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[学位论文] 刘晓蕾山西医科大学 2018年博士导师: 李新毅共203页

摘要 : 阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease, AD)，是一种常见的神经系统退行性疾病，以进行性记忆力减退、认识功能障碍、执行能力障碍、失语、失用、视空间障碍以及精神行为异常为主要临床特征。随着世界人口老龄化程度的不断加剧，AD的发病率逐年升高，在... 展开阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease, AD)，是一种常见的神经系统退行性疾病，以进行性记忆力减退、认识功能障碍、执行能力障碍、失语、失用、视空间障碍以及精神行为异常为主要临床特征。随着世界人口老龄化程度的不断加剧，AD的发病率逐年升高，在老年人群中 AD 已成为继心脑血管疾病和恶性肿瘤之后的第 4 位致死原因，给社会和家庭带来了沉重的负担。AD的发病机制复杂，至今尚未明确，目前存在的假说包括β淀粉样蛋白毒性学说、Tau蛋白代谢异常学说、基因突变学说、胆碱能缺乏学说、兴奋性氨基酸毒性学说、神经炎症学说、钙超载学说、代谢综合征学说等。因其发病机制复杂，AD仍缺乏有效的治疗手段。目前经FDA批准用于治疗AD的药物只有多奈哌齐和美金刚，然而这两种药物只能改变神经递质水平，不能改变AD的病理过程、阻止AD的病情进展，因此对AD的治疗仍是世界范围内医学研究者所面临的挑战之一。研究证实AD患者脑内小胶质细胞在Aβ刺激下激活，被长期、慢性活化，进而合成和释放大量炎症介质，最终造成神经元的损伤和丢失。存在于小胶质细胞中的NF-κB 作为多效性的核转录因子，能够调控多种炎症因子的信号转导，其中一条重要的炎症信号通路就是NF-κB-NLRP3炎症体-caspase-1-IL-1β。NF-κB被激活后转移到细胞核内，一方面诱导IL-1β基因表达，产生大量无活性的IL-1β前体(pro-IL-1β)，另一方面诱导NLRP3表达。NLRP3在外界损伤刺激下，募集接头蛋白ASC和效应蛋白 caspase-1 组成 NLRP3 炎症体，后者会将 pro-IL-1β 剪切为有强烈促炎活性的 IL-1β，进而诱导其他炎症因子、趋化因子等的合成，导致脑内的炎症级联反应。目前已有多项研究证实，抑制 NLRP3 炎症体可以减少 Aβ 的沉积，改善认知功能。因此， NLRP3炎症小体成为了目前AD防治研究领域的热点。临床流行病研究显示，长期服用非甾体抗炎药物(nonsteroidal anti-inflammatory drugs, NSAIDs)的患者AD的发病率明显减低。这一现象提示我们：以调控神经炎症为靶点来治疗 AD，可能会获得良好的治疗效果。然而，目前已开展的针对 NSAIDs治疗AD的数项临床试验大多因药物的胃肠道副作用而中止，从而限制了抗炎疗法在AD治疗领域中的探索性研究。中医药是中华民族的伟大瑰宝之一，以其低毒、调节全身机体功能的整体观，以及多靶点、多环节的作用特点，在众多疾病的防治中起到了良好的效果。基于对痴呆的中医病机的理解和阅读经典中医古籍，结合前期的研究成果，我们在古代经方“不忘散”基础上，根据单味中药之间的有机配伍和协同作用，构建了由远志、石菖蒲、人参、茯苓、茯神、当归、白术和黄连组成的“加味不忘散”。该组方更加合理全面，既扶正又祛邪，切中、兼顾了AD的主要病机。目前已应用于临床，收到了较好的效果。在前期研究基础上，本研究以神经免疫炎症学说为根据，以信号转导通路途径为切入点，从体内实验和体外实验两个层次，验证加味不忘散治疗AD的有效性，并进一步观察该组方对AD神经炎症的影响。第一部分加味不忘散对AD模型大鼠学习记忆功能及海马组织结构的影响目的： 1. 观察加味不忘散对AD模型大鼠学习记忆功能影响； 2. 观察加味不忘散对AD模型大鼠海马组织结构和神经元凋亡的影响。方法： 1. 