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[学位论文] 魏俊妮山西医科大学 2012年博士导师: 王素萍共198页

摘要 : 目的: 探讨PBMC母.胎转运与HBV宫内感染的关系，了解其作用的生物学基础；探讨胎盘细胞凋亡对胎盘通透性的影响，了解其与PBMC母-胎转运及新生儿HBV感染的关系；探讨PBMC作为HBV的载体，将孕妇体内HBV转运至胎儿体内导致HBV宫内感染的作用机制。 ... 展开目的: 探讨PBMC母.胎转运与HBV宫内感染的关系，了解其作用的生物学基础；探讨胎盘细胞凋亡对胎盘通透性的影响，了解其与PBMC母-胎转运及新生儿HBV感染的关系；探讨PBMC作为HBV的载体，将孕妇体内HBV转运至胎儿体内导致HBV宫内感染的作用机制。方法: 1.人群研究连续收集2005年1月至2009年2月间太原市区各省市级医院筛检，并在太原市传染病院（太原市第三人民医院）妇产科进行产前检查并分娩的HBsAg阳性孕妇为研究队列，从产前检查追踪观察至分娩，排除孕期有其他感染性疾病或接受免疫治疗的孕妇，共收集HBsAg阳性孕妇及其新生儿共450对作为研究对象。收集孕妇孕期及产后新生儿的流行病学基线资料：采集孕妇分娩前肘静脉血及其新生儿出生24小时内注射乙肝疫苗和乙肝高效价免疫球蛋白(HBIG)前的股静脉血；无菌条件下采集孕妇足月分娩时胎盘组织。进行下述研究： (1)采用等位基因特异性PCR(As-PCR)法检测HBsAg阳性孕妇及其新生儿PBMC中HUMGSTM1、ACE基因多态性，筛选母亲为GSTM1基因表达型(GSTM1+)和/或为ACE基因杂合子（ID型），且其新生儿为GSTM1基因缺失型（GSTM1-）和/或为ACE基因纯合子（纯合插入Ⅱ型或纯合缺失DD型）者作为信息病例对。将GSTM1和ACE基因作为母亲的特异性等位基因，从信息病例对的新生儿外周血PBMC中检测母亲基因，判定是否发生PBMC母—胎转运。 (2)采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测上述方法确定的信息病例对中孕妇及其新生儿外周血HBeAg、HBe-Ab、HBc-Ab及新生儿外周血HBsAg。 (3)采用荧光定量聚合酶联反应(FluorescenceQuantitativePCR，FQ-PCR)检测信息病例对中母儿外周血血清、PBMC中HBVDNA含量及PBMCHBVcccDNA含量。 (4)采用FQ-PCR检测新生儿PBMC中的母亲信息，用△Ct值（Ct目的基因/Ctβ-globin）表示PBMC母-胎转运量。 (5)采用免疫组织化学ABC法检测胎盘组织HBsAg。 (6)采用脱氧核苷酸末端转移酶(TdT)介导的核苷酸(dUTP)缺口末端标记法，原位末端标记技术（Tunel法）检测胎盘组织凋亡指数(AI)，采用免疫组化SP法检测胎盘组织Caspase3蛋白表达，采用real-timeRT-PCR检测胎盘组织Caspase3mRNA表达。 (7)采用巢式病例对照研究分析母-胎细胞转运及新生儿PBMCHBV感染复制及宫内感染的危险因素研究。 (8)采用免疫荧光双标技术检测PBMC涂片上HBsAg和GST，判断感染HBV的PBMC转运情况。 2.体外实验 (1)采用100μlHBVDNA含量为5.0×106(copies/ml)的病人血清感染PBMC，用CCK-8试剂盒检测不同共培养时间点12h、24h、48h和72h细胞的生长状况。将共培养的细胞清洗4次，用荧光定量PCR法检测PBMC和洗液中的HBVDNA的含量。 (2)在1μm孔径Transwell小室共培养模型中，用流式细胞技术(FACS)检测Transwell小室上室感染HBV的PBMC与Bewo的融合现象。再用8μm孔径Transwell小室共培养模型观察PBMC的迁移，用流式细胞技术(FACS)检测下室中标记有绿色荧光的PBMC。 (3)共培养时设立三个组：正常对照组(Bewo)、Bewo+HBV血清共培养组、Bewo+感染HBV的PBMC共培养组，在共培养0h、12h、24h、48h后分别收集各组Bewo细胞，通过流式细胞技术(FACS)检测Bewo的凋亡情况。 (4)用FQ-PCR法检测感染HBV的PBMC与Bewo共培养组不同时间点(0h、12h、24h、48h)的Bewo细胞caspases3mRNA的表达情况。 (5)用FQ-PCR法检测感染HBV的PBMC与Bewo共培养组下室中的PBMC的HBVDNA和HBVcccDNA含量。 3.统计分析资料核实后输入数据库，采用SPSS16.0forwindows软件进行统计分析。计数资料采用X2-test，计算各指标阳性率、x2值、OR值及其95％可信区问；计量资料采用t检验、方差分析及相关性分析。结果: 1.HBsAg阳性孕妇PBMC母.胎转运与孕妇HBV感染及新生儿HBV感染的关系 (1)对连续收集的450对HBsAg阳性孕妇及其新生儿的PBMC采用等位基因特异性PCR检测GSTM1、ACE基因多态性：检出86对母亲GSTM1+基因型且其新生儿GSTM1-基因型的信息病例对，84对母亲ID基因型且其新生儿II/DD基因型的信息病例对，合计将GSTM1、ACE基因作为母亲的特异性等位基因时，共检出155对信息病例对。 (2)孕妇HBsAg、HBeAg双阳性组△Ct值（PBMC转运Ct/β-globinCt值）低于非双阳性组，但差异无统计学意义（r=0.81，P=0.42）；孕妇大、小三阳组△Ct值（PBMC转运Ct/β-globinCt值）均分别低于非大、小三阳组（t=1.42，P=0.16；t=0.02，P=0.98），但差异均无统计学意义。HBsAg阳性孕妇血清HBVDNA各组△Ct值（PBMC转运Ct/β-globinCt值）差别无统计学意义（F=0.37，P＞0.05）。 (3)HBsAg阳性孕妇PBMCHBVDNA阳性组△Ct值（PBMC转运Ct/β-globinCt值）低于阴性组，差异有统计学意义（t=6.42，P=0.00）；HBsAg阳性孕妇PBMCHBVcccDNA阳性组△Ct值（PBMC转运Ct/P-globinCt值）高于阴性组，差异有统计学意义(t=2.13，P=0.04)。 (4)将新生儿血清HBsAg、HBVDNA任一项阳性作为判断新生儿宫内感染的指标，则宫内感染组△Ct值（PBMC转运Ct/β-globinCt值）高于非宫内感染组，但差异无统计学意义(t=0.34，P=0.73)。将新生儿血清HBsAg、HBVDNA及PBMCHBVDNA任一项阳性作为判断新生儿宫内感染的指标，则宫内感染组△Ct值（PBMC转运Ct/β-globinCt值）低于非宫内感染组，差异有统计学意义(t'=6.25，P=0.00)。 2.胎盘HBV感染与HBsAg阳性孕妇母-胎细胞转运及新生儿HBV感染的关系 (1)胎盘HBV感染组△Ct值（PBMC转运Ct/β-globinCt值）高于非感染组，但差异无统计学意义（t=0.38，P=0.70）；胎盘各型细胞HBV感染组△Ct值（PBMC转运Ct/β-globinCt值）除母体面的蜕膜细胞高于非感染组外其它均分别低于非感染组，但差异均无统计学意义（t=0.38,P=0.70；t=0.49,P=0.63；t=0.17,P=0.87；t=1.72，P=0.09）。 (2)胎盘HBV感染与新生儿血清HBsAg有关（x2=4.88，P=0.03）而与新生儿HBVDNA无关（x2=0.10，P=0.76）。将新生儿血清HBsAg、HBVDNA任一项阳性作为判断宫内感染的标准，胎盘HBV感染组的新生儿HBV宫内感染率高于非胎盘HBV感染组，但差异无统计学意义（x2=2.71，P=0.10）。胎盘HBV感染与新生儿PBMCHBVDNA、PBMCHBVcccDNA均无关(x2=1.89、0.76，P=0.17、0.38)。将新生儿血清HBsAg、HBVDNA及PBMCHBVDNA任一项阳性作为判断宫内感染的标准，胎盘HBV感染组的新生儿HBV宫内感染率高于非胎盘HBV感染组，但差异无统计学意义（x2=2.09，P=0.15）。 3.胎盘细胞凋亡与HBsAg阳性孕妇母一胎细胞转运及新生儿HBV感染的关系 (1)采用Tunel法检测155例HBsAg阳性孕妇胎盘的凋亡情况。胎盘细胞胞核出现棕黄色颗粒为凋亡阳性信号表达。从母体面至胎儿面的蜕膜细胞(DC)、滋养层细胞(TC)、绒毛间质细胞(VMC)和绒毛毛细血管内皮细胞(VCEC)凋亡指数分别为4.53±0.07,5.56±0.06,4.66±0.05,4.05±0.06，合计胎盘细胞凋亡指数为4.75±0.05。凋亡指数在HBsAg阳性孕妇胎盘各层细胞上的分布总体上有统计学差异(F值为102.60，P=0.00)，其中以滋养层细胞的凋亡为主，绒毛毛细血管内皮细胞的凋亡少见。采用SNK法进一步比较胎盘各层细胞凋亡指数，结果显示：蜕膜细胞(DC)凋亡指数与滋养层细胞(TC)、绒毛毛细血管内皮细胞(VCEC)的凋亡指数差异均有统计学意义（P值均小于0.05），DC的凋亡指数低于TC而高于VCEC；TC与DC、VMC及VCEC的凋亡指数差异均有统计学意义，TC的凋亡指数高于DC、VMC和VCEC；DC的凋亡指数低于VMC的凋亡指数，但差异无统计学意义。 (2)发生PBMC母-胎转运组的胎盘细胞凋亡指数高于未发生转运组的胎盘细胞凋亡指数，差异有统计学意义（t=3.44，P=0.00）。发生PBMC母-胎转运组的胎盘各层细胞凋亡指数均高于未发生转运组，差异均有统计学意义(t=2.86，P=0.01；t'=4.86，P=0.00；t=2.53，P=0.01；t=2.23,P=0.03)。 (3)将新生儿血清HBsAg、HBVDNA任一项阳性作为判断新生儿HBV宫内感染的标准，宫内感染组的胎盘细胞凋亡指数高于非宫内感染组，但差异无统计学意义（t=1.97，P=0.05）。将新生儿血清HBsAg、HBVDNA和/或PBMCHBVDNA任一项阳性作为判断新生儿HBV宫内感染的标准，宫内感染组的胎盘细胞凋亡指数高于非宫内感染组，差异有统计学意义(t=3.22，P=0.00)。 (4)新生儿外周血PBMCHBVDNA阳性组的胎盘蜕膜细胞(DC)、滋养层细胞(TC)的凋亡指数高于阴性组，差异均有统计学意义(t=2.08，P=0.04；F3.47，P=0.00)。绒毛间质细胞(VMC)、绒毛毛细血管内皮细胞(VCEC)的凋亡指数均高于阴性组，但差异无统计学意义(t'=0.92，P=0.36；t=0.77，P=0.44)。 (5)用免疫组织化学SP法检测155例HBsAg阳性孕妇胎盘Caspase3的表达，胎盘细胞细胞浆和/或细胞膜出现棕黄色染色为Caspase3阳性信号表达。从母体面的蜕膜细胞至胎儿面的蜕膜细胞(DC)、滋养层细胞(TC)、绒毛间质细胞(VMC)和绒毛毛细血管内皮细胞(VCEC)Caspase3阳性表达的灰度值分别为98.40±1.86，82.05±1.39，86.41±1.57，89.10±1.70，合计胎盘Caspase3阳性表达的灰度值为88.99±1.47；积分光密度值分别为15.58±0.33，18.59±0.29，17.67±0.31，17.31±0.35，合计胎盘Caspase3阳性表达的积分光密度值为17.29±0.29。Caspase3蛋白在HBsAg阳性孕妇胎盘各层细胞上的分布总体上有统计学差异(F值分别为17.81、15.54，P值均小于0.05)。进一步采用SNK法进行两两比较，结果显示：蜕膜细胞(DC)Caspase3阳性表达的灰度值与滋养层细胞(TC)、绒毛间质细胞(VMC)和绒毛毛细血管内皮细胞(VCEC)的灰度值差异均有统计学意义（P值均小于0.05），DC的Caspase3阳性表达灰度值均高于TC、VMC和VCEC，TC的Caspase3灰度值最小，即TC凋亡率最高，其次VMC、VCEC，DC凋亡率最低；TC与VMC、VMC与VCEC的Caspase3阳性表达的灰度收起

