中国科学技术信息研究所--国家工程技术数字图书馆

[学位论文] 钱洪安徽医科大学 2008年硕士导师: 金涌共55页

摘要 : 恶性肿瘤是严重威胁人类健康的主要疾病之一，发病率和死亡率均较高。对于无法手术切除的或手术切除后预防及复发再治疗的恶性肿瘤，化疗仍然是主要治疗手段。但一般的化疗药物普遍存在着选择性差，毒、副作用大，久用易耐药等缺点。寻找安全有效，毒... 展开恶性肿瘤是严重威胁人类健康的主要疾病之一，发病率和死亡率均较高。对于无法手术切除的或手术切除后预防及复发再治疗的恶性肿瘤，化疗仍然是主要治疗手段。但一般的化疗药物普遍存在着选择性差，毒、副作用大，久用易耐药等缺点。寻找安全有效，毒、副作用小的药物是当务之急。沙利度胺(thalidomide，THD)，是一种谷氨酸衍生物，最初用于治疗妊娠期呕吐，但是因为其致畸作用而于20世纪60年代初撤出市场。后来发现对一些免疫性疾病有效。近期发现，THD是一个潜在的抗肿瘤剂。它可能通过抑制新血管产生，调节免疫功能等，发挥抗肿瘤作用。本文以体内、外实验相结合，对沙利度胺抗肿瘤作用及其机制展开探讨。现分述如下：一、沙利度胺体外抗肿瘤作用采用MTT法检测沙利度胺对体外培养的肝癌细胞株增殖抑制作用。沙利度胺6.25-100μmol·L-1剂量下对体外培养的鼠原性HepA和S180肿瘤细胞株和人原性HepG2和HL-60肿瘤细胞株均有抑制作用。药物浓度越高，抑制作用越强，有明显的量效关系。对不同的细胞系抑制作用不同，其IC50值分别为：65.0，70.3，56.4和54.4μmol·L-1。以沙利度胺6.25，25，100μmol·L-1分别作用于上述四种肿瘤细胞，于12，24，36，48，60h观察细胞生长情况，发现沙利度胺对肿瘤细胞有明显的时间效应关系，12-48h，作用时间越长，抑制作用越强，各组间时效曲线相似。二、沙利度胺体内抗肝癌作用沙利度胺给药连续13天，对荷HepA和S180瘤的小鼠肿瘤生长有明显的抑制作用，沙利度胺20，40，80mg·kg-1×13d的抑瘤率分别为28.1%，38.7%，52.3%(HepA)和26.1%，30.4%，47.8%(S180)；另外，沙利度胺能明显延长荷瘤小鼠的存活时间，沙利度胺20，40，80mg·kg-1的存活延长率分别为26.2%，51.8%，94.4%(HepA)和28.6%，44.5%，66.0%(S180)。三、沙利度胺抗肝癌作用的机制研究经沙利度胺处理后的HepG2细胞，电子显微镜下可见典型的肿瘤细胞凋亡改变。可见体积缩小的凋亡细胞，染色质浓缩致密，并沿核膜分布形成新月状体，凋亡晚期细胞，可见细胞分解为膜包裹的凋亡小体。进行DNA标记，流式细胞仪分析凋亡改变。沙利度胺在6.25-100μmol·L-1浓度作用HepG248h，凋亡率由9.3%上升到35.5%，呈现明显的浓度依赖关系。沙利度胺20，40，80mg·kg-1明显增加HepA荷瘤小鼠的脾脏指数；沙利度胺20，40，80mg·kg-1组明显增加HepA荷瘤小鼠ConA、LPS诱导的脾淋巴细胞增殖。另外，沙利度胺40，80mg·kg-1明显增加HepA荷瘤小鼠IL-2的产生和NK细胞活性，抑制HepA荷瘤小鼠异常升高的IL-6、TNF-α和NO含量。四.结论沙利度胺体内、外有明显的抗肿瘤作用，其机制可能与增强肿瘤细胞死亡和凋亡，调节免疫功能有关。收起

关键词 : 沙利度胺抗肿瘤作用

2. 桑黄提取物抗肿瘤作用的探索研究

[学位论文] 陈琳琳内蒙古医学院 2008年硕士导师: 俞腾飞;刘小玲共37页

摘要 : 目的：研究桑黄提取物对小鼠S180实体瘤、H22肝癌和Lewis肺癌实体瘤的生长抑制作用，体外对人瘤细胞的直接抑制作用，对荷瘤小鼠的免疫调节机制及其对化疗药物的增效作用。方法：本研究建立了小鼠S180实体瘤、H22肝癌和Lewiss肺癌实体瘤模型，观... 展开