将SD大鼠分为假手术组、AD模型组、加味不忘散低剂量干预组、加味不忘散中剂量干预组、加味不忘散高剂量干预组和MCC950干预组； 2. 通过脑立体定位技术向双侧海马注射Aβ1-42制备AD大鼠模型； 3. 运用Morris水迷宫试验评估大鼠学习记忆功能； 4. 大脑切片进行HE染色，在光镜下观察大鼠海马的组织结构； 5. 利用透射电镜观察海马超微结构变化，并计数突触数量进行比较； 6. 运用TUNEL染色法观察海马神经元凋亡情况。结果： 1. 加味不忘散对AD模型大鼠学习记忆试验的影响：假手术组大鼠第1天到第5天的逃避潜伏期分别为 69.79±13.54 s、52.16±3.87 s、34.75±17.10 s、19.71±5.39 s、10.57±3.85 s。AD 模型组大鼠第 1 天到第 5 天的逃避潜伏期分别为 79.21±16.37s、74.46±5.58 s、65.00±8.62 s、41.82±8.87 s、28.96±6.73 s，与假手术组相比，在第2-5天的逃避潜伏期均明显延长(p<0.01)。加味不忘散低剂量干预组大鼠第1天到第5天的逃避潜伏期分别为77.96±13.83 s、75.78±7.92 s、62.91±7.99 s、38.82±10.93 s、25.75±6.77 s，与AD模型组相比无显著差异(p > 0.05)。加味不忘散中剂量干预组大鼠第1天到第5天的逃避潜伏期分别为76.21±12.80 s、64.28±8.37 s、50.87±8.61 s、30.82±5.33 s、19.82±2.68 s，第2-5天的逃避潜伏期较AD模型组和加味不忘散低剂量干预组明显缩短(p < 0.05)。加味不忘散高剂量干预组大鼠第 1 天到第 5 天的逃避潜伏期分别为70.42±14.08 s、54.74±10.40 s、38.07±8.31 s、22.59±5.42 s、14.39±3.51 s，第2-5天的逃避潜伏期较AD模型组和加味不忘散低剂量干预组明显缩短(p<0.01)，较加味不忘散中剂量干预组也缩短(p<0.01)。MCC950干预组大鼠第1天到第5天的逃避潜伏期分别为71.65±16.03 s、54.51±10.01 s、39.36±7.14 s、22.24±5.11 s、13.93±3.68 s，第2-5天的逃避潜伏期较AD模型组和加味不忘散低剂量干预组明显缩短(p<0.01)，较加味不忘散中剂量干预组也缩短(p<0.01)，与加味不忘散高剂量干预组相比无显著差异（p值分别为0.938、0.815、0.928、0.857）。 2. 加味不忘散对AD模型大鼠空间探索能力的影响：假手术组、AD模型组、加味不忘散低、中、高剂量干预组和MCC950干预组大鼠的原平台象限停留时间分别为41.14±4.22 s、23.28±8.34 s、24.57±7.33 s、31.71±6.97 s、39.43±5.44 s、39.15±4.06 s。其中AD模型组大鼠的原平台象限停留时间明显短于假手术组(p < 0.001)，加味不忘散低剂量干预组大鼠的原平台象限停留时间也明显短于假手术组(p < 0.001)，与 AD模型组无明显差异(p=0.703)。加味不忘散中剂量组大鼠的原平台象限停留时间较AD模型组(p=0.016)和加味不忘散低剂量干预组(p=0.040)均有所延长。加味不忘散高剂量组大鼠的原平台象限停留时间较AD模型组(p < 0.001)、加味不忘散低剂量干预组(p<0.001)和加味不忘散中剂量干预组(p=0.027)均延长。MCC950干预组大鼠的原平台象限停留时间较AD模型组(p<0.001)、加味不忘散低剂量干预组(p<0.001)和加味不忘散中剂量干预组(p = 0.033)均延长，与加味不忘散高剂量组相比无统计学差异(p=0.933)。假手术组、AD模型组、加味不忘散低、中、高剂量干预组和MCC950干预组大鼠的跨台次数分别为 12.71±2.63、5.29±1.38、7.43±1.62、9.71±1.50、12.14±2.41、12.29±3.39。