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1. PPARγ激动剂罗格列酮及GLP02的抗肿瘤作用及机制研究hPPARγ2质粒的构建和高表达细胞模型的建立及生物学功能探讨hPPARγ2单克隆抗体的制备

[学位论文] 李燕北京协和医学院(中国医学科学院) 2006年博士导师: 陈晓光共300页

摘要 : 过氧化酶体激活物增殖受体(peroxisome proliferator-activated receptors，PPARs)属于配体激活的转录因子，目前己发现三种亚型：PPARα、PPAR γ和PPARδ。PPAR γ在脂肪组织中表达较高，在乳腺、结肠、肺、卵巢等其它组织中也有不同程度的表达。研... 展开过氧化酶体激活物增殖受体(peroxisome proliferator-activated receptors，PPARs)属于配体激活的转录因子，目前己发现三种亚型：PPARα、PPAR γ和PPARδ。PPAR γ在脂肪组织中表达较高，在乳腺、结肠、肺、卵巢等其它组织中也有不同程度的表达。研究结果表明PPARγ激活后除了可促进脂肪形成及发挥抗炎作用外，还可抑制肿瘤细胞的增殖、诱导其分化并促进凋亡、对其侵袭转移也有一定的抑制作用。噻唑烷二酮类(thiazolidinediones，TZDs)是一类具有强烈PPAR γ激动活性的化合物，其中以罗格列酮(Rosiglitazone，ROZ)的活性最强，可达纳摩尔水平。GLPO2则为一新合成的化合物，也属于PPAR γ激动剂，由我所合成室郭宗儒教授课题组提供。在该部分研究中，将主要探讨ROZ和GLPO2对结肠癌、乳腺癌和黑色素瘤细胞株的抗肿瘤作用及相关机制。 1．对人结肠癌HT-29细胞的抗肿瘤作用 ROZ和GLPO2均可明显抑制HT-29细胞的生长及集落形成，后者的抑制作用明显强于前者。两者均可抑制HT-29细胞DNA和蛋白质的合成，对后者的抑制尤为显著。 ROZ和GLPO2可减少G1期细胞比例，而增加G2期和S期细胞的比例。HT-29细胞经两化合物处理72h后可出现明显的DNA梯状条带(DNA Ladder)，ROZ处理细胞后，凋亡细胞所占比例明显升高， Western Blot结果显示，ROZ和GLPO2可明显降低抗凋亡蛋白Bcl-2的表达水平。 RT-PCR、Westem Blot和免疫组化的结果显示，ROZ可促进HT-29细胞PPARγ的表达，并呈剂量依赖性；GLPO2在低剂量时即可明显提高PPAR γ的表达，而增加剂量后反而抑制其表达。 ROZ不影响ERK1／2的表达，但可以明显促进p-ERK的表达，推测ROZ可能是通过促进ERK磷酸化而增加PPAR γ磷酸化水平，从而导致PPAR γ活性降低，影响细胞增殖并诱导凋亡。与ROZ不同，GLPO<,2>可明显降低ERK1／2和p-ERK的表达，推测该化合物可能是通过抑制ERK1／2及其磷酸化，而发挥抑制细胞增殖和诱导凋亡的作用。与体外研究结果一致，裸鼠实验结果显示ROZ和GLPO<,2>均可使肿瘤组织发生明显纤维化，抑制裸HT-29异体移植瘤的生长，GLPO<,2>的抑制效果强于ROZ。相关研究报道显示PPARy和类视黄醇x受体(retinoid X receptor，RXR)两者只有在组成异二聚体同时活化时才能充分发挥作用，其中任一受体单独激活都不足以完全抑制肿瘤细胞的增殖。故本研究将PPARy激动剂ROZ与RXR激动剂全反式维甲酸(all-trans retinoic acid，ATRA)同时应用，观察后者是否可增强ROZ对HT-29细胞的抑制作用，以期为结肠癌的治疗提供实验依据。 2．ROZ和ATRA联合应用在人结肠癌HT-29的抗肿瘤作用两者联合应用的结果显示，ATRA可明显增强ROZ对HT-29的生长抑制作用，提高其诱导细胞凋亡的能力。在两者单独使用均不引起细胞凋亡的剂量下联合使用，可使HT-29细胞的凋亡比例达到37.9％和60-6％。单独使用ATRA对Bc1-2的表达无影响，ROZ则可降低Bc1-2的表达，并呈剂量依赖性，两者联合应用后降低HT-29细胞Bc1-2表达的作用显著增强。 ROZ和ATRA单独应用时仅轻微升高HT-29细胞中碱性磷酸酶(alkalinephosphatase，AKP)的活性，而联合使用对AKP活性的影响明显增强。提示两者联合使用可促进HT-29细胞的分化。 