中国科学技术信息研究所--国家工程技术数字图书馆

1. 七氟醚、异氟醚对直肠癌患者围术期T淋巴细胞亚群、IL-6、sIL-2R、TNF-a及树突状细胞的影响

[学位论文] 何媛媛河北医科大学 2008年硕士导师: 付建峰;邢玉英共556页

摘要 : 目的：细胞免疫是机体主要的抗肿瘤免疫效应，研究表明吸入麻醉药物能抑制机体的细胞免疫功能，对肿瘤患者的预后产生不利影响。本文旨在探讨七氟醚及异氟醚吸入麻醉对直肠癌患者围手术期T细胞亚群活化、细胞因子IL.6、SIL-2R、TNF-α的分泌及树突状细... 展开目的：细胞免疫是机体主要的抗肿瘤免疫效应，研究表明吸入麻醉药物能抑制机体的细胞免疫功能，对肿瘤患者的预后产生不利影响。本文旨在探讨七氟醚及异氟醚吸入麻醉对直肠癌患者围手术期T细胞亚群活化、细胞因子IL.6、SIL-2R、TNF-α的分泌及树突状细胞(dendritic cells DC)肿瘤抗原提呈功能的影响，从细胞及细胞因子水平上比较七氟醚、异氟醚对直肠癌患者免疫功能的影响，为肿瘤患者临床麻醉的安全实施提供依据。方法：本实验选取直肠癌患者30例，其中男16例，女14例，ASAI～Ⅱ级，年龄45～65岁，TNM分期Ⅰ-Ⅱ期，体重50-77kg随机分2组：七氟醚(SEV组)、异氟醚(ISO组)。患者术前半小时肌注阿托品0.01mg/kg，咪哒唑仑0.05mg/kg，静脉注射芬太尼0.05ug/kg、丙泊酚2mg/kg、维库溴铵0.15mg/kg进行麻醉诱导。插管成功后连接麻醉呼吸机行机械通气，维持呼气末PETCO2于35～45mm：Hg之间。麻醉维持：SEV组：吸入1～2％的七氟醚，ISO组：吸入1～1.5％异氟醚；两组均辅以靶控持续泵入瑞芬太尼1.6ng/kg,静注维库溴铵0.1mg/kg/h，保持BIS值40～60。两组分别于麻醉前(T0)、手术开始后1h(T1)、手术结束后(T2)、术后24h(T3)、术后72h(T4)采外周静脉血5ml测定CD3+T淋巴细胞、CD4+T淋巴细胞、CD8+T淋巴细胞血清中白介素6(IL-6)、可溶性白介素2(sIL-2R)、肿瘤坏死因子(TNF-α)的浓度，细胞因子均采用放射酶联免疫吸附法(ELISA)测量。两组于T0、T2、T3采血20ml测定外周血单个核细胞(PBMC)来源树突状细胞CD80和CD86的变化。结果： 1.两组患者CD3+T淋巴细胞、CD4+T淋巴细胞、CD8+T淋巴细胞的变化。组内比较： SEV组T淋巴细胞亚群在各时间点较T0无显著变化(P＞0.05)ISO组CD3+T淋巴细胞在T1时间点较TO时间点显著下降(P＜0.05)，CD4+T淋巴细胞、CD8+T淋巴细胞则较T0无显著性变化(P＞0.05)；ISO组CD3+T淋巴细胞CD4+T淋巴细胞、CD8+T淋巴细胞在其余各时间点较TO无显著变化。(P＞0.05)。组间比较：两组患者T淋巴细胞亚群各指标在T0时间点无明显差异(P＞0.05)；在T1时间点ISO组CD3+T淋巴细胞低于SEV组(P＜0.05)。 2两组患者血清IL-6浓度的变化组内比较： SEV组及ISO组血清IL-6浓度的变化在T1、T2时间点与T0时间点相比较均有显著的升高(P＜0.05)，在T3及T4时间点逐渐下降至T0水平。组间比较：在T2时间点SEV组血清IL-6浓度低于ISO组(P＜0.05)。 3两组患者血清TNF-α浓度的变化组内比较： SEV组及ISO组在T1时间点与T0时间点比较血清中的TNF-α无明显差异(P＞0.05)，SEV组血清中的TNF-α在T2、T3、T4时间点较T0明显升高(P＜0.05)。ISO组血清中的TNF-α在T2时间点较TO无显著变化(P＞0.05)，在T3、T4时间点较TO升高(P＜0.05)。组间比较：在T2时间点SEV组TNF-α浓度高于ISO组(P＜0.05)，两组其它时间点TNF-α无显著差异(P＞0.05)。 4两组患者血清sIL-2R含量的变化组内比较： SEV组及ISO组血清sIL-2R水平在T0、T1及T2时间点无显著变化(P＞0.05)。sIL-2R在T3时间点与T0比较无明显变化(P＞0.05)。在T4时间点SEV组及ISO组均明显低于T0(P＜0.05)。组间比较：两组在各时间点无明显差异(P＞0.05)。 5外周血单个核细胞(PBMC)来源树突状细胞CD80和CD86的变化。组内比较： ISO组及SEV组CD80表达率在T2和T3时间点较T0时间点降低(P＜0.05)。ISO组及SEV组CD86表达率在T2和T3时间点较T0时间点无明显差异(P＞0.05)。组间比较：两组间CD80、CD86表达率在各时间点无明显差异(P＞0.05)。结论： 1.七氟醚对T淋巴细胞亚群的活性无明显的影响，异氟醚对CD3+T淋巴细胞存在抑制作用，在术毕即开始恢复，术后24h恢复至术前水平。 2.七氟醚较异氟醚能更好的抑制手术中直肠癌根治术患者血清细胞因子IL-6的分泌、对TNF-α的抑制作用较异氟醚更小而且短暂。对肿瘤患者的免疫功能的恢复具有积极意义. 3.七氟醚、异氟醚对外周血来源DC细胞CD80分子的表达存在抑制作用，但两种药物对CD86分子表达均无影响. 4.七氟醚在细胞和细胞因子水平上对肿瘤患者的细胞免疫功能的影响较异氟醚更小，在肿瘤患者的麻醉选择上更具有优势。收起