关键词 : 提取物抗肿瘤作用

3. 慢性应激致抑郁及氟西汀干预对荷瘤小鼠肿瘤进程的影响和代谢组学研究

[学位论文] 任宇南方医科大学 2019年硕士导师: 徐峰共93页

摘要 : 目的：本课题旨在研究慢性应激致抑郁对肿瘤进程的影响、抗抑郁药氟西汀是否具有抑瘤作用及氟西汀干预对慢性应激致抑郁荷瘤小鼠的代谢组学变化。方法：正常C57小鼠随机分为6组:(A)空白健康对照组，(B)单纯抑郁对照组，(C)单纯荷瘤... 展开目的：本课题旨在研究慢性应激致抑郁对肿瘤进程的影响、抗抑郁药氟西汀是否具有抑瘤作用及氟西汀干预对慢性应激致抑郁荷瘤小鼠的代谢组学变化。方法：正常C57小鼠随机分为6组:(A)空白健康对照组，(B)单纯抑郁对照组，(C)单纯荷瘤对照组，(D)抑郁并荷瘤对照组，(E)荷瘤并氟西汀治疗组以及(F)抑郁并荷瘤并氟西汀治疗组。B，D和F组小鼠给予慢性不可预测的轻度应激(CUMS)8周以建立抑郁模型，其他组小鼠均正常喂养。在8周后用行为分析和蔗糖偏好测试验证抑郁模型。然后，用LLC肺癌肿瘤细胞接种C，D,E和F组小鼠，其中D组和F组均为抑郁应激并接种肿瘤小鼠模型。E组和F组小鼠在接种肿瘤后第3天给予氟西汀，A，B，C和D四个对照组给予生理盐水。定期测量体重。连续给药14天后，取小鼠内眦静脉血，进行代谢组学检测;处死小鼠，切除肿瘤，测定移植肿瘤的体积和重量。在小鼠肝脏组织转录组基因测序结果中找出显著差异基因，筛选差异表达的肿瘤相关基因，并用RT-PCR验证。应用Western blotting法检测小鼠肝脏中相应蛋白的表达。结果：血液生化指标和行为测试确证慢性应激诱导的抑郁模型建立成功。与单纯荷瘤对照组(C)相比，抑郁并荷瘤对照组(D)的肿瘤重量显著增加，肿瘤体积有所增大;荷瘤并氟西汀治疗组(E)小鼠的肿瘤重量和体积显著减少。我们发现抑郁并荷瘤并氟西汀治疗组(F)与抑郁并荷瘤对照组(D)相比，小鼠肿瘤重量和体积均明显减少。根据小鼠肝脏基因测序结果，筛选出4种mRNA肿瘤相关基因（Pttg1，Osbpl5，Aatf,Tnfrsf18）。与A组小鼠相比，慢性应激诱导致抑郁小鼠（B组）肝脏中上述4种mRNA肿瘤相关基因的表达均有不同程度上调，氟西汀给药F组小鼠相对于抑郁并荷瘤D组小鼠肝脏中4种mRNA的表达在不同程度上降低。抑郁组和各对照组组间的差异代谢物以氨基酸、脂肪酸、糖类等为主。结论：慢性应激致抑郁小鼠体内组织肿瘤相关基因的表达增加，表明慢性应激致抑郁可以促进肿瘤的发展。抗抑郁药氟西汀可有效减缓肿瘤生长，具有一定的抗肿瘤活性，其作用机制可能与抑制肿瘤相关基因表达有关。代谢组学研究发现慢性应激致抑郁加重肿瘤进程可能与氨基酸合成途径、脂质代谢途径、激素水平波动和能量代谢紊乱等有关。收起

