中国科学技术信息研究所--国家工程技术数字图书馆

[学位论文] 吴骏慧河南科技大学 2022年硕士导师: 雷方;党亚龙共54页

摘要 : 背景：青光眼在全球是仅次于白内障的导致视力丧失的主要病因，其最典型和最突出的表现是视网膜神经节细胞（Retinalganglioncells，RGC）缺失和视野缺损。青光眼性视神经病变发生的因素复杂，近年来视网膜小胶质细胞的过度吞噬作用渐受关注。中枢神经... 展开背景：青光眼在全球是仅次于白内障的导致视力丧失的主要病因，其最典型和最突出的表现是视网膜神经节细胞（Retinalganglioncells，RGC）缺失和视野缺损。青光眼性视神经病变发生的因素复杂，近年来视网膜小胶质细胞的过度吞噬作用渐受关注。中枢神经系统（CentralNervousSystem，CNS）中主要的吞噬细胞是小胶质细胞。正常状态下，小胶质细胞呈分支状，主要起到免疫监视和神经营养功能，有助于大脑的发育；神经病理状态下，小胶质细胞发挥细胞免疫和吞噬作用，能异常吞噬应激状态下有活性的神经元，使神经元逐渐丧失。这种情况可以通过抑制小胶质细胞的异常吞噬来预防。环磷酸腺苷（Cyclicadenosinemonophosphate，cAMP）与小胶质细胞的活化和神经元的存活相关，脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）刺激可诱导激活小鼠BV2小胶质细胞，罂粟碱（papaverine，PAP）是一种磷酸二酯酶（Phosphodiesterase，PDE)抑制剂，能使细胞内的cAMP含量升高，进而激活小胶质细胞的信号通路，可抑制小胶质细胞的吞噬功能，然而罂粟碱对活化后视网膜小胶质细胞的吞噬功能的影响及机制尚在探索。目的：在细胞水平上，探讨罂粟碱抑制LPS诱导的BV2小胶质细胞活化后的吞噬功能及其分子机制。方法：我们使用LPS诱导的BV2小胶质细胞活化模型。按PBS对照组、LPS组、不同浓度的PAP组及添加蛋白激酶A（ProteinkinaseAPKA)抑制剂H89组、添加EPAC抑制剂ESI-09组进行分组，采用荧光法检测及流式细胞法观察不同浓度罂粟碱作用下，BV2小胶质细胞吞噬微球情况。然后采用WesternBlot定量分析PKA依赖性与非PKA依赖性通路活化水平，分析罂粟碱是否可以通过PKA依赖性通路（cAMP/PKA/CREB）和非PKA依赖性通路（cAMP/Epac/Rap1）抑制吞噬作用。结果：罂粟碱剂量依赖性的抑制LPS诱导的BV2小胶质细胞的吞噬功能。未经特殊处理情况下，BV2小胶质细胞吞噬能力较低。LPS刺激BV2小胶质细胞后，BV2小胶质细胞对荧光胶珠的吞噬有明显的增强（p＜0.0001），但罂粟碱能够显著的、剂量依赖性的抑制但并不能完全阻断上述吞噬功能（与LPS比，2μg/ml罂粟碱：p＜0.001，10μg/ml罂粟碱：p＜0.0001）。罂粟碱提高BV2小胶质细胞CREB的磷酸化水平，H89能够部分抑制CREB的磷酸化。LPS处理情况下，BV2小胶质细胞CREB的磷酸化水平较低。10μg/ml的罂粟碱处理后使CREB的磷酸化水平显著上调（p＜0.01），H89能够部分抑制CREB的磷酸化水平（与LPS+PAP组相比：p＜0.001）。罂粟碱提高BV2小胶质细胞Rap1的磷酸化水平，ESI-09不能够抑制Rap1的磷酸化。10μg/ml的罂粟碱处理后使Rap1的磷酸化水平显著上调（p＜0.05），ESI-09不能够抑制Rap1的磷酸化水平（与LPS+PAP组相比：p＞0.05）。结论：罂粟碱剂量依赖性的抑制LPS诱导的BV2小胶质细胞的吞噬能力，罂粟碱可通过活化PKA依赖性通路（cAMP/PKA/CREB）抑制LPS诱导的BV2小胶质细胞的过度吞噬。收起

