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[学位论文] 徐振伟第三临床医学院 2022年硕士导师: 李新毅共52页

摘要 : 血管性痴呆（Vasculardementia,VaD）是仅次于阿尔兹海默症的第二大痴呆类型，患者的认知功能障碍严重影响了生活质量，也为家庭和社会带来了较重的负担，目前尚无治疗VaD的特效药物，本实验旨在探索一种新的中药复方——加味不忘散治疗VaD的可能性。... 展开血管性痴呆（Vasculardementia,VaD）是仅次于阿尔兹海默症的第二大痴呆类型，患者的认知功能障碍严重影响了生活质量，也为家庭和社会带来了较重的负担，目前尚无治疗VaD的特效药物，本实验旨在探索一种新的中药复方——加味不忘散治疗VaD的可能性。目的：研究加味不忘散对VaD模型大鼠的学习记忆能力和认知功能的影响，探索加味不忘散对VaD模型大鼠胆碱能系统的影响，并揭示其作用机制。方法：将60只健康雄性SD大鼠（200g±20g）随机平均分为6组，每组10只，分别标记为假手术组、VaD模型组（简称模型组）、多奈哌齐组、加味不忘散低剂量组（简称低剂量组）、加味不忘散中剂量组（简称中剂量组）、加味不忘散高剂量组（简称高剂量组）。采用双侧颈动脉结扎术进行VaD模型的制备，其中假手术组仅将颈动脉分离，不结扎。术后10天，加味不忘散各治疗组分别给予0.05g/mL、0.15g/mL和0.45g/mL的加味不忘散溶液灌胃治疗；多奈哌齐组按0.5mg/kg给予盐酸多奈哌齐溶液；模型组、假手术组给予同等剂量的生理盐水灌胃。灌胃30天后，采用Morris水迷宫实验和旷场实验评价大鼠的学习记忆能力认知功能。行为学实验结束后，分离大鼠双侧海马组织，制备组织匀浆，采用Westernblot方法检测组织中胆碱乙酰转移酶（CholineAcetyltransferase，ChAT）及乙酰胆碱酯酶（Acetylcholinesterase，AChE）的含量。结果： 1.行为学实验结果：（1）Morris水迷宫：定位航行实验中，各组大鼠的逃避潜伏期随着训练天数的延长呈现下降趋势。空间探索实验中，与模型组相比较，低剂量组无统计学差异（27.2±2.71VS23.78±3.14，P＞0.05），而中、高剂量组在原平台象限停留时间百分比明显延长，差异具有统计学意义（28.58±2.57VS23.78±3.14，Plt;0.05；32.69±2.72VS23.78±3.14，Plt;0.01）。可视平台实验中，各组大鼠爬上平台所需时间及游泳速度均无统计学差异（P＞0.05）。（2）旷场实验：与模型组相比较，低、中、高剂量组穿格次数增加，差异有统计学意义（80±10.28VS61.125±16.5，Plt;0.01；92.75±4.95VS61.125±16.5，Plt;0.01；111.75±7.8VS61.125±16.5，Plt;0.01），且随着加味不忘散浓度的升高，穿格次数也在升高。高剂量组与多奈哌齐组相比，穿格次数无统计学差异（111.75±7.8VS124.375±6.32，P＞0.05）。 2.WesternBlot实验结果：（1）与模型组相比，低、中、高剂量组海马组织表达ChAT的水平均提高，差异具有统计学意义（0.622±0.029VS0.442±0.058，Plt;0.01；0.715±0.035VS0.442±0.058，Plt;0.01；0.809±0.028VS0.442±0.058，Plt;0.01）。高剂量组与假手术组之间ChAT的含量无明显差异（0.809±0.028VS0.84±0.033，Pgt;0.05）。（2）与模型组相比，中、高剂量组大鼠海马组织中AChE的含量降低（0.76±0.102VS0.888±0.063，Plt;0.05；0.648±0.104VS0.888±0.063，Plt;0.01）；与多奈哌齐组比较，高剂量组大鼠海马组织中AChE的含量没有差异（0.648±0.104VS0.725±0.053，Pgt;0.05）；高剂量组与假手术组比较，两者之间无统计学差异（0.648±0.104VS0.598±0.033，Pgt;0.05）。结论： 1.加味不忘散可能改善VaD模型大鼠的学习记忆能力，且其作用呈剂量依赖性。 2.加味不忘散可能呈剂量依赖性地升高VaD模型大鼠海马组织内ChAT的表达水平，降低AChE的表达水平。收起