关键词 : 氟西汀抗肿瘤作用代谢组学

4. MONCPT对膀胱癌细胞5637的抗肿瘤作用及其机制研究

[学位论文] 姜海浙江大学 2008年博士导师: 陈昭典共85页

摘要 : 膀胱癌是我国泌尿系统最常见的恶性肿瘤，90％以上为移行细胞癌。初次就诊的患者中70％～80％为浅表性膀胱癌，其中70％为Ta期，30％为T1期，不论肿瘤分化程度的高低，都未侵及膀胱肌层。经尿道切除术或者膀胱部分切除术可以切除原发肿瘤，但由于膀胱... 展开膀胱癌是我国泌尿系统最常见的恶性肿瘤，90％以上为移行细胞癌。初次就诊的患者中70％～80％为浅表性膀胱癌，其中70％为Ta期，30％为T1期，不论肿瘤分化程度的高低，都未侵及膀胱肌层。经尿道切除术或者膀胱部分切除术可以切除原发肿瘤，但由于膀胱癌的多中心性和多发性特点，术后5年复发率高达三分之二，而术后15年的复发率则高达88％，复发的患者中约有15％会进展为浸润性膀胱癌。因此，浅表性膀胱癌手术后如何预防复发和疾病进展是泌尿外科医生共同努力的目标。自上个世纪60年代起开始的膀胱内灌注治疗有效地延缓或者阻止了肿瘤的复发和进展，因此，膀胱灌注治疗己成为膀胱癌治疗的重要手段之一。目前膀胱灌注治疗的药物主要为两大类，分别为化学药物和免疫制剂，其中喜树碱类衍生物是膀胱灌注化疗的重要药物之一。喜树碱类衍生物的构效关系分析表明在7，9，10位被基团取代的喜树碱类衍生物具有很强的抗肿瘤活性。尽管在10位被羟基和烷基取代后，如10-甲氧基喜树碱有一定的抗肿瘤活性，但是其有较强的毒副作用限制了它的临床应用。相反在9位引入硝基，如9-硝基喜树碱，不仅能保证其治疗效果，同时还具有较低的毒副作用。但要将喜树碱硝化得到9-硝基喜树碱是比较困难的，因为12-硝基喜树碱会是最主要的产物。而对10-羟基喜树碱进行硝化则容易得到10-甲氧基-9-硝基喜树碱(MONCPT)，国内华东师范大学合成了该化合物。该药系我国有自主知识产权的喜树碱类抗肿瘤新药，目前正在进行临床前研究。膀胱癌是泌尿系统最常见的肿瘤，本课题就是考察MONCPT对膀胱癌细胞增殖的抑制作用并对其作用机制进行研究。目的： 1、研究MONCPT对膀胱癌5637细胞增殖的抑制作用(在体和离体)； 2、考察MONCPT对膀胱癌5637细胞周期的影响，若有影响则进一步探讨其作用机制；方法： 1)采用MTT法，评价MONCPT体外抑制膀胱癌5637细胞活性； 2)采用裸小鼠皮下移植瘤模型，观察MONCPT对荷人膀胱癌5637裸小鼠的实验治疗作用； 3)应用流式细胞术检测不同浓度MONCPT和MONCPT在不同作用时间对5637细胞周期的影响； 4)采用Western blotting的方法检测MONCPT对5637细胞p53，CDK7，p21，AKT，Mat1，Wee1，Cyclin B1，CDK1，Cyclin H，Cdc25C等蛋白表达水平的影响；结果： 1、MONCPT对人膀胱癌细胞株的体外抑制作用：采用MTT法对人膀胱癌5637细胞进行体外IC50测定，结果表明，MONCPT对人膀胱癌56372胞作用48小时有较强的抑制增殖作用，IC50值为1.31±0.16 μM。结果还显示，随浓度的下降，MONCPT在体外对人膀胱癌5637细胞的抑制率迅速降低，呈明显的剂量依赖关系。 2、MONCPT对人膀胱癌5637细胞的实验治疗作用：对裸小鼠体内5637肿瘤的实验治疗作用试验结果显示，MONCPT 5、10和20mg/kg组裸小鼠体重无明显影响(P>0.05)。与相应的溶剂对照组比较，Irinotican10 mg/kg和MONCPT 10 mg/kg组移植瘤体积从第5天开始显著减小(P<0.05-0.01)，而MONCPT 20 mg/kg组植瘤体积从第3天开始显著减小(P<0.05)，MONCPT 5 mg/kg组植瘤体积从第9天开始显著减小(P<0.01)。MONCPT 5 mg/kg组在给药后第3、5、7、9、11、13和15天的相对肿瘤增殖率(T/C，％)分别为103.2％、84.6％、95.7％、80.2％、62.0％、41.6％和23.8％，从第13天开始相对肿瘤增殖率小于60％；MONCPT 10 mg/kg组相应的相对肿瘤增殖率分别为95.3％、67.7％、61.4％、34.2％、21.2％、11.1％和6.2％，从给药后第9天开始相对肿瘤增殖率小于60％；MONCPT 20 mg/kg组相应的相对肿瘤增殖率分别为73.2％、51.9％、40.3％、20.9％、11.7％、6.9％和3.3％，从给药后第5天开始相对肿瘤增殖率小于60％；Irinotican 10.0 mg/kg组相应的相对肿瘤增殖率分别为88.1％、70.4％、50.5％、31.3％、20.8％、13.8％和7.3％，从给药后第7天开始相对肿瘤增殖率小于60％。给药15天后剖杀裸小鼠取瘤块称重发现，MONCPT 5 mg/kg、10 mg/kg和20mg/kg组的人膀胱癌5637移植瘤平均重量分别为0.63±0.12g、0.24±0.06 g和0.06±0.03 g，与阴性对照组的1.83±0.30 g比较均有明显下降(P<0.01)，三个剂量组相应的肿瘤抑制率分别为64.8％、86.2％和96.5％，肿瘤抑制率均大于40％。Irinotican 10.0 mg/kg组的平均瘤重为0.36±0.09 g，与溶剂对照组比较也有显著下降(P<0.01)，抑瘤率为81.1％，大于40％。 3、MONCPT诱导人膀胱癌5637细胞周期阻滞作用： MONCPT10，1，0.1，0.01μM分别对人膀胱癌5637细胞作用24小时后，DNA分析结果表明，溶剂对照组的G2/M期的肿瘤细胞百分率分别为8.56±2.13％；而MONCPT10，1，0.1，0.01μM处理24小时后，处于G2/M期肿瘤细胞百分率分别为19.7±3.6％、46.9±7.3％、76.8±9.2％和18.55±3.5％，0.1μM的MONCPT能达到最大的肿瘤细胞周期阻滞作用。用0.1μM的MONCPT处理5637细胞12h，24h，36h和48h，并设溶剂对照，收集各组细胞，用流式细胞术检测细胞的周期阻滞率。结果显示，溶剂对照组的G2/M期的肿瘤细胞百分率为11.45±2.3％，随着MONCPT作用时间的延长，G2/M期比率分别为22.4±3.85％(12h)、79.18±7.3％(24h)、50.15±6.25％(36h)和29.7±3.85％(48h)。 4、MONCPT对5637细胞周期相关蛋白表达量的影响：用0.1μM MONCPT分别处理5637细胞12，24，36和48h，并设对照，收集各组细胞，提取蛋白，用Western印迹法检测CDK1、CyclinB1、Cyclin H、MAT1、AKT、Wee1、CDK7，Cdc25C，p21和p53蛋白表达量的变化。结果显示，随给药时间的延长，MONCPT可使人膀胱癌5637细胞p53，p21的表达先增加后下降，MAT1、CyclinB1的表达先下降后增加，CDK1、CDK7、Cdc25C、Cyclin H、AKT、Wee1的表达量下降。讨论和结论： MONCPT是新合成的喜树碱类衍生物。体内外的抗肿瘤实验证实MONCPT对人膀胱癌5637细胞具有很强的抑制增殖作用，同时我们还证实这种作用是可以通过对细胞周期G2/M期阻滞实现的。近几年来，植物来源的抗肿瘤药物受到了广泛的关注。当哺乳动物细胞遇到DNA损伤时，细胞周期会停滞直到错误被纠正，细胞周期G2/M期被阻滞后细胞将停滞生长。相比较G1/S，人们对G2/M了解的并不多，然而这个周期检验点对于肿瘤发生却是非常重要的。G2/M的转变是受到Cdc家族蛋白和cyclin调控的，Cdc2可以被四个转录靶点p53，Gadd45，p21和14-3-3 σ所抑制。 p53可作为转录因子，诱导另外几种蛋白的产生，如p21，从而达到调控细胞周期的作用。在哺乳动物细胞中，cyclin的结合和CAK对Cdc2的Thr161位磷酸化对于Cdc2-cyclin B复合物的活性都是非常重要的。若没有Cdc25C对Cdc2的Thr14和Tyr15位去磷酸化，且Plk1磷酸化cyclin B时，细胞周期将被停滞。当用0.1 μM MONCPT分别处理5637细胞12，24，36和48h，Western印迹法检测结果显示，随给药时间的延长，5637细胞的p53，p21表达先增加后下降，MAT1、CyclinB1表达先下降后增加，CDK1、CDK7、Cdc25C、Cyclin H、AKT、Wee1表达量下降。因此，我们推测，MONCPT使人膀胱癌5637细胞终止在G2/M期的作用可能是其通过诱导细胞p53、p21表达上调和CyclinB1、CDK1、CDK7、AKT、Wee1、Cyclin H、Mat1和Cdc25C表达下调，从而使细胞终止在G2/M期，达到抑制肿瘤细胞增殖的作用。综上所述，我们实验证实，MONCPT对人膀胱癌5637细胞的增殖具有明显的抑制作用，其作用机制可能与p53通路、CDK7、Cdc25C及cyclin B1-CDK1复合物有密切关系，通过阻滞膀胱癌细胞周期而发挥抗肿瘤活性。在体和离体实验证实，MONCPT具有良好的抗膀胱癌实验治疗作用，值得在临床进一步实验以确证疗效。收起