关键词 : 罂粟碱青光眼吞噬功能小胶质细胞视网膜小胶质细胞

2. dock8对斑马鱼胚胎小胶质细胞定植影响的机制研究

[学位论文] 吴林秀华南理工大学 2022年博士导师: 徐进共137页

摘要 : 小胶质细胞是一类在大脑中的组织驻留巨噬细胞，在中枢神经系统中执行多种免疫相关的功能，包括清除细胞碎片，修剪突触，吞噬凋亡神经元，促进组织再生等。小胶质细胞的缺陷或功能障碍与阿尔茨海默症、帕金森病、亨廷顿病等一系列神经退行性疾病紧密... 展开小胶质细胞是一类在大脑中的组织驻留巨噬细胞，在中枢神经系统中执行多种免疫相关的功能，包括清除细胞碎片，修剪突触，吞噬凋亡神经元，促进组织再生等。小胶质细胞的缺陷或功能障碍与阿尔茨海默症、帕金森病、亨廷顿病等一系列神经退行性疾病紧密相关。小胶质细胞具有独特的发育途径，它的前体细胞在外周组织出生，随后经过迁移最终定植到中枢神经系统并分化为小胶质细胞，这一过程涉及许多信号通路和细胞因子的调控，然而目前关于调控小胶质细胞迁移和定植的机制知之甚少。 DOCK8是DOCK家族的成员之一，作为鸟嘌呤核苷酸交换因子在免疫调节和神经系统疾病中起到关键的作用。虽然在疾病模型下，DOCK8能影响小胶质细胞的吞噬活性以及巨噬细胞的迁移，然而在生命体正常的发育过程中DOCK8是否也参与巨噬细胞/小胶质细胞的发育以影响小胶质细胞的定植目前尚不清楚。本研究利用斑马鱼作为模式生物，通过CRISPR/Cas9基因编辑技术获得了斑马鱼dock8突变体，证实了dock8突变影响了小胶质细胞的数量。在此基础上，通过活体延时成像技术进一步阐明了dock8突变是通过影响巨噬细胞/小胶质细胞的运动来影响小胶质细胞的定植。此外，本研究进一步分析了dock8的下游基因cdc42，它和cdc42l共同调节小胶质细胞的数量。因此，研究结果提示DOCK8-CDC42信号通路影响小胶质细胞早期定植。主要研究内容及结果如下：（1）通过反向遗传学获得dock8斑马鱼突变体。结合已发表的单细胞测序数据和原位杂交结果证实了dock8在巨噬细胞的表达。利用NCBI和Ensembl数据库获得dock8的碱基及氨基酸序列，通过氨基酸序列比对和三维建模比对人，鼠和斑马鱼中DOCK8的结构域，最终选择DHR2结构域作为突变区域。使用多种gRNA的预测网站设计了靶位点，通过CRISPR/Cas9基因编辑技术在斑马鱼单细胞胚胎中显微注射体外合成的sgRNA与Cas9蛋白混合物，在斑马鱼F2代时获得两个突变在不同位置的dock8突变体。最终通过测序确定了突变体的突变类型，分别为dock8-15,+5bp和dock8-2bp。（2）dock8突变体对斑马鱼幼鱼小胶质细胞定植的影响：通过apoeb原位杂交，中性红染色和表达巨噬细胞的转基因鱼Tg(mpeg1:DsRedx)对小胶质细胞的表型进行鉴定，结果发现dock8-15,+5bp突变和dock8-2bp突变以及它们的复合突变dock8-15,+5b/-2bp均减少小胶质细胞在早期斑马鱼幼鱼视顶盖中的数量。鉴于两突变体表型相似，且dock8-15,+5bp的表型比dock8-2bp突变严重。因此，本研究以dock8-15,+5bp突变体为主要对象开展进一步研究，结果发现Tg(mpeg1:DsRedx)转基因鱼在尾部CHT区域巨噬细胞的数量在突变体和sibling之间无显著差异，这些结果提示dock8突变引起的小胶质细胞数量减少的表型不是由于整体巨噬细胞数量减少导致的。此外，dock8-15,+5bp突变减少小胶质细胞的表型在后期能恢复。以上结果提示我们dock8突变影响了小胶质细胞在视顶盖的定植。此外，研究也发现dock8-15,+5bp突变体中小胶质细胞的形态异常，表现为胞体又大又圆，伸出的分支细长，且这种异常形态的细胞在突变体中占据90%以上。在此基础上，通过体内延时成像技术分析了巨噬细胞的基础运动和进入视顶盖的数量，结果提示dock8-15,+5bp突变可能通过影响巨噬细胞/小胶质细胞的运动，从而影响小胶质细胞在视顶盖的定植。（3）cdc42作为dock8的下游基因对斑马鱼幼鱼小胶质细胞数量的影响：通过已发表的单细胞测序数据发现cdc42和cdc42l在巨噬细胞中具有重要的作用。通过分子模拟Dock8的DHR2结构域分别和Cdc42、Cdc42l蛋白的相互作用，结果提示Cdc42和Cdc42l均具有较大的接触面积，并且Cdc42和Cdc42l蛋白与Dock8_DHR2结构域相互作用的氨基酸既有各自独特的位点又有10个共同的氨基酸位点，提示Cdc42和Cdc42l蛋白存在部分功能冗余的同时，可能还存在独特的功能。于是利用CRISPR/Cas9基因编辑技术获得斑马鱼突变体，分别为cdc42-20bp和cdc42l-29bp。然后通过mpeg1原位杂交和中性红染色对cdc42-20bp和cdc42l-29bp中巨噬细胞/小胶质细胞的表型进行鉴定。结果发现单独的cdc42或cdc42l缺失不影响斑马鱼幼鱼小胶质细胞的数量，而cdc42和cdc42l双突变能影响斑马鱼幼鱼小胶质细胞的数量，但不影响整体巨噬细胞的数量。收起