关键词 : 血管性痴呆加味不忘散认知功能胆碱能系统

2. 加味不忘散对阿尔茨海默病模型大鼠海马神经元细胞凋亡及炎症反应的影响

[学位论文] 李晓琼山西医科大学 2019年硕士导师: 李新毅;景玮共66页

摘要 : 目的： 1.观察加味不忘散对AD模型大鼠海马神经元形态学及细胞凋亡的影响； 2.观察加味不忘散对AD模型大鼠海马组织炎症反应的影响。方法： 1.8周雄性SD大鼠32只。随机分为空白对照组、AD模型对照组与Aβ+加味不忘散低剂量治疗组... 展开目的： 1.观察加味不忘散对AD模型大鼠海马神经元形态学及细胞凋亡的影响； 2.观察加味不忘散对AD模型大鼠海马组织炎症反应的影响。方法： 1.8周雄性SD大鼠32只。随机分为空白对照组、AD模型对照组与Aβ+加味不忘散低剂量治疗组及Aβ+加味不忘散高剂量治疗组，每组各8只； 2.运用脑立体定位仪分别向双侧海马注入Aβ1-42制成AD大鼠模型； 3.采用Y迷宫观察大鼠的学习记忆情况； 4.采用HE染色法在光镜下观察大鼠海马神经元形态学改变； 5.运用TUNEL染色法观察大鼠海马神经元细胞凋亡情况； 6.运用ELISA法检测大鼠海马组织炎症因子水平。结果： 1.加味不忘散对AD模型大鼠学习记忆能力的影响。 Y迷宫实验结果显示四组大鼠进臂总次数无显著差异（P>0.05），表明Aβ1-42不影响大鼠运动能力。自发交替率结果显示与空白对照组对比，AD模型对照组自发交替率降低（P<0.05），Aβ+加味不忘散低剂量治疗组与AD模型对照组相比自发交替率无显著增加（P>0.05），而与AD模型对照组相比，Aβ+加味不忘散高剂量治疗组自发交替率显著增加（P<0.05）。 2.加味不忘散对AD模型大鼠海马神经元形态学的影响。 HE染色结果显示空白对照组大鼠海马神经元形态正常，结构完整，排列有序，未发现坏死的神经元，AD模型对照组大鼠海马神经元形态不规则，结构疏松，排列无序，还可观察到胞核固缩，Aβ+加味不忘散低剂量治疗组与AD模型对照组类似，细胞排列紊乱，仍有坏死的神经元，而与AD模型对照组对比，Aβ+加味不忘散高剂量治疗组神经元数目明显增加，结构完整，排列较为有序。 3.加味不忘散对AD模型大鼠海马神经元细胞凋亡的影响。 TUNEL染色结果显示空白对照组海马的凋亡神经元数目极少，AD模型对照组凋亡神经元数显著多于空白对照组（P<0.0001），与AD模型对照组对比，Aβ+加味不忘散低剂量治疗组未见凋亡细胞数减少（P>0.05），而Aβ+加味不忘散高剂量治疗组凋亡细胞数显著减少（P=0.005）。 4.加味不忘散对AD模型大鼠海马组织炎症反应的影响。（1）海马组织中IL-1β水平结果显示AD模型对照组IL-1β水平显著高于空白对照组（P<0.0001），与AD模型对照组对比，Aβ+加味不忘散低剂量治疗组并未降低（P=0.98），而Aβ+加味不忘散高剂量治疗组显著减低（P<0.001）。（2）海马组织中IL-6水平结果显示AD模型对照组IL-6水平较空白对照组显著增加（P<0.0001），与AD模型对照组对比，Aβ+加味不忘散低剂量治疗组并未减低（P=0.99），而Aβ+加味不忘散高剂量治疗组显著减低（P=0.01）。（3）海马组织TNF-α水平测定结果显示，AD模型对照组TNF-α水平较空白对照组显著增高（P<0.0001），与AD模型对照组对比，Aβ+加味不忘散低剂量治疗组没有减低（P=0.26），而Aβ+加味不忘散高剂量治疗组显著减低（P<0.0001）。 5.大鼠学习记忆能力与神经炎症、神经元细胞凋亡之间的关系相关性分析结果显示：Y迷宫自发交替率与TUNEL阳性率以及海马炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α水平相关系数分别为-0.77、-0.81、-0.60、-0.68（P＜0.05）；TUNEL阳性率与海马炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α水平相关系数分别为0.77、0.63、0.63（P＜0.05）。结论： 1.加味不忘散可改善AD模型大鼠的学习记忆能力； 2.加味不忘散可逆转AD模型大鼠海马的神经元形态学改变； 3.加味不忘散能够抑制Aβ1-42所致的海马神经元凋亡与炎症反应； 4.大鼠学习记忆能力随着神经元细胞凋亡及神经炎症反应程度的降低而增强，且大鼠海马神经元凋亡程度越严重，神经炎症反应程度也越严重。收起

关键词 : 加味不忘散阿尔茨海默病细胞凋亡炎症反应

3. “加味不忘散”在血管性痴呆大鼠认知功能中的作用及血管再生机制的研究

[学位论文] 李文霞第三临床医学院 2022年硕士导师: 李新毅共55页

摘要 : 目的: 血管性痴呆（VascularDementia,VaD）是一种由卒中等多种脑血管疾病引起的临床综合征，其特征为学习记忆减退及认知能力下降。近年来，VaD的发病率随着高发的脑血管疾病而逐年上升。因此，对于VaD发病机制及治疗的研究迫在眉睫。研究目的如... 展开目的: 血管性痴呆（VascularDementia,VaD）是一种由卒中等多种脑血管疾病引起的临床综合征，其特征为学习记忆减退及认知能力下降。近年来，VaD的发病率随着高发的脑血管疾病而逐年上升。因此，对于VaD发病机制及治疗的研究迫在眉睫。研究目的如下： 1.研究“加味不忘散”（ModifiedBu-WangPowder,MBWP）对VaD大鼠认知功能的改善作用； 2.探讨“加味不忘散”改善VaD大鼠认知功能的血管再生机制。方法: 1.选取71只成年健康的雄性SD大鼠，将其随机分为假手术组（Shamcontrol,n=15）和造模组（n=56）； 2.对造模组大鼠使用双侧颈动脉血流阻断术进行VaD模型制备，将造模成功的VaD大鼠随机分为VaD模型组（VaDmodel,n=12）、“加味不忘散”低剂量治疗组（LowMBWP,n=12）、“加味不忘散”中剂量治疗组（MediumMBWP,n=11）和“加味不忘散”高剂量治疗组（HighMBWP,n=11）。制备模型10天后，对各治疗组大鼠予以“加味不忘散”灌胃治疗28天； 3.采用水迷宫及Y迷宫实验方法检测各组大鼠的认知功能； 4.利用免疫组化方法研究“加味不忘散”对VaD大鼠海马微血管密度（MicrovesselDensity,MVD）的影响； 5.借助蛋白质印迹法（WesternBlot）探讨“加味不忘散”对VaD大鼠海马组织中缺氧诱导因子1α（Hypoxia-InducibleFactor-1α,HIF-1α）和血管内皮生长因子（VascularEndothelialGrowthFactor,VEGF）表达水平的影响。结果： 1.行为学实验结果：水迷宫实验结果显示：（1）定向巡航实验：VaD模型组的平均逃避潜伏期从第2天起与假手术组相比逐渐延长。与VaD模型组比较，“加味不忘散”治疗组的潜伏期从第3天开始显著缩短，其中，高剂量组的潜伏期最短。（2）空间探索实验：VaD模型组大鼠较假手术组在原平台所在象限（第IV象限）的活动时间占比明显减少，差异具有统计学意义（29.55±0.40%vs.59.34±0.14%,Plt;0.001）；“加味不忘散”低剂量组在第IV象限的活动时间占比与模型组相比无统计学差异（39.51±0.22%vs.29.55±0.40%,Pgt;0.05），中、高剂量组大鼠较模型组在第IV象限活动时间占比明显增多，差异具有统计学意义（49.71±0.24%vs.29.55±0.40%,Plt;0.001;55.48±0.39%vs.29.55±0.40%,Plt;0.001）；而高剂量组的第IV象限活动时间所占百分比较中剂量组延长（55.48±0.39%vs.49.71±0.24%,Plt;0.001）。大鼠找到可视平台的平均时间以及平均速度在各组间未见显著差异（Pgt;0.05）。 Y迷宫实验结果显示：就自发交替反应率而言，VaD模型组较假手术组显著降低，差异具有统计学意义（55.00±6.81%vs.81.50±6.72%,Plt;0.001）。中、高剂量治疗组大鼠的自发交替反应率均较模型组明显增高（67.75±6.50%vs.55.00±6.81%,Plt;0.05;76.83±5.71%vs.55.00±6.81%,Plt;0.001）；高剂量治疗组大鼠的自发反应交替率比低剂量组增多，差异有统计学意义（76.83±5.71%vs.57.14±10.78%,Plt;0.001）。而高剂量组大鼠的自发交替反应率与假手术组之间的差异无统计学意义（76.83±5.71%vs.81.5±6.72%,Pgt;0.05）。Y迷宫的进臂总次数在每组大鼠之间未见明显差异。 2.免疫组织化学染色实验结果：通过免疫组织化学染色观察各组大鼠海马组织中MVD的差异。与假手术组相比，VaD模型组大鼠海马区MVD增多（25.55±2.91num./mm2vs.11.45±1.37num./mm2,Plt;0.001）。MBWP低剂量组大鼠海马区MVD较VaD模型组增多，但无统计学意义（27.69±1.37num./mm2vs.25.55±2.91num./mm2,Pgt;0.05），而中、高剂量治疗组大鼠的海马区MVD较VaD模型组显著增多，差异有统计学意义（42.54±2.57num./mm2vs.25.55±2.91num./mm2,60.45±1.54num./mm2vs.25.55±2.91num./mm2,Plt;0.001）。与中剂量组相比，“加味不忘散”高剂量组大鼠海马区MVD增加，且差异有统计学意义（60.45±1.54num./mm2vs.42.54±2.57num./mm2,Plt;0.001）。 3.WesternBlot实验结果：通过WesternBlot实验观察各组大鼠海马内HIF-1α和VEGFA的表达情况。结果提示，VaD模型组大鼠海马内的HIF-1α和VEGFA的表达水平较假手术组的增多，“加味不忘散”治疗组海马内HIF-1α和VEGFA的表达水平也较假手术组升高，且差异具有统计学意义（Plt;0.05）。与VaD模型组相比，“加味不忘散”治疗组大鼠海马内HIF-1α和VEGFA的表达水平随着“加味不忘散”给药浓度的增加而逐渐提高（Plt;0.05）。结论： 1.“加味不忘散”可以剂量依赖地改善VaD大鼠的学习记忆功能。 2.“加味不忘散”可以增加VaD大鼠脑组织中的MVD，促进大脑海马区的血管再生，且作用呈剂量依赖性。 3.“加味不忘散”可以提高VaD大鼠脑组织内血管新生相关因子的表达，通过上调HIF-1α/VEGF信号通路，促进VaD大鼠海马组织内的血管再生。综上所述，“加味不忘散”通过上调HIF-1α/VEGF信号通路，促进微血管再生，进而改善VaD大鼠的认知功能。本课题受2020年山西白求恩医院人才引进科研启动金项目“加味不忘散对血管性痴呆模型大鼠认知功能的影响及血管再生机制的研究（编号：2020RC007）”资助。收起