关键词 : 乙型肝炎病毒外周血单个核细胞宫内感染细胞凋亡胎盘 HBsAg阳性孕妇 PBMC母-胎转运机制

2. 基于遗传算法的最优决策值选择及医药学应用研究

[学位论文] 仇丽霞山西医科大学 2007年博士导师: 王素萍共193页

摘要 : 医药学研究领域中存在大量的决策分析，如初治完全缓解的急性白血病患者生存时间最长的时缓解时间和治疗时间水平、诊断试验最优决策界值、公共卫生资源的最优分配、动物疾病模型的造模条件选择、药物有效成分最优提取条件确定等优化问题都属于决策分... 展开医药学研究领域中存在大量的决策分析，如初治完全缓解的急性白血病患者生存时间最长的时缓解时间和治疗时间水平、诊断试验最优决策界值、公共卫生资源的最优分配、动物疾病模型的造模条件选择、药物有效成分最优提取条件确定等优化问题都属于决策分析。本课题在介绍遗传算法原理和方法的基础上，利用英国Glasgow大学软件工程师陈益开发的Matlab外挂SGALAB工具箱，研究医药学研究领域中几个最优决策界值选择的优化问题。本课题的研究内容主要有：第一部分单目标遗传算法效果分析及应用研究对标准测试函数f<,1>(x)=x，x∈[0，2]，分别进行最大优化。结果显示：在x∈(0，2)范围内，搜索的目标函数值等于或接近4，与函数唯一解有较好的近似度。提示：单目标优化结果达到了测试函数理论值水平，所用SGALAB beta5程序是合理的；由于遗传算法的随机性，应用中可多运行几次，选择目标函数值最大或取平均水平作为最优解方案。在此基础上，重点研究初治完全缓解的急性白血病患者生存时间最长以及患者生存时间不低于24个月，持续缓解时间和巩固治疗时间的水平；同时研究了目标变量无约束、模型略复杂、决策变量可控的芦丁最优萃取条件。结果显示：持续缓解时间达到72.4个月、巩固治疗时间达到41.1个月，患者最长可以活满78.3个月。初治完全缓解的急性白血病患者生存时间不低于24个月，则持续缓解时间不低于19.1个月，或巩固治疗时间不低于30.1个月。在三棱超临界CO<,2>萃取芦丁工艺的最优试验条件研究中，结果提示：萃取压力18Mpa、萃取温度45℃、改性剂用量36ml、改性剂体积分数为0.95、静态平衡时间30 min、动态萃取时间45min，芦丁萃取量可以达到5.5023ug/g，与试验结果中最高萃取量的8号试验相比，提高了10.6896。第二部分多目标遗传算法及效果分析对测试函数f<,1>(x)=x，x∈[0,2]，进行两目标最大的优化。结果显示：决策变量x的Pareto非劣解基本在两函数交叉点附近分布，该处是x的最优选择范围；多目标遗传算法(MOGA)、小生境遗传算法(NPGA)、非劣分类遗传算法(NSGA)、改进的非劣分类遗传算法(NSGAⅡ)95%可信区间包含了交叉点解，向量评估遗传算法(VEGA)的x偏向较大取值一侧；非劣解前端光滑地沿曲线分布；五种多目标遗传算法搜索的子目标函数值、决策变量x的Pareto非劣解平均水平尚无统计学差异(F值均为0.184、P值均小于0.001)；NPGA解的变异度大、多样性好， MOGA、NSGA精度高，VEGA给出始末端处的非劣解较多。提示：对于互为冲突的两目标优化，可以首选MOGA、NPGA、NSGA，其次选择NSGAⅡ，而VEGA的结果可作为参考；应用中，据实际问题的需要，在给出的Pareto非劣解方案中，选择合适的满意解或者平均水平作为最优解。由于搜索结果符合测试函数的数学理论，认为所用多目标遗传算法程序具有合理性。第三部分多目标遗传算法在最佳诊断决策界值选择中的应用研究流行病诊断试验需要在灵敏度、特异度最大前提下确定最优决策界值。传统方法取灵敏度与特异度函数交叉点作为最优决策值，根据实际需要来看，该法存在一定的局限性。本章对可疑贫血患者红细胞平均体积(MCV)决策界值的研究显示：五种多目标遗传算法的目标函数值、MCV决策水平尚无统计学差异，且都包含交叉点，但各方法变异度不同，MOGA、NPGA提供的解多样性好，因此，对灵敏度与特异度相互冲突的两目标优化，MOGA、NPGA仍是首选的方法。如果治疗缺铁性贫血的疗法效果好，对无病者的健康没有严重影响，费用不高，可以要求诊断的灵敏度高，选择以MOGA 8号方案，即MCV<84 fl诊断为贫血，其灵敏度76.5%，特异度50.0%。也可以选择MOGA的平均水平作为决策界值，即MCV<81fl诊断为贫血，其灵敏度61.8%，特异度68.2%。本课题增加约登指数、灵敏度特异度和、灵敏度特异度积的目标函数研究优化效果，但从进化结果看，不同目标数间结果尚无统计学差异。提示：应用中抓住问题的主要目标，就可以达到研究目的。诊断试验决策界值选择与成本关系密切，需要确定使成本最小的ROC最佳工作点，再通过模型计算决策界值。因为难度较大，应用中成本问题往往被忽视。本课题将其转化为：①ROC曲线最佳工作点处切线截距intercept=se-slope·(1-sp)最大，②ROC曲线最佳工作点处切线斜率与ROC曲线斜线相等，即constraint=-abs(df(1-sp)-slope)最大，利用遗传算法进行两目标优化。结果显示：当成本比为0.25，MCV<88.5fl诊断为贫血，诊断试验的灵敏度为94.1%、特异度为30.3%；当成本比为0.5，MCV<82.0 fl诊断为贫血，灵敏度为70.6%、特异度为63.6%；当成本比为O.75，MCV<78.0 fl诊断为贫血，灵敏度为50.0%、特异度为77.3%；当成本比再增大时，确定的红细胞平均体积决策水平更低，方法的灵敏度降低，应用的价值不大。遗传算法与数学求导结果很近似，在大部分指标上尚无统计学差异，其中以MOGA、NPGA、NSGAⅡ结果更为满意，其次是NSGA，对于相互冲突的两目标优化，VEGA不作为首选，可以作为补充。由于遗传算法不要求对优化问题的性质作深入的数学分析，其效果优于双正态模型。第四部分基于多目标遗传算法的疾病预后判断标准的选择研究表明，流行病诊断试验方法也可用于疾病预后判断标准的选择，在不考虑成本比时，对于严重头外伤患者脑脊液同工酶——肌氨酸激酶(CK-BB)预后判断的决策界值选择，选择2目标结果较好，2目标五种遗传算法的搜索效果尚无统计学差异。如果损伤早期有较好的预防措施，可以选择MOGA 15号方案，即CK-BB>91(U/L)为预后不良，其灵敏度为85.4%，特异度为42.1%。考虑成本比时，MOGA、NPGA、NSGAⅡ的效果较满意。结果提示：成本比为1.0，CK-BB>86U/L预后不良，诊断试验的灵敏度为87.8%，特异度为42.1%；成本比为2.0，CK-BB>159U/L预后不良，灵敏度为73.2%，特异度为73.7%；成本比为3.0，CK-BB>233U/L预后不良，灵敏度为58.5%，特异度为84.2%。这些结果为临床医生针对具体治疗措施的效果，对患者预后进行合理判断提供了参考。由于严重头外伤患者不良预后的发生率为68.3%，成本比的可行取值范围在0.1～4.0；可疑贫血患者的患病率是34.0%，成本比的可行取值范围是0.1～1.5。提示：某些文献提到成本比取值范围为0.5～2.5，可认为是一个常用的可行取值范围，应用中应考虑先验概率水平和研究目的，对成本比作出合理选择。第五部分基于遗传算法的药物有效成分最优提取条件确定本章利用微波萃取五味子提取工艺的资料，研究浸膏得率(%)、五味子醇甲含量(%)、五味子总木脂素含量(%)、五味子醇甲转移率(%)四个相互竞争的多目标优化，结果显示：VEGA给出始末端处的解较多、最大目标函数值较大，因此，对于多个相互竞争的优化问题，首选VEGA，其次可以考虑NSGA、NSGAⅡ；这三种方法的五味子醇甲、五味子总木脂素都达到了单目标最大目标函数值的77%以上，确定的最优提取条件的效果高于试验中任何一个方案。由于五味子醇甲转移率可通过五味子醇甲来计算，利用前3个评价指标作为目标函数，就可以达到很好的效果。若以三目标NSGAⅡ 11号方案看，50克五味子饮片粉碎79目，加入4.5倍的89%乙醇，在703W微波下萃取8分钟，浸膏得率22.0696、五味子醇甲5.06%、五味子总木脂素11.83%。收起