关键词 : dock8基因小胶质细胞细胞定植

3. P2X7受体激活NLRP3炎性小体调控小胶质细胞M1/M2型极化在骨癌痛中的作用及机制研究

[学位论文] 武平大连医科大学 2022年博士导师: 闻庆平共100页

摘要 : 背景：骨癌痛（bonecancerpain,BCP）是目前最严重、最顽固的癌痛类型，极大降低了患者的生活质量，并缩短了患者的生存时间。目前，我国的癌痛治疗遵循国际三阶梯疗法，但由于个体差异性大，使得长期镇痛效果差，究其原因是骨癌痛发病机制的复杂性所... 展开背景：骨癌痛（bonecancerpain,BCP）是目前最严重、最顽固的癌痛类型，极大降低了患者的生活质量，并缩短了患者的生存时间。目前，我国的癌痛治疗遵循国际三阶梯疗法，但由于个体差异性大，使得长期镇痛效果差，究其原因是骨癌痛发病机制的复杂性所致。因此阐明骨癌痛发病机制，寻求有针对性、切实有效的防治方法已成为迫切需要解决的问题。小胶质细胞在慢性疼痛中枢敏化中发挥了重要作用。近期研究表明，活化的小胶质细胞会释放过多的神经毒性物质，刺激神经元，形成痛觉敏化。小胶质细胞可塑性极强，在响应刺激时会诱导出两种极化表型，促炎（M1）型及抗炎（M2）型。M1型小胶质细胞分泌的多种促炎细胞因子会激活邻近神经元导致中枢敏化，而M2型小胶质细胞通过分泌抗炎因子介导免疫稳态的恢复进而缓解疼痛。研究表明，在包括骨癌痛的多种慢性疼痛发生时，促进小胶质细胞向M2极化，可以有效的缓解疼痛，但是具体靶点并不明确。嘌呤能受体P2X7（PurinergicReceptorP2X7，P2X7R）是一种非选择性ATP门控离子通道，在脊髓水平优势性的表达在小胶质细胞。研究显示在缺血性疼痛模型中，P2X7R参与调控小胶质细胞M1/M2型极化。P2X7R激活后导致K+外流和Ca2+内流，其中K+外流可激活Nod样受体蛋白3（Nod-likereceptorprotein3，NLRP3）炎性小体，Ca2+的内流可以激活MAPK等相关的信号通路促进NF-κB的核移位进一步促进NLRP3炎性小体的转录。最近有研究表明，在中枢神经病变的模型中过度表达的NLRP3炎性小体可以促进脑的小胶质细胞向M1型极化，进而加重中枢神经炎性反应。P2X7R是否通过调控NLRP3炎性小体促进脊髓小胶质细胞M1/M2型极化，进而参与骨癌痛的中枢敏化，尚无相关报道。因此，本研究拟通过建立大鼠乳腺癌骨癌痛模型及LPS和BzATP共刺激BV2小胶质细胞系活化模型，探讨P2X7R/NLRP3信号通路调控小胶质细胞M1/M2型极化在骨癌痛中的作用及机制。第一部分：P2X7受体调控小胶质细胞向M1型极化参与骨癌痛中枢敏化目的：通过胫骨内直接注射Walker256乳腺癌细胞构建大鼠的骨癌痛模型，研究大鼠的骨癌痛模型脊髓背角小胶质细胞是否存在M1/M2型极化及P2X7受体调控小胶质细胞M1/M2型极化在骨癌痛中的作用；建立LPS和BzATP共刺激BV2小胶质细胞系活化模型以及P2X7RsiRNA干预模型，研究P2X7R能否调控BV2小胶质细胞向M1型极化。方法：实验一：通过胫骨内直接注射Walker256乳腺癌细胞构建大鼠的骨癌痛模型。将32只SPF级健康成年雌性大鼠随机分为4组（每组8只）：假手术组（Sham组）；骨癌痛7天组（BCP7d组）；骨癌痛14天组（BCP14d组）和骨癌痛21天组（BCP21d组）。检测指标包括：（1）建模后第7、14、21天进行胫骨X线检查骨破坏和肿瘤细胞浸润情况；（2）建模前一天及建模后4、7、11、14、17、21天测定机械性缩足阈值（50%pawwithdrawalthresholds，50%PWTs）、自发抬足次数（numberofspontaneousflinches，NSF）、后肢应用评分（limbusescore）评估大鼠的骨癌痛行为学；（3）Westernblot检测脊髓组织小胶质细胞M1标记物CD86、iNOs及M2标记物CD163、Arg-1的蛋白水平；（4）免疫荧光染色技术检测P2X7R在脊髓组织中的定位。（5）免疫荧光染色、Westernblot检测P2X7R在各组脊髓组织中的表达。实验二：基于BCP模型，腹腔注射P2X7R特异性拮抗剂亮蓝-G（BrilliantBlueG，BBG），研究P2X7R调控小胶质细胞M1/M2型极化在骨癌痛中的作用。32只SPF级的健康成年雌性大鼠随机分为4组（每组8只）：假手术组（Sham+NS组）、假手术干预组（Sham+BBG组）、骨癌痛组（BCP+NS组）、BBG治疗组（BCP+BBG组）。Sham+BBG和BCP+BBG组的大鼠从第7天到第21天每天晨8点腹腔注射BBG（50mg/kg）。检测指标包括：（1）建模前一天及建模后4、7、11、14、17、21（天）测定50%PWTs、NSF、后肢应用评分评估BBG对大鼠疼痛行为学的影响。（2）Westernblot检测脊髓小胶质细胞M1标记物CD86、iNOs及促炎因子TNF-α、IL-18；M2标记物CD163、Arg-1及抗炎因子IL-4、IL-10的蛋白表达水平，分析BBG对脊髓小胶质细胞极化的影响。实验三：建立LPS和BzATP共刺激BV2小胶质细胞系活化模型以及P2X7RsiRNA干预模型，研究P2X7R能否调控BV2小胶质细胞向M1型极化。实验分组：Control-NCsiRNA组、Control-P2X7RsiRNA组、LPS+BzATP+NCsiRNA组、LPS+BzATP+P2X7RsiRNA组。检测指标包括：（1）Westernblot检测BV2小胶质细胞M1标记物CD86、iNOs及M2标记物CD163、Arg-1的蛋白水平；（2）RT-PCR检测M1相关促炎因子TNF-α、IL-18及M2相关抗炎因子IL-4、IL-10mRNA水平，分析P2X7R对BV2小胶质细胞极化的影响。结果： 1.成功建立大鼠的骨癌痛模型，BCP脊髓背角小胶质细胞向M1型极化。