HT-29细胞分别经ROZ和ATRA单独作用以及两者联合作用后接种于裸鼠体内，ATRA单独作用后形成的肿瘤其大小与对照组相比无明显差别，ROZ作用后形成的肿瘤体积约为对照组的一半，而两者联合处理后形成的肿瘤明显缩小，仅为对照组的10%左右。 ROZ和ATRA联合作用于HT-29细胞后，其G1期细胞降低的比例较单药更为明显，G2期细胞下降的比例也很明显，而S期的比例则呈上升趋势。 ROZ对ERK的表达没有明显影响，但联合应用ATRA后，ERK的表达明显增加，同时，ROZ还可增加ERK的磷酸化水平，联合应用ATRA后，p-ERK的表达在ROZ低剂量时升高，高剂量时抑制。 3.对乳腺癌的抗肿瘤作用 ROZ和GLP02对MCF-7细胞的生长均有明显地抑制作用，可抑制其DNA的合成，GLP02的作用强于ROZ。ROZ和GLP02可引起少部分细胞发生凋亡，对凋亡相关蛋白Bcl-2的表达也具有一定的降低作用，同样GLP02的作用略强于ROZ。细胞周期分析结果显示，ROZ可以升高G1+G2期细胞比例，同时降低S期细胞的比例。GLP02对G1期细胞比例无明显影响，增加G2期+S期细胞的比例。 ROZ使MCF-7细胞中的PPAR γ表达升高，而GLP02使其剂量依赖性地降低。对蛋白P53的分析结果显示，ROZ和GLP02对P53的表达均有增强作用。两化合物在低于诱导细胞凋亡的剂量下可诱导细胞成衰老样表型，维持细胞衰老状态。体内裸鼠移植瘤实验结果与体外实验结果一致，ROZ可以明显抑制MCF-7裸鼠移植瘤的生长，作用强度与阿霉素相当，而且对裸鼠体重无明显影响。 4.对黑色素瘤的抗肿瘤作用综上所述，ROZ和GLPO2可能是通过诱导分化，促进凋亡以及抗侵袭转移等多种机制而发挥其抗肿瘤作用，该类化合物有望成为新型的抗肿瘤药物。 PPAR γ与肿瘤的关系还未完全清楚阐明，存在着诸多矛盾的结论，究其原因可能是PPAR γ作用范围广泛，作用机制复杂，影响PPAR γ发挥作用的影响因素多，并且受PPAR γ调控的靶基因多且复杂，相互之间亦存在交互作用。乳腺癌与PPAR r的表达尤为密切，因此在本研究中，为了比较PPAR γ在正常细胞与肿瘤细胞之间、在乳腺癌细胞雌激素受体阳性和受体阴性细胞之间作用的联系与差异，初步探讨PPAR γ基因在抗肿瘤作用中的功能及可能的信号传导途径，将hPPAR γ2基因转染入NIH3T3、MCF-7、MDA-MB-231细胞，经过鉴定筛选出稳定高表达的转基因细胞株。研究中发现转入hPPAR γ2基因后，三株细胞中PPAR γ的表达无论在mRNA水平还是在蛋白质水平均明显升高。对于未转入基因的细胞，ROZ均增高原有：PPAR γ的表达，对于转基因的细胞，ROZ同样升高NIH3T3细胞中PPAR γ表达，而降低MDA-MB-231中PPAR γ的表达，对于MCF-7细胞则是低剂量时增高，高剂量时抑制，而这也正与诱导分化的结果一致。 1．NIH3T3细胞与Pγ2-NIH3T3细胞 2.MDA-MB-231细胞与Py2-MDA-MB-231细胞 3．MCF-7细胞与Pγ2-MCF-7细胞综上所述，转入hPPARγ2基因后可使细胞形态改变，致瘤性增强、细胞粘附能力降低，运动功能增强，肿瘤细胞分化能力降低、侵袭转移能力增加，而且hPPARγ2主要影响MAPK通路、一些生长因子的通路(如TGFβ、IGFl、EGFR)以及激素水平和周期凋亡相关的蛋白，反过来，MAPK及其它生长因子及激素也影响hPPARγ2的表达。因此可以认为hPPARγ2基因有可能成为肿瘤治疗和诊断的一个靶点，而其激动剂有望成为治疗肿瘤或者辅助治疗肿瘤的一类新药。首先，利用论文第二部分建立的pMD18-T／hPPARγ2亚克隆扩增出hPPARγ2前1017bp cDNA。利用pET原核表达系统表达了含有hPPAR72前339个氨基酸(C-Histag)融合蛋白，并成功地进行了纯化。其次利用原核表达的重组hPPARγ2蛋白制备了特异性抗hPPARγ2单克隆抗体1B4，3H2，3H10，10D6和10D8。通过ELISA和Western Blot方法对抗体进行了特异性鉴定。证明这5株单抗均为hPPARγ2的特异性抗体。综上所述，这些系统的建立和鼠源抗hPPARγ2单克隆抗体的制备为后续的针对hPPART2抗肿瘤作用及机制研究提供了良好的工具，同时为细胞水平高通量筛选模型的建立奠定了基础，节约了成本。收起

