中国科学技术信息研究所--国家工程技术数字图书馆

[学位论文] 刘明慧山西医科大学 2012年硕士导师: 王素萍共51页

摘要 : 目的： ①了解HBsAg阳性孕妇婴儿脐静脉血PBMC中TLR3与HBV宫内感染的关系。 ②探讨HBsAg阳性孕妇婴儿脐静脉血PBMC中相关免疫细胞与HBV宫内感染的关系。 ③探讨TLR3在HBsAg阳性孕妇婴儿HBV宫内感染中可能的作用机制。方法： ... 展开目的： ①了解HBsAg阳性孕妇婴儿脐静脉血PBMC中TLR3与HBV宫内感染的关系。 ②探讨HBsAg阳性孕妇婴儿脐静脉血PBMC中相关免疫细胞与HBV宫内感染的关系。 ③探讨TLR3在HBsAg阳性孕妇婴儿HBV宫内感染中可能的作用机制。方法： ①收集2011年7月至2012年1月于太原市传染病医院妇产科分娩的HBsAg阳性孕妇产后脐血共52例。无菌采集分娩时脐血抗凝血30ml，并收集母几的流行病学资料。 ②婴儿脐静脉血PBMC的分离及培养，体外HBV干预宫内感染组和非宫内感染组，以HBV+PolyI:C干预宫内感染组婴儿PBMC。 ③多色流式细胞术(FCM)对两组TLR3蛋白表达的荧光强度值以及T细胞、B细胞、DC细胞和CD4+CD25+Treg的百分比进行测定。结果： ①采用多色FCM测定TLR3蛋白表达荧光强度值，经比较：非宫内感染组的TLR3蛋白表达的平均荧光强度值（32.18±11.36）高于宫内感染组（30.29±11.04），差异无统计学意义(t=0.410,P=0.684);宫内感染组TLR3活化后（即PolyI:C刺激后），TLR3蛋白表达的平均荧光强度值（32.16±9.40）升高,与非宫内感染组的（32.18±11.36）相比，无统计学差异（t=-1.824，P=0.078）。 ②采用多色FCM测定B细胞的百分比，经比较：非宫内感染组的B细胞的百分比（7.38±6.40）高于宫内感染组(6.76±4.01)，没有统计学差异（t=0.210,P=0.834）；宫内感染组TLR3活化后，B细胞的百分比（5.14±2.64）降低，与非宫内感染组（7.38±6.40）比较，差异没有统计学意义（t=0.768,P=0.447）。 ③非宫内感染组的CD4+T细胞的百分比（41.14±20.08）高于宫内感染组（33.82±2.60），差异尚不能认为有统计学意义（t=0.618，P=0.543）；非宫内感染组的CD8+T细胞的百分比（11.30±5.87）与宫内感染组（11.14±9.64）相比，差异无统计学意义（t=0.041，P=0.968）；非宫内感染组的CD4+/CD8+比值（4.30±2.28）与宫内感染组的（4.75±3.23）比较，差异尚不能认为有统计学意义（t=-0.30,P=0.767）。 ④非宫内感染组的mDC的百分比(0.84±0.58)高于宫内感染组(0.67±0.34)，差异尚不能认为有统计学意义（t=-0.485,P=0.633）；非宫内感染组的pDC（0.92±0.91）与宫内感染组的（0.91±0.46）比较，差异没有统计学意义(t=0.020,P=0.984)。 ⑤非宫内感染组的CD4+CD25+Treg细胞的百分比（4.69±3.41）与宫内感染组(3.00)比较，差异无统计学意义(t=0.474,P=0.646)。结论： ①非宫内感染组的TLR3蛋白表达平均荧光强度值高于宫内感染组，而宫内感染组经PolyI:C刺激后其表达水平升高，提示宫内感染可能与婴儿TLR3表达有关。 ②非宫内感染组的B细胞、CD4+T细胞、mDC的百分比高于宫内感染组，提示宫内感染与婴儿B细胞、CD4+T细胞、mDC表达可能有关。 ③本次研究未发现宫内感染与CD8+T细胞、pDC、CD4+CD25+Treg细胞的百分比以及CD4+/CD8+比值相关，有待于进一步研究。收起