关键词 : 血管性痴呆加味不忘散认知功能血管再生发病机制

4. “加味不忘散”对血管性痴呆模型大鼠学习记忆的影响及其突触可塑性机制的研究

[学位论文] 侯苗苗山西医科大学 2019年博士导师: 李新毅;赵建平共129页

摘要 : 目的：血管性痴呆(Vascular Dementia,VaD)是严重影响人类健康的一种认知功能障碍疾病，随着脑血管病的发病率逐年升高，已成为导致痴呆的第二大常见类型。对VaD的研究已成为研究热点，探索并明确VaD的治疗和预防措施十分有意义。本课题研究目的... 展开目的：血管性痴呆(Vascular Dementia,VaD)是严重影响人类健康的一种认知功能障碍疾病，随着脑血管病的发病率逐年升高，已成为导致痴呆的第二大常见类型。对VaD的研究已成为研究热点，探索并明确VaD的治疗和预防措施十分有意义。本课题研究目的主要包括： 1.观察“加味不忘散”(Modified Bu-Wang Powder, MBWP)对VaD模型大鼠的学习记忆能力的影响； 2.研究MBWP对VaD大鼠海马神经元形态和突触结构的影响； 3.探索MBWP对VaD模型大鼠海马突触可塑性的影响； 4.研究MBWP防治VaD的作用机制。方法： 1.将200只雄性SD大鼠随机分为5组，每组40只。分别为假手术组(Sham control)、VaD模型组(VaDmodel)、VaD模型+MBWP低剂量干预组(Low dose MBWP group, MBWPlow)、VaD模型+MBWP中剂量干预组(Medium dose MBWP group, MBWPmedium)、VaD模型+MBWP高剂量干预组(High dose MBWP group,MBWP high)。 2.通过双颈总动脉永久结扎方法制备VaD大鼠模型，MBWP灌胃治疗4周。 3.运用Y迷宫、Morris水迷宫、穿梭箱实验等行为学方法测定MBWP对VaD模型的学习记忆能力的影响； 4.运用在体LTP检测大鼠海马组织的突触可塑性； 5.通过HE染色观察大鼠海马的组织结构改变； 6.采用透射电镜观察海马超微结构变化； 7.应用RT-PCR技术检测海马内GAP43、SYN、PSD-95、MAP-2、BDNF和TrkBmRNA的水平； 8.应用Western-Blot技术检测海马内GAP43、SYN、PSD-95、MAP-2、BDNF和TrkB蛋白水平的变化。 9.采用SPSS24.0和Graphpadprism7.0软件对数据进行统计分析和作图。结果： 1.在Morris水迷宫定位航行实验中，与Shamcontrol相比，VaDmodel大鼠的平均逃避潜伏期从第3天开始延长(P＜0.01)，VaDmodel大鼠对空间标志物的学习能力减退；与VaDmodel大鼠相比，从第3天开始，MBWPlow、medium、high大鼠的平均逃避潜伏期显著性缩短。MBWPhigh改善VaD大鼠的空间学习能力的效果最好。在空间探索实验中，与Shamcontrol相比，VaDmodel大鼠在目标象限停留时间显著性减少(P＜0.001)，VaD大鼠的空间记忆能力受损严重。MBWPmedium、high大鼠在目标象限停留时间延长，差异具有统计学意义(P＜0.001)。各组大鼠到达可视平台的时间和游泳速度没有统计学差异(P＞0.05)，提示造模和药物对大鼠的视力和游泳能力没有影响。 2.Y迷宫自发交替实验中，与Shamcontrol相比，VaDmodel大鼠的进臂自发交替正确率显著性降低(P＜0.001)，VaD大鼠的工作记忆能力受损严重。MBWPmedium、high可以提高自发交替正确率，差异具有统计学意义(P＜0.05，P＜0.001)，MBWP能显著改善VaD大鼠的空间工作记忆能力。各组大鼠的进臂总次数之间没有统计学差异，提示VaD模型的造模方法和MBWP干预对大鼠的运动能力和探索空间的欲望都没有影响。 3.穿梭箱实验中，与Shamcontrol相比，VaDmodel大鼠的主动回避率显著性降低(P＜0.001)，主动回避潜伏期显著性延长(P＜0.001)，VaD大鼠回避伤害性刺激的学习记忆能力受损严重。与VaDmodel相比，MBWPmedium、high大鼠的主动回避率显著性增高(P＜0.001)，主动回避潜伏期显著性缩短(P＜0.001)MBWP能显著改善VaD大鼠回避伤害性刺激的学习记忆能力。MBWPhigh干预效果最好。 4.在体场电位记录实验中，与Shamcontrol相比，VaDmodel大鼠的f-EPSP斜率百分比显著性降低，LTP有显著性压抑作用(P＜0.001)，VaD大鼠海马突触可塑性受损严重。与VaDmodel相比，MBWPmedium、high逆转了VaD大鼠维持LTP的压抑作用(P＜0.001)，MBWP能显著改善VaD大鼠的突触可塑性。 5.通过HE染色观察大鼠海马组织结构改变，VaDmodel和MBWPlow大鼠海马神经元数量显著性减少，细胞体积缩小，核固缩，排列紊乱；MBWPmedium、high大鼠海马神经元数量增多、排列整齐、异常细胞减少。 6.采用透射电镜观察海马超微结构变化，结果显示，VaDmodel大鼠海马内的突触结构被破坏，突触数量减少，突触结构不完整，突触间隙增大，突触后膜上的致密物质变薄。与VaDmodel相比，随着MBWP干预剂量的增加，海马内突触结构逐渐变完整，突触间隙由大变小，突触后膜上的致密物也由少变多。 7.通过分子生物学检测各组大鼠海马内突触相关蛋白GAP43、SYN、PSD-95、MAP-2的改变，结果显示，VaDmodel大鼠海马中GAP43、SYN、PSD-95、MAP-2转录水平和表达蛋白水平平均比Shamcontrol显著性降低(P＜0.05)。与VaDmodel相比，随着MBWP干预剂量的增加，海马中GAP43、SYN、PSD-95、MAP-2转录和表达水平逐渐升高(P＜0.05)。 8.通过分子生物学检测各组大鼠海马内BDNF和TrkB的改变，结果显示，VaDmodel大鼠海马中BDNF和TrkB转录和表达水平与Shamcontrol相比均显著性降低(P＜0.05)。与VaDmodel相比，随着MBWP干预剂量的增加，海马中BDNF和TrkB转录和表达水平逐渐升高(P＜0.05)。结论： 1.MBWP显著提高了VaD模型大鼠的学习记忆能力，且治疗效果具有剂量依赖性。 2.MBWP改善了VaD模型大鼠海马的神经元数目、神经元结构、突触数量、突触超微结构。 3.MBWP可以剂量依赖性的改善VaD模型大鼠海马的突触可塑性。 4.MBWP提高了海马内GAP43、SYN、PSD-95、MAP-2的转录和翻译水平。 5.MBWP可以上调海马内BDNF-TrkB信号通路。由此提示，MBWP可能对治疗VaD具有一定的积极意义。收起