关键词 : 遗传算法预后分析诊断试验成本比最优决策界值最优提取条件

3. 性激素代谢及血管生成通路相关基因多态性与子痫前期发病关系研究

[学位论文] 张萍山西医科大学 2018年博士导师: 王素萍共103页

摘要 : 目的： 1.性激素合成和代谢异常可能与子痫前期的发生有关，流行病学研究显示,关于性激素代谢通路相关基因多态性影响性激素代谢通路中酶和受体活性，但与子痫前期的关系还不是很清楚，因此，本研究试探讨性激素代谢通路基因多态性与子痫前期及其... 展开目的： 1.性激素合成和代谢异常可能与子痫前期的发生有关，流行病学研究显示,关于性激素代谢通路相关基因多态性影响性激素代谢通路中酶和受体活性，但与子痫前期的关系还不是很清楚，因此，本研究试探讨性激素代谢通路基因多态性与子痫前期及其临床亚型的关系。 2.血管重铸异常是导致子痫前期的重要机制之一，血管生成和抗血管生成的失调是血管重铸异常重要原因，具体机制仍不是很清楚，本研究试探讨血管生成通路基因多态性与子痫前期及其临床亚型的关系。 3.子痫前期的发生与性激素调控血管生成异常关系密切，拟探讨性激素及血管生成通路基因多态性与子痫前期及其临床亚型的关系。对象与方法：研究对象与研究方法：选自2012年3月到2013年11月山西医科大学第一附属医院妇产科建立的出生队列，排除妊娠结局为流产、死胎、多胎、出生缺陷及慢性高血压、慢性心血管疾病患者，且信息完整。按诊断标准“妊娠期高血压疾病诊治指南”，共计纳入子痫前期孕妇203例作为病例组；同时在非妊娠高血压健康孕妇中按照孕妇年龄和居住地相同、怀孕时间频数匹配，随机选择健康孕妇233例作为对照组，进行巢式病例对照研究，探讨性激素代谢和血管生成通路相关基因多态性与子痫前期发病关系。采用统一的孕期妇女健康调查问卷，内容包括一般人口学特征，孕妇本次怀孕情况、疾病史，孕妇临床诊断，影响因素（包括既往疾病史、主动（被动）吸烟及饮酒等情况），并采集血样。实验方法：用试剂盒（Qiagen）提取孕妇抗凝全血 DNA，所有单核苷酸多态性位点分型均在Illumina Goldengate Platform上进行。检测性激素代谢通路候选基因共计28个基因，111个SNP位点；血管生成通路基因共计6个基因，15个SNP位点基因分型。每批检测选取5%的样品做重复样检测，作为质控。统计方法：数据分析采用SAS 9.4统计软件，应用χ2检验及t检验分析比较病例组及对照组孕妇基本特征。采用χ2检验分析SNP在一般人群（即对照组）中是否符合哈迪-温伯格遗传平衡定律（Hardy-Weinberg Equilibrium，HWE），采用Min P法来检验基因与子痫前期发病风险的关系。采用非条件Logistic回归模型筛选两条通路单个SNP及多个SNP与子痫前期及亚型发病风险的关系，调整因素包括孕妇年龄，受教育水平和孕前 BMI。基因连锁不平衡的检测使用Haploview 4.2，方法采用四配子检验法（four gamete rule），将最常见的单倍体型作为参比，调整孕妇年龄，受教育水平和孕前 BMI，分析单倍体与子痫前期发病风险的关系；采用以哈迪-温伯格平衡为前提的最大似然算法（EM法）估计单个单倍体型的频率，分析单倍体与子痫前期及亚型发病风险的关系采用非条件Logistic回归模型。结果分析中涉及多重比较均采用FDR（False discovery rate，错误发现率）法（q=0.2）矫正检验水准α。采用ESEfinder 3.0在线软件来预测所研究SNP功能。结果：用巢式病例对照研究的方法进行性激素代谢和血管生成通路相关基因多态性与子痫前期发病关系的研究，在病例组和对照组研究对象基本特征均衡可比前提下，对性激素代谢通路基因和血管生成通路基因符合遗传平衡定律的28个基因（94个SNP）和6个基因（12个SNP）位点基因分型与子痫前期发病风险的关系进行了探讨，研究主要结果分述如下： 1. 性激素代谢通路基因多态性与子痫前期发病风险关系 ⑴与性激素合成和代谢相关基因多态性与子痫前期发病的关系：检验水准通过FDR法矫正，结果显示：TXNRD2/COMTrs3788314（ORGG=2.15；ORAG&GG=1.68）， SULT1A2/1A1rs4788073 （ ORAG=1.67；ORGG=4.01；ORAG&GG=1.82 ）， CYP17A1 rs4919690（ORAG=1.65；ORAG&GG=1.66），rs4919687（ORAG=1.5；ORAG&GG=1.54）基因多态性位点表型会增加子痫前期发病风险；HSD17B3 rs8190512（ORAC=0.61；ORCC=0.55；ORAC&CC=0.59）基因多态性位点表型会降低子痫前期发病风险。而各基因与子痫前期临床亚型表现各异：TXNRD2/COMTrs3788314，SULT1A2/1A1rs4788073， HSD17B3 rs8190512基因多态性与早发型、重度子痫前期发病风险有关；CYP17A1 rs4919690，rs4919687基因多态性与迟发型、重度子痫前期发病风险有关；CYP17A1rs4919690 基因多态性与早发型子痫前期发病风险有关；SULT1A2/1A1rs4788073基因多态性与轻度子痫前期发病风险有关。 ⑵与促性腺激素和生殖细胞发育相关基因多态性与子痫前期发病的关系：结果显示：LHCGRrs10180731（ORAG&GG=1.45）基因多态性位点表型会增加子痫前期发病风险。同时该基因多态性与早发型和重度子痫前期发病风险有关系；GNRHRrs2630488（ORAG=0.57；ORAG&GG=0.56）基因多态性与重度子痫前期发病风险有关。所有与子痫前期发病风险相关的性激素代谢通路 SNP 位点，经功能预测，显示突变位点影响前RNA结合位点。 ⑶研究还发现 HSD17B3 基因存在单体域（ rs10739847&rs11788785&rs13302476&rs8190512）且表型为A-A-A-A和C-A-A-C对子痫前期呈保护作用，而 LHCGR、SULF1 基因存在单体域（ rs12469065&rs10180731&rs4594496&rs4245821）、（rs10106958&rs7813987&rs6990375）表型为A-C-A-A和A-C-C会增加子痫前期发病危险。 2. 血管生成通路基因多态性与子痫前期发病风险未发现有关联性，但观察到该通路基因多态性与子痫前期各亚型发病风险相关。在子痫前期发病时间早晚各亚型分析结果显示， FLT-1rs12584067 （ORGC=1.98；ORGC&GG=1.99）基因多态性位点表型会增加早发型子痫前期发病风险；VEGFCrs1485766（ORAC&CC=0.58）基因多态性位点表型会降低早发型子痫前期发病风险。在子痫前期病情轻重各亚型分析结果显示，VEGFArs3025039 （ ORTT=3.14 ）基因多态性位点表型会增加轻度子痫前期发病风险。ENGrs10121110（ORTC=2.17）基因多态性位点表型会增加重度子痫前期发病风险；而 VEGFArs3025039 （ ORTC&TT=0.50 ）， VEGFCrs1485766 （ ORAC=0.50；ORAC&CC=0.50），VEGFArs699947（ORAC&AA=0.55）基因多态性位点表型会降低重度子痫前期发病风险。所有与子痫前期发病风险相关的非编码基因SNP位点，经ESEfinder3.0预测功能，显示突变位点影响前RNA结合位点。 3. 性激素及血管生成通路基因多态性与子痫前期发病风险关系，显示TXNRD2/COMTrs3788314 （ORGG=2.53；ORAG&GG=1.65），SULT1A2/1A1rs4788073 （OR AG&GG=1.71），LHCGRrs10180731（ ORGG=2.29；ORAG&GG =1.53）基因多态性位点表型会增加子痫前期发病风险；HSD17B3rs8190512（ORAC&CC=0.46）， VEGFC rs1485766（ORAC=0.59；ORCC=0.50；ORAC&CC=0.60）基因多态性位点表型会降低子痫前期发病风险。子痫前期发病时间早晚各亚型分析结果显示：TXNRD2/COMTrs3788314， ENGrs10121110, VEGFCrs1485766 基因多态性位点与早发型子痫前期发病风险有关；TXNRD2/COMTrs3788314，SULT1A2/1A1rs4788073，CYP17A1rs4919690， LHCGRrs10180731，HSD17B3rs8190512基因多态性位点与迟发型子痫前期发病风险有关。子痫前期病情轻重各亚型分析结果显示：TXNRD2/COMTrs3788314 ， SULT1A2/1A1rs4788073，LHCGRrs10180731，VEGFArs3025039，GNRHR rs2630488基因多态性位点与轻度子痫前期发病风险有关。TXNRD2/COMTrs3788314 ， SULT1A2/1A1rs4788073，LHCGRrs10180731，ENGrs10121110 ，VEGFArs699947, VEGFArs3025039，VEGFCrs1485766基因多态性位点与重度子痫前期发病风险有关。结论： 1.性激素代谢通路 ①与性激素合成和代谢相关基因：SULT1A2/SULT1A1（rs4788073），CYP17A1 （rs4919690、rs4919687），TXNRD2/COMT（rs3788314），HSD17B3（rs8190512）位点多态性可能是子痫前期及其临床亚型发病机制过程中发挥重要的作用。 ②与促性腺激素和生殖细胞发育过程中受体相关的基因 LHCGR （rs10180731）和GNRHR（rs2630488）位点多态性与子痫前期及其各临床亚型发病机制中发挥重要作用。 2.血管生成通路基因 ①VEGF与VEGFR1通路相关基因：VEGFA（rs699947、rs3025039），FLT-1 （rs12584067），VEGFC（rs1485766）基因位点多态性在子痫前期临床亚型发病过程中发挥关键作用。②ENG通路基因：ENG（rs10121110）基因位点多态性是重度子痫前期发病机制中发挥重要作用。推断血管生成通路基因多态性与子痫前期亚型易感性相关，通过影响血管生成通路中因子的功能最终影响疾病的发生。 3.性激素代谢与血管生成通路中TXNRD2/COMT（rs3788314）、SULT1A2/1A1（rs4788073）、CYP17A1（rs4919690）、HSD17B3（rs8190512）、LHCGR （rs10180731）、GNRHR（rs2630488）、VEGFA（rs699947、rs3025039）、VEGFC （rs1485766）、ENG（rs10121110）基因多态性在子痫前期发病及其各临床亚型发病机制中发挥重要作用，推测这些基因多态性会影响蛋白表达和功能，可能存在相互调节控制关系，通过性激素调节血管生成通路共同导致子痫前期的发病。收起