关键词 : 乙型肝炎婴儿宫内感染 TLR3蛋白免疫细胞 HBsAg阳性孕妇

2. 母胎转运与HBV宫内感染的研究

[学位论文] 邹璐南昌大学 2008年硕士导师: 石珍共30页

摘要 : 目的：探索HBsAg阳性孕妇细胞是否可进入胎儿血循环，HBV通过细胞转运使胎儿发生宫内感染的机制。方法：选取2006年7月至2008年3月在南昌大学医学院第一附属医院产科足月分娩HBsAg阳性孕妇及其新生儿各160例为研究对象。利用谷胱甘肽S转移酶M1基... 展开目的：探索HBsAg阳性孕妇细胞是否可进入胎儿血循环，HBV通过细胞转运使胎儿发生宫内感染的机制。方法：选取2006年7月至2008年3月在南昌大学医学院第一附属医院产科足月分娩HBsAg阳性孕妇及其新生儿各160例为研究对象。利用谷胱甘肽S转移酶M1基因(glutathione S-transferase M1，GSTM1)、人血管紧张素转换酶基因(angiotensin-converting enzyme genes，ACE)基因多态性，用等位基因特异性PCR(AS—PCR)和半巢式PCR(hemi-nPCR)方法检测母一胎细胞转运。用实时荧光定量PCR(fluorescence quantitative PCR，FQ-PCR)方法对母儿HBV DNA和PBMC HBV DNA进行定量分析。结果： 1、以GSTM1及ACE基因作为母亲的特异性等位基因，收集到56对信息病例对中，其中31例新生儿发生了母儿转运，占55.35％(31/56)。 2、当以新生儿外周血PBMC HBV DNA阳性来判断新生儿HBV宫内感染时，母-胎细胞转运组较未转运组新生儿宫内感染率要高(χ 213.532，P＜0.01)，说明母-胎细胞转运与新生儿PBMC HBV DNA阳性有关。 3、当以新生儿外周血HBV DNA阳性来判断新生儿HBV宫内感染时，母-胎细胞转运组与未转运组新生儿宫内感染率无差别(χ 20.355，P＞0.5)，说明母-胎细胞转运与新生儿外周血HBV DNA阳性无关。 4、当以新生儿外周血PBMC HBV DNA和HBV DNA两者之一为阳性与否来判断是否存在新生儿HBV宫内感染时，母-胎细胞转运组较未转运组新生儿宫内感染率要高(χ 214.641，P＜0.01)，说明母—胎细胞转运与新生儿PBMC HBV DNA或/和HBV DNA阳性有关。 5、孕妇外周血HBV-DNA与新生儿外周血中HBV-DNA含量存在线性相关关系，相关系数r大于0，说明新生儿外周血HBV-DNA含量随着孕妇HBV-DNA含量增加而增加。由于r=0.481，从相关系数的大小来看，孕妇与新生儿外周血中HBV-DNA含量的关系密切程度一般。 6、孕妇PBMC HBV—DNA与新生儿外周血中PBMC HBV—DNA含量存在线性相关关系，相关系数r大于0，说明新生儿外周血PBMC HBV-DNA含量随着孕妇PBMC HBV—DNA含量增加而增加。由于r=0.783，从相关系数的大小来看，孕妇与新生儿外周血中PBMC HBV—DNA含量的关系较为密切。结论： 1、HBsAg阳性孕妇存在母儿细胞转运。 2、母-胎细胞转运与新生儿HBV DNA/PBMC HBV DNA阳性有关。母-胎细胞转运是HBV宫内感染的一个原因。 3、PBMC HBV DNA的检测可作为诊断宫内感染的重要指标。收起

关键词 : 孕妇 HBsAg阳性细胞转运胎儿宫内感染新生儿病例分析

3. 成都市学龄前儿童乙型肝炎血源疫苗效果考核和丙型肝炎感染血清学调查

[学位论文] 董军亚四川大学 1998年硕士导师: 雷秉钧共38页

摘要 : 目的与方法:采用ELISA检测乙型肝炎指标(抗-HBs、HBsAg、-HBc)和丙型肝炎指标(抗-HCA),考核成都市学龄前儿童1992年新生儿普种乙型肝炎血源疫苗后乙肝感染和免疫水平,调查成都市学龄前儿童的丙型肝炎流行情况.结果与结论:与免疫前相比,0-7岁学龄前儿童... 展开

关键词 : 乙型肝炎血源疫苗 HBsAg阳性率丙肝感染率

4. 妊娠早期孕妇外周血中胎儿游离DNA的定量分析

[学位论文] 琚竹梅山西医科大学 2005年硕士导师: 郑梅玲;张延丽共19页

摘要 : 　　本文对早孕期孕妇外周血中胎儿游离DNA行定量分析，以确定正常浓度范围，为实施无创性产前诊断提供科学依据。从孕早期50名孕妇外周血血浆中提取胎儿DNA，用实时荧光定量聚合酶链反应(fluorescencequantitativepolymerasechainreaction，FQ-PCR)技... 展开