关键词 : 七氟醚异氟醚吸入麻醉直肠癌围手手术期 T淋巴细胞亚群 IL-6 sIL-2R NF-a 树突状细胞

2. 东北红豆杉、飞机草的化学成分研究及土木香中活性成分的微生物转化研究

[学位论文] 张嫚丽河北医科大学 2010年博士导师: 史清文共391页

摘要 : 第一部分东北红豆杉针叶的化学成分研究目的：以东北红豆杉（Taxuscuspidata）可再生针叶为研究对象，利用现代分离手段对其化学成分，尤其是紫杉烷类化学成分进行系统研究，并采用波谱学及光谱学方法，包括：1H-NMR、13C-NMR、1H-1HCOSY、HMQC... 展开第一部分东北红豆杉针叶的化学成分研究目的：以东北红豆杉（Taxuscuspidata）可再生针叶为研究对象，利用现代分离手段对其化学成分，尤其是紫杉烷类化学成分进行系统研究，并采用波谱学及光谱学方法，包括：1H-NMR、13C-NMR、1H-1HCOSY、HMQC、HMBC、NOESY、UV、IR、MS等对分离得到的单体化合物进行平面结构和立体结构的鉴定，为寻找新的抗癌活性先导化合物或药物奠定基础。方法：取干燥后的东北红豆杉针叶约3.2Kg，用95％的乙醇冷浸提取，浓缩后得到总提物。将总提物分散于蒸馏水中，石油醚脱脂后用乙酸乙酯进行萃取，得到乙酸乙酯部位。依次用5％HCl水溶液、5％Na2CO3水溶液对乙酸乙酯部位进行萃取，得到东北红豆杉针叶的碱性部位约4.2g、酚性部位约3.4g、中性部位约82g。采用硅胶柱色谱法、葡聚糖凝胶SephadexLH-20、制备薄层色谱法和制备高效液相色谱法对以上三个部位的化学成分进行分离，得到的单体化合物利用薄层色谱法及高效液相色谱法进行纯度检识。单体化合物采用UV、IR、MS、1H-NMR、13C-NMR、1H-1HCOSY、HMQC、HMBC、NOESY等光谱学和波谱学方法进行化学结构的鉴定。结果：从东北红豆杉针叶中分离并鉴定了41个化合物，包括：37个紫杉烷类化合物，2个木脂素类化合物，1个倍半萜类化合物和1个苯丙素类化合物。结论：本研究对东北红豆杉（Taxuscuspidata）可再生针叶的化学成分进行了系统研究，采用的按碱性成分、酚性成分及中性成分进行分离的方法适用于本植物的成分分离。第二部分飞机草化学成分研究目的：本课题以飞机草全草为研究对象，对其化学成进行全面系统的研究，运用1H-NMR、13C-NMR、1H-1HCOSY、HMQC、HMBC、NOESY、UV、IR、MS等波谱学及光谱学方法对得到的单体化合物进行平面结构和立体结构的鉴定，通过活性筛选寻找到该植物中的活性成分，为其开发与利用提供科学依据。方法：取粉碎后的飞机草药材19Kg，用95%乙醇回流提取，得浸膏约1800g。将浸膏分散于蒸馏水中，依次用石油醚、二氯甲烷和乙酸乙酯进行萃取，减压浓缩后分别得到石油醚部位29.5g、二氯甲烷部位101.2g和乙酸乙酯部位40g。采用硅胶柱色谱法、葡聚糖凝胶SephadexLH-20、制备薄层色谱法对以上三个部位的化学成分进行分离，得到单体化合物。采用UV、IR、MS、1H-NMR、13C-NMR、1H-1HCOSY、HMQC、HMBC、NOESY等光谱学和波谱学方法对各单体化合物进行化学结构的鉴定。对飞机草中分得的16个化合物进行了9株人肿瘤细胞增殖抑制活性测试，以及对PPARγ和肝X受体激动活性的测试。结果：从飞机草中分离得到35个单体化合物，对其中的28个化合物进行了结构鉴定，包括：8个黄酮类化合物，8个木脂素类化合物，7个醌类化合物，2个甾醇类化合物、1个酰胺醇酯类化合物、1个长链有机酸和1个萘醌衍生物。结论：从飞机草中分离并鉴定了28个化合物，其中自然界中首次发现的新化合物5个，分别为：1，2-亚甲二氧基-6-甲基蒽醌（6）、EO-12（12）、1，2，4-三甲氧基-3-羟基-6-甲基蒽醌（13）、1，2-二甲氧基-3-羟基-6-甲基蒽醌（14）、5，7-二甲氧基松脂素（29）；该植物中首次发现的化合物16个，分别为：化合物3、4、9、10、16、20、23、24、25、27、28、30、31、32、33、34。首次发现1，2-二甲氧基-3-羟基-6-甲基蒽醌（14）对人非小细胞肺肿瘤细胞（PC-6）具有增值抑制活性，其IC50为15.56μg/mL；首次发现飞机草素（1）对PPARγ具有较强的激动活性，其EC50为1.10μg/mL。第三部分土木香中活性成分的微生物转化研究微生物转化，即指外源性化学物或称底物在微生物体内经过多种酶催化的代谢转化过程。在天然药物化学研究中可用于进行活性化合物的结构修饰，丰富其化学结构，从中寻找到活性更好或副作用更小的先导化合物，继而进行新药的开发。另外，还可以通过体外生物反应过程模拟药物在人体内的代谢行为，获得一定量的代谢产物用于药物的体内代谢研究。异土木香内酯（Isoalantolactone）属桉烷型倍半萜内酯类化合物，为菊科旋覆花属植物土木香（InulaheleniumL）的主要成分，本课题对收集自河北、内蒙、河南、四川等地的十余批次的土木香进行的含量测定结果表明，异土木香内酯的含量高达1.2～5.6％。药理学研究表明异土木香内酯具有较强的驱虫、抗原虫、抗菌等活性，具有开发为药物的潜力。本研究以异土木香内酯为研究对象，对其进行微生物转化的研究，为这一资源丰富、活性较好的单体化合物的开发利用做基础研究。目的：利用真菌对异土木香内酯进行生物转化研究，以期得到新的异土木香内酯衍生物或活性更强、毒性更小的化合物用于该单体的药物研发。同时模拟异土木香内酯在哺乳动物体内的代谢，为研究该单体在体内代谢，阐明其在体内发挥药效作用的物质基础提供基础研究。方法：取粉碎后的土木香根5Kg用99%乙醇冷提，所得浸膏分别用石油醚、二氯甲烷进行萃取，采用硅胶柱色谱法和硝酸银硅胶柱色谱法制备得到异土木香内酯单体。以异土木香内酯为底物，对47株真菌进行筛选，选择转化率较高、转化多样性较好的真菌进行放大培养，培养结束后减压滤取发酵液，用乙酸乙酯进行萃取，经硅胶柱色谱分离得到转化产物，并通过MS、1H-NMR、13C-NMR、1H-1HCOSY、HMBC、HMQC等方法对转化产物进行结构鉴定。结果：从土木香根中分离得到包括异土木香内酯在内的5个单体化合物，分别鉴定为土木香内酯（1a）、异土木香内酯（1b）、β-谷甾醇（2）、5α-环氧土木香内酯（3）和双咖啡酸酯（4）。从47株真菌中筛选出2株真菌可对底物异土木香内酯进行生物转化，即刺囊毛霉AS3.3450和黑曲霉AS3.1858。选择转化多样性较好且转化效率较高的AS3.3450进行放大培养，得到3个转化产物，分别鉴定为：3α-羟基异土木香内酯（Z-1a）、3α-羟基-11，13-二氢异土木香内酯（Z-1b）和2α-羟基异土木香内酯（Z-2）。结论：从土木香根中分离得到5个单体化合物，均为该植物中的已知化学成分；硝酸银硅胶柱色谱法对于分离土木香内酯和异土木香内酯这对结构相似的同分异构体具有较好的分离效果；通过刺囊毛霉AS3.3450对异土木香内酯进行生物转化得到的3个转化产物均为已知化合物。第四部分土木香药材HPLC指纹图谱研究及含量测定目的：建立土木香药材的指纹图谱，测定其主要成分土木香内酯和异土木香内酯的含量，为土木香药材的鉴别及质量控制提供依据。方法：指纹图谱研究的色谱条件：HICHROMC18（250mm×4.6mm，5.0μm），流动相为乙腈-0.1％甲酸水溶液梯度洗脱，流速1.0mL/min，柱温：25℃，检测波长254nm；含量测定的色谱条件：HICHROMC18（250mm×4.6mm，5.0μm），流动相为乙腈-0.1％甲酸溶液梯度洗脱（0～3min，乙腈65％等度洗脱；3～10min乙腈由65％线性梯度至55％；10～15min乙腈55％等度洗脱），运行时间15min。流速1.0mL/min，柱温：25℃，检测波长220nm。结果：1.采用HPLC-DAD法建立了土木香药材的指纹图谱，精密度试验：各共有峰相对保留时间和相对峰面积的RSD均小于0.2％和1.7％；重复性试验：各共有峰相对保留时间和相对峰面积的RSD均小于0.2％和2.8％；稳定性试验：各共有峰相对保留时间和相对峰面积的RSD均小于1.4％和1.8％。15批土木香药材的相似度在0.848～0.989之间。2.采用HPLC法建立了土木香内酯及异土木香内酯的含量测定方法，线性范围：土木香内酯0.571～2.86μg·L-1，异土木香内酯0.325～1.62μg·L-1；精密度试验：RSD分别为0.46％和1.13％；重复性试验：RSD分别为1.68％和0.85％；回收率试验：土木香内酯和异土木香内酯的平均回收率分别为98.5％和99.4％，RSD分别为1.37和1.00（n=6）；样品在24h之内稳定。15批土木香及土木香对照药材的土木香内酯含量在6.66～48.00mg/g之间，异土木香内酯含量在12.64～55.67mg/g之间。结论：本研究方法稳定可靠，重复性和精密度良好，可作为土木香药材的指纹图谱及含量测定的方法。首次建立了土木香药材的HPLC指纹特征图谱，建立了河北产土木香药材指纹图谱的共有模式，同时测定了两个主成分土木香内酯和异土木香内酯的含量，为该药材的质量控制提供了更为可靠和准确的方法。收起