关键词 : 血管性痴呆加味不忘散学习记忆突触可塑性动物实验

5. “加味不忘散”对APP/PS1转基因小鼠学习记忆的影响及其抗凋亡机制的研究

[学位论文] 杨青青山西医科大学 2020年硕士导师: 李新毅共49页

摘要 : 目的：观察加味不忘散对AD转基因模型小鼠(APP/PS1小鼠)学习记忆能力的影响，研究加味不忘散对APP/PS1凋亡相关蛋白(Bcl-2，Cleaved caspase-3)表达的影响，并探讨其改善学习记忆能力的机制。方法： 1.分组及喂养：6月龄APP/PS1小鼠... 展开目的：观察加味不忘散对AD转基因模型小鼠(APP/PS1小鼠)学习记忆能力的影响，研究加味不忘散对APP/PS1凋亡相关蛋白(Bcl-2，Cleaved caspase-3)表达的影响，并探讨其改善学习记忆能力的机制。方法： 1.分组及喂养：6月龄APP/PS1小鼠随机分成3组，每组10只，分别为APP/PS1组(APP/PS1 group)、MBWP低剂量组(APP/PS1+L-MBWPgroup，15mg/kg/d)和MBWP高剂量组(APP/PS1+H-MBWPgroup，30mg/kg/d)，10只非转基因小鼠作为对照组(Control group)。 2.行为学检测：在MBWP干预4个月后，对小鼠进行水迷宫及穿梭箱实验，评估小鼠学习记忆能力。 3.WesternBlot：运用WesternBlot技术，从蛋白分子水平层面检测小鼠海马内Bcl-2和Cleavedcaspase-3的表达水平。结果： 1.行为学检测结果： (1)Morris水迷宫实验：在定位航行实验中，随着实验天数的增加，各组小鼠的逃避潜伏期逐渐缩短。在空间探索实验中，APP/PS1组的目标象限停留时间与Control组相比显著缩短(P＜0.01)；与APP/PS1组对比，APP/PS1+L-MBWP组及APP/PS1+H-MBWP组目标象限停留时间延长(P＜0.05，P＜0.01)。APP/PS1+L-MBWP组与APP/PS1+H-MBWP组相比无显著性差异(P＞0.05)。 (2)穿梭箱实验：在穿梭箱实验的训练阶段，可见每组小鼠主动逃避次数随着训练天数的延长而增长。在穿梭箱实验的测试阶段，与Control组相比，APP/PS1组和APP/PS1+L-MBWP组小鼠的主动逃避次数显著降低(P＜0.01，P＜0.01)；与APP/PS1组对比，APP/PS1+L-MBWP组小鼠的主动逃避次数增加，且差异具有统计学意义(P＜0.01)；与APP/PS1+L-MBWP组相比，APP/PS1+H-MBWP组小鼠主动逃避次数无显著性差异(P＞0.05)。 2.WesternBlot检测结果： (1)APP/PS1小鼠海马组织中Bcl-2水平显著性低于Control组(P＜0.05)；与APP/PS1组相比，APP/PS1+L-MBWP及APP/PS1+H-MBWP组海马组织Bcl-2水平显著升高(P＜0.05，P＜0.01)；与APP/PS1+L-MBWP组相比，APP/PS1+H-MBWP组Bcl-2水平显著增加(P＜0.05)。 (2)APP/PS1组小鼠海马组织中Cleavedcaspase-3水平显著高于Control组(P＜0.01)；与APP/PS1组相比，APP/PS1+H-MBWP组海马组织中Cleavedcaspase-3水平显著性降低(P＜0.05)，APP/PS1+L-MBWP组无显著差异(P＞0.05)；与APP/PS1+L-MBWP组相比，APP/PS1+H-MBWP组小鼠主动逃避次数无显著性差异(P＞0.05)。结论： 1.加味不忘散可以改善APP/PS1转基因小鼠的学习记忆能力。 2.APP/PS1转基因小鼠海马内抗凋亡蛋白Bcl-2表达水平降低，凋亡执行分子Cleavedcaspase-3蛋白表达水平升高，参与细胞凋亡。 3.加味不忘散可以上调APP/PS1转基因小鼠海马内抗凋亡蛋白Bcl-2的表达，下调凋亡执行分子Cleavedcaspase-3蛋白的表达，抑制细胞凋亡。收起

