伤的启动因素，细胞内钙超载是心肌损伤的重要因素。应用药物预处理防治心肌缺血再灌注损伤取得了一定的进展，但迄今为止尚未发现理想的预处理药物。两面针是我国南方省区常用中药，广西资源尤为丰富，有行气止痛、活血化淤、祛风通络、解毒消肿之功用。现代药理研究表明，两面针提取物有抗氧化、抗癌、解痉、抗炎等作用。两面针含有以生物碱为主的多种化学成分，其中氯化两面针碱(nitidinechloride，NC)在生物碱中含量较多，并且具有明显活性。本论文目的在于研究氯化两面针碱对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用，并对其作用机制进行探讨，为开发防治心肌缺血再灌注损伤药物提供实验依据。方法与结果； 1氯化两面针碱对大鼠心肌缺血再灌注损伤的作用本研究采用简易开睑器扩大手术视野、使用自制简易活动索套降低手术难度成功地建立了改良法大鼠心肌缺血再灌注损伤实验模型。利用Wistar大鼠冠状动脉左前降支结扎30min/放松60min复制缺血再灌注损伤模型，主要进行了以下几个方面的研究： 1.1氯化两面针碱对大鼠心肌缺血再灌注心律失常的影响与MIR组相比，1mg/kg、2mg/kgNC组心律失常出现的时间明显延迟(P＜0.05，P＜0.01)、心律失常持续时间明显缩短(P＜0.01)、室性心动过速(VT)、室性纤维颤动(VF)、室性异位节律(VEBs)及房室传导阻滞(AVB)发生率显著减少(P＜0.01)，复灌15min及60min时S-T段抬高程度均显著低于MIR组(P＜0.05，P＜0.01)，呈现一定的量效关系。结果提示，氯化两面针碱预处理能有效地对抗大鼠心肌缺血再灌注心律失常。 1.2氯化两面针碱对大鼠心肌缺血再灌注心肌酶学的影响 1mg/kg、2mg/kgNC组血清谷草转氨酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)、乳酸脱氢酶同功酶1(LDH-1)、肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同功酶MB(CK-MB)明显低于MIR组(P＜0.01，P＜0.05)，呈现一定的量效关系。结果提示，氯化两面针碱预处理能有效地抑制大鼠心肌缺血再灌注血液心肌酶的升高，从酶学角度证实对再灌注大鼠心肌的保护作用。 1.3氯化两面针碱对大鼠心肌缺血再灌注心肌组织形态学的影响与MIR组比较，2mg/kgNC组心肌受损程度明显减轻(P＜0.01)，从组织病理学角度证实了2mg/kgNC对MIR大鼠心肌有明显的保护作用。 1.4氯化两面针碱对大鼠心肌缺血再灌注心肌细胞超微结构的影响电镜下观察发现NC使缺血再灌注心肌细胞超微结构损伤减轻，从线粒体到肌丝，从闰盘到血管内皮细胞，均有不同程度的保护作用，从超微结构形态学方面证实了NC对缺血再灌注心肌细胞具有一定的预防性保护作用。 1.5氯化两面针碱对大鼠心肌缺血再灌注心肌SOD、MDA的影响 1mg/kg、2mg/kgNC组超氧化物歧化酶(SOD)活力明显高于MIR组(P＜0.01)，而1mg/kg、2mg/kgNC组丙二醛(MDA)含量明显低于MIR组(P＜0.01)，均呈现一定的量效关系。结果提示，NC预处理对缺血再灌注心肌的保护作用可能与其增加再灌注心肌组织SOD活力，减少膜脂质过氧化，稳定膜结构有关。 1.6氯化两面针碱对大鼠心肌缺血再灌注心肌Ca2+的影响假手术(Sham)组、MIR组、2mg/kgNC组三个组之间血清Ca2+含量均无显著性差异。采用原子吸收光谱法测定心肌总Ca2+，数据显示，经NC预处理后，心肌总Ca2+含量有下降的趋势(虽然与MIR组比较，P＞0.05)。结果提示，NC可能具有Ca2+拮抗剂样作用。 1.7氯化两面针碱对大鼠心肌缺血再灌注心肌细胞凋亡的影响在这个实验，冠状动脉左前降支结扎30min/放松2h，2mg/kgNC组凋亡细胞指数(AI)显著低于MIR组(P＜0.01)。结果提示，2mg/kgNC预处理对心肌缺血再灌注损伤所致细胞凋亡增多有抑制作用，有利于保护心功能。 2氯化两面针碱对在体大鼠心脏血流动力学、动脉血压的影响采用心内插管及动脉插管技术检测大鼠心脏血流动力学、动脉血压，结果显示，2mg/kgNC未引起心率(HR)、收缩压(SBP)、舒张压(DBP)、左心室收缩压(LVSP)、左心室终末舒张压(LVEDP)、左室内压最大上升速率(dp/dtmax)、左室内压最大下降速率(-dp/dtmax)以及HR×SBP(一种氧耗指标)的明显变化。结果表明，这个剂量对心脏的耗氧、收缩、舒张等功能以及动脉血压无明显影响。提示2mg/kgNC对再灌注心肌的保护作用可能不依赖其血流动力学效应。 3氯化两面针碱对离体大鼠心脏冠脉流量、心力、心率的影响给NC后冠脉流量增加，3～5min内达到峰值，与药前比较P＜0.05，持续2～3min后渐趋药前冠脉流量水平。给NC后心率和心搏幅度在3～5min内数值有所增加，但与药前比较P＞0.05。结论本研究成功地建立了改良法大鼠心肌缺血再灌注损伤实验模型，并利用此模型较全面地研究了氯化两面针碱对大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响，研究表明，2mg/kg氯化两面针碱预处理心肌缺血再灌注大鼠能抑制心律失常的发生，抑制血浆心肌酶的升高，减少心肌细胞的凋亡，减轻心肌病理损伤，对缺血再灌注心肌有保护作用，其作用机制与增加再灌注心肌组织SOD活力，减少膜脂质过氧化，稳定膜结构有关，也可能与钙拮抗剂样作用或增加冠脉流量有关。收起

