摘要: 目的： 血管性痴呆(Vascular Dementia,VaD)是严重影响人类健康的一种认知功能障碍疾病，随着脑血管病的发病率逐年升高，已成为导致痴呆的第二大常见类型。对VaD的研究已成为研究热点，探索并明确VaD的治疗和预防措施十分有意义。本课题研究目的主... 展开 目的： 血管性痴呆(Vascular Dementia,VaD)是严重影响人类健康的一种认知功能障碍疾病，随着脑血管病的发病率逐年升高，已成为导致痴呆的第二大常见类型。对VaD的研究已成为研究热点，探索并明确VaD的治疗和预防措施十分有意义。本课题研究目的主要包括： 1.观察“加味不忘散”(Modified Bu-Wang Powder, MBWP)对VaD模型大鼠的学习记忆能力的影响； 2.研究MBWP对VaD大鼠海马神经元形态和突触结构的影响； 3.探索MBWP对VaD模型大鼠海马突触可塑性的影响； 4.研究MBWP防治VaD的作用机制。 方法： 1.将200只雄性SD大鼠随机分为5组，每组40只。分别为假手术组(Sham control)、VaD模型组(VaDmodel)、VaD模型+MBWP低剂量干预组(Low dose MBWP group, MBWPlow)、VaD模型+MBWP中剂量干预组(Medium dose MBWP group, MBWPmedium)、VaD模型+MBWP高剂量干预组(High dose MBWP group,MBWP high)。 2.通过双颈总动脉永久结扎方法制备VaD大鼠模型，MBWP灌胃治疗4周。 3.运用Y迷宫、Morris水迷宫、穿梭箱实验等行为学方法测定MBWP对VaD模型的学习记忆能力的影响； 4.运用在体LTP检测大鼠海马组织的突触可塑性； 5.通过HE染色观察大鼠海马的组织结构改变； 6.采用透射电镜观察海马超微结构变化； 7.应用RT-PCR技术检测海马内GAP43、SYN、PSD-95、MAP-2、BDNF和TrkBmRNA的水平； 8.应用Western-Blot技术检测海马内GAP43、SYN、PSD-95、MAP-2、BDNF和TrkB蛋白水平的变化。 9.采用SPSS24.0和Graphpadprism7.0软件对数据进行统计分析和作图。 结果： 1.在Morris水迷宫定位航行实验中，与Shamcontrol相比，VaDmodel大鼠的平均逃避潜伏期从第3天开始延长(P＜0.01)，VaDmodel大鼠对空间标志物的学习能力减退；与VaDmodel大鼠相比，从第3天开始，MBWPlow、medium、high大鼠的平均逃避潜伏期显著性缩短。MBWPhigh改善VaD大鼠的空间学习能力的效果最好。在空间探索实验中，与Shamcontrol相比，VaDmodel大鼠在目标象限停留时间显著性减少(P＜0.001)，VaD大鼠的空间记忆能力受损严重。MBWPmedium、high大鼠在目标象限停留时间延长，差异具有统计学意义(P＜0.001)。各组大鼠到达可视平台的时间和游泳速度没有统计学差异(P＞0.05)，提示造模和药物对大鼠的视力和游泳能力没有影响。 2.Y迷宫自发交替实验中，与Shamcontrol相比，VaDmodel大鼠的进臂自发交替正确率显著性降低(P＜0.001)，VaD大鼠的工作记忆能力受损严重。MBWPmedium、high可以提高自发交替正确率，差异具有统计学意义(P＜0.05，P＜0.001)，MBWP能显著改善VaD大鼠的空间工作记忆能力。各组大鼠的进臂总次数之间没有统计学差异，提示VaD模型的造模方法和MBWP干预对大鼠的运动能力和探索空间的欲望都没有影响。 3.穿梭箱实验中，与Shamcontrol相比，VaDmodel大鼠的主动回避率显著性降低(P＜0.001)，主动回避潜伏期显著性延长(P＜0.001)，VaD大鼠回避伤害性刺激的学习记忆能力受损严重。与VaDmodel相比，MBWPmedium、high大鼠的主动回避率显著性增高(P＜0.001)，主动回避潜伏期显著性缩短(P＜0.001)MBWP能显著改善VaD大鼠回避伤害性刺激的学习记忆能力。MBWPhigh干预效果最好。 4.在体场电位记录实验中，与Shamcontrol相比，VaDmodel大鼠的f-EPSP斜率百分比显著性降低，LTP有显著性压抑作用(P＜0.001)，VaD大鼠海马突触可塑性受损严重。与VaDmodel相比，MBWPmedium、high逆转了VaD大鼠维持LTP的压抑作用(P＜0.001)，MBWP能显著改善VaD大鼠的突触可塑性。 5.通过HE染色观察大鼠海马组织结构改变，VaDmodel和MBWPlow大鼠海马神经元数量显著性减少，细胞体积缩小，核固缩，排列紊乱；MBWPmedium、high大鼠海马神经元数量增多、排列整齐、异常细胞减少。 6.采用透射电镜观察海马超微结构变化，结果显示，VaDmodel大鼠海马内的突触结构被破坏，突触数量减少，突触结构不完整，突触间隙增大，突触后膜上的致密物质变薄。与VaDmodel相比，随着MBWP干预剂量的增加，海马内突触结构逐渐变完整，突触间隙由大变小，突触后膜上的致密物也由少变多。 7.通过分子生物学检测各组大鼠海马内突触相关蛋白GAP43、SYN、PSD-95、MAP-2的改变，结果显示，VaDmodel大鼠海马中GAP43、SYN、PSD-95、MAP-2转录水平和表达蛋白水平平均比Shamcontrol显著性降低(P＜0.05)。与VaDmodel相比，随着MBWP干预剂量的增加，海马中GAP43、SYN、PSD-95、MAP-2转录和表达水平逐渐升高(P＜0.05)。 8.通过分子生物学检测各组大鼠海马内BDNF和TrkB的改变，结果显示，VaDmodel大鼠海马中BDNF和TrkB转录和表达水平与Shamcontrol相比均显著性降低(P＜0.05)。与VaDmodel相比，随着MBWP干预剂量的增加，海马中BDNF和TrkB转录和表达水平逐渐升高(P＜0.05)。 结论： 1.MBWP显著提高了VaD模型大鼠的学习记忆能力，且治疗效果具有剂量依赖性。 2.MBWP改善了VaD模型大鼠海马的神经元数目、神经元结构、突触数量、突触超微结构。 3.MBWP可以剂量依赖性的改善VaD模型大鼠海马的突触可塑性。 4.MBWP提高了海马内GAP43、SYN、PSD-95、MAP-2的转录和翻译水平。 5.MBWP可以上调海马内BDNF-TrkB信号通路。 由此提示，MBWP可能对治疗VaD具有一定的积极意义。 收起