关键词 : 阿尔茨海默病加味不忘散细胞凋亡 Bcl-2基因 Cleavedcaspase-3基因

6. 加味不忘散对AD大鼠学习记忆及在体海马长时程增强的影响

[学位论文] 王海龙山西医科大学 2015年硕士导师: 李新毅共38页

摘要 : 目的： 1.观察加味不忘散对AD大鼠学习记忆能力的影响； 2.观察加味不忘散对AD大鼠在体海马CA1区LTP的影响。方法：将40只雄性Wistar大鼠（230g±30g）随机分成对照组、AD模型组、加味不忘散低剂量组（加味不忘散0.9g/100g体重... 展开目的： 1.观察加味不忘散对AD大鼠学习记忆能力的影响； 2.观察加味不忘散对AD大鼠在体海马CA1区LTP的影响。方法：将40只雄性Wistar大鼠（230g±30g）随机分成对照组、AD模型组、加味不忘散低剂量组（加味不忘散0.9g/100g体重）、加味不忘散高剂量组（加味不忘散1.8g/100g体重），每组10只，后三组给以腹腔注射D-半乳糖6周联合注射鹅膏蕈氨酸（Ibotenic acid，IBO）定向损毁基底前脑Meynert核（第43天）造模，加味不忘散高、低剂量组同时予以加味不忘散灌胃共8周，8周后利用Morris水迷宫法评价各组大鼠学习记忆的改变，利用神经电生理指标长时程增强（Long-term potentiation，LTP）评价各组大鼠海马突触可塑性改变。各组资料均为计量资料，采用单因素方差分析进行比较，各组间的比较采用LSD-t检验，以α=0.05为检验水准，认为p＜0.05具有统计学差异。结果： 1.加味不忘散对AD大鼠学习记忆能力的影响：对照组大鼠连续5天逃避潜伏期为60.52±7.09、53.25±6.86、33.49±5.98、20.85±5.12、12.31±4.11；AD模型组大鼠逃避潜伏期普遍延长，分别是：90.08±9.51、81.69±8.98、69.07±6.76、59.80±6.65、53.78±5.76；加味不忘散低剂量组大鼠逃避潜伏期较AD组缩短，分别为81.23±6.35、69.53±5.43、54.76±6.94、49,67±5.87、38.57±5.08；加味不忘散高剂量组大鼠逃避潜伏期较低剂量组缩短，分别为：72.87±5.34、62.30±6.78、48.32±4.83、37.62±4.41、29.09±4.37。对照组、模型组、低剂量组、高剂量组大鼠跨台次数分别为：14.89±1.45、4.75±1.91、7.57±1.51、10.71±0.76。以上四组数据之间的差异均有统计学意义（p＜0.05），且各组之间比较差异也均有统计学意义（p＜0.05）。 2.加味不忘散对AD大鼠在体海马CA1区LTP的影响：在HFS之后，对照组1min、30min、60min fEPSP增幅（HFS之后的fEPSP与基础fEPSP的比值）分别为237.23±15.79%、237.23±15.79%、192.18±11.21%，模型组1min、30min、60minfEPSP增幅降为159.60±7.06、130.48±6.39、110.44±7.90，加味不忘散低剂量组1min、30min、60minfEPSP增幅为181.87±7.14、146.04±4.73、140.61±7.59，加味不忘散高剂量组1min、30min、60min增幅为200.66±6.78、172.52±6.08、161.16±6.70，以上四组数据均使用单因素方差分析表明差异均有统计学意义（p＜0.05），且各组使用LSD-t两两比较差异均有意义（p＜0.05）。结论： 1.加味不忘散具有改善AD大鼠的学习记忆能力的作用； 2.加味不忘散可减轻AD模型大鼠在体海马LTP的抑制； 3.加味不忘散的上述作用具有浓度依赖性。收起

关键词 : 阿尔茨海默病加味不忘散学习记忆海马组织电生理指标

7. 加味不忘散对APP/PS1转基因小鼠学习记忆、海马NF-κB及相关炎性因子表达的影响

[学位论文] 贺则凡山西医科大学 2020年硕士导师: 李新毅共40页

摘要 : 目的： 1.观察加味不忘散对APP/PS1转基因小鼠学习记忆能力的影响； 2.观察加味不忘散对APP/PS1转基因小鼠海马NF-κB及相关炎性因子表达水平的影响； 3.探讨加味不忘散改善AD认知功能障碍的机制。方法： 1.实验动物分组：... 展开目的： 1.观察加味不忘散对APP/PS1转基因小鼠学习记忆能力的影响； 2.观察加味不忘散对APP/PS1转基因小鼠海马NF-κB及相关炎性因子表达水平的影响； 3.探讨加味不忘散改善AD认知功能障碍的机制。方法： 1.实验动物分组：6月龄健康小鼠10只，作为健康对照组；6月龄APP/PS1转基因小鼠共30只，随机分为3组：APP/PS1组、加味不忘散低剂量组(L-MBWP组)、加味不忘散高剂量组(H-MBWP组)。 2.健康对照组、APP/PS1组小鼠予生理盐水(1ml/100g体重)灌胃处理，L-MBWP组、H-MBWP组分别予低剂量(0.15g/ml,1ml/100g体重)、高剂量(0.30g/ml,1ml/100g体重)加味不忘散灌胃处理，每日一次，共4个月； 3.采用Y迷宫实验观察各组小鼠的学习记忆能力； 4.利用Westernblot检测各组小鼠海马组织中NF-κB、TNF-α蛋白的表达水平； 5.使用GraphPadPrism7.0软件行统计分析。计量资料用均数±标准差((x)±s)表示，多组间差异比较采用单因素方差分析检验，组间比较采用LSD-t检验行。α=0.05为检验水准，P＜0.05视为差异有统计学意义。结果： 1.加味不忘散对APP/PS1转基因小鼠学习记忆能力的影响 Y迷宫自主交替实验结果显示：四组小鼠的总进臂次数无显著差异(P＞0.05)，表明各组小鼠运动能力无明显差异；与健康对照组相比，APP/PS1组小鼠的自主交替率显著降低(P＜0.01)，与APP/PS1组相比，H-MBWP组自主交替率显著增加(P＜0.01),L-MBWP组无显著性差异(P＞0.05)。 2.加味不忘散对APP/PS1转基因小鼠海马NF-κBp65及相关炎性因子表达水平的影响 (1)小鼠海马组织中NF-κBp65表达水平测定结果显示：与健康对照组相比，APP/PS1组海马组织中NF-κBp65表达水平显著增加(P＜0.01)；与APP/PS1组相比，H-MBWP组小鼠海马组织中NF-κBp65表达水平显著降低(P＜0.05)，L-MBWP组表达水平无统计学差异(P＞0.05)。 (2)小鼠海马组织TNF-α表达水平测定结果显示：与健康对照组相，APP/PS1组小鼠海马组织中TNF-α水平较显著增加(P＜0.01)，与APP/PS1组相比，H-MBWP组小鼠海马组织中TNF-α表达水平均显著降低(P＜0.01)，L-MBWP组表达水平无统计学差异(P＞0.05)。结论： 1.加味不忘散可改善APP/PS1转基因小鼠的学习记忆能力； 2.APP/PS1转基因小鼠海马组织中NF-κBp65及相关炎性因子TNF-α表达增加； 3.加味不忘散可抑制APP/PS1转基因小鼠海马组织中NF-κBp65激活及炎性因子TNF-α释放，提示该复方可能通过抑制海马炎症反应发挥神经保护作用。收起