关键词 : 膀胱癌细胞抗肿瘤作用

5. 消瘤汤抗肿瘤作用及机制探讨

[学位论文] 张玮湖北中医药大学 2008年硕士导师: 丁艳蕊共38页

摘要 : 目的：消瘤汤是由白花蛇舌草、黄芪，半枝莲、藤梨根、白英、龙葵等药物组成，具有清热解毒，扶正培本，活血消肿，化瘀利湿之功效，诸药配伍，扶正祛邪，攻补兼施，气血同治，痰瘀热毒并除．本研究在中医理论的指导下，通过中药血清药理学实验... 展开目的：消瘤汤是由白花蛇舌草、黄芪，半枝莲、藤梨根、白英、龙葵等药物组成，具有清热解毒，扶正培本，活血消肿，化瘀利湿之功效，诸药配伍，扶正祛邪，攻补兼施，气血同治，痰瘀热毒并除．本研究在中医理论的指导下，通过中药血清药理学实验，从细胞、分子水平系统地探讨消瘤汤抗肿瘤作用机理。观察消瘤汤含药血清对肝癌细胞Bel-7402增殖的影响、细胞凋亡率及细胞周期变化。研究消瘤汤含药血清对肝癌细胞Bel-7402凋亡的诱导作用，探讨消瘤汤诱导肝癌细胞凋亡的可能机制，为临床上应用该方治疗恶性肿瘤提供实验依据。方法：选用SD大鼠30只，随机分为五组，即消瘤汤高、中、低剂量组、氟脲嘧啶组、空白对照组。用中药血清药理学方法，制备各受试药物含药血清和无药血清。各实验组细胞分别加入各受试药物血清，空白对照组加入无药血清，分别培养24h，48h。 1、用台盼蓝染色检测各组细胞蓝染率。 2、通过MTT(噻唑蓝)比色法检测各组细胞抑制率。 3、流式细胞仪检测各组细胞凋亡率。 4、流式细胞仪检测各组细胞周期变化。结果： 1、台盼蓝染色显示，细胞蓝染率无明显变化。 2、MTT比色显示，各实验加药组细胞存活率降低，细胞生长增殖明显受到抑制，随着时间的延长，细胞的相对抑制率逐渐增加，消瘤汤含药血清药物浓度较低时，细胞相对抑制率随着含药血清浓度的增大而增加，当含药血清达到一定浓度后，细胞相对抑制率随着血清浓度的增加而下降。各实验加药组中细胞生长抑制率与空白对照组相比，均有显著性差异．以氟尿嘧啶组、消瘤汤中剂量组较空白对照组细胞生长抑制率增高显著。 3、流式细胞仪检测凋亡峰，实验组细胞在G1期前出现凋亡峰，凋亡峰随着含药血清浓度的增加先升高后下降，显示量效关系，各实验组之间相比较，相同培养时间中，以氟尿嘧啶组、消瘤汤中剂量组细胞凋亡峰最高，而空白对照组细胞始终无凋亡峰出现。同一实验组，细胞凋亡百分率随着药物作用时间的增加而增加，显示时效关系，培养48小时作用明显。各实验加药组中细胞凋亡率与空白对照组相比，均有显著性差异。 4、流式细胞仪检测细胞周期，各实验组细胞周期均出现明显改变，与空白对照组相比，均有显著性差异。表现为实验组中G1期，S期变化不明显，G2～M期细胞明显增加。以氟尿嘧啶组、消瘤汤中剂量组细胞周期变化显著。结论： 1、消瘤汤能可抑制人肝癌细胞Bel-7402生长增殖，并呈现出一定的剂量效应。 2、消瘤汤可诱导肝癌细胞Bel-7402凋亡。 3、消瘤汤诱导肝癌细胞Bel-7402凋亡的机制可能与阻止Bel-7402细胞增殖周期的运行有关。 4、提示消瘤汤具有治疗肝癌的潜力。收起