关键词 : 过氧化酶体激活物增殖受体激动剂罗格列酮抗肿瘤作用 hPPAR&gamma 2质粒单克隆抗体

2. 吡格列酮及全反式维甲酸对胃癌SGC-7901细胞株PPARγ基因的影响

[学位论文] 陈亦明温州医学院 2008年硕士导师: 余震共32页

摘要 : 目的：研究过氧化物酶体增殖激活物受体γ(PPARγ)在胃癌SGC-7901细胞株中的表达；观察PPARγ配体吡格列酮(PGZ)及RXR配体全反式维甲酸(ATRA)对胃癌SGC-7901细胞生长以及PPARγmRNA表达的影响，探讨其可能的作用机制。方法：将培养细胞分为空白... 展开目的：研究过氧化物酶体增殖激活物受体γ(PPARγ)在胃癌SGC-7901细胞株中的表达；观察PPARγ配体吡格列酮(PGZ)及RXR配体全反式维甲酸(ATRA)对胃癌SGC-7901细胞生长以及PPARγmRNA表达的影响，探讨其可能的作用机制。方法：将培养细胞分为空白对照组、不同浓度的吡格列酮组(PGZ25、50、100μmol/L)、不同浓度的全反式维甲酸组(ATRA0.1、1、10μmol/L)及两者合用组(PGZ50μmol/L+ATRA10μmol/L)，共八组，分别干预胃癌SGC-7901细胞24、48、72小时，采用CCK-8法观察细胞增殖抑制作用；再分空白对照组、吡格列酮组(PGZ50μmol/L)、全反式维甲酸组(ATRA10μmol/L)及两者合用组(PGZ50μmol/L+ATRA10μmol/L)四组，干预72小时后，采用RT-PCR法扩增PPARγmRNA，对扩增产物进行电泳及图像分析，观测并比较各试验组的表达水平。结果： 1.经药物作用72小时后在倒置显微镜下观察，药物作用后细胞数量明显减少，细胞形态变得不规则，部分细胞漂浮、死亡，细胞质中颗粒、空泡增多，细胞透亮度较差，细胞之间间隙加大，细胞膜边缘毛糙。 2.PPARγ基因在人胃癌SGC-7901细胞株中存在表达。 3.吡格列酮及全反式维甲酸均可显著抑制胃癌SGC-7901细胞增殖，且随药物浓度的增加和作用时间的延长抑制率逐渐增加，呈现浓度和时间依赖性。两者合用较单用一种药物对胃癌SGC-7901细胞抑制效应更明显，差异有统计学意义(P＜0.05)。 4.药物作用72h后胃癌SGC-7901细胞PPARγmRNA表达量吡格列酮组(0.937±0.045)、全反式维甲酸组(0.951±0.051)与两者合用组(0.599±0.041)均低于空白对照组(1.181±0.082)，差异有统计学意义(P＜0.05)；且两者合用组细胞中PPARγmRNA的表达量与吡格列酮组及全反式维甲酸组比较均下降，差异有统计学意义(P＜0.05)。结论：PPARγ基因在人胃癌SGC-7901细胞株中存在表达。吡格列酮及全反式维甲酸可能通过PPARγ途径下调PPARγmRNA表达从而抑制胃癌SGC-7901细胞增殖，提示PPARγ可能是胃癌治疗的一个分子靶点。收起

关键词 : 吡格列酮氧化物酶体增殖激活物受体胃癌细胞增殖

3. PPARγ激动剂吡格列酮抗大鼠肝纤维化的实验研究

[学位论文] 袁光金南华大学 2003年硕士导师: 张明亮共44页

摘要 : 目的:观察吡格列酮抗大鼠肝纤维化的效果并探讨其作用机制.方法:大鼠肝实质损伤性纤维化模型由四氧化碳(CCl<,4>)诱导.40只Sprague-Dawley大鼠被随机分为4组:对照组、模型组及两个治疗组(PⅠ、PⅡ组),每组10只.除对照组外所有大鼠均给予皮下注射40%CCl<,4>,每... 展开

关键词 : 肝纤维化药物治疗过氧化酶体增殖因子活化受体吡格列酮

4. 曲格列酮增加细胞自噬依赖于AMPKα激酶信号通路

[学位论文] 闫金国中国科学院 2009年硕士导师: 姜学军共51页

摘要 : 曲格列酮(TZ)是一种人工合成的过氧化酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)的激动剂,能够诱导很多恶性肿瘤细胞的凋亡,但是它调控自噬的具有机制还不清楚。利用荧光显微镜和电镜,我们观察到曲格列酮刺激诱导原始和表达表皮生长因子受体(EGFR)的猪血管内皮(PA... 展开