关键词 : 阿尔茨海默病加味不忘散认知功能 NF-&kappa B 神经炎症反应

8. 加味不忘散对阿尔茨海默病模型大鼠学习记忆的影响及其抗炎机制的研究

[学位论文] 刘晓蕾山西医科大学 2018年博士导师: 李新毅共203页

摘要 : 阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease, AD)，是一种常见的神经系统退行性疾病，以进行性记忆力减退、认识功能障碍、执行能力障碍、失语、失用、视空间障碍以及精神行为异常为主要临床特征。随着世界人口老龄化程度的不断加剧，AD的发病率逐年升高，在... 展开阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease, AD)，是一种常见的神经系统退行性疾病，以进行性记忆力减退、认识功能障碍、执行能力障碍、失语、失用、视空间障碍以及精神行为异常为主要临床特征。随着世界人口老龄化程度的不断加剧，AD的发病率逐年升高，在老年人群中 AD 已成为继心脑血管疾病和恶性肿瘤之后的第 4 位致死原因，给社会和家庭带来了沉重的负担。AD的发病机制复杂，至今尚未明确，目前存在的假说包括β淀粉样蛋白毒性学说、Tau蛋白代谢异常学说、基因突变学说、胆碱能缺乏学说、兴奋性氨基酸毒性学说、神经炎症学说、钙超载学说、代谢综合征学说等。因其发病机制复杂，AD仍缺乏有效的治疗手段。目前经FDA批准用于治疗AD的药物只有多奈哌齐和美金刚，然而这两种药物只能改变神经递质水平，不能改变AD的病理过程、阻止AD的病情进展，因此对AD的治疗仍是世界范围内医学研究者所面临的挑战之一。研究证实AD患者脑内小胶质细胞在Aβ刺激下激活，被长期、慢性活化，进而合成和释放大量炎症介质，最终造成神经元的损伤和丢失。存在于小胶质细胞中的NF-κB 作为多效性的核转录因子，能够调控多种炎症因子的信号转导，其中一条重要的炎症信号通路就是NF-κB-NLRP3炎症体-caspase-1-IL-1β。NF-κB被激活后转移到细胞核内，一方面诱导IL-1β基因表达，产生大量无活性的IL-1β前体(pro-IL-1β)，另一方面诱导NLRP3表达。NLRP3在外界损伤刺激下，募集接头蛋白ASC和效应蛋白 caspase-1 组成 NLRP3 炎症体，后者会将 pro-IL-1β 剪切为有强烈促炎活性的 IL-1β，进而诱导其他炎症因子、趋化因子等的合成，导致脑内的炎症级联反应。目前已有多项研究证实，抑制 NLRP3 炎症体可以减少 Aβ 的沉积，改善认知功能。因此， NLRP3炎症小体成为了目前AD防治研究领域的热点。临床流行病研究显示，长期服用非甾体抗炎药物(nonsteroidal anti-inflammatory drugs, NSAIDs)的患者AD的发病率明显减低。这一现象提示我们：以调控神经炎症为靶点来治疗 AD，可能会获得良好的治疗效果。然而，目前已开展的针对 NSAIDs治疗AD的数项临床试验大多因药物的胃肠道副作用而中止，从而限制了抗炎疗法在AD治疗领域中的探索性研究。中医药是中华民族的伟大瑰宝之一，以其低毒、调节全身机体功能的整体观，以及多靶点、多环节的作用特点，在众多疾病的防治中起到了良好的效果。基于对痴呆的中医病机的理解和阅读经典中医古籍，结合前期的研究成果，我们在古代经方“不忘散”基础上，根据单味中药之间的有机配伍和协同作用，构建了由远志、石菖蒲、人参、茯苓、茯神、当归、白术和黄连组成的“加味不忘散”。该组方更加合理全面，既扶正又祛邪，切中、兼顾了AD的主要病机。目前已应用于临床，收到了较好的效果。在前期研究基础上，本研究以神经免疫炎症学说为根据，以信号转导通路途径为切入点，从体内实验和体外实验两个层次，验证加味不忘散治疗AD的有效性，并进一步观察该组方对AD神经炎症的影响。第一部分加味不忘散对AD模型大鼠学习记忆功能及海马组织结构的影响目的： 1. 观察加味不忘散对AD模型大鼠学习记忆功能影响； 2. 观察加味不忘散对AD模型大鼠海马组织结构和神经元凋亡的影响。方法： 1. 将SD大鼠分为假手术组、AD模型组、加味不忘散低剂量干预组、加味不忘散中剂量干预组、加味不忘散高剂量干预组和MCC950干预组； 2. 通过脑立体定位技术向双侧海马注射Aβ1-42制备AD大鼠模型； 3. 运用Morris水迷宫试验评估大鼠学习记忆功能； 4. 大脑切片进行HE染色，在光镜下观察大鼠海马的组织结构； 5. 利用透射电镜观察海马超微结构变化，并计数突触数量进行比较； 6. 运用TUNEL染色法观察海马神经元凋亡情况。结果： 1. 加味不忘散对AD模型大鼠学习记忆试验的影响：假手术组大鼠第1天到第5天的逃避潜伏期分别为 69.79±13.54 s、52.16±3.87 s、34.75±17.10 s、19.71±5.39 s、10.57±3.85 s。AD 模型组大鼠第 1 天到第 5 天的逃避潜伏期分别为 79.21±16.37s、74.46±5.58 s、65.00±8.62 s、41.82±8.87 s、28.96±6.73 s，与假手术组相比，在第2-5天的逃避潜伏期均明显延长(p<0.01)。加味不忘散低剂量干预组大鼠第1天到第5天的逃避潜伏期分别为77.96±13.83 s、75.78±7.92 s、62.91±7.99 s、38.82±10.93 s、25.75±6.77 s，与AD模型组相比无显著差异(p > 0.05)。加味不忘散中剂量干预组大鼠第1天到第5天的逃避潜伏期分别为76.21±12.80 s、64.28±8.37 s、50.87±8.61 s、30.82±5.33 s、19.82±2.68 s，第2-5天的逃避潜伏期较AD模型组和加味不忘散低剂量干预组明显缩短(p < 0.05)。加味不忘散高剂量干预组大鼠第 1 天到第 5 天的逃避潜伏期分别为70.42±14.08 s、54.74±10.40 s、38.07±8.31 s、22.59±5.42 s、14.39±3.51 s，第2-5天的逃避潜伏期较AD模型组和加味不忘散低剂量干预组明显缩短(p<0.01)，较加味不忘散中剂量干预组也缩短(p<0.01)。