关键词 : 消瘤汤抗肿瘤作用

6. 天然植物单体百里醌与顺铂在体内外协同抗胃癌作用及机制研究

[学位论文] 马静静武汉大学 2019年博士导师: 董卫国共92页

摘要 : 研究背景与目的胃癌（gastriccancer，GC）是最常见的消化道恶性肿瘤之一，其全球发病率居第5位，死亡率居第3位。我国是胃癌高发病区之一，每年新发例数约40万例，总体死亡率呈逐年上升趋势。并且由于多数胃癌患者早期症状不典型、无特异性，确... 展开研究背景与目的胃癌（gastriccancer，GC）是最常见的消化道恶性肿瘤之一，其全球发病率居第5位，死亡率居第3位。我国是胃癌高发病区之一，每年新发例数约40万例，总体死亡率呈逐年上升趋势。并且由于多数胃癌患者早期症状不典型、无特异性，确诊时已处于中晚期，即进展期胃癌，临床疗效欠佳，预后差，5年生存率低，严重危害国人身体健康。化疗是目前胃癌常见的治疗方式，但由于化疗药物副作用大、不良反应多以及肿瘤耐药率高等问题，限制了其在胃癌治疗中的应用。因此，开发新型化疗药物，寻求有效联合治疗方案，以期改善当前胃癌治疗现状尤为重要。近年来，毛琅科植物黑种草籽越来越受到人们重视。其药用价值高，从其提取的多种生物学物质，具有抗氧化、抗炎、免疫调节、抗菌、抗肿瘤等活性。而百里醌（Thymoquinone，TQ），就是从黑种草籽中提取并纯化的一种活性单体。多项研究证实，百里醌可参与调控多种肿瘤细胞的生物学行为，包括结直肠癌、乳腺癌、肺癌、前列腺癌等，可显著抑制肿瘤细胞增殖、侵袭和迁移，诱导肿瘤细胞凋亡。此外，百里醌在体外和体内实验均能增强5-氟尿嘧啶（5-fluorouracil，5-FU）诱导结肠癌细胞凋亡的活性，还可增强常规化疗药物吉西他滨对胰腺癌的抗肿瘤作用，但具体作用机制不明。而顺铂是胃癌治疗的基础药物，通过干扰DNA修复，引起DNA损伤，进而诱导肿瘤细胞凋亡。但目前单用顺铂的疗效并不理想，经过顺铂治疗后复发的肿瘤患者耐药率高。多项研究发现，联合治疗（基于顺铂）的抗肿瘤疗效显著优于单用顺铂，包括卵巢癌、胃癌、食管癌、肺癌、胰腺癌等。因此，人们越来越重视顺铂联合治疗肿瘤策略在临床上的应用，以期改善肿瘤治疗现状。 PI3K/AKT信号通路是参与细胞增殖调控的重要通路之一，其在肿瘤的发生发展中常被异常地激活，是关键的“驱动因子”。该条通路由许多个亚单位和激酶组成的，因此为癌症的治疗提供了许多潜在的靶点。肿瘤抑癌基因PTEN（phosphataseandtensionhomlog，PTEN）基因于1997年首次被发现，其表达产物具有蛋白质磷酸酶和脂质磷酸酶双重活性，可使PIP3去磷酸化成为无活性的PIP2，阻止AKT的活化，从而抑制了PI3K/AKT信号通路的激活，发挥其抑癌作用。在人类的多种恶性肿瘤中，广泛存在PTEN基因突变、缺失或者启动子超甲基化等发生。但目前关于PTEN基因在胃癌发生发展的作用研究甚少。研究表明，Wnt/β-catenin通路异常激活与肿瘤的侵袭和迁移能力密切相关，且GSK-3β作为该信号通路的重要负向调节因素，其活性可受到PI3K/AKT信号通路的密切调控。多项研究证实，PI3K/AKT信号通路活性改变在百里醌抗肿瘤过程中发挥了重要作用。百里醌可通过靶向PI3K/AKT信号通路，改善肿瘤耐药细胞对阿霉素和多西他赛的敏感性。本课题组前期研究已证实，百里醌可在体内外抑制胃癌细胞增殖，诱导胃癌细胞发生凋亡。我们推测，百里醌可能通过上调PTEN基因调节PI3K/AKT信号通路活性，实现增强胃癌细胞对顺铂敏感性作用，并且，PTEN基因很可能在胃癌的侵袭和迁移过程中发挥了重要作用。因此，本课题在前期研究基础上，进一步研究百里醌联合顺铂对胃癌细胞生物学行为的影响，同时探索了PTEN基因调控胃癌的发生发展的作用机制，在动物水平也证实了百里醌和顺铂的抗胃癌作用。第一部分，运用百里醌和顺铂处理人胃癌细胞系(HGC-27、SGC-7901、MGC-803)，检测两者对胃癌增殖和凋亡的影响，通过CCK-8、克隆形成、Hoechst33258染色法、流式凋亡染色及Westernblot等方法，同时构建了稳定转染的胃癌细胞系，探究百里醌对胃癌细胞对顺铂的敏感性的影响及作用机制；第二部分，进一步探讨了PTEN基因调控胃癌细胞侵袭和迁移的具体机制；第三部分，通过构建裸鼠胃癌皮下移殖瘤体内实验模型，予以裸鼠腹腔注射百里醌和顺铂，探讨两者联合治疗在裸鼠体内对胃癌细胞增殖与凋亡的影响。材料与方法 1、选取人胃癌细胞系(HGC-27、SGC-7901、MGC-803)为研究对象，分别不同浓度的百里醌（0、5、10、20、40、80μM）和/或顺铂（0、0.25、0.5、1、2、4μg/mL）处理人胃癌细胞24h，通过CCK-8法检测百里醌和/或顺铂对人胃癌细胞增殖能力的影响，用GrahPad软件计算两种药物对胃癌细胞增殖抑制率和药物的IC50，用calcusyn2.0软件分析百里醌和顺铂是否协同抑制胃癌细胞增殖；以终浓度为空白、5μM百里醌、2μg/ml顺铂、5μM百里醌+2μg/ml顺铂作用于人胃癌细胞24h，运用CCK-8、克隆形成实验、流式细胞术、及Hochest33258染色等方法检测百里醌和顺铂对胃癌细胞增殖和凋亡的影响；百里醌和顺铂刺激胃癌细胞24h后，westernblot检测细胞内PTEN、p-AKT、AKT、P-gp、Bax、Bcl-2、CytC、AIF等蛋白变化。 2、构建敲低PTEN的稳定细胞系，干扰胃癌细胞PTEN的表达后，予以该细胞系百里醌和顺铂刺激，运用CCK-8、克隆形成、Hoechst33258凋亡染色及westernblot验证百里醌是否通过上调PTEN基因，增强胃癌细胞对顺铂的敏感协同发挥抗胃癌的作用。 