（1）X线的结果显示，在注射Walker256乳腺癌细胞后第14天，BCP组观察到骨破坏和肿瘤细胞浸润，第21天肿瘤细胞完全浸润骨髓腔，胫骨严重受损。Sham组的大鼠的胫骨没有显示任何骨质破坏和肿瘤浸润。（2）行为学检测结果显示，BCP组的大鼠术后第7、11、14、17、21天50%PWTs水平显著降低（p＜0.05），BCP组NSF水平和后肢应用评分呈上升趋势，术后第7、11、14、17、21天明显高于假手术组（p＜0.05）。（3）Westernblot结果显示，BCP14天脊髓小胶质细胞M1标记物CD86、iNOs显著升高，而M2标记物CD163、Arg-1被显著抑制。（4）免疫荧光染色结果显示大多数P2X7R可与同侧脊髓背角中的小胶质细胞的标记物Iba-1阳性细胞共定位，不与星形胶质细胞的标记物GFAP和神经元的标记物NeuN阳性细胞共定位。（5）免疫荧光染色和Westernblot结果显示，与Sham组相比，BCP组脊髓背角中P2X7R蛋白表达水平随着肿瘤接种时间而上调。 2.P2X7R特异性拮抗剂BBG能有效缓解BCP并促进小胶质细胞向M2型极化。（1）行为学检测结果显示，BBG治疗组的大鼠50%PWTs值在术后第7、11、14天显著增加（p＜0.05）；BBG治疗组的大鼠NSF水平和后肢应用评分数值显著低于BCP组（p＜0.05）。（2）Westernblot结果显示，BBG显著抑制脊髓小胶质细胞M1标记物CD86、iNOs及相关促炎因子TNF-α、IL-18的表达，并促进了M2标记物CD163、Arg-1及抗炎因子IL-4、IL-10的表达。 3.P2X7RsiRNA可以抑制LPS和BzATP共刺激诱导的BV2小胶质细胞向M1型极化,促进小胶质细胞向M2型极化。（1）Westernblot检测结果显示，LPS和BzATP共刺激显著提高了BV2小胶质细胞M1标志物iNOs和CD86，抑制M2标志物CD163和Arg-1蛋白的表达（p＜0.05）；使用P2X7RsiRNA预处理逆可以转LPS和BzATP共刺激诱导的CD86、iNOs、CD163、Arg-1蛋白质水平的变化（p＜0.05）。（2）RT-PCR检测结果显示LPS和BzATP共刺激显著提高了M1相关促炎因子TNF-α和IL-18的表达，抑制了M2相关抗炎因子IL-4、IL-10mRNA水平（p＜0.05）；使用P2X7RsiRNA预处理有效的逆转了LPS和BzATP共刺激诱导的TNF-α、IL-18、IL-4和IL-10mRNA表达（p＜0.05）。结论：在大鼠乳腺癌骨转移性癌痛模型及LPS和BzATP共刺激BV2小胶质细胞系活化模型中，P2X7R激活促进小胶质细胞向M1型极化参与骨癌痛中枢敏化。第二部分：P2X7受体通过激活NLRP3炎性小体调控小胶质细胞向M1型极化参与骨癌痛中枢敏化目的：基于骨癌痛模型及LPS和BzATP共刺激BV2小胶质细胞系活化模型深入研究P2X7R是否通过激活NLRP3炎性小体调控小胶质细胞向M1型极化参与骨癌痛的中枢敏化。方法：实验一：基于BCP模型，腹腔注射P2X7R特异性拮抗剂BBG，检测脊髓组织NLRP3炎性小体相关蛋白表达，进而确定BCP模型中，P2X7R能否调控NLRP3炎性小体的表达。本实验利用第一部分实验二中的脊髓组织进行检测。检测指标包括：Westernblot检测脊髓组织NLRP3炎症小体重要组成成分NLRP3、ASC、Caspase-1蛋白表达情况。实验二：建立LPS和BzATP共刺激BV2小胶质细胞系活化模型及P2X7RsiRNA干预模型，研究BV2细胞中P2X7R是否能调控NLRP3炎性小体的表达。实验分组：Control-NCsiRNA组、Control-P2X7RsiRNA组、LPS+BzATP+NCsiRNA组、LPS+BzATP+P2X7RsiRNA组。检测指标包括：Westernblot检测BV2小胶质细胞NLRP3、ASC、Caspase-1蛋白的表达。实验三：基于BV2小胶质细胞系活化模型，通过给予P2X7RsiRNA与NLRP3炎症小体特异性的激动剂尼日利亚菌素（Nigericin）共处理，研究P2X7R通过激活NLRP3炎性小体进而调控BV2小胶质细胞极化。实验分组：Control组、LPS+BzATP组、LPS+BzATP+siRNA组、LPS+BzATP+siRNA+N组（Nigericin：NLRP3特异性激动）。检测指标包括：（1）Westernblot检测BV2小胶质细胞P2X7R、NLRP3、ASC、Caspase-1的蛋白表达；（2）Westernblot检测BV2小胶质细胞M1标记物CD86、iNOs及M2标记物CD163、Arg-1的蛋白表达水平；（3）RT-PCR检测M1相关促炎因子TNF-α、IL-18及M2相关抗炎因子IL-4、IL-10mRNA水平。结果： 1.P2X7R特异性拮抗剂BBG能显著下调脊髓组织NLRP3炎性小体的表达。Westernblot结果显示，BCP组NLRP3，ASC，Caspase-1蛋白表达升高，BBG明显抑制脊髓组织NLRP3炎症小体相关蛋白的表达（p＜0.05）。 2.BV2小胶质细胞中，P2X7R调控NLRP3炎性小体的表达。Westernblot结果显示，LPS和BzATP共刺激诱导的P2X7R激活可以显著提高NLRP3、ASC、Caspase-1蛋白的表达水平，而P2X7RsiRNA会降低上述蛋白的表达。 3.P2X7R通过激活下游NLRP3炎性小体从而调控BV2小胶质细胞向M1型转化。（1）Westernblot检测结果显示，NLRP3炎性小体特异性激动剂尼日利亚菌素可以有效逆转P2X7RsiRNA引起NLRP3、ASC和Caspase-1蛋白的表达减少（p＜0.05）；（2）Westernblot检测结果显示，尼日利亚菌素可以逆转P2X7RsiRNA诱导的CD86、iNOs、CD163、Arg-1蛋白水平的变化（p＜0.05）。（3）RT-PCR检测结果显示，尼日利亚菌素可以逆转P2 收起