MCC950干预组大鼠第1天到第5天的逃避潜伏期分别为71.65±16.03 s、54.51±10.01 s、39.36±7.14 s、22.24±5.11 s、13.93±3.68 s，第2-5天的逃避潜伏期较AD模型组和加味不忘散低剂量干预组明显缩短(p<0.01)，较加味不忘散中剂量干预组也缩短(p<0.01)，与加味不忘散高剂量干预组相比无显著差异（p值分别为0.938、0.815、0.928、0.857）。 2. 加味不忘散对AD模型大鼠空间探索能力的影响：假手术组、AD模型组、加味不忘散低、中、高剂量干预组和MCC950干预组大鼠的原平台象限停留时间分别为41.14±4.22 s、23.28±8.34 s、24.57±7.33 s、31.71±6.97 s、39.43±5.44 s、39.15±4.06 s。其中AD模型组大鼠的原平台象限停留时间明显短于假手术组(p < 0.001)，加味不忘散低剂量干预组大鼠的原平台象限停留时间也明显短于假手术组(p < 0.001)，与 AD模型组无明显差异(p=0.703)。加味不忘散中剂量组大鼠的原平台象限停留时间较AD模型组(p=0.016)和加味不忘散低剂量干预组(p=0.040)均有所延长。加味不忘散高剂量组大鼠的原平台象限停留时间较AD模型组(p < 0.001)、加味不忘散低剂量干预组(p<0.001)和加味不忘散中剂量干预组(p=0.027)均延长。MCC950干预组大鼠的原平台象限停留时间较AD模型组(p<0.001)、加味不忘散低剂量干预组(p<0.001)和加味不忘散中剂量干预组(p = 0.033)均延长，与加味不忘散高剂量组相比无统计学差异(p=0.933)。假手术组、AD模型组、加味不忘散低、中、高剂量干预组和MCC950干预组大鼠的跨台次数分别为 12.71±2.63、5.29±1.38、7.43±1.62、9.71±1.50、12.14±2.41、12.29±3.39。其中AD模型组大鼠的跨台次数明显少于假手术组(p<0.001)，加味不忘散低剂量干预组大鼠的跨台次数也明显少于假手术组(p < 0.001)，与AD模型组无明显差异(p=0.056)。加味不忘散中剂量组大鼠的跨台次数较AD模型组(p<0.001)和加味不忘散低剂量干预组(p=0.042)均增多。加味不忘散高剂量组大鼠的跨台次数较AD模型组(p<0.001)、加味不忘散低剂量干预组(p<0.001)和加味不忘散中剂量干预组(p=0.031)均增多。MCC950干预组大鼠的跨台次数较AD模型组(p<0.001)、加味不忘散低剂量干预组(p<0.001)和加味不忘散中剂量干预组(p=0.023)均显著增多，与加味不忘散高剂量组相比无统计学差异(p=0.895)。 3. 加味不忘散对AD模型大鼠海马组织结构的影响：HE染色显示，AD模型组和加味不忘散低剂量组海马神经元数量明显减少，细胞体积缩小，核固缩，排列紊乱；加味不忘散中、高剂量干预组和 MCC950 大鼠海马神经元数量明显增多、排列变整齐、异常细胞减少。 4. 加味不忘散对AD模型大鼠海马超微结构的影响：通过透射电镜观察到，AD模型组大鼠海马大量神经元变性、坏死，核固缩，线粒体肿胀明显。与AD模型组相比，随着加味不忘散干预剂量的增加，大鼠海马神经元形态逐渐变完整，变性或坏死的神经元逐渐减少，细胞浆内细胞器数量逐渐增多、形态逐渐转为正常。 5. 加味不忘散对 AD 模型大鼠海马突触结构和数量的影响：通过透射电镜观察海马突触结构发现，AD模型组大鼠海马内的突触结构被破坏，突触结构不完整，突触间隙增大，突触后膜内的致密物质变薄。与AD模型组相比，随着加味不忘散干预剂量的增加，海马内突触结构逐渐由不完整变完整，突触间隙由大变小，突触后膜内的致密物也由少变多。假手术组、AD模型组、加味不忘散低、中、高剂量干预组和MCC950干预组大鼠海马的突触数量分别为27.31±6.99、10.76±3.19、13.64±3.53、19.61±3.69、25.77±7.21、24.93±5.97。其中AD模型组大鼠海马的突触数量较假手术组明显减少(p<0.001)，加味不忘散低剂量干预组大鼠海马的突触数量也明显少于假手术组(p < 0.001)，与 AD模型组无明显差异(p = 0.248)。加味不忘散中剂量组大鼠海马的突触数量较AD模型组(p=0.001)和加味不忘散低剂量干预组(p=0.015)均增多。加味不忘散高剂量组大鼠海马的突触数量较AD模型组(p<0.001)、加味不忘散低剂量干预组(p<0.001)和加味不忘散中剂量干预组(p = 0.013)均增多。MCC950 干预组大鼠海马的突触数量较 AD模型组(p<0.001)、加味不忘散低剂量干预组(p<0.001)和加味不忘散中剂量干预组(p=0.031)均显著增多，与加味不忘散高剂量组相比无统计学差异(p=0.709)。可见，加味不忘散对AD模型大鼠突触结构和数量具有改善作用，并具有剂量依赖性。 6. 加味不忘散对AD模型大鼠海马神经元凋亡的影响：TUNEL染色显示，假手术组、AD模型组、加味不忘散低、中、高剂量干预组和MCC950干预组大鼠海马的细胞凋亡率分别为 5.50±2.13 %、38.06±12.87 %、31.33±11.57 %、22.71±7.55 %、16.43±4.25%、14.38±5.28%。AD模型组可见到大量凋亡细胞，与假手术组相比明显增多(p < 0.001)。加味不忘散低剂量干预组大鼠海马内也可见到大量凋亡细胞与 AD模型组无明显差异(p=0.623)。加味不忘散中剂量干预组大鼠海马凋亡细胞，较AD模型组明显减少(p < 0.001)，较加味不忘散低剂量干预组有减少趋势，但无显著性差异(p = 0.058)。加味不忘散高剂量干预组大鼠海马的凋亡细胞明显少于较AD模型组(p<0.001)、加味不忘散低剂量干预组(p<0.001)和中剂量干预组 (p=0.16)。MCC950干预组大鼠海马的凋亡细胞数较AD模型组明显减少(p < 0.001)，与加味不忘散高剂量干预组相比无显著差异(p= 收起