关键词 : 过氧化酶体增殖物激活受体&gamma 配体自噬表皮生长因子受体 AMP激活蛋白激酶&alpha

5. STZ大鼠肝胆固醇代谢相关基因mRNA表达变化的研究

[学位论文] 李海丽河北医科大学 2007年硕士导师: 姜玲玲共65页

摘要 : 目的：外周组织转出的胆固醇主要经高密度脂蛋白(HDL)逆向转运至肝脏代谢。HDL前体是由肝细胞合成的，肝细胞中的ATP结合盒转运蛋白Al(ABCA1)表达增加时，HDL 前体也随之增加。HDL前体入血后募集外周组织游离的胆固醇，并在血浆卵磷脂胆固醇脂酰转移酶... 展开目的：外周组织转出的胆固醇主要经高密度脂蛋白(HDL)逆向转运至肝脏代谢。HDL前体是由肝细胞合成的，肝细胞中的ATP结合盒转运蛋白Al(ABCA1)表达增加时，HDL 前体也随之增加。HDL前体入血后募集外周组织游离的胆固醇，并在血浆卵磷脂胆固醇脂酰转移酶(LCAT)作用下生成胆固醇酯，HDL成为成熟的HDL，成熟的HDL又被肝细胞膜上的HDL受体清道夫受体BI(SR-BI)识别结合后，将胆固醇转入肝细胞，发挥其特定的生物功能或转化成胆汁酸，随胆汁排出体外。胆固醇7a羟化酶(CYP7A1)是胆汁酸合成的限速酶，其活性的大小决定了胆汁酸合成的速度。研究报道，糖尿病时血总胆固醇升高，进入肝脏的胆固醇也随之增加，同时CYP7A1酶活性升高。那么，糖尿病肝脏胆固醇的摄入增多是否与肝脏ABCA1和SR-BI基因表达有关呢?糖尿病状态肝CYP7A1酶活性升高是不是因CYP7A1表达增加而引起的呢?未见报道。细胞内脂肪酸代谢主要由过氧化物酶体增殖物激活受体a(PPARa)调节，胆固醇代谢主要由肝X受体a(LXRa)调节。两个核受体对脂肪酸和胆固醇代谢调节存在交互作。糖尿病状态，脂肪动员加强，增高的游离脂肪酸可激活肝PPARa。那么，糖尿病状态PPARa被脂肪酸激活时，肝中LXRa是否也被激活?肝胆固醇相关基因的表达会不会随着LXRa的激活而改变呢?未见报道。非诺贝特是PPARa的人工合成配体，是临床常用的降脂药，它除了通过激活PPARa促进与脂肪酸分解代谢有关的酶基因表达，加强脂肪酸的分解达到降血脂的目的外，也有轻微的降血总胆固醇的作用。糖尿病时它是否通过激活PPARa进而激活LXRa，使其下游基因表达增加，从而调节胆固醇代谢，使血总胆固醇和肝胆固醇水平下降从而改善肝细胞的结构与功能?未见报道。为此，本研究一方面以链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病大鼠为实验对象，通过肝组织形态学直接观察，和血清谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)的测定，确定糖尿病大鼠肝功能损伤的同时，观测糖尿病大鼠肝胆固醇含量；用RT-PCR方法，测定肝组织中PPARa、脂酰CoA氧化酶(ACOX1)以及LXRa、ABCA1、SR-BI、CYP7A1等与胆固醇代谢有关的基因表达情况；另一方面，观察PPARa人工合成的激活配体，降脂药一非诺贝特，对上述各项指标的影响，了解糖尿病肝胆固醇代谢情况，进一步探讨糖尿病肝脏脂代谢紊乱的分子机理，深化对糖尿病脂代谢紊乱的认识。方法： 1、动物分组及取材选用成年200-250g雄性清洁级 Wistar大鼠，随机分为：正常对照组(CON)、糖尿病组(DM)、糖尿病+非诺贝特组(DM+F)、正常对照+非诺贝特组(CON+F)。正常大鼠一次性腹腔注射2％STZ诱导糖尿病发生。CON+F组和DM+F组在糖尿病大鼠模型建立后4周末，分别用生理盐水和非诺贝特连续两周给正常和STZ鼠灌胃(100mg/kg/day)。颈动脉采空腹血，血清用于血糖、血脂、血胆汁酸、血谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)的测定。肝脏用于组织切片、RNA及脂质提取。 2、光镜观察组织病理变化按常规方法将肝组织用甲醛固定、石蜡包埋、切片、HE染色后，光镜观察。 3、肝脏总脂提取参照文献收起

关键词 : 过氧化酶体增殖物活化受体a 肝X受体a ATP结合盒转运蛋白A1 胆固醇糖尿病蛋白表达

6. 曲格列酮改变宫颈癌细胞的自噬

[学位论文] 张蔚中国科学院微生物研究所年硕士导师: 姜学军共43页

摘要 : 自噬是真核细胞中一种依赖于溶酶体的降解胞内长半衰期蛋白及细胞器的过程。程序性细胞死亡(Programmed Cell Death，PCD)是指细胞接受某种信号或受到某些因素刺激后，为了维持内环境稳定而发生的一种主动性消亡过程。目前将程序性细胞死亡分为三类，... 展开