关键词 : 子痫前期临床亚型性激素代谢血管生成基因基因多态性

4. 太原地区社区及医院获得性肺炎流行特征研究

[学位论文] 范炤山西医科大学 2007年博士导师: 王素萍共98页

摘要 : 目的：肺炎按照传播来源不同可分为社区获得性肺炎(CAP)和医院获得性肺炎(NP)，社区获得性肺炎和医院获得性肺炎在临床上均常见，可发生于任何人群。在以肺炎为主要临床特征的突发公共卫生事件日趋严重的情况下，我国尚没有肺炎病例报告制度，各地区流... 展开目的：肺炎按照传播来源不同可分为社区获得性肺炎(CAP)和医院获得性肺炎(NP)，社区获得性肺炎和医院获得性肺炎在临床上均常见，可发生于任何人群。在以肺炎为主要临床特征的突发公共卫生事件日趋严重的情况下，我国尚没有肺炎病例报告制度，各地区流行强度、流行优势菌株及其变迁规律尚不明了，对引起暴发的病原菌缺少深入的研究。不同的疾病应采取不同的监测手段与方法，而针对肺炎根据其发病特点和诊断标准，只能采取依托于医院的监测方法。本课题通过以医院为基础的肺炎监测，了解太原地区社区及医院获得性肺炎病原微生物感染特点、流行的优势菌株、感染模式等，探讨太原地区社区及医院获得性肺炎的流行规律以及流行趋势；在对其病原学特征、流行影响因素进行综合性研究的基础上，为未来病原体及耐药性的变化趋势以及加强地区性社区及医院获得性肺炎的监测工作提供科学指导，为进行公共卫生突发事件的预警，为进一步开展和加强我国社区及医院获得性肺炎的监测工作，为制定防治策略和措施提供科学依据。方法： 1.收集太原地区2005年12月至2006年12月各协作医院成人和儿童CAP患者的痰(咽试子)、血清学标本、相关临床和流行病学资料。 2.应用VITEK自动微生物分析仪对CAP患者痰(咽试子)进行细菌分离鉴定。根据美国临床实验标准化委员会(NCCLS)颁布的细菌药敏实验参考标准进行，采用Kirby-Bauer。纸片扩散法对分离培养出的细菌测定体外药敏活性，应用稀释法测定抗生素最低抑菌浓度MIC值。超广谱酶检测按NCCPLS推荐的纸片扩散初筛法和确证测定ESBLs指南进行。 3.CAP患者血清学标本非典型病原体的检测：用微量颗粒凝集法诊断试剂盒检测肺炎支原体IgM抗体，用间接免疫荧光法(MIF)滴定平板技术检测肺炎衣原体IgM抗体；用聚合酶链反应方法检测CAP患者痰(咽拭子)军团菌种属特异性的16SrRNA基因DNA，以判定军团菌感染。 4.收集1995年1月至2006年12月各协作医院成人医院获得性肺炎的回顾性资料，在分析成人NP患者人群分布特征以及详细的临床资料基础上，采用病例对照研究，单因素和logistic多因素分析方法，筛选出发生NP的危险因素。 5.以NP危险因素作为网络输入，以每月NP发病率作为输出，构建。BP神经网络模型。对医院获得性肺炎发生情况进行评价、对发病率进行预测，并结合NP发生的危险因素对NP的预防控制提供科学依据。 6.收集2003年1月至2005年12月山西省儿童医院NP患儿回顾性资料，对NP患儿的年龄分布、科室分布、主要原发疾病、发病季节、病原菌分布及耐药情况等进行分析。结论： 1.太原地区CAP患者以老年人和1岁以内婴儿居多，常见病原体是肺炎支原体和肺炎链球菌，非典型病原体尤其是肺炎支原体感染在CAP中所占比重较大，发病季节以冬春季为主。肺炎链球菌是较常见的致病细菌，对青霉素高度耐药，对大环内酯类抗生素耐药非常普遍，且多为高度耐药，值得关注。 2.太原地区十二年成人NP、三年儿童NP总的发病率均在1％以下。革兰阴性菌是成人NP主要病原菌，且对大多数常用抗菌素有较高的耐药性；革兰阳性菌是儿章NP主要致病菌，且对青霉素、红霉素高度耐药，对万古霉素高度敏感。 3.NP的发生受到很多因素的影响，各因素之间又存在着十分复杂的相互作用与不确定性，而BP人工神经网络有许多优点可以解决这些变量间关系不能精确地用函数表达的复杂问题。研究结果表明，该模型是可行的，具有普遍性，可推广到卫生领域其它传染病的评价和预测体系中。 4.本课题的研究内容目前尚未见到国内外系统研究报告。本研究对太原地区社区和医院获得性肺炎流行病学特征、病原学特征、影响因素进行综合性研究，为探讨未来病原体及耐药性的变化趋势以及加强社区及医院获得性肺炎的监测工作提供科学依据，对控制社区和医院获得性肺炎的流行、突发公共卫生事件的应对等方面有一定的理论和实际意义以及推广价值；在对太原地区肺炎的预防和控制提供科学指导的同时，也可对全省地市级城市、我国华北地区及北部中等以上城市肺炎防控有一定的借鉴价值和推动作用。收起