关键词 : 骨癌痛小胶质细胞嘌呤能受体P2X7 小胶质细胞极化 Nod样受体蛋白3

4. PRMT2抑制LPS诱导的小胶质细胞M1型极化及机制研究

[学位论文] 陈杉杉南华大学 2020年硕士导师: 周寿红共79页

摘要 : 【研究背景与目的】大量研究表明，脑内以小胶质细胞活化为特征的慢性炎症反应是神经退行性疾病的重要标志，M1型极化的小胶质细胞具有促进神经炎症和神经毒性的作用，而M2型极化具有抗炎和促进组织修复作用。小胶质细胞M1型和M2型之间的平衡对神经炎... 展开【研究背景与目的】大量研究表明，脑内以小胶质细胞活化为特征的慢性炎症反应是神经退行性疾病的重要标志，M1型极化的小胶质细胞具有促进神经炎症和神经毒性的作用，而M2型极化具有抗炎和促进组织修复作用。小胶质细胞M1型和M2型之间的平衡对神经炎症性相关疾病的进展有重要作用，因此探讨小胶质细胞在什么条件下可以从M1型促炎状态转变成M2型抗炎状态将对治疗这类疾病有重要启示作用。我们前期的研究发现PRMT2可能参与LPS诱导的小胶质细胞神经炎症反应，但是其机制不清。本研究通过观察蛋白质精氨酸甲基转移酶2(Protein arginine methyltransferase 2，PRMT2)对脂多糖(Lipopolysaccharides, LPS)诱导N9小胶质细胞极化的影响，并探讨其可能的机制，为防治神经炎症相关类疾病提供新的靶点。【方法】体外培养小鼠来源的N9小胶质细胞株。将表达PRMT2的慢病毒载体LV-PRMT2(4952-1)转染到N9小胶质细胞上作为实验组，对照组转染空载慢病毒载体，没有转染慢病毒载体的小胶质细胞作为完全对照组。细胞自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-Methyladenine， 3-MA)(10 mM)预处理小胶质细胞0.5h，LPS(2μg/mL)处理N9小胶质细胞6h构建体外炎症模型。实验分组如下：Control组、LV-empty组、LV-PRMT2组、Control+LPS组、LV-empty+LPS组、LV-PRMT2+LPS组。MTT检测各组细胞活力；WesternBlot检测细胞中PRMT2、肿瘤坏死因子α(Tumornecrosisfactoralpha,TNF-α)、白介素6(Interleukin-6, IL-6 )、诱导型一氧化氮合酶(Induced nitric-oxide synthase, iNOS)、精氨酸酶1(Arginase 1, Arg1)、白介素4(Interleukin-4, IL-4)、白介素10(Interleukin-10, IL-10)、转录因子EB(Transcription factor EB, TFEB)、核内TFEB、包浆TFEB以及自噬相关蛋白Beclin-1、LC3-II/LC3-I和p62的蛋白表达；透射电镜观察细胞的超微结构。【结果】 1.LPS下调小胶质细胞中PRMT2的表达和Control组相比，LPS处理后显著减少小胶质细胞中PRMT2的蛋白表达(P＜0.05)。 2.构建过表达PRMT2的N9小胶质细胞和Control组相比，成功转染慢病毒载体的N9小胶质细胞显示绿色荧光；和LV-empty组相比，LV-PRMT2组中PRMT2的蛋白表达显著性增加(P＜0.05)。 3.转染慢病毒载体和LPS处理对N9小胶质细胞的活力没有影响 Control、LV-empty和LV-PRMT2三组细胞的细胞活力没有显著性差异(P＞0.05)；LPS(2μg/mL)处理Control、LV-empty和LV-PRMT2这三组细胞6h后，各组细胞活力均无显著性差异(P＞0.05)。 4.过表达PRMT2调控LPS处理的N9小胶质细胞极化 4.1与LV-empty组相比，LV-empty+LPS组细胞中iNOS、TNF-α和IL-6的蛋白表达水平均显著性上调(P＜0.05)；与LV-empty+LPS组比较，LV-PRMT2+LPS组细胞中iNOS、TNF-α和IL-6蛋白表达水平显著下调(P＜0.05)； 4.2与LV-empty组相比，LV-empty+LPS组细胞中Arg1、IL-4和IL-10蛋白的表达水平均显著性下调(P＜0.05)；与LV-empty+LPS组比较，LV-PRMT2+LPS组细胞中Arg1、IL-4和IL-10蛋白的表达水平均显著性上调(P＜0.05)。 5.过表达PRMT2促进LPS处理的小胶质细胞自噬水平 5.1与LV-empty组相比，LV-empty+LPS组细胞中LC3-II/LC3-I的比值显著性降低(P＜0.05)，而p62的蛋白表达水平明显上调(P＜0.05)；与LV-empty+LPS组比较，LV-PRMT2+LPS组细胞中LC3-II/LC3-I的比值显著性增加(P＜0.05)，而p62的蛋白表达水平显著性减少(P＜0.05)； 5.2与LV-empty组相比，LV-empty+LPS组细胞内自噬体数量减少；与LV-empty+LPS组比较，LV-PRMT2+LPS组细胞内自噬体数量增加。 6.3-MA逆转过表达PRMT2调控LPS处理的小胶质细胞极化 6.1与LV-PRMT2+LPS组相比，LV-PRMT2+LPS+3-MA组细胞中iNOS、TNF-α和IL-6蛋白的表达水平均显著性上调(P＜0.05)； 6.2与LV-PRMT2+LPS组相比，LV-PRMT2+LPS+3-MA组细胞中Arg1、IL-4和IL-10蛋白的表达水平均显著性下调(P＜0.05)。 7.过表达PRMT2促进小胶质细胞TFEB核转位 7.1TFEB和PRMT2之间没有相互作用； 7.2与LV-empty组相比，LV-empty+LPS组胞浆TFEB蛋白的表达水平显著性上调(P＜0.05)，核内TFEB蛋白的表达水平显著性下调(P＜0.05)；与LV-empty+LPS组比较，LV-PRMT2+LPS组胞浆TFEB蛋白的表达水平显著性下调(P＜0.05)，核内TFEB蛋白的表达水平显著性上调(P＜0.05)。【结论】PRMT2抑制LPS诱导的N9小胶质细胞M1型极化，其机制可能涉及到TFEB-自噬途径。收起

关键词 : 神经炎症 LPS细胞小胶质细胞

5. 钙稳态调节蛋白Calhm2在小胶质细胞激活中的作用与机制研究

[学位论文] 谢非安徽医科大学 2022年硕士导师: 袁增强共78页

摘要 : 神经炎症在中枢神经系统疾病中扮演重要角色，小胶质细胞活化是神经炎症的显著特征，在病原体感染或损伤时，小胶质细胞迅速活化，进而增殖并分泌炎症因子，迁移并增加吞噬，引发一系列炎症反应。在这些炎症反应发生时，常伴随细胞内钙稳态的失衡，靶... 展开神经炎症在中枢神经系统疾病中扮演重要角色，小胶质细胞活化是神经炎症的显著特征，在病原体感染或损伤时，小胶质细胞迅速活化，进而增殖并分泌炎症因子，迁移并增加吞噬，引发一系列炎症反应。在这些炎症反应发生时，常伴随细胞内钙稳态的失衡，靶向钙稳态调节进而调控神经炎症成为治疗相关神经系统疾病的重要方向。Calhm2是一类钙稳态调节蛋白，可以介导ATP的释放及钙离子的运输，通过靶向Calhm2可以有效改善神经炎症水平，但具体机制仍未明确。为了研究Calhm2在神经炎症中扮演的角色，我们首先体外培养了Calhm2敲除的原代小胶质细胞，利用脂多糖（LPS）诱导构建神经炎症模型，结果表明Calhm2敲除的原代小胶质细胞其LPS诱导的炎症水平相较正常原代小胶质细胞是显著降低的，进一步发现敲低Calhm2的BV2细胞其LPS诱导的神经炎症水平较正常BV2细胞也是降低的。与之相反的是过表达Calhm2的BV2细胞其LPS诱导的炎症水平相较正常BV2细胞则是显著升高的,这一表型在过表达Calhm2的IBMDM细胞中同样存在。以上结果提示Calhm2可正向调控小胶质细胞激活及炎症水平。为了进一步研究Calhm2调控小胶质细胞炎症水平的机制，我们利用过表达Calhm2的BV2细胞，通过Calhm2所携带的Flag标签进行免疫共沉淀实验，在银染实验证实Calhm2成功过表达和被富集后送样进行质谱分析。质谱分析结果显示EFhd2可能是Calhm2的相互作用蛋白。接下来我们利用HEK293T细胞并进行共转染带标签的EFhd2及Calhm2的质粒，免疫共沉淀实验证实EFhd2与Calhm2可以相互作用。为了研究Calhm2调控EFhd2的作用方式，我们首先探索了Calhm2敲除的原代小胶质细胞、Calhm2敲低的BV2细胞和Calhm2过表达的BV2细胞EFhd2的表达变化，结果显示Calhm2并不影响小胶质细胞内EFhd2蛋白水平，但是可以影响EFhd2的二聚体形式。进一步研究显示敲低EFhd2可以降低LPS诱导的炎症水平，这一结果与Calhm2敲低的结果相一致。由于我们之前的工作发现Calhm2在AD患者及模型小鼠中上升，接下来我们分析了EFhd2在AD患者及动物模型中的变化。结果显示，EFhd2在AD患者多个脑区及模型小鼠脑内均无明显变化，但在6月龄AD模型小鼠小胶质细胞中特异性上升，提示EFhd2在AD病理条件下的小胶质细胞中具有重要作用。目前缺乏可用的Calhm2商品化抗体，为了进一步研究Calhm2在不同类型神经细胞中的表达、定位以及在体功能，我们构建了Calhm2-C-HA的转基因小鼠，目前已完成基因型鉴定及表达量鉴定，后续需要进行细胞特异性表达鉴定以及进行在体功能等实验。综上所述，我们发现Calhm2参与LPS诱导的神经炎症的调节，进一步发现Calhm2与EFhd2的相互作用，并通过影响EFhd2的二聚化形式作用小胶质细胞的炎症反应。该研究进一步揭示了Calhm2在神经炎症中的作用和初步的分子机制，为相关神经系统疾病的治疗提供了理论依据。收起