关键词 : 曲格列酮过氧化酶体增殖激活受体宫颈癌细胞自噬细胞程序性死亡药理作用

7. 替米沙坦和瑞舒伐他汀对胰岛素抵抗大鼠骨骼肌AMPKα2、PPARγ表达的影响

[学位论文] 冯畅中国医科大学 2012年硕士导师: 王艳军共43页

摘要 : 目的：测定高糖高脂饮食喂养大鼠及替米沙坦、瑞舒伐他汀干预后大鼠胰岛素抵抗(IR)的情况,观察胰岛素抵抗大鼠骨骼肌中AMPKa2mRNA、PPARγmRNA表达的变化。方法： 4周龄Wistar雄性大鼠50只,随机分为正常对照组15只、高糖高脂组35只,... 展开

关键词 : 胰岛素抵抗过氧化酶体增殖物激活受体&gamma 单磷酸腺苷激活蛋白激酶替米沙坦瑞舒伐他汀

8. 过氧化酶体增殖物激活型受体γ激动剂对动脉粥样硬化兔HDL功能影响及其调控机制探讨

[学位论文] 范永臻南方医科大学 2010年硕士导师: 郭志刚共62页

摘要 : 一．研究背景冠心病等心血管疾病严重危害人类健康，而动脉粥样硬化(atherosclerosis，AS)是其主要病理基础，大量流行病学和临床研究表明，高密度脂蛋白胆固醇(high density lipoprotein cholestero，HDI—C)水平与冠心病(coronary artery dis... 展开一．研究背景冠心病等心血管疾病严重危害人类健康，而动脉粥样硬化(atherosclerosis，AS)是其主要病理基础，大量流行病学和临床研究表明，高密度脂蛋白胆固醇(high density lipoprotein cholestero，HDI—C)水平与冠心病(coronary artery disease，CAD)的发生率及病死率呈负相关，为抗AS和CAD的一个独立因素，目前认为高密度脂蛋白(HDL)的心血管保护作用很大程度上是由于通过HDL受体ATP结合盒转运子Al(ATP—binding cassettetransporter 1，ABCA1)和B族Ⅰ型清道夫受体(Scavenger receptor class B type Ⅰ，SR—BI)介导逆胆固醇转运(reversecholesterol transport，RCT)的功能。在RCT中，HDL介导外周细胞游离胆固醇流出，然后通过血液运输到达肝脏，最终胆固醇经胆汁排泄。逆胆固醇转运是机体排出过多胆固醇的唯一途径，也是目前认为机体内对抗动脉粥样硬化发生的主要机制之一。传统的资料显示HDL—C水平与CAD的发生率及死亡率呈负相关，但最新研究表明HDL—C水平高低并不准确代表HDL的整体功能，HDL抗AS功能主要表现在逆胆固醇转运及抗炎抗氧化功能上。HDL是由不同大小、密度、组分和功能的颗粒组成的一组异质性脂蛋白，应用密度梯度超速离心技术，可将HDL颗粒按其密度大小分为HDL1、HDL2和HDL3三种亚类，血浆中以HDL2和HDL3为主(各占1/3和2/3)，而HDL1含量甚微。HDL3为小的、密度较大、未成熟的颗粒，HDL2为大的、密度较小、成熟的颗粒。这些HDL亚类在促进逆胆固醇转运及抗氧化、抗AS功能上起着各自不同的作用。近年来研究发现罗格列酮作为过氧化物酶增值物激活型受体γ(peroxisomeproliferator—activated receptorγ，PPARγ)激动剂，不论是在糖尿病状态还是在非糖尿病状态均可抑制AS的进展，其中一个重要途径是增加细胞ABCA1表达，上调ABCA1表达显著增加血浆HDL—C水平，同时抑制AS的进展，这些显示ABCA1促进RCT。但就PPARγ激动剂对RCT过程中HDL功能的影响目前尚无系统研究。本研究以RCT起始环节的巨噬细胞ABCA1和SR—BI表达量、巨噬细胞胆固醇流出率及HDL中间转化环节中的HDL亚组份，RCT终环节的肝细胞ABCA1和SR—BI表达量、肝细胞胆固醇流出率为研究对象，探讨PPARγ，激动剂罗格列酮对RCT过程中HDL功能的影响。因此在本研究中，我们以兔AS模型为研究对象，以流式细胞仪观察罗格列酮对肝细胞、巨噬细胞ABCA1及SR—BI蛋白水平表达的影响；以液闪计数仪检测腹腔巨噬细胞及肝细胞对[3H]胆固醇的转出率间接反映RCT水平；利用化学沉淀法测定HDL亚组分(HDL2及HDL3)的浓度；将主动脉常规HE染色进行组织病理学观察，测量其主动脉内中膜厚度(IMT)。以探讨罗格列酮对AS兔模型HDL功能的影响，并深入探讨其抗AS的新机制。二．研究目的以AS兔模型为研究对象，观察肝细胞、腹腔巨噬细胞ABCA1、SR—BI及其[3H]胆固醇转出率、血浆HDL亚组分比例(HDL2/HDL)在AS形成的作用，同时分析在AS状态下PPARγ激动剂罗格列酮对上述指标的影响，从而探讨RCT过程中罗格列酮对HDL功能的影响及抗动脉粥样硬化新机制。三．方法应用随机数字表进行完全随机化的分组将18只健康雄性新西兰白兔(体重2．0±0．11Kg)随机分为3组：①正常对照组(n=6)：给予普通饮食喂养；②动脉粥样硬化(AS)组(n=6)：饲以高脂饲料；③罗格列酮组(n=6)：在饲以高脂饮食基础上给予罗格列酮(0．5mg/kg/d)。