关键词 : 获得性肺炎 BP人工神经网络病原体流行特征流行趋势

5. 原发性肝癌中医证候潜变量分析及其生物学基础的初步研究

[学位论文] 武嫣斐山西医科大学 2006年博士导师: 王素萍共97页

摘要 : 目的：1.用潜变量分析技术探讨原发性肝癌中医证候辨证标准的建立方法，初步建立5种证候的结构方程。2.通过探索性分析，了解中医证型与中医症状和体征、细胞免疫、肝功能状态、肝纤维化指标的关系。3.探讨AFPmRNA、IGFIImRNA和GGTmRNA表达与原发性肝... 展开目的：1.用潜变量分析技术探讨原发性肝癌中医证候辨证标准的建立方法，初步建立5种证候的结构方程。2.通过探索性分析，了解中医证型与中医症状和体征、细胞免疫、肝功能状态、肝纤维化指标的关系。3.探讨AFPmRNA、IGFIImRNA和GGTmRNA表达与原发性肝癌不同中医证候的关系。方法：采用流行病学研究方法，采集2003年10月至2005年12月太原市辖区四所医院的原发性肝癌患者用以下方法进行研究。1.调查原发性肝癌患者中医四诊信息，探讨证型分布特征及其与临床分期的关系。采用Binarylogistic多元逐步回归分析初步判定证型与中医症状和体征的相关性。采用LISREL软件建立证候结构方程，并对其拟合度进行检验。2.以西医症状和体征为自变量，以中医证型为因变量，进行Binarylogistic多元逐步回归分析，提出西医症状和体征的中西医结合的辨证方法。采用LISREL软件，建立以西医症状和体征为显变量的中医宏观证型结构模型，并对其进行拟合度检验。3.对患者临床实验室指标，以本证组与非本证组实验室指标进行比较，探讨本证的生物学基础。采用Binarylogistic多元逐步回归分析的方法，确定中医证型的相关实验室指标，并以此为基础进行本证组与本证的组合组实验室指标比较，探讨本证演变的生物学基础。采用潜变量分析的方法，探讨实验室指标为显变量的潜在的变量—中医证型的存在，用LISREL软件建立中医证型微观辨证模式，并对其进行拟合度检验，分析中医证的生物学基础。4.采用探索性因子分析的方法，了解中医证型与原发性肝癌患者临床相关变量之间的关系。5.以原发性肝癌中医辨证为肝血瘀阻、脾气虚、肝胆湿热患者为研究对象，应用RT-PCR检测外周血单个核细胞中AFPmRNA、IGFIImRNA、和GGTmRNA的表达。并用Binarylogistic多元逐步回归分析的方法，探讨AFPmRNA、IGFIImRNA、和GGTmRNA与中医证型的关系。结果：自2003年10月至2005年12月，共采集和观察原发性肝癌患者439例。1.原发性肝癌基本证型分布特点为单证、两证相合、三证相兼，单证187例占42.3％，两证相合213例占48.5％，三证相兼39例占9.2％。不同的中医症状和体征的组合具有一定的规律，原发性肝癌两证相合有肝血瘀阻合并脾气虚、脾气虚合并肝胆湿热、脾气虚合并肝肾阴虚、肝郁气滞合并肝血瘀阻、肝郁气滞合并脾气虚、肝血瘀阻合并肝胆湿热、肝血瘀阻合并肝肾阴虚、肝胆湿热合并肝肾阴虚、肝郁气滞合并肝胆湿热。原发性肝癌三证相兼表现为肝郁气滞、肝血瘀阻合并脾气虚；脾气虚、肝胆湿热合并肝肾阴虚；肝血瘀阻、脾气虚合并肝肾阴虚；肝血瘀阻、脾气虚合并肝胆湿热；肝郁气滞、肝血瘀阻合并肝肾阴虚；肝血瘀阻、肝胆湿热合并肝肾阴虚。2.证型与临床分期的关系：Ⅰ期以肝郁气滞、肝血瘀阻、脾气虚为主，为肝癌的中医辨证起始证型。Ⅱ期Ⅲ期出现湿毒内盛的表现，并且证型出现新的组合，以虚实夹杂、实证愈实、虚证愈虚为特点。3.符合中医传统宏观辨证的特点，提出原发性肝癌中医辨证各证型的必备证候、排除证候及与该证型无关的证候。4.建立证候结构方程，并用通径图表示，其拟合度较好。验证原发性肝癌中医证型潜变量的存在，经专业分析为肝郁气滞、肝血瘀阻、脾气虚、肝胆湿热、肝肾阴虚。其与中医症状和体征存在关系，关系程度为肝郁气滞1.00烦躁易怒、1.33嗳气、1.59情志抑郁、0.96脘腹胀满、1.36喜叹息、1.36胸胁乳房少腹胀满、0.67脉弦。肝血瘀阻1.00面色黧黑、0.93胁下徵块、1.46刺痛固定、1.33唇紫暗1.46爪甲紫暗、1.11舌质紫暗、1.06脉涩。脾气虚1.00鼓胀、0.84浮肿、0.74面色萎黄、0.65口淡不欲饮、0.88神疲乏力、0.52自汗、0.84气短懒言、0.53肢体倦怠、0.89小便短少、0.83大便溏薄、0.60恶心呕吐、1.17精神倦怠、0.87食少、0.89纳呆、0.44胁下徵块、0.67齿痕舌、0.32脉濡。肝胆湿热0.67鼓胀、1.00高热、1.48小便黄赤、1.46S身目俱黄、1.09灼痛、1.18心烦、0.70烦躁易怒、0.57大便干结、1.01出血、0.52小便短少、0.84胀痛、1.14舌苔黄腻、1.17舌红绛、1.23脉数、0.83脉滑。肝肾阴虚1.00腰酸、0.82膝软、0.86失眠健忘、0.86口干、0.74头晕目眩、0.79颧红、0.91盗汗、0.95五心烦热、0.49舌苔少或无、1.13脉细、0.76烦渴。5.提出西医症状和体征出现时中医辨证依据。6.建立中医证型与西医症状和体征结构方程模型，并用通径图表示，其拟合度较好。皮肤粘膜黄染、出血、发热、肝区压痛与中医肝胆湿热证有关：移动性浊音、疲劳、消化不良与中医脾气虚证有关；肝区压痛、移动性浊音、腹壁静脉曲张、蜘蛛痣、肝掌与中医肝血瘀阻证有关；发热、肝区压痛与肝肾阴虚证有关。7.对中医证型与实验室指标的关系进行分析，了解各证型的相关实验室指标的变化。8.了解各证型及其组合证型的实验室指标的变化。9.建立中医证与实验室指标的结构方程，并用通径图表示，其拟合度较好。10.通过探索性因子分析，了解与证型相关的中医症状、体征和实验室指标的关系，作为建立证候宏观和微观相结合诊断模型的基础。通过探索性因子分析，提出证的相兼性和转化性的规律。11.通过RT-PCR方法检测原发性肝癌患者外周血单个核细胞中的AFPmRNA、GGTmRNA、IGFII-mRNA的表达率：AFPmRNA表达率为53.54％(58/127)，GGTmRNA表达率为29.92％(38/127)，IGFII-mRNA表达率为45.66％(31/127)。12.原发性肝癌三组中医证型间的AFPmRNA表达有统计学差异，其中脾气虚证的表达较高，脾气虚与肝血瘀阻、脾气虚与肝胆湿热比较均有统计学差异。三组中医证型间的IGFII-mRNA表达有统计学差异，其中肝血瘀阻的表达较高，肝血瘀阻与脾气虚、肝血瘀阻与肝胆湿热比较均有统计学差异。三组中医证型间的GGTmRNA表达无统计学差异。收起