关键词 : 孕妇外周血胎儿DNA 基因阳性 SRY基因

5. 胎盘细胞凋亡在HBsAg阳性孕妇PBMC母-胎转运机制中的作用

[学位论文] 魏俊妮山西医科大学 2012年博士导师: 王素萍共198页

摘要 : 目的: 探讨PBMC母.胎转运与HBV宫内感染的关系，了解其作用的生物学基础；探讨胎盘细胞凋亡对胎盘通透性的影响，了解其与PBMC母-胎转运及新生儿HBV感染的关系；探讨PBMC作为HBV的载体，将孕妇体内HBV转运至胎儿体内导致HBV宫内感染的作用机制。 ... 展开目的: 探讨PBMC母.胎转运与HBV宫内感染的关系，了解其作用的生物学基础；探讨胎盘细胞凋亡对胎盘通透性的影响，了解其与PBMC母-胎转运及新生儿HBV感染的关系；探讨PBMC作为HBV的载体，将孕妇体内HBV转运至胎儿体内导致HBV宫内感染的作用机制。方法: 1.人群研究连续收集2005年1月至2009年2月间太原市区各省市级医院筛检，并在太原市传染病院（太原市第三人民医院）妇产科进行产前检查并分娩的HBsAg阳性孕妇为研究队列，从产前检查追踪观察至分娩，排除孕期有其他感染性疾病或接受免疫治疗的孕妇，共收集HBsAg阳性孕妇及其新生儿共450对作为研究对象。收集孕妇孕期及产后新生儿的流行病学基线资料：采集孕妇分娩前肘静脉血及其新生儿出生24小时内注射乙肝疫苗和乙肝高效价免疫球蛋白(HBIG)前的股静脉血；无菌条件下采集孕妇足月分娩时胎盘组织。进行下述研究： (1)采用等位基因特异性PCR(As-PCR)法检测HBsAg阳性孕妇及其新生儿PBMC中HUMGSTM1、ACE基因多态性，筛选母亲为GSTM1基因表达型(GSTM1+)和/或为ACE基因杂合子（ID型），且其新生儿为GSTM1基因缺失型（GSTM1-）和/或为ACE基因纯合子（纯合插入Ⅱ型或纯合缺失DD型）者作为信息病例对。将GSTM1和ACE基因作为母亲的特异性等位基因，从信息病例对的新生儿外周血PBMC中检测母亲基因，判定是否发生PBMC母—胎转运。 (2)采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测上述方法确定的信息病例对中孕妇及其新生儿外周血HBeAg、HBe-Ab、HBc-Ab及新生儿外周血HBsAg。 (3)采用荧光定量聚合酶联反应(FluorescenceQuantitativePCR，FQ-PCR)检测信息病例对中母儿外周血血清、PBMC中HBVDNA含量及PBMCHBVcccDNA含量。 (4)采用FQ-PCR检测新生儿PBMC中的母亲信息，用△Ct值（Ct目的基因/Ctβ-globin）表示PBMC母-胎转运量。 (5)采用免疫组织化学ABC法检测胎盘组织HBsAg。 (6)采用脱氧核苷酸末端转移酶(TdT)介导的核苷酸(dUTP)缺口末端标记法，原位末端标记技术（Tunel法）检测胎盘组织凋亡指数(AI)，采用免疫组化SP法检测胎盘组织Caspase3蛋白表达，采用real-timeRT-PCR检测胎盘组织Caspase3mRNA表达。 (7)采用巢式病例对照研究分析母-胎细胞转运及新生儿PBMCHBV感染复制及宫内感染的危险因素研究。 (8)采用免疫荧光双标技术检测PBMC涂片上HBsAg和GST，判断感染HBV的PBMC转运情况。 2.体外实验 (1)采用100μlHBVDNA含量为5.0×106(copies/ml)的病人血清感染PBMC，用CCK-8试剂盒检测不同共培养时间点12h、24h、48h和72h细胞的生长状况。将共培养的细胞清洗4次，用荧光定量PCR法检测PBMC和洗液中的HBVDNA的含量。 (2)在1μm孔径Transwell小室共培养模型中，用流式细胞技术(FACS)检测Transwell小室上室感染HBV的PBMC与Bewo的融合现象。再用8μm孔径Transwell小室共培养模型观察PBMC的迁移，用流式细胞技术(FACS)检测下室中标记有绿色荧光的PBMC。 (3)共培养时设立三个组：正常对照组(Bewo)、Bewo+HBV血清共培养组、Bewo+感染HBV的PBMC共培养组，在共培养0h、12h、24h、48h后分别收集各组Bewo细胞，通过流式细胞技术(FACS)检测Bewo的凋亡情况。 (4)用FQ-PCR法检测感染HBV的PBMC与Bewo共培养组不同时间点(0h、12h、24h、48h)的Bewo细胞caspases3mRNA的表达情况。 (5)用FQ-PCR法检测感染HBV的PBMC与Bewo共培养组下室中的PBMC的HBVDNA和HBVcccDNA含量。 3.统计分析资料核实后输入数据库，采用SPSS16.0forwindows软件进行统计分析。计数资料采用X2-test，计算各指标阳性率、x2值、OR值及其95％可信区问；计量资料采用t检验、方差分析及相关性分析。结果: 1.HBsAg阳性孕妇PBMC母.胎转运与孕妇HBV感染及新生儿HBV感染的关系 (1)对连续收集的450对HBsAg阳性孕妇及其新生儿的PBMC采用等位基因特异性PCR检测GSTM1、ACE基因多态性：检出86对母亲GSTM1+基因型且其新生儿GSTM1-基因型的信息病例对，84对母亲ID基因型且其新生儿II/DD基因型的信息病例对，合计将GSTM1、ACE基因作为母亲的特异性等位基因时，共检出155对信息病例对。 (2)孕妇HBsAg、HBeAg双阳性组△Ct值（PBMC转运Ct/β-globinCt值）低于非双阳性组，但差异无统计学意义（r=0.81，P=0.42）；孕妇大、小三阳组△Ct值（PBMC转运Ct/β-globinCt值）均分别低于非大、小三阳组（t=1.42，P=0.16；t=0.02，P=0.98），但差异均无统计学意义。HBsAg阳性孕妇血清HBVDNA各组△Ct值（PBMC转运Ct/β-globinCt值）差别无统计学意义（F=0.37，P＞0.05）。 (3)HBsAg阳性孕妇PBMCHBVDNA阳性组△Ct值（PBMC转运Ct/β-globinCt值）低于阴性组，差异有统计学意义（t=6.42，P=0.00）；HBsAg阳性孕妇PBMCHBVcccDNA阳性组△Ct值（PBMC转运Ct/P-globinCt值）高于阴性组，差异有统计学意义(t=2.13，P=0.04)。 (4)将新生儿血清HBsAg、HBVDNA任一项阳性作为判断新生儿宫内感染的指标，则宫内感染组△Ct值（PBMC转运Ct/β-globinCt值）高于非宫内感染组，但差异无统计学意义(t=0.34，P=0.73)。将新生儿血清HBsAg、HBVDNA及PBMCHBVDNA任一项阳性作为判断新生儿宫内感染的指标，则宫内感染组△Ct值（PBMC转运Ct/β-globinCt值）低于非宫内感染组，差异有统计学意义(t'=6.25，P=0.00)。 2.胎盘HBV感染与HBsAg阳性孕妇母-胎细胞转运及新生儿HBV感染的关系 (1)胎盘HBV感染组△Ct值（PBMC转运Ct/β-globinCt值）高于非感染组，但差异无统计学意义（t=0.38，P=0.70）；胎盘各型细胞HBV感染组△Ct值（PBMC转运Ct/β-globinCt值）除母体面的蜕膜细胞高于非感染组外其它均分别低于非感染组，但差异均无统计学意义（t=0.38,P=0.70；t=0.49,P=0.63；t=0.17,P=0.87；t=1.72，P=0.09）。 (2)胎盘HBV感染与新生儿血清HBsAg有关（x2=4.88，P=0.03）而与新生儿HBVDNA无关（x2=0.10，P=0.76）。将新生儿血清HBsAg、HBVDNA任一项阳性作为判断宫内感染的标准，胎盘HBV感染组的新生儿HBV宫内感染率高于非胎盘HBV感染组，但差异无统计学意义（x2=2.71，P=0.10）。胎盘HBV感染与新生儿PBMCHBVDNA、PBMCHBVcccDNA均无关(x2=1.89、0.76，P=0.17、0.38)。