关键词 : 东北红豆杉飞机草土木香提取分离结构鉴定活性筛选微生物转化指纹图谱

3. 轮奸案混合DNA分析的关键技术基础研究及分离软件研发

[学位论文] 胡娜河北医科大学 2014年博士导师: 丛斌共354页

摘要 : 混合DNA(mixed DNA，DNA mixture)包含多名来源个体的DNA信息，如何对混合斑生物检材DNA进行正确分型检验并对其结果进行科学解释是法医DNA鉴定领域中亟待解决的理论技术难题。本研究通过构建批量轮奸案混合DNA的实验模型，将通过科学性验证的实验数据... 展开混合DNA(mixed DNA，DNA mixture)包含多名来源个体的DNA信息，如何对混合斑生物检材DNA进行正确分型检验并对其结果进行科学解释是法医DNA鉴定领域中亟待解决的理论技术难题。本研究通过构建批量轮奸案混合DNA的实验模型，将通过科学性验证的实验数据用于混合DNA的参数评估和约束性条件的挖掘;进而构建基于STR分型数据的混合DNA分离模型，并将分离模型与国外的数学模型（如:mixsepsoftware package）进行比较分析;将构建的混合DNA分离模型进行软件转化，并通过模拟混合DNA分型数据完成研发软件的效能分析和应用验证;从而为DNA鉴定人员解决轮奸案混合DNA的个人识别提供初步的自动化专家系统。本研究构建的方法和模型不受混合样本的来源种类（如:混合精斑、混合血痕、混合脱落上皮细胞等）限制，故对不同案件类型的混合DNA均适用。第一部分、构建轮奸案混合DNA的实验模型目的:以两男混合DNA和三人混合DNA（1男+1男+1女）模拟轮奸案的混合DNA作为研究对象;利用ABI7500实时荧光定量仪构建模拟混合样本，包括不同来源个体和不同混合梯度的样本制备;将通过科学性验证的实验数据用于混合DNA分析的参数评估以及分离模型的研发。方法:将来自河北省血液中心的50份人全血样本提取DNA并进行ABI7500实时荧光定量，以DNA浓度非常接近为标准对单一DNA原液进行归类，作为构建模拟两男混合DNA和三人混合DNA的来源样本，确保通过调整DNA溶液的体积能够实现不同混合梯度的制备。为避免后续构建分离模型时由于样本类型过于单一且样本量不足而导致模型出现“过度拟合”，故需构建不同来源个体多种类型的模拟混合DNA，且各混合DNA均包含多个混合梯度，以确保客观地反映混合DNA分型和混合比例(mixture proportion，Mx)对后续分析的影响;另外，需将模拟混合DNA原液的浓度调整至理想浓度范围0.5-1.25 ng/μl内，以满足DNA检测试剂盒对模板量的要求。随后，将实测Mx与理论Mx间的误差D值和 mixsep软件包估算的Mx值(alpha)作为实验模型的科学性验证指标，通过数据挖掘和统计分析以评估构建实验模型的数据质量。结果:以DNA浓度相差不超过0.5 ng/μl为归类标准，其中符合两男混合DNA标准的单一DNA样本有22个，可构建11组;符合三人混合DNA标准的单一DNA样本有12个，可构建4组。两男混合DNA的Mx在95％的可信区间中PCR扩增前后的偏差D≤0.1，波动较小，说明构建两男混合DNA实验模型的数据质量较好，为后续混合DNA分型的准确分离提供了较好的数据基础;三人混合DNA没有通用的D值计算公式，故不予评估。两男混合DNA Identifiler(简称ID)分型中实测alpha值的均方根标准误(root mean square error, RMSE)值较大的数据在11组样本中散在出现;除了梯度1∶1的RMSE＞0.02，其余8个梯度的RMSE均位于0.01-0.02之间。即:本实验构建的两男混合DNA ID分型相应的实测Mx与理论Mx之间的RMSE值不超过0.02（除梯度1∶1），该实验模型能够为科学合理的进行混合DNA分析提供良好的数据基础。三人混合DNAID分型由于出现很多等位基因drop-out，mixsep软件无法保证准确评估alpha值，故不予评估。两男混合DNA Yfiler分型中实测alpha值的RMSE值较大的数据在11组样本中散在出现;除了梯度1∶3和1∶4的RMSE偏大＞0.02但＜0.3，其余梯度的RMSE均位于0.01-0.02之间。即:本实验构建的两男混合DNAYfiler分型相应的实测Mx与理论Mx之间的RMSE值不超过0.03，Yfiler分型数据仅作为补充基础。结论:结合ABI7500实时荧光定量仪和实验模型的科学性验证，该部分建立了模拟轮奸案混合DNA的297个两男混合DNA和264个三人混合DNA（其中三人混合DNA存在很多等位基因drop-out现象），这些模型除了用于构建混合DNA分离模型及分析软件的研发之外，297个模拟两男混合DNA的ID分型还要为混合DNA相关参数（如:等位基因平均峰高/面积、混合比例、杂合型均衡比、等位基因缺失、基因座间平衡等）的评估分析及规律性挖掘提供数据支持。第二部分、两男混合DNA的参数评估及mixsep软件验证目的:对混合DNA的参数进行评估和分析，观察各参数之间的相关关系，以明晰混合DNA分析的约束性条件并挖掘其规律性;并通过模拟混合DNA分型数据对mixsep软件进行应用验证，明确该软件的优缺点，取长补短，为混合DNA分离模型的研发提供参照和效能比较对象。方法:峰高(PH)与峰面积(PA)两参数间的相关分析选择广义可加模型拟合法进行曲线拟合，以及最小二乘回归分析计算回归系数，观察两种定量信息在混合DNA分析中的效能是否有差异。平均峰高(APH)与杂合型均衡比(Hb)两参数间的相关分析，选择局部加权回归和Kruskal-Wallis秩和检验等，这些方法适用于非正态分布的数据，可分析16个STR基因座和9个混合梯度相应的Hb分布趋势及规律。通过不同channel荧光敏感度对APH的影响和基因座间平衡(Inter-locus balance，Ci)参数对混合DNA分型中各channel对应的STR基因座进行荧光敏感度差异分析，证明各STR基因座在混合DNA分析中的效能是否有差异，并通过Tukey's Honestly显著性差异法进行多重检验。该部分所有统计图均由R软件（版本3.0.1）的ggplot2（版本0.9.3）程序包绘制完成。结果: 1.PH与PA相关分析:16个STR基因座中，除基因座D19S433、D3S1358、D58S18和D8S1179的PH与PA呈良好线性关系外，其余12个基因座的PH与PA呈高度线性关系，这与Tvedebrink的研究结论基本一致。即:PH与PA具有良好线性关系，两种定量信息在混合DNA分析中均可使用，分析效能差别不大。 2.APH与Hb相关分析:通过Kruskal-Wallis秩和检验，各基因座Hb分布的检验p值=0.0063＜显著性水平0.05，说明各基因座的Hb分布有统计学差异;另外，各混合梯度Hb分布的检验p值=0.02257＜0.05，说明各混合梯度的Hb分布也存在统计学差异。即:参数Hb会受到STR基因座和混合梯度两个因素的共同影响。当APH＜1250 rfu时，Hb值明显增大;当APH≥1250 rfu时，Hb值基本稳定，APH≥1250 rfu时相应的Hb均值为0.878。结合本实验数据，APH＜2500 rfu且Hb＞0.6阈值的数据达到92.74％。基因座CSF1PO、D19S433、D21S11、D2S1338和vWA中，相应Hb值和APH均较高的数据比其它基因座多;当混合梯度的不平衡性增加（从1∶5到1∶9）时，Hb值和APH均较低的数据会增多。 3.APH与drop-out相关分析:当混合梯度比较均衡（1∶1到1∶3）时，等位基因drop-out（简称ADO）的个数较少;而当梯度非常不均衡(1∶7到1∶9)时，ADO个数陡增，即:ADO个数与混合梯度相关;随着ADO个数的增多，相应的样本APH逐渐降低。 4.荧光敏感度对APH的影响:为检验不同荧光敏感度的四种channel（蓝色、绿色、黄色和红色）间APH均值是否有统计学差异，利用基于Tukey's Honest Significant Difference方法进行多重检验，蓝色与绿色channel间的荧光敏感度无差异（p值=0.446）;同时，黄色与红色channel间的荧光敏感度也无差异（p值=0.530）;其余蓝色与黄色组、蓝色与红色组、绿色与黄色组、绿色与红色组共4组对应的APH检验p值均=3.95E-08远小于0.05，即:“蓝色和绿色”的两种荧光与“黄色和红色”的两种荧光相比有显著性差异。也就是说，ABI3130xl基因分析仪对“蓝色和绿色”荧光的敏感度确实高于其它两种荧光。蓝色channel中基因座D8S1179的APH中位数最高;绿色channel中基困座D3S1358、TH01和D13S317的APH中位数高于其它;黄色和红色channel中基因座D18S51和FGA的APH中位数最低;这些恰与ABIIdentifler试剂盒中STR基因座的片段分子量大小排列相吻合，即:分子量较小的基因座D8S1179、D21S11、D3S1358、TH01、D13S317、D19S433、vWA、Amel-和D5S818对应的APH中位数均较高。也就是说，APH会受到基因分析仪的荧光敏感度和STR基因座分子量两个因素的共同影响。 5.基因座间平衡(Ci)参数分析:Ci的均值、中位数与ADO个数间的Pearson相关系数R2分别为-0.7179和-0.7065，检验p值分别为1.736E-3＜0.05和2.215E-3＜0.05，具有显著性差异，即:Ci的均值、中位数与ADO个数呈显著负相关;Ci中位数最高的是基因座D8S1179。 16个STR基因座Ci值的分布规律同基因分析仪对四种channel的荧光敏感度差异规律基本一致，即:ABI3130xl对蓝色和绿色channel的荧光敏感度偏高，对应8个基因座D8S1179、D21S11、CSF1PO、D3S1358、TH01、D13S317、D16S539和D2S1338(D7S820例外)Ci值的整体水平偏高;而对黄色和红色channel的荧光敏感度偏低，对应6个基因座D19S433、vWA、TPOX、D18S51、AMEL-和FGA（D5S818例外）Ci值的整体水平偏低。 6.mixsep横向分析:混合梯度与基因座分离准确率进行相关分析，得到相关系数R2=-0.7121，检验p值=0.03139＜0.05，两者呈线性负相关;另外，混合梯度与ADO个数也进行相关分析，得到R2=-0.4244，检验p值=0.2549＞0.05，说明两者无明显相关性;梯度1∶1的准确率最低，随着混合梯度不平衡性的增加，相应的准确率呈先提高后降低的趋势，其中梯度1∶2、1∶3和1∶4的准确率较高,梯度1∶1和1∶9的准确率较低且波动较大;去除ADO后的分离准确率比未去除时的稍高，说明等位基因发生drop-out会降低mixsep软件的分析效能。 7.mixsep纵向分析:基因座D5S818、D8S1179和FGA的准确率较高＞88％，而基因座D19S433、D2S1338和D7S820的准确率偏低≤80％;基因座AMEL-、D5S818和D8S1179的ADO个数最少，而基因座D18S51、D19S433、FGA、TPOX和vWA的ADO个数较多＞15个，后者5个基因座均位于黄色和红色channel且基因座APH均较低，这与ABI3130xl基因分析仪对黄色和红色荧光敏感度偏低的规律相一致。当梯度为1∶1时，除了基因座AMEL-和D3S1358外，其它基因座的准确率均≤70％，箱线图下方区域的离群点即为该梯度的数据;当梯度为1∶2、1∶3、1∶4和1∶5时,各基因座的准确率均较高，尤以梯度1∶3的各基因座准确率均最高≥90％;当梯度为1∶8和1∶9时，基因座分离准确率波动较大且平均水平较低。结论:结合DNA分型的APH信息、STR基因座和混合梯度分别对参数Hb、等位基因drop-out、荧光敏感度和参数Ci等多个因素进行相关分析以及对mixsep软件进行效能分析，本研究认为:针对ABI ID试剂盒的16个STR基因座，在混合DNA的基因型分离过程中，如果该分型的APH大于1 收起