3、购置胃癌组织芯片（含48例胃癌患者的癌与癌旁组织标本），采用免疫组化法检测PTEN和β-catenin蛋白在胃癌和癌旁组织中的表达，研究其与胃癌患者临床病理学特征的关系，进一步进行两者表达在胃癌组织中的相关性分析；以胃癌细胞系HGC-27和SGC-7901为研究对象，构建稳转细胞系，敲低PTEN基因的表达，通过划痕实验、Matrigel侵袭试验研究PTEN基因在调控胃癌侵袭和迁移中的作用；通过PTEN和β-catenin免疫荧光染色，westernblot检测PTEN、AKT、p-AKT,、p-GSK-3β、β-catenin、E-cadherin等蛋白表达差异，最后用明胶酶谱法分析干扰胃癌细胞PTEN基因表达后胃癌细胞MMP-2和MMP-9的活性变化。 4、选取人胃癌SGC-7901细胞系，PBS重悬细胞调整细胞浓度4×107/mL，接种至裸鼠后背部皮下（每只裸鼠接种体积100μL），构建裸鼠胃癌皮下移植瘤模型后，将裸鼠随机进行分组，腹腔注射生理盐水、顺铂、百里醌以及百里醌和顺铂联合，观察裸鼠状态和瘤体的生长情况并做好记录，间隔2天给药，给药10次后，去眼球取血，离心取上清检测裸鼠肝肾功能，断颈椎处死裸鼠，分离剥除皮下移植瘤，称瘤体重量，取裸鼠肝脏、脾脏、脑以及肺组织行HE染色，并绘制瘤体生长曲线、TUNEL法检测移植瘤细胞凋亡情况、免疫组织化学方法检测PTEN蛋白的表达变化。结果 1、用梯度浓度的百里醌（0、5、10、20、40、80μM）刺激胃癌细胞系（SGC-7901、HGC-27和MGC-803）24h，CCK-8检测发现，百里醌可抑制胃癌细胞增殖，且呈浓度依赖性。三种胃癌细胞系中，SGC-7901对百里醌最敏感。在百里醌浓度为5μM时，对3种胃癌细胞无明显的细胞毒性作用，细胞存活率约为90%，故而选择该浓度进行预处理。百里醌（5μM）预处理的胃癌细胞后，予以顺铂(0、0.25、0.5、1、2、4μg/mL)刺激24h，百里醌和顺铂联合组抑制胃癌细胞活力的IC50值显著低于单用顺铂组，差异有统计学意义（P＜0.05）。运用Calcusyn2.0软件分析联合指数（cmbinationindex，CI）提示百里醌和顺铂具有协同抑制胃癌细胞增殖的作用。克隆形成实验中，克隆形成数空白组169.3±10.6，百里醌组126.3±11.6，顺铂组120.0±3.6，联合组49±6.9，提示联合组可显著抑制胃癌细胞克隆形成（P＜0.05）。在Hoechst33258染色实验中，两个单药组诱导的细胞凋亡率明显高于对照组(P＜0.05)，同时我们发现，联合处理组诱导凋亡的细胞比例高于任一单药组（P＜0.05）。流式PE/7-AAD细胞凋亡染色结果显示，早、晚期凋亡率与对照组(1.77%和5.23%)、TQ(3.47%和9.58%)、顺铂(11.24%和22.15%)相比，联合处理组的SGC-7901细胞早、晚期凋亡率明显升高，分别为19.15%和63.5%。Westernblot结果示，与对照组相比，随着百里醌浓度升高，PTEN蛋白表达逐渐升高，AKT蛋白表达无差异，但p-AKT，P-gp表达明显下降；进一步的，与单药组相比，联合处理组PTEN蛋白表达显著升高，p-AKT和P-gp表达明显下降，凋亡相关蛋白Bax、CytC、AIF、cleavedcaspase-3、cleavedcaspase-7、cleavedcaspase-9等表达显著升高，但抗凋亡相关蛋白Bcl-2、procaspase-3、procaspase-7和procaspase-9等表达明显下降（P＜0.05）。上述一些列研究结果表明，百里醌可能通过上调PTEN基因负向调控AKT信号通路从而实现在体外与顺铂协同发挥抗胃癌的作用。 2、构建敲低PTEN基因表达的胃癌细胞系SGC-7901/HGC-27/MGC-803-PTEN-shRNA，并设立空白对照SGC-7901/HGC-27/MGC-803-NC，检测予以顺铂和/或百里醌刺激。CCK-8实验中，单用顺铂刺激细胞发现，与对照组相比，干扰PTEN表达的胃癌细胞对顺铂的敏感性降低，同一顺铂浓度刺激下，后者细胞活力更高；同样地，联合组刺激细胞发现，与对照组相比，干扰PTEN表达胃癌细胞对药物刺激的敏感性降低，同一药物刺激下，后者细胞活力更好。克隆形成实验发现，敲低PTEN基因，联合组细胞克隆形成率升高（P＜0.05）。Hoechst33258染色结果示：联合组刺激胃癌细胞24h，我们发现干扰PTEN表达后细胞的凋亡率降低，差异有统计学意义（P＜0.05）。Westernblot实验中，与阴性对照组相比，敲低PTEN，顺铂和联合组p-AKT蛋白水平升高，P-gp蛋白表达降低，而Baxcleavedcaspase3cleavedcaspase9等凋亡蛋白显著水平降低，差异均有统计学意义。上述实验结果表明，百里醌能增强胃癌细胞对顺铂的敏感性，而敲低PTEN表达，能减弱百里醌的这种作用。 3、免疫组化结果显示，PTEN在大多数胃癌组织中的低表达，且与胃癌患者的分化程度密切相关。进一步分析发现，胃癌组织中PTEN与β-catenin蛋白表达呈负相关(r=-0.546，P＜0.01)。此外，划痕实验及Transwell小室侵袭实验显示，敲除PTEN基因表达，促进了胃癌细胞的迁移和侵袭，westenblot检测发现，干扰PTEN表达，胃癌细胞的p-AKT、p-GSK-3β、β-catenin、E-cadherin、MMP-7、MMP-2和MMP-9蛋白表达上调，明胶酶谱实验提示干扰PTEN表达，人胃癌细胞MMP-2和MMP-9活性升高。 4、裸鼠胃癌细胞皮下移植瘤体内实验中，24只裸鼠成功构建皮下移植瘤模型，随机分为四组，予以腹腔注射药物，分别为对照组、顺铂组、百里醌组、百里醌和顺铂联合用药组。移植瘤逐渐生长，待给药结束，处死动物并取材，剥离瘤体测量其长径和短径，计算瘤体体积为（以上四组依次）：1214.92±207.99mm3，845.01±53.09mm3，582.49±75.43mm3，345.99±54.83mm3，提示与单药组相比，联合组可显著抑制瘤体生长，差异有统计学意义(P＜0.05)。瘤体重量：联合组对肿瘤生长有更强的抑制作用，肿瘤重量显著低于单药组(P＜05)。进一步TUNEL检测发现：联合组凋亡率显著增高（P＜0.05）。免疫组化结果显示，联合组PTEN蛋白表达水平升高，且高于单药组。上述裸鼠体内实验结果表明：百里醌能上调P 收起