其中AD模型组大鼠的跨台次数明显少于假手术组(p<0.001)，加味不忘散低剂量干预组大鼠的跨台次数也明显少于假手术组(p < 0.001)，与AD模型组无明显差异(p=0.056)。加味不忘散中剂量组大鼠的跨台次数较AD模型组(p<0.001)和加味不忘散低剂量干预组(p=0.042)均增多。加味不忘散高剂量组大鼠的跨台次数较AD模型组(p<0.001)、加味不忘散低剂量干预组(p<0.001)和加味不忘散中剂量干预组(p=0.031)均增多。MCC950干预组大鼠的跨台次数较AD模型组(p<0.001)、加味不忘散低剂量干预组(p<0.001)和加味不忘散中剂量干预组(p=0.023)均显著增多，与加味不忘散高剂量组相比无统计学差异(p=0.895)。 3. 加味不忘散对AD模型大鼠海马组织结构的影响：HE染色显示，AD模型组和加味不忘散低剂量组海马神经元数量明显减少，细胞体积缩小，核固缩，排列紊乱；加味不忘散中、高剂量干预组和 MCC950 大鼠海马神经元数量明显增多、排列变整齐、异常细胞减少。 4. 加味不忘散对AD模型大鼠海马超微结构的影响：通过透射电镜观察到，AD模型组大鼠海马大量神经元变性、坏死，核固缩，线粒体肿胀明显。与AD模型组相比，随着加味不忘散干预剂量的增加，大鼠海马神经元形态逐渐变完整，变性或坏死的神经元逐渐减少，细胞浆内细胞器数量逐渐增多、形态逐渐转为正常。 5. 加味不忘散对 AD 模型大鼠海马突触结构和数量的影响：通过透射电镜观察海马突触结构发现，AD模型组大鼠海马内的突触结构被破坏，突触结构不完整，突触间隙增大，突触后膜内的致密物质变薄。与AD模型组相比，随着加味不忘散干预剂量的增加，海马内突触结构逐渐由不完整变完整，突触间隙由大变小，突触后膜内的致密物也由少变多。假手术组、AD模型组、加味不忘散低、中、高剂量干预组和MCC950干预组大鼠海马的突触数量分别为27.31±6.99、10.76±3.19、13.64±3.53、19.61±3.69、25.77±7.21、24.93±5.97。其中AD模型组大鼠海马的突触数量较假手术组明显减少(p<0.001)，加味不忘散低剂量干预组大鼠海马的突触数量也明显少于假手术组(p < 0.001)，与 AD模型组无明显差异(p = 0.248)。加味不忘散中剂量组大鼠海马的突触数量较AD模型组(p=0.001)和加味不忘散低剂量干预组(p=0.015)均增多。加味不忘散高剂量组大鼠海马的突触数量较AD模型组(p<0.001)、加味不忘散低剂量干预组(p<0.001)和加味不忘散中剂量干预组(p = 0.013)均增多。MCC950 干预组大鼠海马的突触数量较 AD模型组(p<0.001)、加味不忘散低剂量干预组(p<0.001)和加味不忘散中剂量干预组(p=0.031)均显著增多，与加味不忘散高剂量组相比无统计学差异(p=0.709)。可见，加味不忘散对AD模型大鼠突触结构和数量具有改善作用，并具有剂量依赖性。 6. 加味不忘散对AD模型大鼠海马神经元凋亡的影响：TUNEL染色显示，假手术组、AD模型组、加味不忘散低、中、高剂量干预组和MCC950干预组大鼠海马的细胞凋亡率分别为 5.50±2.13 %、38.06±12.87 %、31.33±11.57 %、22.71±7.55 %、16.43±4.25%、14.38±5.28%。AD模型组可见到大量凋亡细胞，与假手术组相比明显增多(p < 0.001)。加味不忘散低剂量干预组大鼠海马内也可见到大量凋亡细胞与 AD模型组无明显差异(p=0.623)。加味不忘散中剂量干预组大鼠海马凋亡细胞，较AD模型组明显减少(p < 0.001)，较加味不忘散低剂量干预组有减少趋势，但无显著性差异(p = 0.058)。加味不忘散高剂量干预组大鼠海马的凋亡细胞明显少于较AD模型组(p<0.001)、加味不忘散低剂量干预组(p<0.001)和中剂量干预组 (p=0.16)。MCC950干预组大鼠海马的凋亡细胞数较AD模型组明显减少(p < 0.001)，与加味不忘散高剂量干预组相比无显著差异(p= 收起