关键词 : 中医证候原发性肝癌中医辨证标准潜变量

6. TLR3在人类胎盘HBV感染中作用的研究

[学位论文] 李淑珍山西医科大学 2008年博士导师: 王素萍共96页

摘要 : 目的:为了研究TLR3在人类胎盘HBV感染中的作用，本课题采用人群研究和体外实验相结合的方法，从基因和蛋白水平初步了解正常孕妇人群与HBsAg阳性孕妇人群胎盘组织TLR3的表达和分布情况以及与HBV宫内感染的关系，根据人群研究提供的线索进一步进行体外... 展开目的:为了研究TLR3在人类胎盘HBV感染中的作用，本课题采用人群研究和体外实验相结合的方法，从基因和蛋白水平初步了解正常孕妇人群与HBsAg阳性孕妇人群胎盘组织TLR3的表达和分布情况以及与HBV宫内感染的关系，根据人群研究提供的线索进一步进行体外实验，探索TLR3在胎盘细胞抵御HBV感染中的作用。 ①了解TLR3受体在正常孕妇和HBsAg阳性孕妇胎盘组织的基因表达及蛋白分布情况； ②了解胎盘组织TLR3mRNA表达与孕妇HBV感染的关系；从基因水平了解胎盘组织TLR3mRNA与孕妇外周血HBVDNA含量的关系以及与新生儿HBV宫内感染的关系；从蛋白水平了解TLR3与胎盘HBV感染的关系及与新生儿HBV宫内感染的关系； ③研究HBV感染对人胎盘滋养层细胞系Bewo中TLR3mRNA表达的影响，观察人胎盘滋养层细胞系Bewo中TLR3抗HBV感染的生物学作用。方法: ①普通半定量RT-PCR和RealtimeRT-PCR检测正常孕妇和HBsAg阳性孕妇胎盘组织TLR3mRNA的表达情况，免疫组织化学ABC法检测正常孕妇和HBsAg阳性孕妇胎盘组织TLR3分布情况： ②荧光定量PCR检测HBsAg阳性孕妇及其新生儿HBVDNA含量； ③建立HBV体外感染人胎盘滋养层细胞模型；高浓度HBVDNA阳性血清与Bewo细胞共培养，荧光定量PCR法检测培养上清中HBVDNA含量；免疫组织化学ABC法检测细胞爬片Bewo细胞中HBsAg； ④普通半定量RT-PCR和RealtimeRT-PCR检测人胎盘滋养层细胞系Bewo中，TLR3mRNA的表达；HBV感染前后人胎盘滋养层细胞系Bewo中TLR3mRNA表达的变化；利用PolyI:C刺激Bewo细胞TLR3mRNA的表达，设计合成特异的siRNA阻抑Bewo细胞TLR3mRNA的表达，同时设对照组，RealtimeRT-PCR检测三组细胞经不同措施干预后TLR3mRNA的表达变化，同时检测用108copies/ml浓度的HBVDNA阳性血清与上述三组细胞共同培养后上清液中HBVDNA含量的变化。结果: ①半定量RT-PCR和RealtimeRT-PCR结果均显示HBsAg阳性孕妇胎盘组织TLR3mRNA含量低于正常孕妇胎盘组织(t=3.003，P＜0.05；t=4.698，P＜0.05)；免疫组化检测41例正常孕妇胎盘TLR3全部阳性，且各层细胞均显示很强的免疫印迹，呈片状分布；所检116例外周血HBsAg阳性孕妇胎盘组织中73.0％TLR3受体阳性，棕黄色信号局灶性分布于被检胎盘的各型细胞中；TLR3在两组的胎盘分布经统计学检验差异有显著性(Fisher's确切概率P＜0.01)； ②胎盘组织TLR3mRNA水平与孕妇外周血HBVDNA含量无关(F=0.147，P＞0.05)：胎盘组织TLR3mRNA水平与新生儿宫内感染无关(t=0.888，P＞0.05)； ③从蛋白水平研究TLR3与胎盘HBV感染及与新生儿HBV宫内感染的关系，结果显示TLR3阳性不仅是胎盘HBV感染的保护因素(OR=0.259，0.189～0.354)，同时也是新生儿HBV宫内感染的保护因素(OR=0.438，0.204～0.942)之一。 ④HBVDNA阳性血清与Bewo细胞共培养24小时组、48小时组，在细胞感染后不同时段(24小时、48小时、72小时)的培养上清中均可检出HBVDNA；免疫组织化学ABC法检测细胞爬片Bewo细胞内HBsAg的表达，阳性物质呈细小棕黄色颗粒，多数呈胞浆均质型，少数呈胞浆不均质型，少数细胞核内亦可见阳性表达。光镜下HBsAg阳性细胞未见形态学上的明显变化。 ⑤经普通半定量RT-PCR和RealtimeRT-PCR检测证实人胎盘滋养层细胞系Bewo中TLR3mRNA的表达呈阳性；HBV感染Bewo细胞后TLR3mRNA表达高于对照组(t=4.479，P＜0.05)；PolyIC刺激Bewo细胞后，TLR3mRNA的表达水平高于siRNA组和对照组(H=13.087，P＜0.05；H=1.3.100，P＜0.017)，siRNA组和对照组细胞TLR3mRNA含量无差别(H=3.287，P＞0.05)；用108copies/ml浓度的HBVDNA阳性血清与上述三组细胞共同培养后，三组均可检出HBVDNA，PolyI:C组上清中HBVDNA含量低于siRNA组和对照组，差异有统计学意义(F=8.531，P＜0.05)；siRNA组和对照组差异无统计学意义(LSD检验P＞0.05)。结论: ①胎盘组织TLR3表达情况与孕妇乙型肝炎病毒感染有关，TuR3高表达是孕妇乙型肝炎病毒感染的保护因素； ②蛋白水平的检测结果显示，HBsAg阳性孕妇胎盘组织TLR3阳性率低于正常孕妇胎盘组织，TLR3是孕妇胎盘HBV感染的保护因素，同时也是HBV宫内感染的保护因素； ③乙型肝炎病毒可在体外成功感染人胎盘滋养层细胞系Bewo;体外培养的人胎盘滋养层细胞系Bewo可稳定表达TLR3，也可被乙型肝炎病毒直接感染，故此模型可作为研究HBV胎盘感染机制的良好工具； ④Bewo细胞受HBV感染后TLR3mRNA表达上调；PolyI:C刺激可使Bewo细胞TLR3mRNA表达上调，抗乙型肝炎病毒能力增强。 ⑤研究结果表明HBV感染与人体初始免疫有关，TLR3在胎盘细胞抵御HBV感染中发挥重要生物学作用，TUR3为胎盘HBV感染及新生儿HBV宫内感染的保护因素，人群研究和体外实验结果基本一致，该研究结果将为乙肝防治和HBV宫内感染的预防及治疗提供新思路。收起