将新生儿血清HBsAg、HBVDNA及PBMCHBVDNA任一项阳性作为判断宫内感染的标准，胎盘HBV感染组的新生儿HBV宫内感染率高于非胎盘HBV感染组，但差异无统计学意义（x2=2.09，P=0.15）。 3.胎盘细胞凋亡与HBsAg阳性孕妇母一胎细胞转运及新生儿HBV感染的关系 (1)采用Tunel法检测155例HBsAg阳性孕妇胎盘的凋亡情况。胎盘细胞胞核出现棕黄色颗粒为凋亡阳性信号表达。从母体面至胎儿面的蜕膜细胞(DC)、滋养层细胞(TC)、绒毛间质细胞(VMC)和绒毛毛细血管内皮细胞(VCEC)凋亡指数分别为4.53±0.07,5.56±0.06,4.66±0.05,4.05±0.06，合计胎盘细胞凋亡指数为4.75±0.05。凋亡指数在HBsAg阳性孕妇胎盘各层细胞上的分布总体上有统计学差异(F值为102.60，P=0.00)，其中以滋养层细胞的凋亡为主，绒毛毛细血管内皮细胞的凋亡少见。采用SNK法进一步比较胎盘各层细胞凋亡指数，结果显示：蜕膜细胞(DC)凋亡指数与滋养层细胞(TC)、绒毛毛细血管内皮细胞(VCEC)的凋亡指数差异均有统计学意义（P值均小于0.05），DC的凋亡指数低于TC而高于VCEC；TC与DC、VMC及VCEC的凋亡指数差异均有统计学意义，TC的凋亡指数高于DC、VMC和VCEC；DC的凋亡指数低于VMC的凋亡指数，但差异无统计学意义。 (2)发生PBMC母-胎转运组的胎盘细胞凋亡指数高于未发生转运组的胎盘细胞凋亡指数，差异有统计学意义（t=3.44，P=0.00）。发生PBMC母-胎转运组的胎盘各层细胞凋亡指数均高于未发生转运组，差异均有统计学意义(t=2.86，P=0.01；t'=4.86，P=0.00；t=2.53，P=0.01；t=2.23,P=0.03)。 (3)将新生儿血清HBsAg、HBVDNA任一项阳性作为判断新生儿HBV宫内感染的标准，宫内感染组的胎盘细胞凋亡指数高于非宫内感染组，但差异无统计学意义（t=1.97，P=0.05）。将新生儿血清HBsAg、HBVDNA和/或PBMCHBVDNA任一项阳性作为判断新生儿HBV宫内感染的标准，宫内感染组的胎盘细胞凋亡指数高于非宫内感染组，差异有统计学意义(t=3.22，P=0.00)。 (4)新生儿外周血PBMCHBVDNA阳性组的胎盘蜕膜细胞(DC)、滋养层细胞(TC)的凋亡指数高于阴性组，差异均有统计学意义(t=2.08，P=0.04；F3.47，P=0.00)。绒毛间质细胞(VMC)、绒毛毛细血管内皮细胞(VCEC)的凋亡指数均高于阴性组，但差异无统计学意义(t'=0.92，P=0.36；t=0.77，P=0.44)。 (5)用免疫组织化学SP法检测155例HBsAg阳性孕妇胎盘Caspase3的表达，胎盘细胞细胞浆和/或细胞膜出现棕黄色染色为Caspase3阳性信号表达。从母体面的蜕膜细胞至胎儿面的蜕膜细胞(DC)、滋养层细胞(TC)、绒毛间质细胞(VMC)和绒毛毛细血管内皮细胞(VCEC)Caspase3阳性表达的灰度值分别为98.40±1.86，82.05±1.39，86.41±1.57，89.10±1.70，合计胎盘Caspase3阳性表达的灰度值为88.99±1.47；积分光密度值分别为15.58±0.33，18.59±0.29，17.67±0.31，17.31±0.35，合计胎盘Caspase3阳性表达的积分光密度值为17.29±0.29。Caspase3蛋白在HBsAg阳性孕妇胎盘各层细胞上的分布总体上有统计学差异(F值分别为17.81、15.54，P值均小于0.05)。进一步采用SNK法进行两两比较，结果显示：蜕膜细胞(DC)Caspase3阳性表达的灰度值与滋养层细胞(TC)、绒毛间质细胞(VMC)和绒毛毛细血管内皮细胞(VCEC)的灰度值差异均有统计学意义（P值均小于0.05），DC的Caspase3阳性表达灰度值均高于TC、VMC和VCEC，TC的Caspase3灰度值最小，即TC凋亡率最高，其次VMC、VCEC，DC凋亡率最低；TC与VMC、VMC与VCEC的Caspase3阳性表达的灰度收起