关键词 : 轮奸案混合DNA分析法医鉴定分离软件研发专家系统

4. 我国医学院校医学人文教育教学现状及改进研究

[学位论文] 柳云河北医科大学 2022年博士导师: 边林共345页

摘要 : 本论文以“我国医学院校医学人文教育教学现状及改进”为研究主题。从问题来源看，这一主题是现代医学教育改革的重要论题；也是中国医学人文教育发展的重要议题；还是医学人文教育实践的重要课题。该主题研究主要基于三方面的背景，一是现代医学科学... 展开本论文以“我国医学院校医学人文教育教学现状及改进”为研究主题。从问题来源看，这一主题是现代医学教育改革的重要论题；也是中国医学人文教育发展的重要议题；还是医学人文教育实践的重要课题。该主题研究主要基于三方面的背景，一是现代医学科学与人文一体化发展趋势所构成的科学背景；二是医学人文学科所呈现出的群化形态及整体性发展趋势所构成的学科背景；三是社会医学化和医学社会化发展态势，要求医学人才培养目标随之变化所构成的社会背景。论文研究的主要目的是对我国40多年来的医学人文学科教育和教学现状进行科学评估，肯定成绩，发现问题，通过设计课程模型等方式，推动这一领域的有效改进。论文的结构框架主要包括绪论、结语和正文六章。绪论主要是阐明本论文的一些基本问题，主要包括问题来源、研究背景、研究目的、研究意义、研究方法和思路以及国内外相关研究成果的综述；正文由六章构成。第一章主要是基本概念界定和基本理论概述。该章构成整个研究的认识前提和理论原则。第二章考察了医学人文与医学教育关系史。论文设置这一章的原因，一是论文研究秉持逻辑与历史相统一的哲学认识方法，为实证调查研究和质性分析研究提供逻辑与历史一致性的根据；二是论文研究坚持理论与实践相统一的基本原则，坚持理论指导实践和理论检验的实践标准。第三章是以河北省6所医学院校临床医学等专业大三至大五年级本科生和31家规范化培训基地的住院医师为调查对象，对河北省高等医学院校医学人文学科课程与教学现状进行量化研究，运用SPSS21.0软件对数据进行整理分析，目的是通过对河北省医学人文教育教学现状的研究，对我国该领域现状做出判断和评价。第四章主要是对71所高校的临床医学专业本科人才培养方案的文本材料进行研究。主要按照培养目标、培养要求和课程设置三个核心要素进行质性和量化研究。质性研究主要运用文本分析法和扎根理论研究方法，借助Nvivo12.0软件进行分析。量化研究主要运用Excel2016软件进行分析。通过医学人文教育教学元素在培养方案中的呈现状况，对培养方案的科学性和合理性进行评估，以期实现培养方案在设计上达到医学专业和医学人文教学的相对平衡。第五章是基于前期调查研究和质性分析结论，对我国医学人文学科的教育教学现状进行总体评价，充分肯定40年来发展取得的成就，明确提出存在的主要和关键问题。第六章通过“三位一体（以学生为中心、人文胜任力导向、知行合一）”教育理念的建构和教学原则的确立，构建了体现“三位一体”教育理念的课程模块和教学体系。结语对论文进行了概括性的总结。收起

关键词 : 高等医学院校医学人文教育课程建设教学改革

5. 人牙龈成纤维细胞构建组织工程化血管的实验研究

[学位论文] 刘旭倩河北医科大学 2016年博士导师: 王洁共287页

摘要 : 第一部分人牙龈成纤维细胞诱导分化为血管内皮细胞的研究目的：体外分离培养人牙龈成纤维细胞（human gingival fibroblasts，HGFs）诱导分化为血管内皮细胞（vascular endothelial cell，VEC）。探讨人牙龈成纤维细胞（HGFs）在体外分化... 展开第一部分人牙龈成纤维细胞诱导分化为血管内皮细胞的研究目的：体外分离培养人牙龈成纤维细胞（human gingival fibroblasts，HGFs）诱导分化为血管内皮细胞（vascular endothelial cell，VEC）。探讨人牙龈成纤维细胞（HGFs）在体外分化为血管内皮细胞（VEC）的潜能。方法： 1牙龈组织的获取和分离正常人牙龈组织取自河北医科大学口腔医院口腔颌面外科，患者下颌阻生齿拔除术。牙龈组织手术切取后带回实验室，在无菌条件下分离牙龈上皮及结缔组织，留取牙龈结缔组织进行细胞培养。 2人牙龈成纤维细胞（HGFs）的培养培养液选用含15%胎牛血清的L-DMEM。牙龈结缔组织剪成1 mm×1 mm的组织块，进行原代培养。培养的细胞达到80%融合后，进行细胞传代培养。 3人牙龈成纤维细胞（HGFs）的鉴定 3.1流式细胞仪检测人牙龈成纤维细胞（ HGFs），选择波形蛋白（vimentin）抗体和CD31抗体鉴定成纤维细胞和血管内皮细胞。 3.2人牙龈成纤维细胞（HGFs）的RT-PCR鉴定 TRIzol法提取成纤维细胞的总RNA；以分光光度计测定细胞总 RNA的纯度及浓度；应用反转录试剂盒RevertAid? First Strand cDNA Synthesis Kit合成第一链cDNA；以适量反转录所得的cDNA为模版，在TaqDNA聚合酶催化下进行PCR扩增；将PCR产物在2%琼脂糖凝胶中进行电泳，然后置于凝胶图像分析系统进行吸光度扫描，以GAPDH作为内参照校正，用目的基因的吸光度与GAPDH吸光度的比值代表目的基因的相对表达含量。 3.3人牙龈成纤维细胞（HGFs）免疫细胞化学染色采用鼠抗人vimentin单克隆抗体、鼠抗人III型胶原单克隆抗体，通过免疫细胞化学染色法检测vimentin蛋白和III型胶原蛋白在人牙龈成纤维细胞中的表达与分布。 3.4人牙龈成纤维细胞（HGFs）免疫荧光染色采用兔抗人S-100A4抗体和鼠抗人肌动蛋白α（α-SMA）抗体，通过免疫荧光染色法检测 S-100A4蛋白和α-SMA蛋白在人牙龈成纤维细胞HGFs中的表达与分布。 4生长曲线的测定采用MTT法测定第1~6代人牙龈成纤维细胞（HGFs）1~7天的OD490 nm处的吸光值。 5内皮细胞相关标记物在分化中的人牙龈成纤维细胞（HGFs）中的表达采用vimentin，血管生成素受体2（tie2）抗体和血管生长因子受体2（VEGFR2）抗体，通过Western blot半定量vimentin蛋白，tie2蛋白和VEGFR2蛋白在不同VEGF165浓度组和不同诱导周期组中的表达量。 Real-time PCR相对定量法检测不同VEGF165浓度组和不同诱导周期组中vimentin基因，tie2基因，血管生成素2（Ang2）基因的mRNA相对表达量。 6诱导过程中的形态学观察倒置显微镜观察8 ng/ml VEGF165诱导人牙龈成纤维细胞（HGFs）0，7，14，21，28，35，42和50天时的形态学变化。 7诱导后血管内皮样细胞的鉴定 7.1免疫细胞化学染色 8ng/ml VEGF165诱导人牙龈成纤维细胞35天后，采用鼠抗人 CD34单克隆抗体、鼠抗人 CD31单克隆抗体，通过免疫细胞化学染色法检测CD34蛋白和CD31蛋白在诱导后血管内皮样细胞的表达与分布。 7.2免疫荧光染色 8ng/ml VEGF165诱导人牙龈成纤维细胞35天后，采用血管性假血友病因子（vWF）抗体和上皮钙粘附分子（E-cadherin）抗体，通过免疫荧光染色检测vWF蛋白和E-cadherin蛋白在诱导后血管内皮样细胞的表达与分布。 7.3 RT-PCR鉴定诱导后血管内皮样细胞中tie2基因的mRNA相对表达量。 7.4经8 ng/ml VEGF诱导35天后，通过透射电镜观察诱导后血管内皮样细胞的超微结构。 8流式细胞仪测定诱导细胞转化率采用CD34抗体和CD31抗体，通过流式细胞仪检测诱导后血管内皮细胞中CD34和CD31的阳性表达率，以评估人牙龈成纤维细胞（HGFs）分化为血管内皮细胞（VEC）的转化率。 9成管能力测试检测诱导后血管内皮细胞的功能将诱导前后细胞接种于24孔板的Matrigel基质胶中，Olympus IX71倒置显微镜下观察管状排列结构和完整度并计数管状结构的数量，对诱导后血管内皮细胞（VEC）的功能进行评估。结果： 1人牙龈成纤维细胞（HGFs）的基本生长情况细胞多数呈长梭形，细胞核较大，呈圆形或椭圆形。原代培养以组织块为中心向周围辐射生长，传代培养的细胞生长状态好，3~4天即可生长达90%~100%。 2人牙龈成纤维细胞（HGFs）的鉴定结果 2.1流式细胞仪检测人牙龈成纤维细胞（HGFs）表面抗原vimentin和CD31表达结果培养的成纤维样细胞表面抗原 vimentin表达阳性，阳性率为（97.13±0.62）%；而表面抗原 CD31表达率仅为（8.64±1.55）%。两者比较有统计学差异（P<0.05）。 2.2细胞RT-PCR鉴定结果细胞 RT-PCR结果显示人牙龈成纤维细胞（ HGFs）特异性表达vimentin，S-100A4和α-SMA。然而，tie2在细胞中不表达。 2.3细胞的免疫细胞化学鉴定结果鼠抗人vimentin单克隆抗体和鼠抗人III型胶原单克隆抗体染色结果显示细胞呈阳性反应。 2.4细胞的免疫荧光染色鉴定结果兔抗人S-100A4多克隆抗体和鼠抗人α-SMA单克隆抗体荧光染色结果显示细胞分别呈绿色荧光和红色荧光表达。 3人牙龈成纤维细胞（HGFs）生长曲线测定结果结果显示第2代或第3代人牙龈成纤维细胞（HGFs）的对数生长期比其余代次细胞增殖水平显著升高（P<0.05），而第2代或第3代细胞的对数生长期细胞增殖水平无统计学差异（P>0.05）。 4内皮细胞相关标记物在分化中的人牙龈成纤维细胞（HGFs）中的表达 Western blot结果显示，8 ng/ml VEGF165诱导时tie2蛋白和VEGFR2的相对表达量最高。Real-time PCR结果显示，经8 ng/ml VEGF165诱导时tie2基因和Ang2基因的mRNA相对表达量达到最高。Western blot结果显示，诱导周期达到35天时tie2蛋白和VEGFR2蛋白的相对表达含量最高。Real-time PCR结果显示，诱导周期达到35天时tie2和Ang2基因的mRNA相对表达量最高。 5 VEGF165对诱导后细胞形态学的影响人牙龈成纤维细胞（HGFs）经8 ng/ml VEGF165诱导7~14天，大部分细胞仍然呈现丛状或束状排列；14~21天时，细胞逐渐排列形成多边形上皮细胞样结构；21~28天时，细胞逐渐出现融合成簇现象，逐渐形成鹅卵石样或铺路石样的生长排列形式；28~35天时，绝大多数细胞呈现铺路石样的生长形式以及形成血管腔样结构。 6免疫细胞化学染色对诱导后细胞的鉴定鼠抗人CD34单克隆抗体和鼠抗人CD31单克隆抗体染色结果显示细胞呈阳性反应。 7 RT-PCR鉴定诱导后细胞tie2基因的表达 RT-PCR结果显示，与对照组相比，tie2基因在诱导后细胞中显著表达。 8免疫荧光染色对诱导后细胞的鉴定兔抗人 vWF抗体和兔抗人 E-cadherin抗体荧光染色结果显示细胞分别呈红色荧光表达。 9诱导后细胞超微结构的观察透射电镜观察显示，细胞表面呈现微绒毛结构，细胞胞浆内出现溶酶体结构及内皮细胞特有的Weibel-Palad小体（W-P小体）。 10流式细胞仪检测分析人牙龈成纤维细胞（HGFs）向血管内皮细胞（VEC）分化的转分化率诱导后细胞组CD34和CD31细胞表型阳性率与对照组相比，差异有显著性，具有统计学意义（P<0.05）。 11成管能力测试实验比较诱导前后细胞形成小管的能力诱导形成的细胞组在Matrigel基质胶中24小时呈现管状样结构，与对照组相比，诱导组成管数目显著增高，具有统计学差异(P<0.05)。第二部分人牙龈成纤维细胞诱导分化为血管平滑肌细胞的研究目的：体外分离培养人牙龈成纤维细胞（human gingival fibroblasts，HGFs）并诱导分化为血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cell，VSMC），证实人牙龈成纤维细胞（ HGFs）具有在体外分化为血管平滑肌细胞（VSMC）的潜能。方法： 1人牙龈组织的获取，分离和细胞的培养同第一部分。 2人牙龈成纤维细胞（HGFs）的鉴定 2.1人牙龈成纤维细胞（HGFs）的RT-PCR鉴定同第一部分。 2.2人牙龈成纤维细胞（HGFs）免疫细胞化学染色同第一部分。 2.3人牙龈成纤维细胞（HGFs）免疫荧光染色同第一部分。 3生长曲线的测定同第一部分。 4平滑肌细胞相关标记物在诱导分化中的人牙龈成纤维细胞（HGFs）中的表达采用波形蛋白（ vimentin），肌动蛋白α（α-SMA）和肌球蛋白（SM-MHC）抗体，通过Western blot半定量vimentin蛋白，α-SMA蛋白和SM-MHC蛋白在不同PDGF-BB浓度组和不同诱导周期组中的表达量。 Real-time PCR相对定量法检测不同PDGF-BB浓度组和不同诱导周期组中vimentin基因，α-SMA基因，SM-MHC基因，Calponin1（Cnn1）基因和平滑肌22α（SM22α）基因的mRNA相对表达量。 5诱导过程中细胞的形态学观察倒置显微镜观察10 ng/ml PDGF-BB（含2 ng/ml TGF-β1）诱导人牙龈成纤维细胞（HGFs）0，7，14，21，28和35天时的形态学变化。 6诱导后细胞的鉴定 6.110 ng/ml PDGF-BB（含2 ng/ml TGF-β1）诱导人牙龈成纤维细胞（HGFs）28天后，采用兔抗人α-SMA抗体和鼠抗人SM-MHC抗体，通过免疫细胞化学染色法检测α-SMA蛋白和SM-MHC蛋白在诱导后血管平滑肌样细胞的表达与分布。 6.2采用Cnn1抗体和SM22α抗体，通过免疫荧光染色检测Cnn1蛋白和SM22α蛋白在诱导后血管平滑肌样细胞的表达与分布。 6.3 RT-PCR鉴定诱导后细胞中α-SMA基因和SM-MHC基因的表达量。 6.4经10 ng/ml PDGF-BB（含2 ng/ml TGF-β1）诱导人牙龈成纤维细胞（HGFs）28天后，通过透射电镜观察诱导后细胞的超微结构。结果： 1人牙龈成纤维细胞（HGFs）的基本生长情况:结果同第一部分。 2人牙龈成纤维细胞（HGFs）的鉴定 2.1细胞RT-PCR的鉴定细胞特异性表达vimentin基因和S-100A4基因，弱表达α-SMA基因，不表达SM-MHC基因。 2.2细胞的免疫细胞化学鉴定:结果同第一部分。 2.3细胞收起