12周后取血以酶法测定血脂；利用流式细胞仪检测腹腔巨噬细胞、肝细胞表面ABCA1、SR—BI蛋白表达量；液闪计数仪检测腹腔巨噬细胞、肝细胞[3H]胆固醇转出率；化学沉淀法测定血浆HDL2及HDL3浓度；将主动脉常规HE染色进行组织病理学观察，测量其主动脉内中膜厚度(IMT)。四．结果 1)入组前(0周)正常对照组、AS组、罗格列酮组兔血浆TC(1．85±0．12，1．77±0．15，1．78±0．12)、LDL—C(1．00±0．20，1．00±0．20，0．98±0．14)、HDL—C(0．47±0．12，0．48±0．12，0．464±0．07)、TG(1．04±0．19，1．10±0．14，1．02±0．14)、NHDL—C(1．38±0．14，1．29±0．14，1．31±0．11)，入组前各组动物间血浆TC(P=0．525>0．05，F=0．672)、TG(P=0．665>0．05，F=0．420)、LDL—C(P=0．978>0．05，F=0．023)、HDL—C(P=0．982>0．05，F=0．018)、NHDL—C(P=0．473>0．05，F=0．788)的差异无统计学意义。实验12周后，空白组血清外观清亮，AS组和罗格列酮组血清外观呈不同程度乳白色混浊。与正常对照组相比，AS组血浆血浆HDL—C(1．11±0．09 vs．0．45±0．12，P=0．000<0．01)、NHDL—C(22．15±3．22 vs．1．34±0．10，P=0．000<0．01)水平显著升高，其差异有统计意义；与AS组相比，罗格列酮组血浆HDL—C(1．94±0．30 vs．1．11±0．09，P=0．000<0．01)水平显著升高，NHDL—C(17．84±1．63 vs．22．15±3．22，P=0．041<0．05)显著降低，其差异有统计学意义。 2)12周后各组兔血清HDL亚组分也发生了改变，与正常对照组相比，AS组中的HDL2/HDL显著降低(0．33±±0．03 vs．0．40±0．03，P=0．001<0．01)，其差异有统计学意义；而与AS组比较，罗格列酮组的HDL2/HDL比例显著升高(0．43±0．03vs．0．33±0．03，P=0．000<0．01)，其差异有统计学意义。 3)实验12周时，与正常对照组相比，AS组肝细胞ABCA1(3．25±0．97vs．5．29±1．71，P=0．018<0．05)、腹腔巨噬细胞ABCA1(16．49±4．10 vs．24．93±3．85，p=0．008<0．01)表达均明显降低，AS组肝细胞SR—BI(26．12±5．12 vs．36．13±6．97，P=0．006<0．01)及巨噬细胞SR—BI(10．23±2．04 vs．15．14±1．46，p=0．000<0．01)表达均显著降低，其差异均有统计学意义；与AS组相比，罗格列酮组肝细胞ABCA1(8．50±1．18 vs．3．25+0．97，P=0．000<0．01)、腹腔巨噬细胞ABCA1(44．50±6．19 vs．16．49±4．10，P=0．000<0．01)表达均显著升高，罗格列酮组肝细胞SR—BI(36．59±3．81 vs．26．12±5．12，P=0．005<0．01)及巨噬细胞SR—BI(16．43±1．83vs．10．23±2．04，P=0．000<0．01)蛋白表达显著升高，其差异均有统计学意义。 4)实验12周时，与对照组比较，AS组肝细胞(10．16±2．01 vs．19．48±2．19，P=0．000<0．01)、腹腔巨噬细胞(5．79±0．97 vs．11．45±2．15，P=0．000<0．01)[3H]胆固醇转出率明显降低，其差异有统计学意义；而罗格列酮组腹腔巨噬细胞(12．77±1．87 vs．5．79±0．97，P=0．000<0．01)、肝细胞(22．15±2．17 vs．10．16±2．01，P=0．016<0．05)[3H]胆固醇转出率较AS组显著增加，其差异有统计学意义。 5)光镜下观察各组主动脉见正常对照组血管内膜光滑，连续，内皮细胞完整；AS组血管内膜明显增厚，血管腔明显缩小；罗格列酮组血管内膜虽较正常对照组增厚，但与AS组比较，主动脉内膜增厚的程度明显减轻，与正常对照组相比，AS组主动脉内中膜厚度显著增厚(527．42±85．16．203．21±30．61，P<0．01);与AS组相比，罗格列酮组主动脉内中膜厚度显著下降(291．46±50．18vs．527．42±85．16，P<0．05)。五．结论 1．罗格列酮组明显升高血浆HDL—C水平、明显降低血浆NHDL—C； 2．在非糖尿病AS状态下罗格列酮通过上调腹腔巨噬细胞和肝细胞ABCA1及SR—BI的表达，增加其[3H]胆固醇转出率，同时通过上调HDL2/HDL比例，以共同促进RCT，增加HDL功能，明显减轻主动脉内中膜厚度，抑制AS进展； 3．流行病学研究显示HDL—C水平与AS程度负相关，但本研究显示HDL亚组份及其功能在AS发生、发展中亦发挥重要作用，血浆HDL—C水平不能准确代表HDL整体功能； 4．PPARγ激动剂罗格列酮不仅升高HDL—C水平，而且改善HDL功能。收起