关键词 : 乙型肝炎病毒外周血单个核细胞宫内感染细胞凋亡胎盘 HBsAg阳性孕妇 PBMC母-胎转运机制

6. 混合细胞性肝癌的临床特点及预后分析

[学位论文] 陈立健中南大学 2011年硕士导师: 苗雄鹰共58页

摘要 : 目的: 探讨混合细胞性肝癌(Combined Hepatocellular andCholangiocarcinoma，cHCC-CC)的临床特点及影响预后的因素。方法: 回顾性分析中南大学湘雅二医院自2002年1月～2010年1月经手术治疗的35例cHCC-CC患者的临床资料，并分别与同期... 展开目的: 探讨混合细胞性肝癌(Combined Hepatocellular andCholangiocarcinoma，cHCC-CC)的临床特点及影响预后的因素。方法: 回顾性分析中南大学湘雅二医院自2002年1月～2010年1月经手术治疗的35例cHCC-CC患者的临床资料，并分别与同期48例CC和339例HCC患者的临床资料进行比较。统计因素包括：年龄、性别、肝胆管结石病史、临床表现、HBsAg阳性率、AFP阳性率、肝功能、肝硬化、肿瘤数目、肿瘤直径、肿瘤位置、包膜、淋巴结转移、侵犯周围脏器、门静脉癌栓、手术根治性切除率、病理分化程度、生存率。结果: 1.cHCC-CC组伴有肝胆管结石病史与CC组比较无差异(17.1％vs35.4％，P>0.05)，而明显高于HCC组(17.1％vs0.9％，P<0.05)。 2.cHCC-CC组有腹痛症状的比例接近于HCC组(51.4％vs54.6％，P>0.05)，高于CC组(51.4％vs22.9％，P<0.05)；发现腹部肿块的患者中，cHCC-CC组也类似于HCC组(37.1％vs36.9％，P>0.05)，显著高于CC组(37.1％vs10.4％，P<0.05)。 3.在HBsAg阳性率、AFP阳性率和肝硬化方面，cHCC-CC组与HCC组相似(74.3％vs80.5％，48.6％vs55.5％，62.9％vs72.6％，均P>0.05)，而显著高于CC组(74.3％vs20.8％，48.6％vs4.2％，62.9％vs35.4％，均P<0.05)。 4.cHCC-CC组和HCC组出现大肝癌(直径>5CM)的比例相似(62.9％vs68.7％，P>0.05)，而明显多于CC组(62.9％vs37.5％，P<0.05)。 5.cHCC-CC组同CC组一样有较高的淋巴结转移率(17.1％vs20.8％，P>0.05)，显著高于HCC组(17.1％vs5.0％，P<0.05)。 6.在侵犯周围脏器方面，cHCC-CC组的发生率与CC组相近(28.6％vs29.2％，P>0.05)，显著高于HCC(28.6％vs11.2％，P<0.05)。 7.cHCC-CC组和HCC组有门静脉癌栓的比例类似(28.6％vs20.6％，P>0.05)，而与CC组比较存在显著性差异(28.6％vs4.2％，P<0.05)。 8.cHCC-CC组手术根治性切除率显著低于CC和HCC组(40.0％vs66.7％，40.0％vs67.8％，均P<0.05)。 9.cHCC-CC组肿瘤呈低分化者比例同CC组相似(48.6％vs39.6％，P>0.05)，明显高于HCC组(48.6％vs18.0％，P<0.05)。 10.cHCC-CC组术后1、3、5年生存率均显著低于HCC组(62.0％VS82.6％、15.0％vs53.0％、0％vs5.0％，均P<0.05)，稍低于CC组，但无统计学意义(62.0％vs69.6％，15.0％vs19.0％，0％vs0％，P>0.05)；在行肝门区淋巴结清扫的姑息性切除当中，cHCC-CC组术后1、3、5年生存率低于CC组，但无统计学意义(20.0％vs43.0％，0％vs0％，0％vs0％，P>0.05)；在行门静脉取栓的姑息性切除当中，cHCC-CC组术后1、3、5年生存率均显著低于HCC组(30.0％vs67.0％，0％vs11.0％，0％vs0％，P<0.05)。 11.对cHCC-CC预后影响有统计学意义的单因素为：淋巴结转移、门静脉癌栓、手术根治性切除率；对CC预后影响有统计学意义的单因素为：淋巴结转移、手术根治性切除率；对HCC预后影响有统计学意义的单因素为：肝功能、肝硬化、肿瘤直径、门静脉癌栓、病理分化程度。 12.对cHCC-CC预后影响有统计学意义的独立因素为：淋巴结转移、门静脉癌栓；对CC预后影响有统计学意义的独立因素为：淋巴结转移、手术根治性切除率；对HCC预后影响有统计学意义的独立因素为：肝硬化、门静脉癌栓。结论： 1.cHCC-CC的临床特点介于CC和HCC之间，更多倾向于HCC，但恶性程度较HCC高，较CC无差异。 2.影响cHCC-CC的独立预后因素为淋巴结转移、门静脉癌栓。 3.cHCC-CC的手术根治性切除率较CC和HCC低，预后比HCC差，较CC无差异。收起

关键词 : 细胞性肝癌临床表现 HBsAg阳性率 AFP阳性率肝功能预后分析手术根治

7. 乙型肝炎免疫接种策略的评价

[学位论文] 于淑丽复旦大学 2003年博士导师: 龚幼龙共124页

摘要 : 研究目的:总目的是通过对两种乙肝免疫接种策略进行投入产出分析,提出有利于实现将中国人群HBsAg阳性率下降到1%目标的接种策略,为卫生决策部门制定防治乙肝的相关政策提供依据.具体目的有:1建立乙肝疫苗接种干预效果预测模型,预测两种不同接种策略人... 展开