关键词 : 加味不忘散阿尔茨海默病小胶质细胞学习记忆抗炎机制

9. “加味不忘散”对APP/PS1转基因小鼠认知功能和海马病理改变的影响

[学位论文] 杜亚平山西医科大学 2019年硕士导师: 李新毅共39页

摘要 : 目的：本研究旨在探索“加味不忘散”(MBWP)对APP/PS1转基因小鼠模型认知功能的改善作用，同时观察该药对APP/PS1转基因小鼠海马细胞病理改变及神经元细胞凋亡的影响。方法：取10只2月龄B6C3小鼠(20g±2g)作为B6C3非转基因组(简称C... 展开目的：本研究旨在探索“加味不忘散”(MBWP)对APP/PS1转基因小鼠模型认知功能的改善作用，同时观察该药对APP/PS1转基因小鼠海马细胞病理改变及神经元细胞凋亡的影响。方法：取10只2月龄B6C3小鼠(20g±2g)作为B6C3非转基因组(简称C组)，取30只2月龄APP/PS1小鼠(20g±2g)随机分成3组(每组10只)，将他们标记为APP/PS1双转基因组(简称A组)、低剂量“加味不忘散”干预组(简称L组)、高剂量“加味不忘散”干预组(简称H组)。将C、A、L、H组40只小鼠温度恒定饲养，每个鼠笼2只。给予C、A、L、H组适宜量转基因鼠专用饲料和灭菌水饲养，定期更换垫料。对小鼠从4月龄至10月龄进行灌胃，H组给予药物高计量(0.3g/10g体重)MBWP溶液灌胃，L组给予药物低计量(0.15g/10g体重)MBWP溶液灌胃，C组及A组给以生理盐水灌胃，剂量为1ml/10g体重。将9月龄小鼠放入Morris水迷宫室进行环境适应，1个月后检测小鼠的学习记忆功能。Morris水迷宫实验完成后将所有小鼠处死取脑，分离出鼠脑双侧海马组织制片，进行HE染色观察小鼠海马区细胞的病理改变，进行TUNEL染色观察凋亡与阿尔茨海默病(AD)发生的相关性。结果： 1.MBWP溶液对APP/PS1转基因小鼠学习记忆能力的影响：与C组比较，A组、L组、H组各指标(每天逃避潜伏期、空间探索实验)变化存在显著差异(p＜0.05)；与A组比较，L、H组逃避潜伏期在第2-5天显著缩短；与L组比较，H组逃避潜伏期在第2-5天显著缩短。 2.MBWP溶液对APP/PS1转基因小鼠空间探索能力的影响：C组、A组、L组、H组的小鼠在原象限停留时间存在差异：A组与C组相比较，小鼠在平台象限停留时间明显减少，存在统计学差异。(p＜0.05)L组在原平台象限停留时间较A组时间有所延长；H组小鼠较L组在原平台象限停留时间有所延长。对于跨台次数，A组与C组相比较跨台次数明显减少。A组与L组和H组跨台次数相比有所减少，存在统计学差异。(p＜0.05)我们同时可以看出H组比L组跨台次数稍多。 3.HE染色结果：A组与L组小鼠海马区神经元细胞明显减少，细胞体积减小，细胞核固缩，细胞排列不紧密；C组与H组海马神经元细胞数量明显增多、细胞排列较紧密、整齐，细胞核形态符合鼠龄，异常细胞数较少。 4.TUNEL染色结果：C组、A组、L组、H组的小鼠海马区神经元细胞凋亡率为：5.35±0.88、40.44±5.17、33.39±5.19、22.60±4.60。其中A组小鼠海马处可看到大量凋亡的神经元细胞，即视野里可见的大量棕染细胞，与C组相比较凋亡细胞数明显增多。(p＜0.05)L组细胞凋亡数量与A组相比较有明显差异。(p＜0.05)H组细胞凋亡数量与A组相比较明显减少，较L组有减少趋。(p＜0.05) 结论： 1.MBWP可以提高APP/PS1转基因小鼠的学习记忆功能，低剂量MBWP作用不是很显著，高剂量MBWP对小鼠的学习记忆能力有所提高。 2阿尔茨海默病会导致APP/PS1转基因小鼠海马区脑细胞发生病理损害，MBWP的使用可以减轻该损害。 3.MBWP可显著改善APP/PS1转基因小鼠脑内海马区神经元的凋亡，这可能是MBWP治疗AD的主要机制，且具有浓度依赖性。收起

关键词 : 加味不忘散阿尔茨海默病学习记忆能力细胞凋亡海马病理改变

10. 加味不忘散对MicroRNA-30e海马过表达SD大鼠学习记忆及海马ChAT改变的影响

[学位论文] 成红江山西医科大学 2017年硕士导师: 李新毅共38页

摘要 : 目的：本研究旨在探索MicroRNA-30e海马过表达SD大鼠模型认知功能障碍可能的发病机制及观察加味不忘散对该模型大鼠学习记忆功能的影响。方法：将40只健康雄性SD大鼠（200g±10g）随机分成5组，分别标记为空白对照组（简称B组）、空... 展开目的：本研究旨在探索MicroRNA-30e海马过表达SD大鼠模型认知功能障碍可能的发病机制及观察加味不忘散对该模型大鼠学习记忆功能的影响。方法：将40只健康雄性SD大鼠（200g±10g）随机分成5组，分别标记为空白对照组（简称B组）、空载体病毒对照组（简称C组）、MicroRNA-30e海马过表达模型组（简称M组）、加味不忘散低剂量组（简称L组）、加味不忘散高剂量组（简称H组）。给予M、L、H组大鼠双侧海马各注射 MicroRNA-30e病毒颗粒1ul；给予C组大鼠双侧海马各注射空病毒颗粒1ul；给予B组大鼠双侧海马各注射生理盐水1ul。术后2周，H、L组分别给予高（0.3g/100g体重）、低(0.15g/100g体重)剂量加味不忘散溶液灌胃，其他三组给以生理盐水(1ml/100g体重)灌胃。持续2周后，采用Morris水迷宫实验评价大鼠学习记忆功能。Morris水迷宫实验完成后将所有大鼠断头取脑，分离双侧海马组织，制备组织匀浆，利用比色法检测各样本ChAT活力的改变。结果： 1. Morris水迷宫实验结果：与B组比较，C组各指标（每天逃避潜伏期、跨台次数及原平台象限停留时间）变化均无显著差异（P>0.05）；与B、C组比较，M组逃避潜伏期在第2-5天显著延长(p<0.05)，跨台次数显著减少(p<0.05)，原平台象限停留时间显著缩短(p<0.05)；与M组比较，L、H组逃避潜伏期在第2-5天显著缩短（p<0.05），跨台次数显著增加（p<0.05），原平台象限停留时间显著延长（p<0.05）；与L组比较，H组逃避潜伏期在第2-5天显著缩短（p<0.05），跨台次数显著增加(p<0.05)，原平台象限停留时间显著延长（p<0.05）。 2. ChAT活力测定结果：与B组比较，C组海马ChAT活力变化无显著差异（P>0.05）；与B、C组比较，M组海马ChAT活力显著降低（p<0.05）；与M组比较，H、L组海马ChAT活力均显著升高（p<0.05）；与L组比较，H组海马ChAT活力显著升高（p<0.05）。结论： 1.加味不忘散可显著改善MicroRNA-30e海马过表达SD大鼠学习记忆功能，且高、低剂量之间具有浓度依赖性。 2. MicroRNA-30e海马过表达致SD大鼠认知功能障碍的机制与大鼠海马ChAT活力降低有关，加味不忘散可提高模型大鼠海马ChAT活力，且高、低剂量之间具有浓度依赖性。收起

关键词 : 加味不忘散 MicroRNA-30e海马过表达学习记忆 ChAT 认知功能障碍发病机制