关键词 : 加味不忘散阿尔茨海默病小胶质细胞学习记忆抗炎机制

2. 抑郁症血浆microRNA表达谱及潜在诊断标志物的研究

[学位论文] 刘晓蕾重庆医科大学 2013年博士导师: 谢鹏共121页

摘要 : 背景：抑郁症是最常见的精神疾病之一，其发病率和复发率高，而就诊率和治愈率低，这给个人、家庭和社会带来了沉重的负担。目前抑郁症的诊治仍存在诸多挑战，主要有：（1）发病机制研究尚停留在各种假说层面，如单胺类神经递质假说、细胞因子假... 展开背景：抑郁症是最常见的精神疾病之一，其发病率和复发率高，而就诊率和治愈率低，这给个人、家庭和社会带来了沉重的负担。目前抑郁症的诊治仍存在诸多挑战，主要有：（1）发病机制研究尚停留在各种假说层面，如单胺类神经递质假说、细胞因子假说、下丘脑-垂体-肾上腺轴假说、表观遗传调控假说以及神经发生障碍和突触可塑性异常假说等。（2）缺乏客观有效的辅助诊断指标/方法。（3）抗抑郁药物起效慢，对部分患者疗效差。因此，目前迫切需要继续探索抑郁症的病理生理机制，发现早期诊断的生物标志物以及新的治疗靶点。 microRNA（miRNA）是长约19~23nt的RNA分子，在基因表达过程中进行转录后调控，在肿瘤等临床疾病的病理生理机制探索及潜在疾病诊断生物标志物筛选等领域中有广泛的研究前景。文献报道，中枢神经系统中存在脑组织特异性或富集表达的miRNA，急性或慢性应激会导致一些miRNA表达失调。故我们推测，miRNA在抑郁症的病理生理过程中扮演重要角色，并可能通过表达谱及靶向分析寻找到潜在的抑郁症诊断标志物。目的：分别基于锁核酸杂交芯片技术和实时定量PCR技术对抑郁症患者血浆差异miRNA进行表达谱分析及靶向研究，初步探讨差异miRNA在抑郁症病理生理机制中的潜在作用及其临床意义，为筛选抑郁症诊断标志物提供研究基础。方法： 1.提供临床样本志愿者招募：本研究在重庆医科大学第一附属医院精神科门诊收集重性抑郁障碍及双向情感障碍患者；在重庆医科大学第一附属医院体检中心收集正常对照者；在重庆市精神病院住院部收集精神分裂症患者。精神疾病患者分别由两名精神科专家依据《精神疾病诊断和统计手册》（DSM-IV）对患者进行诊断。对上述三种精神疾病患者分别进行汉密尔顿抑郁量表、贝克抑郁自评量表、Beck-Rafaelsen躁狂量表及阳性与阴性症状量表进行疾病严重程度评分。所有试验对象入组时均进行血常规及血生化（肝肾功能）检查。严格按照实验设计拟定的纳入和排除标准入组实验对象。所有纳入研究的志愿者均签署了书面知情同意书。第一部分纳入30例实验对象（抑郁症16例，正常对照14例）。第二部分第一阶段纳入70例实验对象（抑郁症和正常对照各35例），第二阶段纳入300例实验对象（抑郁症100例，双向情感障碍和精神分裂症各50例，正常对照100例）。 2.抑郁动物模型的建立：采用慢性不可预见性温和刺激对大鼠进行抑郁模型建造，运用体重、糖水消耗实验及旷野实验判定抑郁大鼠模型建立成功与否。 3.实验标本的采集与保存：临床血液用EDTA抗凝的真空采血管经静脉穿刺采集，大鼠血液经水合氯醛深麻醉大鼠后通过心尖穿刺获取，并于采集后1小时内进行分离血浆处理，血浆分装后-80°C保存备用。大鼠心脏采血结束后断头处死，解剖分离脑组织，取前额叶、海马及嗅球组织后放入1.5ml去RNA酶EP管中，液氮速冻，最后所有标本-80°C保存备用。 4.采用TrizolRNA提取法提取血浆及脑组织RNA。抽提后的RNA采用紫外吸收法测定RNA浓度与纯度，采用变性琼脂糖凝胶电泳判断RNA的完整性和基因组DNA污染。 5.基于锁核酸miRNA杂交芯片技术，分析抑郁症和正常对照血浆的miRNA表达谱，设定倍数差异>1.3，P值<0.05为阈值判断抑郁症患者血浆的差异表达miRNA，建立抑郁症血浆miRNA表达数据库。 6.通过对差异miRNA的靶基因分析、GeneOntology及Pathway分析等生物信息学手段，初步探索差异miRNA在抑郁症病理生理机制中的潜在作用。 7.运用实时定量PCR方法，检测血浆、脑组织miR-134的表达，观察该指标在抑郁症是否存在改变，并判断其在抑郁症中的诊断价值。结果： 1.通过芯片表达谱分析（抑郁症16例，正常对照14例），发现75个差异表达miRNA，其中含未命名的miRNA序列6个；含病毒编码的miRNA序列8个，其中显著上调的病毒编码miRNA有ebv-miR-BART6-3p和hsv2-miR-H4-3p，上调倍数分别为1.45倍及1.795倍；hsa-miR-124-3p、hsa-miR-652-3p、hsa-miR-147b、hsa-miR-196a-3p、hsa-miR-1255a、hsa-miR-604、hsa-miR-511、hsa-let-7a-5p八个差异miRNA在抑郁组和对照组中的区分度最为明显。进一步对所有差异miRNA进行生物信息学分析发现其参与MAPK及Wnt信号通路的调控，另外还参与神经营养因子的信号途径，以及中枢神经系统发育、神经发生和突触可塑性调控等。 2.通过实时定量PCR分析，在35例抑郁症及35例正常对照血浆中初步发现抑郁组血浆miR-134水平明显低于对照组，经常用抗抑郁治疗后随症状好转血浆miR-134水平亦回复，但仍明显低于对照组。抑郁症患者中，更低的血浆miR-134水平提示较差的预后。进一步扩大样本到100例抑郁症、100例正常对照、50例双向情感障碍、50例精神分裂症后发现，抑郁组、双向情感障碍组及精神分裂组血浆miR-134水平均显著低于对照组，但抑郁组较双向情感障碍及精神分裂组的血浆miR-134水平更低，具有显著的统计学差异。血浆miR-134在抑郁症及正常对照人群中诊断抑郁症的灵敏度为79%，特异性84%，在抑郁症、双向情感障碍、精神分裂症及正常对照人群中诊断抑郁症的灵敏度为79%，特异性76.5%。与临床样本研究的结果一致，动物实验亦证实慢性应激导致大鼠血浆及海马、前额叶皮质的miR-134水平明显下调。结论： 1.八个差异miRNA在抑郁组和对照组中的区分度最为明显。参与MAPK、Wnt及神经营养因子信号通路调控的miRNA表达紊乱可能参与抑郁症的病理生理过程。抑郁症可能与潜在的EB病毒及HSV病毒感染相关。 2.血浆miR-134可能是潜在的抑郁症诊断及预后判断的标志物。收起