关键词 : 乙型肝炎接种策略模型 HBsAg阳性率成本效果效用效益

8. HLA-DRB1*1101和HLA-DRB1*1201基因与乙肝疫苗无、弱应答及HBsAg阳性的关系

[学位论文] 冼雪珍广东药学院 2008年硕士导师: 陈思东共40页

摘要 : 目的：无、弱应答是乙肝预防中的一个重要问题，弄清乙肝疫苗接种后无、弱应答及HBsAg感染的发生原因及其影响因素，对提高乙肝疫苗的免疫效果具有十分重要的意义。本研究尝试探讨HLA-DRB1*1101、HLA-DRB1*1201基因与乙肝疫苗接种后无、弱应答及HBsAg... 展开目的：无、弱应答是乙肝预防中的一个重要问题，弄清乙肝疫苗接种后无、弱应答及HBsAg感染的发生原因及其影响因素，对提高乙肝疫苗的免疫效果具有十分重要的意义。本研究尝试探讨HLA-DRB1*1101、HLA-DRB1*1201基因与乙肝疫苗接种后无、弱应答及HBsAg感染之间的关系，为探索乙肝疫苗接种后无、弱应答及HBsAg感染的发生机制提供依据。方法：选取全程接种乙肝疫苗后幼儿园在托幼儿无、弱应答者75人作为病例组，485人有应答者作为对照组进行病例对照研究，对研究对象进行资料调查，并应用PCR-SSP技术检测研究对象的HLA-DRB1*1101基因和HLA-DRB1*1201基因。采用SPSS13.0软件对获取的研究数据进行单因素分析以及多因素非条件logistic回归分析。另选取在托幼儿中HBsAg阳性37人作为病例组，HBsAg阴性幼儿591人作为对照组进行病例对照研究，对研究对象进行资料调查，并应用PCR-SSP技术检测研究对象的HLA-DRB1*1101基因和HLA-DRB1*1201基因。采用SPSS13.0软件对获取的研究数据进行单因素分析以及多因素非条件logistic回归分析。结果　单因素分析发现，与无、弱应答相关的因素为剂量10ug（OR=0.265, 95％CI 0.141～0.498）。单因素分析还发现，携带HLA-DRB1*1201基因发生无、弱应答的风险为不携带此基因的6.037倍（95％CI 2.412~15.114）；多因素非条件logistic回归分析，最终进入模型的有HLA-DRB1*1201基因（OR=4.612, 95％CI 1.55～13.726）和剂量10ug（OR=0.283, 95％CI 0.149～0.539 ）。单因素分析发现，与HBsAg感染相关的因素为抗-HBs（OR=0.128, 95％CI 0.064～0.256）、剂量10ug（OR=0.274, 95％CI 0.098～0.767）；多因素非条件logistic回归分析，最终进入模型的是抗-HBs（OR=0.052, 95％CI 0.009～0.291）和HLA-DRB1*1101基因（OR=29.000 95％CI 1.803～466.413）。结论：无、弱应答者的发生与HLA-DRB1*1201基因和剂量有关，HLA-DRB1*1201基因型容易导致乙肝疫苗无、弱应答。 HBsAg感染和HLA-DRB1*1101基因型和抗－HBsAb相关，HLA- DRB1*1101基因型容易导致HBsAg感染。收起

关键词 : HLA-DRB1*1101基因 HLA-DRB1*1201基因乙肝疫苗 HBsAg阳性

9. 临床诊断为“非甲～戊型肝炎”患者血清中HBVDNA测定、基因分型

[学位论文] 王小红北京大学 2002年硕士导师: 庄辉共58页

摘要 : 目的了解目前临床诊断为“非甲～戊型肝炎”患者中HBV感染比例、基因分型及其与临床特点的关系.结论临床诊断为“非甲～戊型肝炎”病人中，存在HBsAg阴性的HBV感染.产生HBsAg阴性乙型肝炎可能与下列因素有关：（1）HBsAg水平低;（2）不同HBV基因型感染... 展开