关键词 : 胃癌百里醌顺铂抗肿瘤作用

7. 苏木提取物的免疫抑制及抗肿瘤作用机制研究

[学位论文] 彭新北京中医药大学 2009年博士导师: 顾立刚共87页

摘要 : 肿瘤是机体在各种致瘤因素的作用下，局部组织的细胞在基因水平上失去对其生长的正常调控，导致克隆性异常增生或凋亡不足而形成的新生物，这种新生物往往形成局部肿块。肿瘤不管是良性还是恶性，也不管是上皮组织来源还是间叶组织来源，本质上都表现... 展开肿瘤是机体在各种致瘤因素的作用下，局部组织的细胞在基因水平上失去对其生长的正常调控，导致克隆性异常增生或凋亡不足而形成的新生物，这种新生物往往形成局部肿块。肿瘤不管是良性还是恶性，也不管是上皮组织来源还是间叶组织来源，本质上都表现为细胞失去控制的异常增殖，这种异常生长的能力除了表现为肿瘤本身的持续生长之外，在恶性肿瘤还表现为对邻近正常组织的侵犯以及经血管、淋巴管和体腔转移到身体其它部位，而这往往是肿瘤致死的原因。祖国传统医学关于肿瘤发生的病机，历代医家的论述主要包括正气内虚、血瘀痰凝、邪毒内攻等。根据肿瘤患者病理性肿块、疼痛、出血、舌质瘀紫或有瘀点瘀斑，以及晚期面色黧黑、肌肤甲错等临床表现，认为血瘀症与肿瘤关系密切。近年来，随着分子生物学理论不断深入研究，中医药治疗肿瘤方面的研究进展取得了较为长足的进步，使我们对中药在抑制肿瘤生长，提高机体免疫功能，防止肿瘤转移的分子机制有了初步的认识。中医药对肿瘤的影响也从最初的免疫功能调节研究，发展到了今天的抗肿瘤血管生成研究，诱导细胞凋亡，抑制端粒酶活性等研究。苏木（Caesalpinia Sappan L，CAE）为豆科云实属植物的干燥心材。有行血祛瘀，消肿止痛之功效，中医临床常用于经痛、风湿痛、跌打瘀痛等症。临床上也用于肿瘤的治疗，现代药理学研究表明其具有抗肿瘤、免疫抑制等作用。但其具体的抗癌机制目前仍未知。为此我们用现代医学测试技术，测定苏木醇提取物免疫抑制与对抗肿瘤的作用机制。本研究的第一部分主要观察苏木不同提取物对小鼠胸腺组织、外周T细胞增殖和产生INF—γ的影响。通过制备苏木不同提取物分别给予灌胃小鼠，取小鼠胸腺称重计算胸腺指数；采用MTT法测定小鼠脾T细胞的增殖能力；用双抗体夹心ELISA法测定T细胞培养上清中产生INF—γ的含量。结果发现苏木不同提取物不仅对胸腺重量具有明显的抑制作用，而且还对T细胞的增殖和产生INF—γ的能力具有明显的抑制作用。其中苏木醇提取物和正丁醇提取物对T细胞的抑制作用较强。鉴于醇类提取物作用较强，在研究的第二部分主要观察苏木醇提物对人肺癌A549细胞的细胞毒作用和诱导凋亡作用。将苏木醇提物按不同浓度分别同人肺癌A549细胞共同培养，MTT法检测对细胞增殖作用的影响，光学显微镜、细胞膜磷脂酰丝氨酸外翻分析、细胞周期分析观察不同浓度苏木醇提物对人肺癌A549细胞的细胞毒和调亡作用。发现苏木醇提物对人肺癌A549细胞有抑制作用，并呈浓度依赖性；苏木醇提物在诱导细胞发生凋亡外还存在其它形式的细胞死亡方式并对细胞各期均有影响。经过第二部分体外抗肿瘤实验后，进行体内抗瘤实验。第三部分研究主要观察苏木醇提物对H22腹水瘤细胞抑瘤作用，通过皮下接种H22腹水瘤细胞的方法建立荷瘤小鼠模型，用苏木醇提物灌胃处理，观察各组荷瘤小鼠的肿瘤生长情况，采用缺口末端标记法测定肿瘤细胞凋亡指数，免疫组织化学方法测定凋亡蛋白Bcl—2、Bax的表达情况。发现苏木醇提物可抑制H22移植瘤生长，促进瘤体细胞凋亡，降低瘤体细胞Bcl—2/Bax比值；其机制与通过调控凋亡相关蛋白Bcl—2、Bax的表达诱导肿瘤细胞凋亡有关。收起