关键词 : 牙龈成纤维细胞组织工程血管内皮细胞血管平滑肌细胞形态支架材料细胞相容性

6. 冷蒿地上部分化学成分的研究

[学位论文] 李存芳河北医科大学 2009年硕士导师: 史清文共272页

摘要 : 冷蒿（Artemisia frigida），又名小白蒿，为菊科蒿属植物。多年生草本，有时略成半灌木状。在我国主要分布于黑龙江、吉林、辽宁、内蒙古、河北、山西、陕西、宁夏、甘肃、青海、新疆、西藏等省区。中亚、西伯利亚、欧洲部分地区、北美洲的加拿大北部... 展开冷蒿（Artemisia frigida），又名小白蒿，为菊科蒿属植物。多年生草本，有时略成半灌木状。在我国主要分布于黑龙江、吉林、辽宁、内蒙古、河北、山西、陕西、宁夏、甘肃、青海、新疆、西藏等省区。中亚、西伯利亚、欧洲部分地区、北美洲的加拿大北部、美国西部、中部及南部都有分布[1]。在我国森林草原、草原、荒漠草原及干旱地区的山坡、路旁、砾质旷地、固定沙丘、戈壁、高山草甸等地区都有分布，常常构成山地干旱与半干旱地区植物群落的建群种或主要伴生种[1]。冷蒿全草入药，在中药和蒙药上都有应用，在中药上主要治疗治黄疸型肝炎，胆囊炎，小便不利，皮肤瘙痒，湿疹，蛔虫病和蛲虫病。其蒙药名“阿格”，主治吐血，鼻出血，月经不调，外伤出血，疮疡，“奇哈”症，肾热等。有时冷蒿还做“茵陈”的代用品。在牧区为牲畜营养价值良好的饲料。本属植物多含倍半萜，黄酮，香豆素，单萜及聚乙烯多炔类化合物，尤其倍半萜类化合物，其多方面的药理活性尤为引人注目，特别是从黄花蒿（Artemisia annua L.）中分离的青蒿素（artemisinin），作为一种有效的抗疟药物在临床上的成功运用，更是引起了人们的对蒿属植物的研究兴趣[2]。目前，关于冷蒿化学成分的研究国内外少有报道，已有的文献表明其主要成分为黄酮、倍半萜以及炔类化合物[3，4，5]。因此从冷蒿中寻找新的化学成分，在此基础上进一步探讨同类化合物的构效关系并以此为指导对其活性成分进行深入研究，具有尤为重要的意义。本课题以冷蒿的地上部分为研究对象，对其化学成分进行了系统的分离纯化以及结构确认，并对所得的部分单体化合物进行了广泛的活性筛选。目的：本研究以冷蒿地上部分为研究对象，利用硅胶柱色谱、葡聚糖凝胶色谱、制备薄层色谱、高效液相制备色谱以及重结晶等分离纯化技术对其进行系统研究，寻找新的化学成分，并应用MS、1H-NMR、13C-NMR、1H-1H-COSY、HMQC、HMBC、NOESY等现代化手段完成单体化合物分子的结构鉴定，开发自然资源，丰富中药的多样性；并对所得的部分单体化合物进行了广泛的活性筛选，为进一步开发利用提供依据。方法：干燥的冷蒿（Artemisia frigida）地上部分（7.17Kg）适当粉碎后，用95％乙醇冷浸三次，浸出液加热，加入活性炭趁热抽滤，合并滤液减压浓缩至粘膏状（2 Kg），将其悬浮于饱和NaCl水溶液中，分别用石油醚、二氯甲烷和乙酸乙酯萃取，继而得到石油醚部位（118 g）、二氯甲烷部位（120 g）和乙酸乙酯部位（45 g）。本研究先后对二氯甲烷部位和乙酸乙酯部位采用硅胶柱色谱进行初步分离，经薄层色谱检识后，进一步用硅胶柱色谱、葡聚糖凝胶色谱、制备薄层色谱、高效液相制备色谱反复分离纯化得到单体化合物。运用HR-FAB-MS、1H-NMR、13C-NMR、1H-1H-COSY、HMQC、HMBC、NOESY等波谱学方法进行检测，依据测定的图谱数据分析确定单体化合物的平面结构和立体结构。薄层检识中用薄层用硅胶GF254和0.5％的羧甲基纤维素钠混匀后铺制的硅胶薄板展开，挥尽展开剂后，先在254nm的紫外灯下观察，再浸入10％的硫酸乙醇溶液后140℃加热显色。分析型和制备型高效液相所用流动相均为甲醇-水两相溶剂，梯度洗脱，分析型高效液相流动相流速为1 mL/min，制备型高效液相流动相流速为2.5 mL/min. 结果：通过系统提取分离植物冷蒿（A.frigida）的地上部分，从中得到19个单体化合物，由于时间的限制仅确定了其中7个化合物的结构。其中包括4个倍半萜类化合物，1个香豆素类化合物，1个二苯甲酸酯类化合物和1个苯乙酮类化合物。结构鉴定结果按分离得到的先后顺序排列，7个化合物分别为：11，13-dihydrozaluzanin-D（1），isoscopoletin（5），1，15-Dioxoeudesm-12，6-olide（6），8α-hydroxy-11βH-11，13-dihydrodehydrocostuslactone（7），11，13-dihydrozaluzanin-C（11），terephthalic acid tricyclic ethylene ester（19），P-hydroxyacetophenone（20）。结论：本课题对蒿属植物冷蒿（A.frigida）地上部分的化学成分进行了系统研究，提取方法及提取溶剂选择恰当。采用了硅胶柱色谱、葡聚糖凝胶色谱、制备薄层色谱、高效液相制备色谱等多种分离方法，共分离得到19个化合物，并且运用了多种现代波谱手段及其相关知识进行结构鉴定，由于时间的限制仅确定了其中7个化合物的结构。其中化合物11，13-dihydrozaluzanin-D（1），11，13-dihydrozaluzanin-C（11）和terephthalic acid tricyclic ethylene ester（19）为首次从植物中分离得到。化合物isoscopoletin（5）和p-hydroxyacetophenone（20）为首次从冷蒿中分离得到，8α-hydroxy-11βH-11，13-dihydrodehydrocostuslactone（7）为首次从蒿属中分离得到，化合物1，15-dioxoeudesm-12，6-olide（6）为新化合物。活性初筛结果显示化合物5对人白细胞弹性蛋白酶（HLE）表现出较强的抑制活性，但无剂量依赖性。收起

