摘要: 目的：外周组织转出的胆固醇主要经高密度脂蛋白(HDL)逆向转运至肝脏代谢。HDL前体是由肝细胞合成的，肝细胞中的ATP结合盒转运蛋白Al(ABCA1)表达增加时，HDL 前体也随之增加。HDL前体入血后募集外周组织游离的胆固醇，并在血浆卵磷脂胆固醇脂酰转移酶... 展开 目的：外周组织转出的胆固醇主要经高密度脂蛋白(HDL)逆向转运至肝脏代谢。HDL前体是由肝细胞合成的，肝细胞中的ATP结合盒转运蛋白Al(ABCA1)表达增加时，HDL 前体也随之增加。HDL前体入血后募集外周组织游离的胆固醇，并在血浆卵磷脂胆固醇脂酰转移酶(LCAT)作用下生成胆固醇酯，HDL成为成熟的HDL，成熟的HDL又被肝细胞膜上的HDL受体清道夫受体BI(SR-BI)识别结合后，将胆固醇转入肝细胞，发挥其特定的生物功能或转化成胆汁酸，随胆汁排出体外。胆固醇7a羟化酶(CYP7A1)是胆汁酸合成的限速酶，其活性的大小决定了胆汁酸合成的速度。研究报道，糖尿病时血总胆固醇升高，进入肝脏的胆固醇也随之增加，同时CYP7A1酶活性升高。那么，糖尿病肝脏胆固醇的摄入增多是否与肝脏ABCA1和SR-BI基因表达有关呢?糖尿病状态肝CYP7A1酶活性升高是不是因CYP7A1表达增加而引起的呢?未见报道。 细胞内脂肪酸代谢主要由过氧化物酶体增殖物激活受体a(PPARa)调节，胆固醇代谢主要由肝X受体a(LXRa)调节。两个核受体对脂肪酸和胆固醇代谢调节存在交互作。糖尿病状态，脂肪动员加强，增高的游离脂肪酸可激活肝PPARa。那么，糖尿病状态PPARa被脂肪酸激活时，肝中LXRa是否也被激活?肝胆固醇相关基因的表达会不会随着LXRa的激活而改变呢?未见报道。 非诺贝特是PPARa的人工合成配体，是临床常用的降脂药，它除了通过激活PPARa促进与脂肪酸分解代谢有关的酶基因表达，加强脂肪酸的分解达到降血脂的目的外，也有轻微的降血总胆固醇的作用。糖尿病时它是否通过激活PPARa进而激活LXRa，使其下游基因表达增加，从而调节胆固醇代谢，使血总胆固醇和肝胆固醇水平下降从而改善肝细胞的结构与功能?未见报道。 为此，本研究一方面以链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病大鼠为实验对象，通过肝组织形态学直接观察，和血清谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)的测定，确定糖尿病大鼠肝功能损伤的同时，观测糖尿病大鼠肝胆固醇含量；用RT-PCR方法，测定肝组织中PPARa、脂酰CoA氧化酶(ACOX1)以及LXRa、ABCA1、SR-BI、CYP7A1等与胆固醇代谢有关的基因表达情况；另一方面，观察PPARa人工合成的激活配体，降脂药一非诺贝特，对上述各项指标的影响，了解糖尿病肝胆固醇代谢情况，进一步探讨糖尿病肝脏脂代谢紊乱的分子机理，深化对糖尿病脂代谢紊乱的认识。 方法： 1、动物分组及取材选用成年200-250g雄性清洁级 Wistar大鼠，随机分为：正常对照组(CON)、糖尿病组(DM)、糖尿病+非诺贝特组(DM+F)、正常对照+非诺贝特组(CON+F)。正常大鼠一次性腹腔注射2％STZ诱导糖尿病发生。CON+F组和DM+F组在糖尿病大鼠模型建立后4周末，分别用生理盐水和非诺贝特连续两周给正常和STZ鼠灌胃(100mg/kg/day)。颈动脉采空腹血，血清用于血糖、血脂、血胆汁酸、血谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)的测定。肝脏用于组织切片、RNA及脂质提取。 2、光镜观察组织病理变化按常规方法将肝组织用甲醛固定、石蜡包埋、切片、HE染色后，光镜观察。 3、肝脏总脂提取参照文献<'[12]>提取肝脏总脂，用于胆固醇测定。 4、血糖、血脂、血胆汁酸、血ALT、血AST、肝胆固醇的测定上述指标用Olympus Au2700型全自动生化分析仪测定。 5、肝组织有关基因mRNA相对表达量的测定用Trizol法提取总RNA。以GAPDH作为内参，用RT-PCR法测定PPARa、ACOX1、LXRa、ABCA1、SR-BI及CYP7A1mRNA的相对表达量。 结果： 1、正常对照和糖尿病组各项指标变化。 2、糖尿病+非诺贝特组和正常对照+非诺贝特组各项指标变化。 结论： 1、糖尿病时，大鼠肝PPARa的激活伴随LXRa的激活。糖尿病肝脂肪酸代紊乱时，与胆固醇代谢有关的基因表达也出现异常。 2、非诺贝特对糖尿病鼠肝胆固醇代谢相关基因mRNA表达影响不同于正常鼠。在我们实验条件下，它虽然可以降低糖尿病鼠肝胆固醇水平，但不能降低糖尿病鼠血总胆固醇。 收起