关键词 : 心肌缺血再灌注氯化两面针碱心律失常心肌酶细胞凋亡血流动力学心肌保护

10. 五味子甲素、乙素对CYP3A和P-gp活性的影响及机制研究

[学位论文] 苏明威广西中医药大学 2010年硕士导师: 王乃平共86页

摘要 : 目的：临床实践发现，合用五酯胶囊可以增加他克莫司血药浓度，降低他克莫司服用量。五脂胶囊是华中五味子（北五味子）醇提法制备的有效成分混合物，五味子甲素、乙素是五味子的重要的药理活性成分。国内外对于五味子甲素、乙素与药物相互作用机制的... 展开目的：临床实践发现，合用五酯胶囊可以增加他克莫司血药浓度，降低他克莫司服用量。五脂胶囊是华中五味子（北五味子）醇提法制备的有效成分混合物，五味子甲素、乙素是五味子的重要的药理活性成分。国内外对于五味子甲素、乙素与药物相互作用机制的研究报道尚少，也不全面。本课题拟从体外、体内两方面，较全面的研究五味子甲素和乙素对 CYP3A和P-糖蛋白的作用，探讨其对药物代谢的影响，为临床提供合用五酯胶囊用量的理论依据和用药标准，减少或避免由于合用五味子药物而引起的其它药物血药浓度升高而导致的药物不良反应。方法：1.五味子甲素、乙素对细胞色素CYP3A的影响及机制研究，体外研究以大鼠肝微粒体酶为载体，通过体外温孵法考察五味子甲素、乙素等对CYP3A的作用机制，采用HPLC法测定酶孵育体系中1′-羟基咪达唑仑的生成量，以1′-羟基咪达唑仑与空白对照组的百分率-log（SchA）及-log（SchB）拟合曲线求得IC50值以不同浓度的SchA、SchB的酶促动力学方程计算各自的Vmax及 Km。2.体内研究以咪达唑仑作为探针药物，采用HPLC法测定血浆中1，-羟基咪达唑仑和咪达唑仑的浓度，用DAS2.0处理血药浓度－时间数据，对主要药动学数据进行统计分析。以1′-羟基咪达唑仑与咪达唑仑的AUC（0～3 h）比值及咪达唑仑的体内清除率为指标考察不同给药剂量下，五味子甲素、乙素对CYP3A的作用。3.五味子甲素、五味子乙素对 P糖蛋白的影响及机制研究，体外研究建立Caco-2细胞模型，通过双向转运实验考察五味子甲素、乙素等对 P-糖蛋白的影响，即首先通过 Papp值及 PDR值评价五味子甲素、乙素是否为Caco-2细胞转运底物，然后测定这两种试验药物对Caco-2细胞转运同位素标记后的环孢素A影响。结果：1. CYP3A体外微粒体试验通过二次拟合计算出SchA及SchB的抑制常数（Ki），结果表明 SchA和SchB对肝微粒体的IC50分别为6.26μmol/ml、5.5μmol/ml，Ki分别为5.5μmol/ml、4.24μmol/ml，根据双倒曲线拟合所在的象限区域可以判定 SchA和SchB对肝微粒体CYP3A的抑制作用属于混合型抑制。2. CYP3A体内代谢试验结果表明3天单次给予五味子甲素低、中、高（8 mg/kg、16 mg/kg及32 mg/kg）使1′-羟基咪达唑仑与咪达唑仑的AUC（0～3 h）从1.25分别降至0.78、0.85、0.56，经统计分析均有显著差异（P<0.05），表明五味子甲素、乙素对CYP3A有显著抑制作用，浓度依赖性不明显。同时测定灌胃后的大鼠肝微粒体活性常数Km，空白组、甲素低、中、高剂量组以及乙素中剂量组的Km值分别为14.53、17.53、18.03、20.29、21.46、18.9（μmol/ml），表明药物灌胃后，CYP3A活性受到抑制，与探针底物亲合性降低。3. P－糖蛋白细胞转运实验结果发现五味子甲素、乙素PDR值约等于1，不是此种细胞的转运底物。结论：在临床上药物的联合运用中，五脂胶囊有可能影响经P－糖蛋白吸收、经细胞色素P4503A代谢的其他合用药的体内处臵过程，对临床上指导合理用药提供可靠的理论依据。收起

关键词 : 五脂胶囊甲素乙素 CYP3A基因 P-糖蛋白