关键词 : 罗格列酮高密度脂蛋白 ATP结合盒转运子A1 B族Ⅰ型清道夫受体过氧化酶体增殖物激活型受体&gamma 动脉粥样硬化

9. PPAR-γ及15-LOX-2在前列腺癌中的表达和意义以及替米沙坦对PC3细胞的影响

[学位论文] 姜庆传苏州大学 2011年硕士导师: 俞建军共48页

摘要 : 第一部分：前列腺癌组织中PPAR-γ以及15-LOX-2的表达及其意义目的：观察过氧化物酶体增殖激活物受体(peroxisome proliferator-actived receptorγ，PPAR-γ)及15-脂氧合酶-2(15-lipoxygenase-2，15-LOX-2)在前列腺癌中的表达，探讨其意义。 ... 展开第一部分：前列腺癌组织中PPAR-γ以及15-LOX-2的表达及其意义目的：观察过氧化物酶体增殖激活物受体(peroxisome proliferator-actived receptorγ，PPAR-γ)及15-脂氧合酶-2(15-lipoxygenase-2，15-LOX-2)在前列腺癌中的表达，探讨其意义。方法：采用免疫组织化学方法检测28例前列腺癌组织中PPAR-γ及15-LOX-2蛋白的表达，取26例前列腺增生组织作为对照。结果：PPAR-γ在前列腺癌中表达阳性率为64.29％(18/28)，在前列腺增生组织中表达阳性率为26.92％(7/26)，PPAR-γ表达阳性在前列腺癌组与在前列腺增生组两组差异有统计学意义(x2=4.84，P<0.05)。15-LOX-2在前列腺癌中表达阳性率为17.86％(5/28)，在前列腺增生组织表达阳性率为76.92％(20/26)，两组差异有统计学意义(x2=9.00，P<0.05)。T3期前列腺癌组织PPAR-γ的表达阳性程度明显高于T2期(H=4.103，P<0.05)；T2期及T3期前列腺癌组织15-LOX-2的表达阳性程度无统计学差异(H=0.076，P>0.05)。Gleason评分≥7分前列腺癌组织PPAR-γ的表达阳性程度明显高于Gleason评分<7分(H=5.306，P<0.05)；Gleason评分≥7分与<7分在前列腺癌组织15-LOX-2的表达阳性程度上无统计学差异(H=0.313，P>0.05)。结论：PPAR-γ蛋白在前列腺癌组织中高表达，并且与病理分期及Gleason评分有关；15-LOX-2在前列腺癌组织中低表达，提示PPAR-γ和15-LOX-2与前列腺癌发生与发展有关。第二部分：PPAR-γ在PC3细胞中的表达以及替米沙坦对PC3细胞的影响目的：研究过氧物酶体增殖因子活化受体(peroxisome proliferators-activatedreceptors-γ，PPAR-γ)在人前列腺癌细胞中的表达以及替米沙坦对前列腺癌细胞系生长的影响。方法：用Westernblot、RT-PCR分别检测激素不敏感型的人前列腺癌细胞系PC3细胞PPAR-γ的表达情况，MTT法及免疫荧光染色等分析替米沙坦对PC3细胞生长的影响。结果：PPAR-γ的蛋白及mRNA在前列腺癌细胞系PC3高表达，MTT显示用药24h后Ⅰ组与Ⅱ组除未加入替米沙坦的其余各孔前列腺癌细胞均出现不同程度增殖抑制。各组剂量0μmol/L、25μmol/L、50μmol/L、100μmol/L比较加入替米沙坦与替米沙坦+PPAR-γ抑制剂GW9662的细胞增殖抑制率无明显差异(F=8.336，P>0.05)；而不论是加入替米沙坦还是替米沙坦+GW9662，细胞增殖抑制率都随替米沙坦浓度增高而上升，各剂量组间抑制率都有明显差异(Ⅰ组F=18.372，P<0.05，Ⅱ组F=25.561，P<0.051。而单独加入替米沙坦100μmol/L作用24h、48h和72h后细胞平均生存率明显呈下降趋势，24h、48h和72h细胞平均生存率分别为29.22％，23.00％及21.29％。24h与48h细胞生存率差异有统计学意义(x2=1.003，P<0.05)；48h与72h细胞生存率差异亦有统计学意义(x2=8.480，P<0.05)。免疫荧光显示经100μmol/L替米沙坦作用24h后PC3细胞发生早期凋亡。结论：替米沙坦可以促进前列腺癌细胞的早期凋亡，使得细胞生存率降低，提示替米沙坦可能成为预防治疗激素不敏感型前列腺癌的新药物。收起