关键词 : 苏木抗肿瘤作用免疫抑制

8. 芹菜素促进卵巢癌化疗的减毒增效作用

[学位论文] 王文静大连理工大学 2022年硕士导师: 包永明共82页

摘要 : 卵巢癌是高死亡率的妇科恶性肿瘤之一，对女性的生命健康产生巨大威胁。目前，卡铂（CBP）和紫杉醇（PTX）用于卵巢癌临床一线化疗。针对CBP/PTX疗法的毒副作用及肿瘤铂耐药的问题，本论文围绕芹菜素（API）与CBP/PTX的联合用药对上皮性卵巢癌细胞Cao... 展开卵巢癌是高死亡率的妇科恶性肿瘤之一，对女性的生命健康产生巨大威胁。目前，卡铂（CBP）和紫杉醇（PTX）用于卵巢癌临床一线化疗。针对CBP/PTX疗法的毒副作用及肿瘤铂耐药的问题，本论文围绕芹菜素（API）与CBP/PTX的联合用药对上皮性卵巢癌细胞Caov-3的协同抗肿瘤作用，以及API逆转上皮性卵巢癌细胞HeyA8对CBP耐药作用开展研究。研究结果和结论如下：（1）采用MTT方法确定联合用药48h时，API显著增强CBP/PTX对Caov-3细胞增殖的抑制作用，联合指数为0.54～0.98。细胞周期、凋亡及荧光实时定量PCR分析发现API与CBP/PTX的联合使用将更多细胞阻滞在S期和G2期，Bcl2/Bax显著降低。API与CBP/PTX联合使用诱导划痕宽度增加，同时MMP1、3、9的mRNA表达量下降。在Caov-3裸鼠移植瘤模型中，5mg/kg API和5mg/kg CBP/3mg/kg PTX组的抑瘤率（77.80%）高于15mg/kg CBP/6mg/kg PTX组（74.26%），CBP和PTX的使用剂量分别下降了3倍和2倍；HE染色结果表明联合使用不会对裸鼠的主要内脏器官产生损伤。免疫组织化学分析进一步证明联合用药诱导Bcl2/Bax的表达降低。（2）HeyA8细胞为耐CBP的细胞系，耐药指数为13.35，通过MTT方法确定了API能够逆转HeyA8对CBP的耐药作用,耐药指数RI可降至4.07。转录组学分析及荧光实时定量PCR实验发现API的联合使用通过降低EGF的表达，减少STAT5A在细胞核内的积累，使细胞周期阻滞在S期，并诱导更多的细胞经历CBP诱导的凋亡，从而逆转了细胞对CBP的耐药性；细胞周期、凋亡分析进一步证明上述结论。在HeyA8裸鼠移植瘤模型中，5mg/kg API和10mg/kg CBP/3mg/kg PTX组的抑瘤率（83.22%）高于50mg/kg CBP/6mg/kg PTX组（82.75%），CBP的剂量下降了5倍。HE染色结果表明联合使用不会对裸鼠的主要内脏器官产生损伤。综上所述，本文发现API与CBP/PTX具有显著的协同抗卵巢癌作用，并揭示抗肿瘤作用机制；API提高了HeyA8细胞对CBP的敏感性并揭示HeyA8细胞对CBP的耐药机制。同时，API与CBP/PTX的联合使用降低了肿瘤细胞的迁移能力，限制了肿瘤的恶性发展，对患者的愈后有重大意义。体内药效学评价证明API与CBP/PTX的联合使用具有显著的协同抗肿瘤和逆转CBP耐药性的作用，且不会对裸鼠内脏器官造成损伤。收起

关键词 : 卵巢癌芹菜素抗肿瘤作用

9. 桑辛素抗骨肉瘤作用及其机制的研究

[学位论文] 康艳宾广西医科大学 2019年硕士导师: 韦庆军共79页

摘要 : 目的：骨肉瘤，近年来骨肉瘤患者的预后在应用化疗后虽然明显的改善，且近年来骨肉瘤治疗的取得一定进展，但是骨肉瘤患者的5年生存率，在近二十多年来仍在15-30％左右。过去20年里，使用新药物下肺癌疗效明显改善，新型化疗药不穷层出，然而抗骨肉瘤... 展开目的：骨肉瘤，近年来骨肉瘤患者的预后在应用化疗后虽然明显的改善，且近年来骨肉瘤治疗的取得一定进展，但是骨肉瘤患者的5年生存率，在近二十多年来仍在15-30％左右。过去20年里，使用新药物下肺癌疗效明显改善，新型化疗药不穷层出，然而抗骨肉瘤的新药少有被发现、且新发现药物毒性较强。因此，开发新型高效低毒药物以更好的抗骨肉瘤，是当前治疗骨肉瘤一项重要研究课题。桑辛素，是一种从桑树(Morus Alba)和其他桑树属植物的根皮中分离出的黄酮类化合物，它具有很多种的生物学活性，其中最重要的主要有抗病毒、抗炎、抗癌作用等。然而，桑树素对骨肉瘤的抗肿瘤作用尚不清楚。方法：(1)体外实验：采集对数生长期人骨肉瘤细胞。设置空白组和不同浓度的桑辛组。利用MTS检测法，分析桑辛素对细胞增殖的影响;采用Real-time PCR检测凋亡相关基因mRNA(Bax和Bcl-2等)的表达，计算Bax/Bcl-2值，以明确桑辛素对细胞凋亡的作用;利用ELISA实验方法，直接检测分析桑辛素在促进SAOS2细胞凋亡的具体作用;用Transwell检测和经典的划痕实验方法，研究桑辛素对细胞迁移能力和侵袭能力的影响。(2)体内实验：桑辛素对BALB/c-nu/nu裸鼠骨肉瘤移植模型的作用实验，以4×106/0.1m1细胞浓度接种背部的右肩腋窝附近皮下，造模的成功率为100％，给药时间及剂量为桑辛素50和25mg/kg，腹腔注射，两天1次，连续给药28天。在给药过程中，每3天测量一次肿瘤的直径。结果：(1)体外结果显示，桑辛素各组细胞增殖抑制率、抗凋亡基因相对表达量、相对迁移与侵袭能力均明显低于空白组，且桑辛素对细胞的增殖、抗凋亡基因表达量、及迁移侵袭能力具有抑制作用，并且呈现出浓度依赖性;桑辛素促进凋亡基因相对表达量、和细胞的直接凋亡作用。(2)体内结果显示，桑辛素可以显著抑制SAOS2移植瘤，且对裸鼠无明显的不良反应。结论：本研究提示桑辛素具有明显的抑制骨肉瘤作用，具有潜在的临床应用前景。收起

关键词 : 骨肉瘤桑辛素抗肿瘤作用

10. 3种卷柏属药用植物抗肿瘤作用的实验研究

[学位论文] 孙颖桢湖北中医药大学 2008年硕士导师: 陈科力共75页

摘要 : 目的：探索卷柏属3种药用植物中黄酮类化合物的抗肿瘤作用，并阐明其作用机理。方法：体外培养肺癌A549，肝癌Bel-7402和结肠癌HT-29三种人类癌细胞，将卷柏属药用植物的不同提取物作用于癌细胞。(1)通过倒置显微镜对各药物组作用后细胞的形态改... 展开

关键词 : 卷柏属药用物抗肿瘤作用