关键词 : 抑郁症 microRNA 诊断标志物发病机制

3. 黄柏中盐酸小檗碱超声波经皮渗透量实验研究

[学位论文] 刘晓蕾山西大学 2013年硕士导师: 汪晓阳共98页

摘要 : 目的:软组织损伤是体育运动中的常见病和多发病，传统治疗方法有外用药物和物理因素的单独或配合治疗。这一基础上稍加创新，在损伤局部同时施加药物和物理双重治疗因素，选择治疗软组织损伤时常用的外敷新伤药中具有抗炎止痛功效的中药黄柏，运用对软... 展开目的:软组织损伤是体育运动中的常见病和多发病，传统治疗方法有外用药物和物理因素的单独或配合治疗。这一基础上稍加创新，在损伤局部同时施加药物和物理双重治疗因素，选择治疗软组织损伤时常用的外敷新伤药中具有抗炎止痛功效的中药黄柏，运用对软组织损伤治疗效果明显的超声波导入方法，在低超声强度情况下，考察超声频率、作用时间以及联合化学促渗剂对黄柏药用成分盐酸小檗碱体外经皮渗透量的影响，找到适合中药黄柏超声透入的最优超声参数，为软组织损伤新型治疗方法及超声波复方中药制剂的药代动力学研究提供科学的依据。方法:采用冷浸回流法对黄柏药用成分盐酸小檗碱进行实验室粗提，以乳膏基质作为药物载体，制成适用于超声波药物透入的黄柏乳膏;将超声强度定为0.1W/cm2，选择空白对照及300KHz-1400KHz12个超声频段，运用超声经皮给药实验仪，对有无化学促渗剂的黄柏乳膏进行固定接触法的超声透入实验，并在3min、5min、10min、15min、20min时间点抽取接收液，使用高效液相色谱仪检测盐酸小檗碱的含量并计算各时间点的累积渗透量。运用SPSS18.0数据处理软件进行超声频率、作用时间及化学促渗剂对盐酸小檗碱累积渗透量影响的多因素方差分析。结果: (1)本实验高效液相色谱法(HPLC)最佳色谱条件为:ThermoC18色谱柱(4.6×150mm，5μm)，流动相为乙腈-0.1％磷酸（40∶60，pH=4.0，每100ml磷酸中加0.1g十二烷基磺酸钠）;检测波长:265nm;流速:1ml/min;柱温:25℃。 (2)无论有无化学促渗剂，800KHz频率下盐酸小檗碱累积渗透量均为最高，但无化学促渗剂时，低强度超声促渗效果不明显;在添加化学促渗剂的条件下，盐酸小檗碱平均累积渗透量从高到低的超声频率排序为800KHz、900KHz、700KHz、500KHz、600KHz、1000KHz、1100KHz、1400KHz、300KHz、1300KHz、400KHz、1200KHz。 (3)在不施加超声波作用的情况下，添加化学促渗剂各时间点盐酸小檗碱平均累积渗透量约比不添加化学促渗剂增渗7.82倍;在施加超声作用时，添加化学促渗剂各超声频率、各时间点盐酸小檗碱平均累积渗透量约比不添加化学促渗剂增渗4.5倍;在不添加化学促渗剂的情况下，各超声频率、各时间点盐酸小檗碱平均累积渗透量约比没有超声作用时增渗1.57倍;在添加化学促渗剂情况下，各超声频率、各时间点盐酸小檗碱平均累积渗透量约比没有超声作用时增渗0.62倍;化学促渗剂十超声波作用下盐酸小檗碱平均累积渗透量约比无超声无化学促渗剂增渗13.15倍;只添加化学促渗剂盐酸小檗碱累积渗透量比单纯施加低强度超声波增渗2.4倍。 (4)方差分析结果:超声频率、作用时间、化学促渗剂均对累积渗透量有显著影响(P＜0.01);其贡献率化学促渗剂＞超声频率＞时间。 (5)所有超声频率及有无促渗剂作用下，连续两个时间点盐酸小檗碱累积渗透量差异不显著(P＞0.05);但3min与10min、3min与15min、3min与20min、5min与15min、10min与20min累积渗透量差异非常显著(P＜0.01)。 (6)超声频率因素的两两比较结果:800KHz作用时盐酸小檗碱累积渗透量最高;900KHz次之;500KHz、600KHz、700KHz、900KHz、1000KHz、1100KHz之间无差异(P＞0.05)，处于第三水平;300KHz、400KHz、1200KHz、1300KHz、1400KHz之间无差异(P＞0.05)，排第四。结论: (1)300KHz-1400KHz的超声频率对盐酸小檗碱均有促渗作用，但促渗程度各不相同，以800KHz的促渗效果最显著。 (2)在超声固定接触法，强度为0.1W/cm2的条件下，频率为800KHz的超声促渗效果相对最好;但是短时间内促渗效果不明显。 (3)超声促渗与化学促渗联用可在短时间内提高盐酸小檗碱的经皮渗透量。 (4)在0.1W/cm2的超声强度下，盐酸小檗碱的超声透入固定疗法的治疗时间应以10min为间隔。收起

关键词 : 黄柏盐酸小檗碱超声波经皮给药渗透量

4. fat-1基因对HT-29细胞增殖的抑制作用以及转基因小鼠的构建与鉴定

[学位论文] 刘晓蕾青岛大学 2007年博士导师: 蒋正尧;葛银林共98页

摘要 : 目的:探讨fat-1基因在结肠癌HT-29细胞的凋亡、增殖以及细胞周期中所起的作用，并对其抗肿瘤作用的机制进行初步探讨。构建和鉴定携带有外源fat-1基因的转基因小鼠。方法:构建真核表达载体(pEGFP-fat-1)，用脂质体介导的方法转染到结肠癌HT-29细... 展开