关键词 : 神经炎症 Calhm2 小胶质细胞 EFhd2

6. miR-218-5p通过I型干扰素反应调控帕金森病小鼠小胶质细胞炎症机制研究

[学位论文] 王丹蕾华中科技大学 2022年硕士导师: 薛峥;毛志娟共77页

摘要 : 目的：探究miR-218-5p对帕金森病（Parkinson’sdisease，PD）小鼠黑质区小胶质细胞炎症与多巴胺能神经元丢失的影响及作用机制。方法：对8周雄性C57BL6/J小鼠腹腔注射1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶（1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropy... 展开目的：探究miR-218-5p对帕金森病（Parkinson’sdisease，PD）小鼠黑质区小胶质细胞炎症与多巴胺能神经元丢失的影响及作用机制。方法：对8周雄性C57BL6/J小鼠腹腔注射1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶（1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine，MPTP）构建急性PD小鼠模型，利用实时荧光定量PCR（Quantitativereal-timePCR，qPCR）法检测miR-218-5p在PD小鼠中的表达变化。采用双侧黑质立体定位注射miR-218-5pagomir的方法构建miR-218-5p过表达小鼠模型，通过免疫荧光染色和蛋白免疫印迹（Westernblot，WB）法检测小胶质细胞活化和多巴胺能神经元丢失情况，通过Rotarod转棒实验检测小鼠的运动功能改变。利用转录组高通量测序（High-throughputtranscriptomesequencing，RNA-seq）和生物信息学分析进一步探究miR-218-5p对PD小鼠黑质区基因表达的影响和作用途径，通过TargetScan软件预测miR-218-5p的靶基因，并采用双荧光素酶报告基因实验验证。用脂多糖（Lipopolysaccharide，LPS）刺激小鼠小胶质细胞系BV2和小鼠原代小胶质细胞构建小胶质细胞炎症模型，采用qPCR法检测miR-218-5p的表达变化。在小胶质细胞中转染miR-218-5pmimic或靶基因的siRNA以过表达miR-218-5p或敲减靶基因，通过qPCR法和WB法检测miR-218-5p和靶基因对小胶质细胞炎症的影响及相关作用途径。结果：MPTP诱导的急性PD小鼠黑质区miR-218-5p表达较对照组显著下降；miR-218-5p过表达可抑制黑质区小胶质细胞的活化，并缓解PD小鼠黑质区多巴胺能神经元损伤和运动功能障碍。应用基因集富集分析方法对RNA-seq结果进行基因本体论富集分析，结果提示小鼠黑质区miR-218-5p过表达可下调Ⅰ型干扰素（Interferon，IFN）反应相关途径；差异基因分析和qPCR检测结果显示，I型IFN反应相关基因Irf7，Ddx60和Nlrc5的表达在PD小鼠黑质区显著上调，而过表达miR-218-5p抑制这些基因的表达。通过TargetScan软件预测和双荧光素酶报告基因实验证实Ddx41是miR-218-5p的靶基因。体外实验结果显示，LPS刺激BV2细胞系及原代小胶质细胞使miR-218-5p表达显著下降；过表达miR-218-5p或敲减Ddx41可抑制小胶质细胞炎症模型I型IFN反应及促炎细胞因子的表达。结论：本研究发现miR-218-5p通过靶向Ddx41基因调节I型IFN反应减轻PD小鼠小胶质细胞炎症反应，并缓解多巴胺能神经元丢失，这可能为PD提供了潜在的治疗靶点。收起