关键词 : 冷蒿地上部分化学成分青蒿素倍半萜类化合物香豆素类化合物苯乙酮类化合物结构鉴定二苯甲酸酯类化合物苯乙酮类化合物

7. 丙酸睾酮改善老年大鼠的协调运动行为及VMAT2的参与

[学位论文] 王力河北医科大学 2015年博士导师: 石葛明共250页

摘要 : 本研究通过网格棒下降实验(Descending a wire mesh pole)、楔形板行走实验(Tapered beam walking test)和粘附物去除实验(Adhesiveremoval test)，检测鼻腔(Intranasal administration)或皮下(Subcutaneousinjection)给予TP对大鼠协调运动行为的影响... 展开本研究通过网格棒下降实验(Descending a wire mesh pole)、楔形板行走实验(Tapered beam walking test)和粘附物去除实验(Adhesiveremoval test)，检测鼻腔(Intranasal administration)或皮下(Subcutaneousinjection)给予TP对大鼠协调运动行为的影响;通过液质联用技术检测鼻腔或皮下给予TP对大鼠尾壳核内DA及其代谢产物含量的影响;通过RT-PCR技术，免疫印迹以及免疫细胞化学检测鼻腔或皮下给予TP对大鼠黑质-纹状体多巴胺能体系中VMAT2表达的影响;通过给予VMAT2阻断剂利血平，探讨TP对上述指标的影响是否与VMAT2相关;在细胞水平探讨TP对多巴胺能神经元保护作用机制是否通过雄激素受体途径实现的。本文主要分五部分展开研究：第一部分丙酸睾酮改善老年大鼠的协调运动行为目的:探讨长期鼻腔或皮下TP替代对大鼠协调运动行为的影响。方法:通过网格棒下降、楔形板行走和粘附物去除实验检测大鼠协同运动行为。结果:1.通过网格棒下降实验发现，24Mon大鼠网格棒停留时间较6Mon大鼠短(P＜0.01);长期TP处理后老年大鼠停留时间较24Mon组延长（鼻腔95.21％、皮下55.02％）(P＜0.01)差异显著。 2.通过楔形板行走实验发现，24Mon大鼠双后肢楔形板评分较6Mon大鼠高(P＜0.01);长期TP处理后老年大鼠双后肢评分较24Mon组降低（左后肢，鼻腔22.56％、皮下11.24％;右后肢，鼻腔19.33％、皮下13.32％）（P＜0.01）。 3.通过粘附物去除实验发现，24Mon组大鼠鼻左、右侧粘附物去除时间较6Mon大鼠长(P＜0.01);长期TP处理后老年大鼠鼻部双侧粘附物去除时间较24Mon组缩短（左侧:鼻腔39.29％、皮下38.29％;右侧:鼻腔50.11％、皮下40.64％）(P＜0.01)。24Mon组大鼠两前肢粘附物去除时间较6Mon大鼠长(P＜0.01);长期TP处理后老年大鼠两前肢粘附物去除时间分别较24Mon组缩短（左侧:鼻腔48.31％、皮下57.63％;右侧:鼻腔49.81％、皮下61.34％）(P＜0.01)。结论:1.老年大鼠表现协调运动行为缺陷。 2.老年大鼠长期给予TP替代后，协调运动行为缺陷改善。 3.老年大鼠鼻腔给予TP对协调运动行为缺陷的改善优于皮下给药。第二部分丙酸睾酮增强老年大鼠黑质-纹状体多巴胺能神经元的功能活动目的:探讨长期鼻腔或皮下TP替代对大鼠尾壳核DA及其代谢产物含量的影响。方法:通过液质联用技术检测大鼠尾壳核内DA及其代谢产物的含量。结果:24Mon组大鼠CPu处DA及其代谢产物水平均较6Mon组明显改变，DA、DOPAC和HVA含量(P＜0.01)明显降低;DOPAC+HVA/DA、DOPAC/DA和HVA/DA比值（P＜0.01）明显升高;给予TP长期处理后，老年大鼠DA及其代谢产物含量均较24Mon组明显改变，其中DA（鼻腔131.46％、皮下53.87％）、DOPAC（鼻腔38.24％、皮下27.82％）和HVA（鼻腔33.25％、皮下15.79％）(P＜0.01)明显升高;DOPAC+HVA/DA（鼻腔35.79％、皮下18.61％）、DOPAC/DA（鼻腔35.24％、皮下16.48％）和HVA/DA（鼻腔37.26％、皮下24.07％）(P＜0.01)明显降低，鼻腔给药组基本恢复到6Mon组水平(P＞0.05)。结论:1.老年大鼠尾壳核内多巴胺神经递质及其代谢产物含量减少。 2.老年大鼠长期TP替代后，尾壳核内多巴胺神经递质及其代谢产物含量增加，暗示黑质-纹状体多巴胺能神经元的活性增强。 3.老年大鼠鼻腔给予TP对尾壳核内DA及其代谢产物含量的改善优于皮下给药。第三部分丙酸睾酮增加老年大鼠黑质-纹状体多巴胺能神经元VMAT2的表达目的:探讨长期鼻腔或皮下TP替代对老年大鼠黑质-纹状体多巴胺能神经元VMAT2表达的影响。方法:通过RT-PCR检测大鼠黑质内VMAT2 mRNA的RQ值，Westernblot检测大鼠黑质和尾壳核内VMAT2/GAPDH的比值，免疫组化法检测老年大鼠黑质和尾壳核内VMAT2的平均光密度值和神经元数目。结论: 1.老年大鼠黑质内VMAT2-ir免疫阳性细胞数目减少，给予TP后增加。 2.老年大鼠黑质-纹状体多巴胺能神经元VMAT2 mRNA和VMAT2蛋白表达减少。 3.老年大鼠长期给予TP替代后，能够在转录和翻译水平提高黑质-纹状体多巴胺能神经元VMAT2表达。 4.老年大鼠鼻腔给予TP对黑质-纹状体多巴胺能神经元VMAT2的改善优于皮下给药。第四部分 VMAT2参与丙酸睾酮对老年大鼠的协调运动行为和黑质-纹状体多巴胺能神经元功能活动的改善目的:探讨老年大鼠TP长期替代后协调运动行为和黑质-纹状体多巴胺能神经元的功能活动明显改善，是否与VMAT2表达增多相关。方法:应用VMAT2长效特异性抑制剂利血平预先处理老年大鼠，然后给予TP皮下替代治疗。通过网格棒下降，楔形板行走和粘附物去除实验检测大鼠协同运动行为，液质联用技术检测大鼠尾壳核内DA及其代谢产物的水平，RT-PCR检测大鼠黑质内VMAT2 mRNA的RQ值，Western blot检测大鼠黑质和尾壳核内VMAT2/GAPDH的比值。结论:1.利血平抑制VMAT2的功能、减少DA及其代谢产物的含量、提高DA代谢产物与DA的比值和损伤协调运动行为。 2.TP对老年大鼠协调运动行为和黑质-纹状体多巴胺能神经元功能的影响可能部分通过VMAT2实现的。第五部分睾酮提高SH-SY5Y细胞MAT2表达与雄激素受体相关目的:在细胞水平探讨睾酮(Testosterone，T)提高VMAT2表达和神经保护作用是通过雄激素受体(Androgen receptor，AR)实现的方法:RA/TPA分化的SH-SY5Y细胞作为DA神经元体外研究模型;利用H2O2作为ROS激发剂;预先给予T和AR阻断剂氟他胺(Flutamide，Flu)处理，通过MTT和LDH检测SH-SY5Y细胞损伤程度，通过免疫荧光和免疫印记检测VMAT2表达的变化。结果:1.RA/TPA分化SH-SY5Y细胞后，出现胞体变圆变小，突起增长等形态学变化。NeuN检测结果显示RA/TPA分化细胞NeuN的表达明显（P＜0.01）高于未分化细胞。 2.MTT和LDH检测结果显示，对照(Con)组、睾酮处理(T)组和睾酮和氟他胺处理(T+F)组三组间细胞活性没有明显变化(P＞0.05)，过氧化氢处理(H)组、睾酮和过氧化氢处理(T+H)组和睾酮、氟他胺和过氧化氢处理(T+F+H)组三组细胞活性均较Con、T和T+F三组降低(P＜0.01)，H和T+F+H组细胞活性低于T+H组(P＜0.01)。 3.免疫荧光结果显示:Con和T+F组间AOD值没有明显差异(P＞0.05)，H、T和T+F+H三组间AOD值没有明显差异(P＞0.05)，H、T和T+F+H三组的AOD值明显高于Con和T+F组(P＜0.01)，T+H组明显高于其余5组（P＜0.01）。 4.免疫印记结果显示:Glyco-VMAT2与GAPDH免疫印迹条带相对吸光度比值，H、T和T+F+H三组间没有明显差异(P＞0.05)，H、T和T+F+H三组间明显高于Con和T+F组（P＜0.01），T+H组明显高于其余5组(P＜0.01)。Partially glyco-VMAT2和Native-VMAT2与GAPDH免疫印迹条带相对吸光度比值，Con、H、T、T+F+H和T+F五组间均无统计学意义（P＞0.05），T+H组明显高于其余5组(P＜0.01)。结论:1.睾酮对H2O2损伤SH-SY5Y细胞的神经保护作用部分通过AR实现的。 2.睾酮使SH-SY5Y细胞VMAT2表达提高部分通过AR实现的。 3.氧化应激能够通过非AR途径提高VMAT2表达。收起