关键词 : 不饱和脂肪酸基因治疗细胞增殖结肠癌细胞凋亡抗肿瘤作用动物模型

5. 我国农村金融精准扶贫效率评价及其影响因素研究

[学位论文] 刘晓蕾中国海洋大学 2019年硕士导师: 徐胜共94页

摘要 : 贫困是我国当前亟待解决的社会问题，贫困人口全部脱贫是我国2020年全面建成小康社会的底线目标。自2013年精准扶贫开展以来，我国以改革开放后的扶贫工作为基础，转换常规思路，以更多元的举措开展新一轮的精准扶贫工作。打赢最后一轮的脱贫攻坚战、... 展开贫困是我国当前亟待解决的社会问题，贫困人口全部脱贫是我国2020年全面建成小康社会的底线目标。自2013年精准扶贫开展以来，我国以改革开放后的扶贫工作为基础，转换常规思路，以更多元的举措开展新一轮的精准扶贫工作。打赢最后一轮的脱贫攻坚战、顺利完成党的十九大制定的目标，对实现我国政治稳定、社会和谐、民族团结具有十分重要的现实意义。在此基础上，农村金融的大力发展不仅能够提升精准扶贫的成效，更是我国今后农村金融体系构成的重要因素。随着金融精准扶贫的大力推进，我国金融精准扶贫专项贷款、扶贫再贷款、易地扶贫搬迀贷款等投入都有巨大的增长，各贫困地区的农村金融也有了较快的发展，农村金融精准扶贫工作初见成效。然而，农村金融精准扶贫体系是一个复杂的整体，金融精准扶贫投入的增加能否更有效的促进贫困人口脱贫，有哪些因素对金融精准扶贫的效率存在着影响，都是当前整个社会普遍关注的问题。截至2017年末，我国依然有24个省、市及自治区存在贫困人口，这些地区大多集中在中部及西部，其发展基础与自然条件相对较差。保证现有贫困人口全部脱贫不仅关乎我国民生，对促进我国各区域协调发展同样具有重要的意义。因此，本文以以上24个地区为研究对象，对金融精准扶贫效率及其影响因素进行了相关的理论分析与实证研究。首先从相关文献研究入手，对金融精准扶贫的相关概念进行了综述，构建了金融精准扶贫的理论分析框架，并结合我国现状，分析了我国金融精准扶贫的成效和难点；随后，本文通过构建科学合理的指标体系，采用数据包络分析法（DEA)对我国农村地区的金融精准扶贫效率进行了评价；最后，通过灰色关联度分析法（GRA)与Tobit模型对上述24个地区金融精准扶贫的影响因素进行了实证分析，探索各具体因素对金融精准扶贫效率的影响。研究结论表明：（1)2015至2016年，我国金融精准扶贫效率整体平稳，但区域差异性较为明显，金融精准扶贫效率整体呈现南部高、北部低的特点。（2)我国金融资源的投入配置不均衡，西北部地区金融精准扶贫投入较为不足，而其他地区金融精准扶贫投入多数已经处于冗余状态。（3)金融精准扶贫效率的影响因素较多，其中第一产业增加值占地区GDP比重、农村现代化程度、农村人口等都与金融精准扶贫效率有较为显著的相关性。在以上结论的基础上，根据我国当前具体情况，本文从完善贫困地区金融基础设施、合理配置金融资源投入、改善贫困地区产业结构、加强贫困地区金融知识宣传等多个方面提出金融精准扶贫推进的建议措施，进一步推动我国金融精准扶贫的发展。收起

关键词 : 金融精准扶贫农村地区效率评价

6. 嵌入式控制系统故障诊断专家系统的研究与应用

[学位论文] 刘晓蕾杭州电子科技大学 2010年硕士导师: 包健共93页

摘要 : 自从Willsky在1976年发表第一篇故障诊断方面的综述文章后,故障诊断技术便蓬勃发展起来。随着嵌入式技术的不断成熟与发展,嵌入式控制系统已经越来越广泛地应用于工业生产的各个环节当中,对工业生产现场的监控与故障诊断已经成为其中的一个重要应用领... 展开自从Willsky在1976年发表第一篇故障诊断方面的综述文章后,故障诊断技术便蓬勃发展起来。随着嵌入式技术的不断成熟与发展,嵌入式控制系统已经越来越广泛地应用于工业生产的各个环节当中,对工业生产现场的监控与故障诊断已经成为其中的一个重要应用领域。目前嵌入式控制系统的故障诊断主要存在两个问题:(1)由于故障诊断系统构成复杂,而且开发这样的诊断系统要求很高,需要对被诊断系统有深入理解,并保证系统运行的稳定性。因此诊断系统的开发一般存在开发周期较长,成本较高的问题。(2)大多数故障诊断系统只是针对单一的机电设备,当要诊断其他机电设备或同一设备的不同型号时,就需要重新开发诊断系统,这就造成了人力和财力上的极大浪费。本文充分考虑到嵌入式控制系统及其故障诊断本身的特点,力求在通用性及特定诊断的专用性上平衡,以提高诊断的正确率、实时性及稳定性为目的,设计以下开发策略。 (1)提出基于专家系统的诊断方法,并将嵌入式控制系统抽象成数字量、计数量、模拟量、时序量、多维量及时间段量。这样便可使嵌入式控制系统按照统一的方式来处理,提取出嵌入式控制系统的共性,使得诊断系统具有通用性的特点。 (2)采用多种知识表示方法。如基于规则的知识表示、曲线拟合和神经网络的知识表示等。同时引入模糊技术,更能准确表达专家的经验知识,使得诊断效果更符合实际情况。 (3)采用代码自动生成技术开发诊断系统。本文对嵌入式控制系统进行抽象,使得诊断系统大部分代码都相同,只有涉及被诊断系统本身相关代码有所变化。于是诊断系统的大部分代码只需一次编辑,与特定诊断系统本身相关的代码则可按一定策略自动生成。这种方式大大提高了故障诊断系统的稳定性及开发进度。 (4)诊断系统按线程方式运行。本文提出的方法创造性地将诊断系统作为一低级线程与被诊断系统的控制程序一起运行。诊断线程的优先级低于控制线程,这样保证了不影响控制线程的实时控制,也使得诊断系统具有实时的功能。而传统诊断方法将被诊断系统的特征数据传送到诊断系统中,这样将在通信中浪费大量时间,从而影响了诊断的实时性。在文章最后,以交通灯控制系统为例进行了仿真故障诊断试验。试验结果表明,此诊断方式具有较好的诊断效果,在一定方面解决了以上提出的问题。收起