关键词 : 帕金森病小胶质细胞 miR-218-5p 小胶质细胞炎症 Ⅰ型干扰素

7. 电针“合谷”“三阴交”对急性宫颈扩张大鼠脊髓小胶质细胞活化的影响

[学位论文] 雷卫平温州医科大学 2015年硕士导师: 孙建良共53页

摘要 : 目的: 探讨脊髓小胶质细胞活化在宫颈扩张(uterine cervical distension，UCD)所致急性内脏痛中的作用，以及电针刺激“合谷”“三阴交”是否通过抑制小胶质细胞活化缓解UCD大鼠内脏痛。方法: 按照文献介绍的方法并略作改良后行宫颈扩... 展开目的: 探讨脊髓小胶质细胞活化在宫颈扩张(uterine cervical distension，UCD)所致急性内脏痛中的作用，以及电针刺激“合谷”“三阴交”是否通过抑制小胶质细胞活化缓解UCD大鼠内脏痛。方法: 按照文献介绍的方法并略作改良后行宫颈扩张，二个自制细金属钩（以22G穿刺针弯曲制成）尖端分别从一侧宫体与宫颈交界处穿入进入宫颈腔，再从宫颈与阴道交界处穿出，金属钩末端各悬挂砝码扩张宫颈，建立大鼠急性UCD模型。第一部分: 观察UCD后大鼠腹直肌肌电(EMG)振幅变化。24只SD大鼠随机分为3组(n=8):正常组、Sham组和UCD组。正常组不做任何处理;Sham组手术暴露宫颈，但不行宫颈扩张;UCD组手术暴露宫颈后行宫颈扩张，扩张强度为75g。于宫颈扩张后30min、60min、120min分别记录大鼠EMG振幅变化。第二部分: 观察UCD对脊髓小胶质细胞活化的影响。分组同第一部分(n=4)。第一部分实验发现UCD后60min，大鼠EMG变化最为显著，因此于宫颈扩张60min后处死大鼠，4％多聚甲醛灌注后取胸腰段（T12-L2）脊髓标本行免疫组化检查，观察UCD对大鼠脊髓小胶质细胞活化的影响。第三部分: 36只鞘内置管成功后的SD大鼠随机分为米诺环素组、PBS组、UCD组(n=12)。米诺环素组连续3天鞘内注射0.5nmol米诺环素后行UCD造模。PBS组、UCD组则分别相应给予等剂量的PBS、生理盐水后行UCD造模。分别记录造模后宫颈扩张前各组大鼠EMG振幅基础值及宫颈扩张后30min、60min、120min时大鼠EMG振幅的变化(n=8)。其余每组4只大鼠于宫颈扩张60min后处死大鼠，4％多聚甲醛灌注后取胸腰段（T12-L2）脊髓标本行免疫组化检查，观察鞘内米诺环素对UCD大鼠脊髓小胶质细胞活化的影响。第四部分: 36只SD大鼠随机分为电针组、电针对照组、UCD组(n=12)。电针组将针灸针刺入大鼠双侧“合谷”“三阴交”（“合谷”穴位于前肢第一、二掌骨之间，进针深度1mm;“三阴交”穴位于后肢内踝尖直上10mm处，进针深度3mm)后接韩氏穴位神经刺激仪给予2/100Hz疏密波电刺激30min(输出电流为10-14mA)后行UCD造模，造模成功后继续给以2/100Hz疏密波电刺激120min，电针对照组只针刺不接韩氏穴位神经刺激仪刺激，UCD组则无任何处理直接行UCD造模。分别记录各组UCD后30min、60min、120min大鼠EMG振幅的变化(n=8)。其余每组4只大鼠于宫颈扩张60min后处死，4％多聚甲醛灌注后取胸腰段（T12-L2）脊髓标本行免疫组化检查，观察电针刺激对UCD大鼠脊髓小胶质细胞活化的影响。结果: 第一部分: Sham组、正常组、UCD组(n=8)大鼠EMG基础值振幅差异无统计学意义(P＞0.05)。造模后，UCD组大鼠EMG振幅与基础值相比在UCD后30min、60min、120min均增加，差异有统计学意义(均P＜0.05);UCD后30min、60min、120min三个时间段相比，以UCD60min时EMG振幅增加最为明显（P＜0.05）。宫颈扩张后30min、60min、120min，与Sham组比较，UCD组大鼠EMG振幅增加，差异有统计学意义（P＜0.05），但正常组与Sham组相比大鼠EMG振幅变化无统计学意义(P＞0.05)。第二部分: UCD后，与Sham组相比，UCD组大鼠脊髓胸腰段（T12-L2）Iba1（小胶质细胞标记物）反应阳性细胞数量明显增加，差异有统计学意义（P＜0.05）;免疫阳性细胞主要集中在胸腰段双侧脊髓背角深层（Ⅳ～Ⅴ层）及中央管周围（X层）。Sham组与正常组相比Iba1反应阳性细胞数量无明显差异(P＞0.05)。第三部分: UCD组、PBS组、米诺环素组大鼠EMG基础值振幅差异无统计学意义(P＞0.05)。与基础值相比，各组UCD后30min、60min、120min EMG振幅明显增加(P＜0.05）。与PBS组相比，UCD后60min、120min，米诺环素组EMG振幅明显减弱;但UCD后30min，两组间EMG振幅无明显差异。PBS组与UCD组相比，UCD后各时间点EMG振幅差异均无统计学意义(均P＞0.05)。 UCD后60min，米诺环素组大鼠脊髓胸腰段（T12-L2）Iba1反应阳性细胞数量较PBS组显著减少，差异有统计学意义（P＜0.05）;但PBS组与UCD组相比差异无统计学意义（P＞0.05）。第四部分: UCD组、电针组、电针对照组大鼠EMG基础值振幅差异无统计学意义（P＞0.05）。与基础值相比，各组UCD后30mi n、60min、120min EMG振幅明显增加(P＜0.05）。UCD后60min、120min，与电针对照组相比，电针组大鼠EMG振幅减弱，差异有统计学意义（P＜0.05）;但UCD后30min电针对照组与电针组间EMG振幅无明显差异。UCD后各时间点，电针对照组与UCD组相比，大鼠EMG振幅差异均无统计学意义(均P＞0.05)。 UCD后60min，电针组大鼠脊髓胸腰段(T12 L2) Iba1反应阳性细胞数量较电针对照组显著减少，差异有统计学意义(P＜0.05)，但电针对照组与UCD组相比差异无统计学意义（P＞0.05）。结论: 1.脊髓小胶质细胞的活化参与了宫颈扩张所致急性内脏痛的形成; 2.电针刺激“合谷”“三阴交”缓解大鼠宫颈扩张的可能机制是抑制脊髓小胶质细胞的活化。收起

关键词 : 急性内脏痛电针刺激小胶质细胞活化脊髓小胶质细胞合谷穴三阴交穴

8. 小胶质细胞的纯化分离培养与鉴定方法

[学位论文] 徐婉茹山东大学 2009年硕士导师: 杜怡峰共40页

摘要 : 目的：探讨培养、纯化小胶质细胞的方法，建立一种高效率的原代小胶质细胞体外分离纯化方法。方法：以经典McCarthy的小胶质培养方法为基础，用手摇法分离纯化小胶质细胞，并进行鉴定。结果：分离、培养的小胶质细胞，折光性强，类圆形，... 展开