关键词 : 丙酸睾酮协调运动行为囊泡单胺转运体2 多巴胺神经保护作用

8. 现代医学教育模式的三次转变及影响因素研究

[学位论文] 陈思铧河北医科大学 2022年博士导师: 席彪共239页

摘要 : 医学教育模式是一个发展的概念，源于人们在社会发展过程中，对培养什么样的医学人才和怎样培养医学人才两个基本问题的不断认识。所以，医学教育模式影响着医学卫生人才培养的标准、过程、方法与质量。在不同的社会及历史发展阶段，相应的医学教育模... 展开医学教育模式是一个发展的概念，源于人们在社会发展过程中，对培养什么样的医学人才和怎样培养医学人才两个基本问题的不断认识。所以，医学教育模式影响着医学卫生人才培养的标准、过程、方法与质量。在不同的社会及历史发展阶段，相应的医学教育模式也会出现变化。进入20世纪以来，随着健康需求、卫生体系、国际合作、科学技术与社会经济全球化等历史环境的发展变化，世界医学教育经历或正在经历三次较大影响的医学教育改革，医学教育模式也随之发生了三次较大的转变。因此，探讨影响医学教育模式发生转变的主要因素及其作用功能，对于未来医学教育更加主动的适应公众健康需求和卫生健康事业发展的变化非常必要。对此，研究以“医学教育模式何以转变”的核心问题为导向，运用比较研究法、历史分析法及因素分析法，分析医学教育模式的构成要素，回顾医学教育模式转变的历程，论述医学教育模式转变背后的影响因素及其功能作用，以深化对医学教育模式转变的基本规律及未来医学教育模式发展趋势的认识，为医学教育改革提供理论依据与参考。围绕核心问题，研究首先以理论分析为先导，提出研究假设，为后续系统性的分析奠定基础。具体研究内容为，对医学教育模式转变的核心概念与模式构成要素的内涵进行界定；系统阐述社会认知理论、AGIL模型相关理论与现代化理论用于医学教育模式转变研究的科学性和合理性；构建相应的理论分析框架。在此基础上，研究明确了影响现代医学教育模式转变七大因素影响，包括三个内部因素（分别是：个体与群体认知因素、个体与群体行为因素和个体与群体环境因素）与四个外部因素（分别是：经济与健康需求因素、政治与组织目标因素、科技与程序规范因素和文化与模式维持因素）。在随后的历史分析部分，研究对三次医学教育改革相关的代表性报告、宣言等历史文献资料进行质性文本分析与比较研究，重点阐释了文本研究中背景因素的相关内容。同时论述现代医学教育改革与医学教育模式转变之间的关系，分析医学教育模式在三个历史时期的理念变化、转变历程与内涵特征。以此为基础，研究结合构建的理论分析框架与文献研究中提供的质性材料，从外部与内部两大影响因素展开分类，重点关注上述七大影响因素的变化，并系统分析每个因素对现代医学教育模式三次转变的功能作用，探讨其中的共性与规律，验证部分假设。研究的第三部分结果是构建因素互动的动态分析框架。即在历史发展的纵向层面，探讨因素互动引发的合力对现代医学教育模式三次转变的推动作用与相互影响，后通过把医学教育连续统一体三阶段的教育标准作为研究案例，重点分析内部影响因素的持续变化在医学教育模式转变过程中的实际作用，以验证假设。最后结合研究结果，比较论述现代医学教育模式的三次转变对我国医学人才培养模式的实际影响与现实问题。通过分析研究得出以下结论：对人的生命健康的始终关注是医学教育模式存在、发展与转变的重要基础；医学教育模式的核心问题是医学人才的培养问题，核心内容是课程的制定与实施；现代医学教育模式的三次转变，是一种迭代式的转变，实际上是一个复杂系统的构建过程；医学教育模式转变的根本动因是社会民生需求与人的互动关系的发展与变化。收起

关键词 : 医学教育模式转变健康需求人才培养课程建设

9. 重症急性胰腺炎神经、内分泌、免疫功能变化及乌司他丁、生长抑素、丹参早期干预的实验研究

[学位论文] 李勇河北医科大学 2005年博士导师: 王士杰共235页

摘要 : 目的：急性胰腺炎(AcutePancreatitis，AP)是指多种病因引起的胰酶激活，继以胰腺局部炎症反应为主要特征，伴或不伴有其他器官功能改变的疾病，20-30％患者临床经过凶险，总体病死率为5-10％。是常见外科急腹症，以发病快、病变多端、病情凶险、死亡... 展开目的：急性胰腺炎(AcutePancreatitis，AP)是指多种病因引起的胰酶激活，继以胰腺局部炎症反应为主要特征，伴或不伴有其他器官功能改变的疾病，20-30％患者临床经过凶险，总体病死率为5-10％。是常见外科急腹症，以发病快、病变多端、病情凶险、死亡率高而为临床医生所棘手。本研究通过建立SD大鼠SAP动物模型，观察胰腺、肺、肝、心、肾、小肠等脏器病理形态及其功能变化，研究SAP时血单个核细胞和胰腺组织细胞生长激素(growthhormone，GH)及生长抑素(somatostatin，SS)表达变化，血清β-内啡肽(β-endorphin，β-END)、促肾上腺皮质激素(adrenocorticotropichormone，ACTH)、糖皮质激素(glucocorticosteroid，GC)、GH、SS变化；T淋巴细胞，B淋巴细胞及IgG、IgM、IgA的变化；血清TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-2、IL-10变化；并根据实验设计要求选用乌司他丁、外源性生长抑素(思他宁，Stilamin)及丹参早期干预。旨在：①探讨SAP对肺、肝、心、肾、小肠等器官形态和功能影响及内毒素血症、脏器感染的发生情况，并建立一个稳定、重复性好并可实施静脉用药的SAP动物模型；②初步探讨SAP时神经内分泌功能的变化，从神经内分泌功能的调理角度，为临床应用乌司他丁、外源性生长抑素(思他宁)治疗SAP提供依据；③探讨SAP时淋巴细胞免疫功能变化及其意义，为临床开展SAP时机体特异性免疫功能的判断、SAP病程进展及预后监测，以及为应用乌司他丁、丹参对SAP时免疫功能异常的早期调理提供依据；④探讨促炎细胞因子、抗炎细胞因子及NF-κB在SAP发生发展中的作用及机制，为SAP病情判断、预后监测及应用乌司他丁、外源性生长抑素(思他宁)免疫调理提供依据；⑤探讨SAP时红细胞免疫功能、氧自由基的变化及其意义，为临床开展SAP时机体红细胞免疫功能的判断、SAP病程预后监测以及应用乌司他丁、丹参对SAP时红细胞免疫功能异常的早期调理提供依据。方法：第一部分：SAP动物模型的建立及其对多器官的影响。选用健康SD大鼠100只，随机分为10组，每组10只，分别为假手术(False，F)1小时组(F1h)、2小时组(F2h)、6小时组(F6h)、12小时组(F12h)、24小时组(F24h)；SAP1小时组(SAP1h)、2小时组(SAP2h)、6小时组(SAP6h)、12小时组(SAP12h)、24小时组(SAP24h)。第二部分：SAP时β-END、ACTH、GC、GH、SS变化及乌司他丁、生长抑素早期干预的实验研究。第三部分：SAP时淋巴细胞免疫功能变化及乌司他丁、丹参早期干预的实验研究。选择健康SD大鼠140只，随机分为14组，每组10只。分别为假手术不同时点组(同第一部分)；SAP不同时点组(同第一部分)；乌司他丁(w组)治疗2小时组(W2h)、6小时组(W6h)；丹参(D组)治疗2小时组(D2h)、6小时组(D6h)。第四部分：SAP促炎与抗炎细胞因子、IL-2R、IL-6R、NF-κB变化及乌司他丁、生长抑素早期干预的实验研究。选择健康SD大鼠140只，随机分为14组，每组10只。分别为假手术不同时点组(同第一部分)；SAP不同时点组(同第一部分)；乌司他丁治疗组2小时组(W2h)、6小时组(W6h)；思他宁治疗2小时组(S2h)、6小时组(S6h)。第五部分：SAP时红细胞免疫功能、氧自由基变化及乌司他丁、丹参早期干预的实验研究。结果：第一部分：SAP动物模型的建立及其对多器官的影响。 SAP组、F组腹水及胰、肺、肝、心、肾、小肠及网膜病理形态学变化肺脏大体观察：假手术组无明显改变；SAP各组肺脏可见轻度充血水肿和偶见血性胸腔积液(0.5-2ml)。肝脏大体观察：假手术组无明显改变；SAP各组肝脏可见充血、肿胀，且随时间的延长逐渐加重。心脏大体观察：假手术组无明显改变，SAP各组除偶见心脏颜色变暗外无其他明显改变。组织学观察：假手术组各时点无明显变化；SAP组可见心肌肌小节横纹模糊，颗粒变性，肌纤维间散在出血，并随时点延长而更加明显。肾脏大体观察：假手术组无明显改变，SAP各组见肾脏周围脂肪皂化外无其他明显改变。小肠大体观察：假手术组无明显改变；SAP各组肠管扩张，粘膜表面出血，肠腔内可见淡红色液体。肠粘膜超微结构观察：假手术组肠绒毛排列整齐，SAP组呈不同程度的排列紊乱现象。在SAP12h、SAP24h可见肠绒毛表面微绒毛广泛脱落、绒毛倒伏，其顶端上皮剥脱呈花瓣状。微绒毛排列稀疏、脱落。随时点延长更加明显。 2与同时点对照组(F组)相比，SAP各时点组的AMY、ALT、AST、Cr、BUN均明显升高(P＜0.01)； 3与同时点对照组(F组)相比，SAP各时点组的CK、LDH、HBDH均明显升高(P＜0.01或P＜0.05)； 5所有F组、SAP1h、SAP2h组的各脏器组织细菌培养均为阴性，而SAP6h、12h、24h组均有不同程度的各脏器组织细菌培养为阳性，SAP6h、12h、24h胰腺、肺脏、肠系膜细菌培养的阳性率较同时点F组明显升高(P＜0.05)，SAP12h、24h肝脏细菌培养的阳性率较同时点F组明显升高(P＜0.05); 第二部分：SAP时β-END、ACTH、GC、GH、SS变化及乌司他丁、生长抑素早期干预的实验研究。第三部分：SAP时淋巴细胞免疫功能变化及乌司他丁、丹参早期干预的实验研究。第四部分：SAP促炎与抗炎细胞因子、IL-2R、IL-6R、NF-κB变化及乌司他丁、生长抑素早期干预的实验研究。第五部分：SAP时红细胞免疫功能、氧自由基变化及乌司他丁、丹参早期干预的实验研究。结论第一部分：SAP动物模型的建立及其对多器官的影响。 1应用5％牛磺胆酸钠逆行胰胆管内注射可诱发SD大鼠SAP模型，颈静脉切开置管可建立SD大鼠补液通路。此模型稳定、重复性好，并可实施静脉补液用药。 2SAP早期即可引起肺脏、肝脏、心脏、肾脏等器官损伤性病理形态学变化及其功能障碍。 3SAP早期即可引起肠粘膜机械屏障损伤，导致内毒素血症及细菌移位，胰腺、肺脏、肝脏、肾脏及小肠系膜的细菌感染。第二部分：SAP时β-END、ACTH、GC、GH、SS变化及乌司他丁、生长抑素早期干预的实验研究。第三部分：SAP时淋巴细胞免疫功能变化及乌司他丁、丹参早期干预的实验研究。 1SAP早期表现为血清促炎细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6明显升高，而抗炎细胞因子IL-2明显降低、IL-10缓慢升高，从而导致机体促炎与抗炎细胞因子平衡的失调。 2SAP时胰腺组织细胞、血单个核细胞的TNF-α表达明显增高，且前者又明显高于后者，是SAP时TNF-α产生和分泌的重要来源。 3SAP时胰腺组织细胞、血单个核细胞的NF-κB表达明显增高，且前者明显高于后者，预示着NF-κB的活性增强，从而可引起炎症细胞因子的大量产生和释放，导致SIRS。 4SAP时胰腺组织细胞、血单个核细胞的IL-2R、IL-6R表达明显降低，预示着细胞膜上的IL-2R、IL-6R的数量减少和功能障碍，从而影响其与相应配体结合发挥生物学效应。 5乌司他丁、思他宁均可明显降低SAP时血清促炎细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6的水平，并使IL-10降低接近正常水平，明显提高血清IL-2的水平，维持促炎与抗炎细胞因子的平衡，抑制免疫过激，以抑制或减轻SIRS。 6乌司他丁、思他宁可明显降低SAP时胰腺组织细胞、血单个核细胞的NF-κB、TNF-α的表达，从而抑制NF-κB的活性，减少TNF-α的合成和释放，减轻或抑制炎症细胞因子的“瀑布级联反应”。 7乌司他丁、思他宁可明显降低SAP时胰腺组织细胞、血单个核细胞的IL-2R、IL-6R的表达，从而维护其结构的完整和功能的正常。第五部分：SAP时红细胞免疫功能、氧自由基变化及乌司他丁、丹参早期干预的实验研究。 1SAP时RBC-C3bRR明显降低，RBC-ICR明显升高，表明SAP时红细胞结构和功能发生异常，免疫黏附功能降低，并导致红细胞抗原识别、提呈及清除循环免疫复合物能力降低， 2SAP时RBC-SOD明显降低，血清MDA明显升高，表明SAP时氧自由基水平升高，且机体清除氧自由基能力降低与红细胞SOD含量下降有关。 3SAP时RBC-C3bRR、RBC-SOD及血清MDA的检测，可作为SAP红细胞免疫功能状态的判断，以及SAP病程进展及预后监测的客观指标。 4应用乌司他丁、丹参均可明显提高SAP时红细胞免疫黏附功能及SOD含量，以清除循环免疫复合物及氧自由基。收起