关键词 : 非甲～戊型肝炎 HBsAg阴性乙型肝炎 HBsAg阳性乙型肝炎聚合酶链反应基因型

10. 免疫促凋亡分子scFv15-Fdt-HA2-tBid的基因构建、表达及对HBsAg阳性肝细胞癌的杀伤作用

[学位论文] 闫博第四军医大学 2011年博士导师: 杨安钢共128页

摘要 : 肝细胞癌（hepatocellular carcinoma，HCC）是最常见的恶性肿瘤之一，手术治疗复发率高，传统放、化疗对正常组织毒害大，本组建立的免疫促凋亡策略已经在 HER2肿瘤模型中证实具有明确的抗肿瘤作用，该策略靶向性高、副作用小，有希望推广应用于HCC的... 展开肝细胞癌（hepatocellular carcinoma，HCC）是最常见的恶性肿瘤之一，手术治疗复发率高，传统放、化疗对正常组织毒害大，本组建立的免疫促凋亡策略已经在 HER2肿瘤模型中证实具有明确的抗肿瘤作用，该策略靶向性高、副作用小，有希望推广应用于HCC的抗肿瘤治疗。关键问题是首先获得能够特异地识别HCC肿瘤标志物的单链抗体，以此抗体构建免疫促凋亡分子，使之靶向杀伤HCC肿瘤细胞。本课题组曾从噬菌体抗体库筛选、改造获得一株对HBsAg具有亲和活性并可经由内吞体进入HBsAg阳性肿瘤细胞的人源性单链抗体（scFv15），并证实了由scFv15/鱼精蛋白构成的重组分子能够将小核酸类效应分子特异地输送到HBsAg阳性肝癌细胞中，发挥抗病毒效应，为将该单链抗体用于构建靶向HBsAg的免疫促凋亡分子提供了有力的实验依据。靶向 HBsAg的免疫促凋亡分子由三部分组成：特异识别 HBsAg的scFv15、转位结构域和促凋亡分子。免疫促凋亡分子由scFv15介导靶向进入HBsAg阳性肝癌细胞后，其抗肿瘤作用的强弱取决于两个要素。第一个要素是促凋亡分子必须经过优化，具有尽可能强的细胞凋亡诱导效应。本课题组曾筛选比较了caspase-3、caspase-6、granzyme B、AIF、tBid等多种人体自身促凋亡分子，体内外实验证实，tBid具有分子量小、渗透性强、诱导凋亡时效短、促凋亡效应强等优点，因此本研究采用tBid作为促凋亡效应分子。第二个要素是免疫促凋亡分子必须能够从内吞体转位进入胞浆，具有尽可能高的内吞体转位效率。这是因为免疫促凋亡分子内化进入肿瘤细胞后，包裹于内吞体中，必须从内吞体转位释放到胞浆，才能发挥杀伤效应。免疫促凋亡分子的转位过程包括两步：一是内吞体中的Furin蛋白酶切割免疫促凋亡分子，使单链抗体部分与促凋亡分子分离；二是内吞体膜被破坏，促凋亡分子释放到胞浆。我们以往的研究已经对转位的两步骤进行了优化：第一步的优化结果显示，白喉毒素的Furin识别序列（Fdt）的切割效率最高；第二步的优化结果显示，流感病毒血凝素蛋白中的HA2序列破坏内吞体膜的能力最强，但HA2序列在融合蛋白中所处的位置是否影响其转位功能尚不清楚。本研究首先观察了HA2序列的位置与转位功能的关系。将 HA2序列分别融合于scFv15的N端和C端，只有HA2-scFv15能够破坏内吞体膜，使标记FITC的指示分子弥散性分布于胞浆，因此本研究选择将HA2融合于效应分子的N端。基于上述实验结果，本研究将scFv15、Fdt、HA2、tBid四部分融合表达，构建靶向HBsAg的免疫促凋亡分子scFv15-Fdt-HA2-tBid。该分子具有Fdt序列，可在内吞体中经Furin蛋白酶切割，将HA2暴露于多肽链N末端，进而破坏内吞体膜，释放tBid进入胞浆发挥杀伤效应。构建不含HA2序列的免疫促凋亡分子scFv15-Fdt-tBid作为对照。体外实验表明，scFv15-Fdt-tBid和scFv15-Fdt-HA2-tBid都具有良好的抗原靶向性，可以特异性结合HBsAg阳性肿瘤细胞；融合有HA2序列的scFv15-Fdt-HA2-tBid分子较scFv15-Fdt-tBid能更快速的突破内吞体限制，转位进入胞浆。scFv15-Fdt-tBid和scFv15-Fdt-HA2-tBid对HBsAg阴性细胞无明显毒性，但能通过诱导凋亡显著降低HBsAg阳性肿瘤细胞存活率，且scFv15-Fdt-HA2-tBid的作用更强。免疫促凋亡分子的促凋亡效应与线粒体凋亡通路的激活有关，伴随着线粒体膜电位降低，caspase-9和caspase-3的活化。体内实验表明，经尾静脉注入肝原位荷瘤裸鼠体内的免疫促凋亡分子，能够逐渐向肿瘤所在位置富集，对其他正常组织脏器的累积分布较少，证明免疫促凋亡分子具有良好的在体靶向性及组织渗透性。免疫促凋亡分子治疗后，瘤体增长速度均显著减缓；相对于 scFv15-Fdt-tBid，scFv15-Fdt-HA2-tBid具有更强的肿瘤增殖抑制作用，能够更高效地诱导肿瘤细胞发生凋亡。以正常 Balb/c小鼠对scFv15-Fdt-HA2-tBid进行在体安全性检测，10倍剂量仍未表现出对重要脏器的损伤作用，没有引起明显的炎症反应，提示scFv15-Fdt-HA2-tBid具有良好的体内应用安全性。综上所述，免疫促凋亡分子scFv15-Fdt-HA2-tBid在体内外均可以靶向结合HBsAg阳性肿瘤细胞，具有较强的特异性和良好的渗透性；HA2序列的引入可以促进凋亡效应分子向胞浆释放，显著提高诱导肿瘤细胞凋亡的效率；该分子安全性较好，并且对人体的潜在免疫原性低，对于HBV相关HCC的治疗具有重要的应用价值。收起

关键词 : 免疫促凋亡分子基因构建 HBsAg阳性肝细胞癌杀伤作用