关键词 : 小胶质细胞体外分离细胞突起

9. 小鼠脑出血后不同时间点小胶质细胞极化状态的实验研究

[学位论文] 武翠梅山西医科大学 2020年硕士导师: 王改青共37页

摘要 : 目的：小胶质细胞是中枢神经系统中极为重要的免疫细胞，正常情况下，小胶质细胞呈分枝状，对中枢神经系统进行免疫监视。脑出血后，血肿成分促进小胶质细胞活化。一方面，小胶质细胞通过经典途径活化转变为M1型，分泌大量促炎因子如TNF-α、IL... 展开目的：小胶质细胞是中枢神经系统中极为重要的免疫细胞，正常情况下，小胶质细胞呈分枝状，对中枢神经系统进行免疫监视。脑出血后，血肿成分促进小胶质细胞活化。一方面，小胶质细胞通过经典途径活化转变为M1型，分泌大量促炎因子如TNF-α、IL-6等发挥细胞炎性作用；另一方面，小胶质细胞通过替代途径转化为M2型，分泌神经保护因子如BDNF、IGF1等促进损伤修复。小胶质细胞由静息状态向活化状态呈动态演变过程。极化状态是指小胶质细胞受周围环境影响，呈现不同表型并保留变化功能以维持组织稳态的一种能力。与外周巨噬细胞相比，小胶质细胞在表型极化方面表现出相似和独特的特征，从而具有先天的免疫功能。脑出血后不同时间段小胶质细胞所处的极化状态尚不明确，如果能够抑制小胶质细胞M1极化的有害效应，发挥M2极化状态的神经保护作用对于神经系统疾病的干预具有重要意义。本研究通过探讨小鼠脑出血后小胶质细胞在不同时间点M1及M2型的转化，为未来可能的促炎型M1型向抗炎修复型M2型的转化干预提供潜在依据。方法：将48只ICR小鼠随机分为手术对照组与脑出血模型组，两组根据术后不同时间点分为1d、3d、7d三个亚组，各模型组予以Ⅳ型胶原酶制备脑出血模型，手术对照组同时给予等量0.9%氯化钠注射液。术后不同时间点行神经功能评分，后应用蛋白免疫印迹法(Western blot)测定TNF-α、IL-6、BDNF、IGF1表达量，免疫荧光染色标记小胶质细胞M1型(Iba1+CD80)、M2型(Iba1+CD206)，评价出血后血肿周围组织小胶质细胞活化状态,对TNF-α、IL-6、BDNF、IGF1的表达量和小胶质细胞数量进行相关性分析。结果：与各时间点手术对照组相比，各时间点脑出血组均有不同程度的神经功能缺损，1d时最明显(P＜0.01)。同时TNF-α、IL-6蛋白表达量均增多，3d时最明显(P＜0.01)。与同期手术对照组相比，脑出血组BDNF、IGF1蛋白表达量增多，脑出血3d及7d的BDNF及IGF1蛋白表达量显著增多(P＜0.01)。免疫荧光染色显示，在脑出血后1-3d以M1为主，第3dM1型小胶质细胞达到高峰；第7d以M2型小胶质细胞为主；即M1型以出血后早期为主(1-3天)；M2型以出血后恢复期为主(3-7天)。脑出血后，M1型小胶质细胞数量与TNF-α和IL-6的蛋白表达量存在明显的正相关关系，M2型小胶质细胞数量与BDNF、IGF1的蛋白表达量存在明显的正相关关系。结论： M1型小胶质细胞在脑出血急性期(1-3d)占主要地位，M2型小胶质细胞在脑出血恢复期(7d)占有优势，且M1型小胶质细胞与促炎因子(TNF--α、IL-6)明显相关，M2型小胶质细胞与抗炎保护因子(BDNF、IGF1)明显相关；提示M1型小胶质细胞可能与脑出血后早期水肿相关，而M2型小胶质细胞可能与脑出血后神经修复有关。提示如果脑出血早期干预M1型小胶质细胞向M2型转变可能对于促进血肿清除，减轻早期脑出血后水肿形成，促进神经功能恢复具有一定的意义。收起

关键词 : 脑出血小胶质细胞细胞极化

10. M1型和M2型小胶质细胞/巨噬细胞在缺血性脑中风中的功能

[学位论文] 赵瑾兰州大学 2019年硕士导师: 张胜祥共78页

摘要 : 缺血性脑中风是常见的脑血管疾病之一，以其发病率高，致死性强的特点严重影响着国民健康，但迄今为止对该疾病所造成的组织损伤仍缺少行之有效的治疗手段。当大脑受到缺血损伤后，大量小胶质细胞/巨噬细胞（MG/MP）迅速激活并极化为两种不同的激活态... 展开缺血性脑中风是常见的脑血管疾病之一，以其发病率高，致死性强的特点严重影响着国民健康，但迄今为止对该疾病所造成的组织损伤仍缺少行之有效的治疗手段。当大脑受到缺血损伤后，大量小胶质细胞/巨噬细胞（MG/MP）迅速激活并极化为两种不同的激活态亚型，即M1型和M2型，这两种不同表型的细胞对脑缺血病程的发展有重要影响。然而，目前M1型和M2型MG/MP在脑缺血病理发展过程中所行使的具体功能尚不明确。本实验首先建立了光化学栓塞小鼠中风模型，利用组织化学染色和荧光定量技术，对中风亚急性期的M1型和M2型MG/MP进行了极化分布研究。结果显示，中风后前三天损伤区极化的MG/MP以M1型为主。其中，M1型MG/MP在中风第三天达到密度峰值，M2型MG/MP在中风第五天达到密度峰值。中风后第三天M1表型基因的表达量较第七天高，M2表型基因Cd206, Tgf-β表达量逐渐升高至中风第七天。之后我们利用药物分别选择性消除M1型和M2型MG/MP，发现消除M1型MG/MP后促炎基因的表达量降低，抗炎基因和血管内皮相关基因的表达量无显著变化。同时发现中风梗死体积减小，退行性神经元密度明显降低，小鼠的行为运动能力有所恢复。在选择性消除M2型MG/MP后发现，血管内皮相关基因和抗炎基因表达量均降低，促炎基因表达量明显上升。同时发现梗死体积明显增大，退行性神经元密度明显升高，小鼠的行为运动能力也明显降低。本项研究结果表明，脑缺血早期MG/MP倾向于极化为M1表型，这些M1型的MG/MP具有促炎作用，不利于缺血后的损伤修复；随着病程的发展，更多的MG/MP向M2型极化，具有神经保护和抗炎作用，这有利于减轻脑缺血后的神经损伤和促进功能恢复。本研究为进一步调控MG/MP的激活和极化提供了理论依据，为缺血性脑中风的早期治疗提供了新的思路。收起

关键词 : 缺血性脑中风胶质细胞 M1型小胶质细胞巨噬细胞 M2型小胶质细胞