关键词 : 前列腺癌替米沙坦细胞凋亡氧化物酶体增殖激活物受体免疫组织化学

10. PGA1对大鼠局灶性脑缺血的保护作用与其抑制NF-κB、激活PPARγ的关系

[学位论文] 张慧灵苏州大学 2005年博士导师: 顾振纶；秦正红；周文轩；郭次仪共127页

摘要 : 目的:研究前列腺素A1(prostaglandinA1，PGA1)对大鼠永久性局灶性脑缺血的保护作用及其与IKK/IκB/NF-κB/c-Myc信号通路和过氧化酶体增殖剂激活受体γ(peroxisome proliferator-activated receptorγ,PPARγ)的关系。方法:采用线栓法建立大鼠永... 展开目的:研究前列腺素A1(prostaglandinA1，PGA1)对大鼠永久性局灶性脑缺血的保护作用及其与IKK/IκB/NF-κB/c-Myc信号通路和过氧化酶体增殖剂激活受体γ(peroxisome proliferator-activated receptorγ,PPARγ)的关系。方法:采用线栓法建立大鼠永久性大脑中动脉阻塞(permanent middle cerebralartery occlusion，pMCAO)模型。PGA1脑室注射给药，以脑梗塞体积、脑水肿、行为学症状、脑组织形态学变化（光镜）及神经细胞的超微结构改变（电镜）等指标评价PGA1对脑缺血的神经保护作用。采用TUNEL法检测细胞凋亡。Western blot法检测大脑皮层或纹状体NF-κB、IκBα、 IKKα、pIKKα及PPARγ等蛋白水平。免疫组织化学法分析NF-κB的核转位及PPARγ在神经细胞中的表达。RT-PCR测定大脑皮层c-Myc mRNA的表达。应用RNA干扰技术沉默脑组织PPARγ基因。结果:PGA1(16.5-66 nmol)可显著改善pMCAO大鼠行为障碍，减小脑梗死体积，减轻脑水肿和缺血所致的神经细胞损伤(P＜0.05，P＜0.01)。PGA1(16.5-66 nmol)组大鼠大脑皮层缺血区TUNEL阳性细胞显著少于模型组(P＜0.05，P＜0.01)。Western blot及免疫组化结果显示大鼠大脑皮层缺血区NF-κB总蛋白水平和NF-κB的核转位于缺血3小时显著增加，12小时达高峰，24小时开始下降;IκBα蛋白水平于缺血3-6小时下降达高峰，24小时开始回升;IKKα蛋白水平在缺血后各时间点均无明显变化，但pIKKα蛋白水平在缺血后3小时显著增加，随后下降。RT-PCR结果表明大鼠大脑皮层缺血区c-Myc mRNA的表达于缺血3小时开始上调，12小时达高峰，维持24小时。PGA1可显著降低大脑皮层NF-κB总蛋白水平，抑制NF-κB的核转位，升高IκBα蛋白水平，降低plKKα蛋白水平，下调NF-κB的靶基因c-Myc mRNA的表达。PGA1对IKKα蛋白水平无明显影响。免疫组化结果显示缺血3小时在大脑皮层和纹状体细胞的细胞浆，尤其是细胞核出现PPARγ的表达，以后逐渐增多，24小时达高峰。Western blot结果亦证明纹状体PPARγ蛋白的表达于缺血12小时明显增加，24小时达高峰。PGA1可显著上调缺血12小时纹状体PPARγ蛋白的表达。Western blot结果证实大鼠脑室注射PPARγsiRNA可抑制缺血诱导的纹状体PPARγ蛋白的表达。在PPAR1，siRNA处理的大鼠，PGA1对脑缺血的神经保护作用明显减弱。结论:本文首次证实PGA1对缺血性脑损伤具有保护作用;PGA1的神经保护作用可能与抑制IKK/IκB/NF-κB/c-Myc信号转导通路和激活PPARγ有关。IKKα和PPARγ可能是PGA1抗缺血性脑损伤作用的靶点。收起

关键词 : 前列腺素A1 神经保护作用转录因子-&kappa B 过氧化酶体增殖剂激活受体&gamma 信号通路局灶性脑缺血