关键词 : 嵌入式控制系统故障诊断专家系统诊断线程

7. 民营企业人力资本与激励机制研究——以苏州LZ公司为例

[学位论文] 刘晓蕾扬州大学 2007年硕士导师: 蒋建刚共85页

摘要 : 改革开放以来，我国民营企业获得蓬勃发展，成为国民经济的重要组成部分，在国民经济的发展中发挥着越来越重要的作用。目前，随着我国加入WTO和知识经济时代的到来，我国民营企业面临着更为激烈的经济全球化的市场竞争，正处于新一轮的发展壮大时期。... 展开改革开放以来，我国民营企业获得蓬勃发展，成为国民经济的重要组成部分，在国民经济的发展中发挥着越来越重要的作用。目前，随着我国加入WTO和知识经济时代的到来，我国民营企业面临着更为激烈的经济全球化的市场竞争，正处于新一轮的发展壮大时期。在新时期中，企业之间的竞争已经由原来的“产品竞争”、“技术竞争”和“管理竞争”发展为“人才的竞争"。然而，与其他类型企业尤其是外资企业相比，民营企业在吸引人才、留住人才方面处于弱势地位。因此，迫切需要通过建立和完善企业内部的人力资本激励机制来应对竞争，促进发展。与强烈的时代要求形成鲜明对比的是民营企业人力资本激励机制缺失的现状：薪酬结构不合理、长期激励未受到足够重视、家族式管理制度严重阻碍了激励体系的科学化、系统化等问题普遍存在，严重制约着民营企业人力资本生产积极性和创造性的发挥。基于此，本文运用理论分析与实证分析相结合的方法在微观层面上对民营企业人力资本激励机制设计展开研究。本研究以人力资本理论、激励理论等相关理论为基础，依据人力资本所包含的知识和能力的层次性，将民营企业中的人力资本划分为经营型、专业型和一般型人力资本，形成民营企业人力资本激励机制设计的框架；通过对我国民营企业人力资本激励手段、方法的现状剖析，探析其中存在的主要问题与原因，结合美、日等发达国家企业人力资本激励机制的经验启示，提出对民营企业人力资本激励机制的设计构想；在前文分析的基础上，以民营企业不同层次人力资本所有者的特征和主导需求为依据，较为系统地设计了一个针对民营企业内部不同层次人力资本所有者的激励机制的框架，并引入一个现实的案例企业进行实证研究，希望能为民营企业人力资本激励机制实践的不断完善提供一定的思路。收起

关键词 : 激励机制人力资本民营企业苏州

8. 韩国又石大学孔子学院初级汉语综合课任务型教学设计

[学位论文] 刘晓蕾山东师范大学 2015年硕士导师: 侯磊;李相度共84页

摘要 : 汉语历史悠久，文化内涵深厚，优美的汉字与抑扬顿挫的声调使许多外国学生对她深深着迷。而汉语又是一门复杂而高深的语言，想说一口标准的汉语谈何容易。初学汉语的学生总是迫不及待地想把自己学到的会话付诸实践，而书本上的知识与真实交际的差异往... 展开汉语历史悠久，文化内涵深厚，优美的汉字与抑扬顿挫的声调使许多外国学生对她深深着迷。而汉语又是一门复杂而高深的语言，想说一口标准的汉语谈何容易。初学汉语的学生总是迫不及待地想把自己学到的会话付诸实践，而书本上的知识与真实交际的差异往往让学生受到打击。因此初级汉语学习者交际能力的提高十分重要，这在一定程度上影响到后续阶段学习中的自信心与学习动力。初级汉语综合课担负着听说读写各方面能力的培养，在学习者汉语水平提高过程中责任重大。其中入门阶段以提高听说能力为突破口进而兼顾读写能力符合由易到难的学习规律。因此在初级汉语综合课中如何提高学生以听说能力为主的交际能力，使其在初学汉语之际能够获得积极的情感体验，从而继续保持学习热情，需要在教学法方面不断地尝试。任务型教学法自问世以来发展较快，20世纪90年代开始被我国对外汉语教学界接受，并被尝试着应用于各种类型的课堂教学。使用任务型教学法对调动学生积极性、提高教学效率的作用是十分值得探索的。笔者结合国内外研究成果，分析了任务型教学法的优势，存在的难点，在教学中需要注意的问题等。本文以韩国初级汉语水平的学生为例，针对初级汉语综合课任务型教学进行了设计与实验。首先选取现有课本的某一单元，结合本单元的话题设计任务活动；然后在课堂上通过教学实践检验效果；最后通过对其他教师和学生的访谈收集了反馈信息，对任务型教学法的教学效果有了初步把握并得到了继续改进的启示。本文的研究内容主要包括六个部分：第一章：绪论部分。主要包括选题背景和意义，进行此项研究的必要性，以及研究意义和方法，对本文研究的重点和预期达到的目的做了说明。第二章：相关理论与任务型教学法的发展历程部分。包括任务型教学法的理论基础：交际法、建构主义、二语习得理论。国内外对该教学法的研究成果，重点对任务型教学法从进入我国英语教学界到进入对外汉语教学界的历程进行了阐述。第三章：对现有教学情况的调查部分。调查了韩国又石大学孔子学院内部以及与大学中学合作的课程设置情况，学生们的学习情况及现有教学模式。对现有初级汉语综合课负责老师进行了访谈，详细探讨了目前的教学情况，并以某一课为例请老师说明了教材分析的方法和教学环节的设计。第四章：设计与实施部分。选取了课本中的某一单元结合学生实际学习需求，设计教学环节并予以实施。全面记录了本次课堂设计的实施情况。第五章：教学效果调查部分。对学生和老师就本次教学实践的效果进行了访谈，得到了真实的反馈信息及对提高以后教学设计质量的宝贵建议。第六章：结论部分。梳理了本文脉络，对全文进行了总结，分析了主要收获和存在的不足。收起