关键词 : 急性胰腺炎神经内分泌淋巴细胞红细胞乌司他丁丹参

10. 续随子种子和旋覆花的化学成分研究

[学位论文] 苏晓会河北医科大学 2008年硕士导师: 史清文共233页

摘要 : 续随子(Euphorbia lathyris)为大戟科大戟属植物。广泛分布或栽培于欧洲、北非、中亚、东亚和南北美洲。中国引种栽培已久，生长于向阳山坡栽培或野生。种子椭圆形，表面有黑、褐色相杂的斑纹，长约5毫米。种子含油高达50％。种子药用，能利尿、泻下、... 展开续随子(Euphorbia lathyris)为大戟科大戟属植物。广泛分布或栽培于欧洲、北非、中亚、东亚和南北美洲。中国引种栽培已久，生长于向阳山坡栽培或野生。种子椭圆形，表面有黑、褐色相杂的斑纹，长约5毫米。种子含油高达50％。种子药用，能利尿、泻下、通经，外用涂治疥癣、恶疮等症，并可杀虫[1]。续随子种子在临床上主要用于治疗水肿、痰饮、积聚、胀满、血瘀经闭等证，某些地方用于治疗血吸虫、肝硬变、肾性水肿等[2]。续随子中含有二萜、三萜、香豆素和挥发油等化合物，主要成分为二萜化合物，也是其重要的活性成分，且以具有独特结构的千金二萜烷型成分L-factors著称，此类成分除具有诸多药理活性外，其结构非常可能通过跨环环合作用产生复杂的多环结构，是生物体中合成多种二萜化合物的前体物[3]。因此，对于相似天然产物筛选对有效生物靶点作用的结构研究，大量的大环L-factors是十分需要的。同时寻找续随子中新的化学成分并在此基础上进一步挖掘同类化合物的构效关系，并以此为指导对其活性成分进行深入研究也具有重要意义。本课题以续随子的种子为研究对象，对其化学成分进行了系统的分离纯化以及结构确认，并对所得的部分单体化合物的抗肿瘤细胞株活性进行筛选。目的：本研究旨在以续随子种子为研究对象，利用硅胶柱色谱、聚酰胺柱色谱、葡聚糖凝胶色谱、制备薄层色谱、高效液相制备色谱以及重结晶等分离纯化技术对其进行系统研究，寻找新的化学成分，并应用UV、IR、MS、1H-NMR、13C-NMR、1H-1H-COSY、HMQC、HMBC、NOESY等现代化手段完成单体化合物分子的结构鉴定，开辟中药资源，丰富中药的多样性；并对所得的部分单体化合物的抗肿瘤细胞株活性进行筛选，为进一步开发利用提供依据。方法：干燥的续随子(Euphorbia lathyris)种子(4Kg)适当粉碎后，用95％乙醇连续回流提取三次，趁热过滤，合并滤液减压浓缩至粘膏状(986g)，将其溶于水中形成悬浊液，分别用石油醚、二氯甲烷和醋酸乙酯萃取，继而得到石油醚部位(760g)、二氯甲烷部位(2.5g)和醋酸乙酯部位(2.7g)。本研究先后对这三部位采用硅胶柱色谱进行初步分离，经薄层色谱检识后，进一步用硅胶柱色谱、聚酰胺柱色谱、葡聚糖凝胶色谱、制备薄层色谱、高效液相制各色谱反复分离纯化得到单体化合物。并运用UV、IR、HR-FAB-MS、1H-NMR、13C-NMR、1H-1H-COSY、HMQC、HMBC、NOESY等波谱学方法对这些单体化合物进行检测，依据测定的图谱数据分析确定单体化合物的平面结构和立体结构。薄层检识中用薄层用硅胶GF254和0.5％的羧甲基纤维素钠混匀后铺制的硅胶薄板展开，挥尽展开剂后，现在254nm的紫外灯下观察，再浸入10％的硫酸乙醇溶液后140℃加热显色。分析型和制备型高效液相所用流动相均为甲醇-水两相溶剂，梯度洗脱，分析型高效液相流动相流速为1mL/min，制备型高效液相流动相流速为3mL/min。结果：通过系统提取分离植物续随子(E.lattyris)的种子，从中得到8个单体化合物，并对其中5个进行结构鉴定，分别为3个二萜类化合物，1个香豆素类化合物以及1个甾体类化合物。这5个化合物的名称分别为Euphorbia FactorL1：(2S*，3S*，4R*，5R*，6R*，11S*，15R*)-5，15-Diacetoxy-3-benzoyloxy-14-oxolathyra-6(17)，(12E)-diene-6(17)-epoxide(1)，Euphorbia Factor L2：(2S*，3S*，4R*，5R*，7R*，9S*，11S*，15R*)-5，15-Diacetoxy-3，7-dibenzoyloxy-14-oxolathyra-6(17)，(12E)-diene(2)，Euphorbia Factor L3:(2S*，3S*，4R*，5R*，9S*，11S*，15R*)-5，15-Diacetoxy-3-benzoyloxy-14-oxolathyra-6(17)，(12E)-diene(3)，6，7-二羟基香豆素(5)，和(3β)-stigma-5-en-3-O-β-glucoside(6)。其中化合物6是首次在大戟属植物中发现。结论：本课题对大戟属植物续随子(E.lathyris)种子的化学成分进行了系统研究，具体采用了硅胶柱色谱、聚酰胺柱色谱、葡聚糖凝胶色谱、制备薄层色谱、高效液相色谱等多种分离手段或方法，共分离得到8个化合物，并且运用了多种现代波谱手段及其相关知识，对其中的5个化合物进行了结构鉴定。抗肿瘤细胞株活性初筛结果显示，化合物3对人子宫内膜癌细胞(HEC-1)和人脑神经胶质瘤细胞(T-98和U251-SP)增殖均有较强的抑制活性；化合物5对脑转移细胞(KT)增殖有强的抑制活性。收起

关键词 : 续随子种子旋覆花化学成分