关键词 : 对外汉语教学汉语综合课任务型教学

9. 旅游管理中外合作办学外方教育资源利用研究

[学位论文] 刘晓蕾辽宁师范大学 2019年硕士导师: 王丽华共81页

摘要 : 旅游管理中外合作办学顺应了教育国际化的趋势与潮流。通过引进与利用外方教育资源，旅游管理中外合作办学将助力旅游教育发展，培育高端国际旅游人才，推进旅游教育质量提升，提高旅游教育的国际化水平和国际影响力。外方教育资源的引进与利用... 展开旅游管理中外合作办学顺应了教育国际化的趋势与潮流。通过引进与利用外方教育资源，旅游管理中外合作办学将助力旅游教育发展，培育高端国际旅游人才，推进旅游教育质量提升，提高旅游教育的国际化水平和国际影响力。外方教育资源的引进与利用，是旅游管理中外合作办学的核心。外方教育资源的优质性以及利用的有效性，将深切影响旅游管理中外合作办学的质量，关系到旅游管理中外合作办学的成功与否。本文选取旅游管理中外合作办学案例，使用问卷调查法、访谈法等分析方法，对旅游管理中外合作办学外方教育资源利用进行研究，系统分析外方教育资源利用的现状、效果与问题，并提出外方教育资源有效利用的建议，以此明确外方教育资源引进与利用的合理性与长效性机制，促进中外合作办学在旅游教育领域高效高质发展。论文共分为七章：第一章绪论，主要介绍本文的研究背景与意义、研究方法与框架以及研究创新点，界定主要概念，并对国内外现有研究成果进行分析评述。第二章主要介绍旅游管理中外合作办学的发展背景与发展历程，概括分析旅游管理中外合作办学发展现状。第三章主要介绍旅游管理中外合作办学外方教育资源的利用方式与利用的一般内容，选取并介绍旅游管理中外合作办学案例院校，对案例院校外方教育资源利用的具体内容进行分析。第四章在对学生进行问卷调查获得信息资料的基础上，分析旅游管理中外合作办学外方教育资源利用现状及外方教育资源利用中的学生认知，进行外方教育资源利用现状对学生认知的回归分析，探讨外方教育资源利用对学生认知的影响。第五章主要是在前文对外方教育资源利用现状与利用效果分析的基础上，探讨旅游管理中外合作办学外方教育资源利用过程中存在的问题与制约因素。第六章在对旅游管理中外合作办学外方教育资源利用过程中存在的问题与制约因素分析的基础上，提出有效利用的建议，主要从政府层面要健全政策法规与监管，院校层面要严控教育资源质量与利用效率。第七章为结语，对本研究进行总结，分析不足并展望未来。收起

关键词 : 旅游教育中外合作办学外方教育资源利用教学质量

10. 面向情感分析的词向量学习及其应用

[学位论文] 刘晓蕾中国科学院大学 2016年硕士导师: 余智华共78页

摘要 : 随着用户在互联网上交互模式的变化，微博等社交平台上均包含大量的实时信息及评论，针对这些短文本信息的情感语义挖掘对于公共事件的舆情分析、商业产品的市场营销、突发事件的公共关系处理等方面都有至关重要的作用。在包含情感分析任务的自... 展开随着用户在互联网上交互模式的变化，微博等社交平台上均包含大量的实时信息及评论，针对这些短文本信息的情感语义挖掘对于公共事件的舆情分析、商业产品的市场营销、突发事件的公共关系处理等方面都有至关重要的作用。在包含情感分析任务的自然语言处理框架中，由于语言文本的复杂性，将文本及其语义通过数字化表示是其他语言处理任务的基础。作为承载语义的基本单元，词的表示学习，也即词向量的学习成为自然语言处理任务中重要的前置工作。而现有的词向量模型，往往只考虑局部上下文的信息，并不能表征词语本身的情感语义信息，不适合直接应用于情感分析领域。同时，如何更高效地利用学习得到的融合情感语义的词向量，将其应用于以情感分类为代表的文本情感分析任务中，也是本文要解决的一大问题。针对上述问题，本文提出了多种面向情感分析的词向量学习模型，并以学习得到的包含情感语义的词向量作为输入特征，提出两种用于情感类分的卷积神经网络分类模型。本文的具体研究内容如下: (1)针对现有基于局部上下文的词向量模型不能很好地体现情感语义的问题，本文提出了基于强化语义的词向量学习模型，将文档本身作为模型的上下文，实现文档信息与局部上下文信息的整合。实验表明基于强化语义模型学习得到的词向量可以实现性能更好的情感分类，也即证明模型有效地扩充了词向量的情感语义信息。 (2)针对原始词向量模型未使用已标注的情感信息的背景，本文提出了基于外部知识的词向量学习模型，分别将情感标签作为模型的输入和预测目标，实现外部情感知识与原有模型的整合。实验表明，扩展模型学习得到的词向量可以实现更高性能的情感分类。 (3)基于前两部分研究内容，本文提出了融合强化语义与外部知识的词向量学习模型，将表征更大范围上下文的文档信息和情感标注的外部知识共同融合进模型中。实验表明，融合模型的性能优于单独使用一种策略的模型。 (4)以包含情感信息的词向量作为输入特征，本文提出了用于情感分类的单层卷积神经网络模型;同时融合词内部的字信息，提出了结合词内部信息的卷积神经网络。实验结果表明，本文提出的以融合模型的词向量作为输入特征，以结合词内部信息的卷积神经网络为分类器的情感分类处理框架相对baseline的性能有所提升，证明该分类处理框架的有效性。收起

关键词 : 社交平台短文本信息情感分类词向量学习卷积神经网络