关键词 : TLR3表达胎盘细胞 HBV宫内感染 ToII样受体乙型肝炎病毒免疫组织化学

7. Toll样受体3与HBV感染和HBV宫内感染的关系及其作用机制的研究

[学位论文] 宋秀霞山西医科大学 2008年博士导师: 王素萍共96页

摘要 : 目的:为研究人PBMCTLR3在人HBV感染和HBV宫内感染中的作用，本课题采用人群研究和体外实验相结合的方法，从基因和蛋白水平初步了解正常孕妇人群与HBsAg阳性孕妇人群PBMCTLR3的表达情况以及与HBV感染和HBV宫内感染的关系，根据人群研究的线索进一步进... 展开目的:为研究人PBMCTLR3在人HBV感染和HBV宫内感染中的作用，本课题采用人群研究和体外实验相结合的方法，从基因和蛋白水平初步了解正常孕妇人群与HBsAg阳性孕妇人群PBMCTLR3的表达情况以及与HBV感染和HBV宫内感染的关系，根据人群研究的线索进一步进行体外实验，探索TLR3在抗HBV感染中的作用机制。方法: 1.人群研究 ①以2004年7月至2006年1月由太原市传染病院妇产科进行产前检查并分娩的HBsAg阳性孕妇为研究队列，从产前检查追踪观察至分娩，共收集HBsAg阳性孕妇及其新生儿228对。采集孕妇分娩前肘静脉血和新生儿出生24小时内注射乙肝疫苗前的股静脉血，同时收集其流行病学资料，佣免疫荧光双标记的方法检测HBsAg阳性孕妇及其新生儿PBMC涂片上HBsAg的表达及TLR3的分布；用巢式病例对照研究的方法进行TLR3与PBMCHBV感染，TLR3与PBMCHBV宫内感染的研究。以PBMCHBV感染者为病例组，非感染者为对照组，分析HBsAg阳性孕妇及新生儿PBMCTLR3表达与PBMCHBV感染的关系; ②于2006年11月至2007年4月，从太原市传染病院妇产科选取外周血HBsAg阳性的足月分娩孕产妇及其新生儿共28对，同期从山西省妇幼保健院妇产科收集正常足月分娩孕产妇26例作为正常孕妇对照，采集孕妇肘静脉血和新生儿出生后24小时内注射乙肝疫苗前的股静脉血，用荧光定量PCR定量检测HBsAg阳性孕妇及其新生儿血清HBVDNA，用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测乙肝标志物，用RT-PCR方法检测正常孕妇和HBsAg阳性孕妇PBMCTLR3mRNA，分析PBMCTLR3mRNA与HBV感染的关系；用real-timeRT-PCR方法检测HBsAg阳性孕妇及其新生儿PBMCTLR3mRNA，分析PBMCTLR3mRNA与HBV感染及HBV宫内感染的关系；ELISA方法分别检测HBsAg阳性孕妇和正常孕妇血清中IL-2、6的浓度，分析HBV感染与细胞因子的关系及TLR3与细胞因子分泌的关系。 2.体外实验 ①于2007年4月至2007年10月从山西医科大学第一医院妇产科收集正常足月分娩孕产妇26例，收集其肘静脉及流行病学资料。分离外周血PBMC，用含10％胎牛血清的1640培养液进行原代细胞培养，设HBV刺激组和正常对照组，在培养2、4、6天后分别收集PBMC细胞和培养上清，real-timeRT-PCR方法检测PBMC的TLR3mRNA，FACs方法检测PBMC的TLR3蛋白，ELISA方法检测培养上清液IL-2、6、10、12、IFN-℃和TNF-α的浓度； ②用RNAi技术沉默正常献血者PBMCTLR3mRNA，用TLR3的配体PolyI:C刺激活化TLR3，并在相应处理后与一定量的HBV共孵育6天，在2，4，6天分别收集PBMC细胞和培养上清，real-timeRT-PCR检测TLR3mRNA，FACs检测TLR3蛋白，荧光定量PCR定量检测培养上清和PBMC中HBVDNA含量。 3.统计分析资料查实后输入数据库，采用SPSS13.0forwindows软件进行统计分析，计数资料采用X2分析，计算各指标阳性率、X2值、OR值及其95％可信区间；计量资料采用t检验、配对t检验、方差分析及相关性分析。结果: 1.HBsAg阳性孕妇PBMCTLR3蛋白和PBMCHBV感染的关系 ①HBsAg分布在PBMC胞膜和胞浆部位；TLR3分布在胞膜上，TLR3在不同PBMC涂片中表达强度不同，同一视野下不同的细胞表达强度也不同，且在TLR3表达强的细胞上HBsAg表达弱。 ②228例HBsAg阳性孕妇有64例(28.07％)PBMCHBsAg阳性；161例(70.61％)TLR3强表达；TLR3在PBMCHBV感染组和非感染组的表达差异有统计学意义(X2=30.944，P＜0.0001)；新生儿有35例(15.35％)PBMCHBsAg阳性；HBsAg阳性孕妇PBMCTLR3的表达与新生儿PBMCHBV宫内感染有关(X2=12.354，P＜0.0001)。TLR3可能是HBsAg阳性孕妇PBMCHBV感染的保护因素(OR=0.181，95％CI=0.091-0.340)，也是PBMCHBV宫内感染的保护因素(OR=0.279，95％CI=0.133-0.585)。 2.人群PBMCTLR3mRNA与HBV感染的关系 ①用RT-PCR检测HBsAg阳性孕妇组和正常孕妇组PBMCTLR3mRNA，HBsAg阳性孕妇组TLR3mRNA的相对表达量(0.8164±0.1608)高于正常孕妇组(0.3892±0.1879)，其差异有统计学意义(t=-8.997，P＜0.001)。 ②用real-timeRT-PCR检测正常孕妇、HBsAg孕妇及其新生儿PBMCTLR3mRNA，HBsAg阳性孕妇组TLR3mRNA的相对表达量高于正常孕妇组(t=9.14，P＜0.0001)。在HBsAg阳性孕妇组中又分为DNA阴性组，≤104copies/ml组和＞104copies/ml组，TLR3mRNA在这三组中差别无统计学意义(F=0.468，P＞0.05)；且在HBsAg阳性孕妇组中的大三阳组和非大三阳组TLR3mRNA差别无统计学意义(t=0.355，P=0.725)；在HBsAg阳性孕妇组中的HBV宫内感染组和非HBV宫内感染组，TLR3mRNA差别无统计学意义(t=-1.525，P=0.139)。 ③根据新生儿血清中乙肝标志物的检测结果将新生儿分为HBV宫内感染组和非HBV宫内感染组，新生儿HBV宫内感染组TLR3mRNA高于非HBV宫内感染组，差别有统计学意义(t=2.613，P=0.015)。 3.人群TLR3mRNA与IL-2、6分泌的关系 ①DHBsAg阳性孕妇血清中IL-2的浓度(32.95±9.93pg/ml)比正常孕妇(27.65±2.86pg/ml)高，而IL-6浓度(52.35±22.09pg/ml)较正常孕妇(544.6±615.4pg/ml)低，差别均有统计学意义(t=-2.291，P=0.028；t=3.575，P=0.002)，并且以IL-2代表Th1型细胞因子，IL-6代表Th2型细胞因子计算Th1/Th2比值，HBsAg阳性孕妇组Th1/Th2(0.22±0.25)比正常孕妇组(0.71±0.27)小，差别具有统计学意义(t=-5.86，P＜0.05)。 ②HBsAg阳性孕妇的HBV宫内感染组血清中IL-6浓度(81.00±21.64pg/ml)高于非HBV宫内感染组(42.80±11.7pg/ml)，差别具有统计学意义(t=-3.77，P=0.014)。Th1/Th2比值(0.43±0.13)低于非HBV宫内未感染组(0.80±0.24)，差别具有统计学意义(t=3.334，P=0.004)。 ③以TLR3/β-actinCt值与相应标本的IL-2，6的浓度作相关分析，得出TLR3/β-actinCt值与IL-2的浓度呈负相关关系，r=-0.56，P＜0.05，随着TLR3的增加，IL-2分泌增加。而未发现与IL-6有相关性，r=0.096，P＞0.05。 4.HBV体外刺激正常孕妇PBMCTLR3的表达及与细胞因子分泌的关系 5.RNAi沉默TLR3和PolyI:C活化TLR3后对HBV感染的影响结论: 1.TLR3在PBMC有表达，在PBMC不同细胞上表达强度不同。在TLR3表达强的细胞上HBsAg表达弱或无表达。 2.TLR3与HBV感染有关，HBV阳性的PBMCTLR3低表达，TLR3是PBMCHBV感染的保护因素；以新生儿PBMCHBV感染判为新生儿PBMCHBV宫内感染，母亲TLR3蛋白是新生儿PBMCHBV宫内感染的保护因素。以新生儿血清HBV标志物HBsAg，HBVDNA任一阳性定义新生儿HBV宫内感染，母亲PBMCTLR3表达与新生儿HBV宫内感染无统计学关联，但新生儿PBMCTLR3表达是新生儿HBV宫内感染的保护因素。 3.TLR3与Th1细胞因子的分泌呈正相关关系，TLR3可能通过增加细胞因子的分泌参与HBV的清除过程。 4.以HBV刺激正常孕妇PBMC可使PBMCTLR3mRNA和TLR3蛋白表达上调，IL-10，IL-6，IFN-γ随着TLR3的上调而分泌增加，而TNF-α，IL-2分泌增加显著，说明HBV感染PBMC以启动Th1型免疫反应为主。 5.RNAi后TLR3在蛋白水平和基因水平上有所降低，一定程度上增加了PBMC对HBV的易感染性。PolyI:C刺激后TLR3在蛋白水平和基因水平上有所升高，并一定程度上降低了PBMC对HBV的易感染性。TLR3可一定程度上影响HBV的复制增值。 6.可以考虑将TLR3作为乙型肝炎治疗性疫苗或佐剂及辅助性治疗药物的作用靶点来开发应用。收起

关键词 : 乙型肝炎病毒 toll样受体3 外周血单个核细胞宫内感染 RNA干扰 HBsAg阳性发病机制

8. 马克思社会治理思想视域下生态化社会构建研究

[学位论文] 梁斌山西财经大学 2018年硕士导师: 王素萍共82页

摘要 : 党中央基于当前我国的社会发展现状，提出加强国家治理体系与治理能力现代化建设，转变过去社会管理以及国家治理的现状，实施社会治理的重大举措，逐步实现社会向共同富裕的共产主义社会迈进。在党的十九大报告中，习近平总书记也指出要打造共建共治... 展开党中央基于当前我国的社会发展现状，提出加强国家治理体系与治理能力现代化建设，转变过去社会管理以及国家治理的现状，实施社会治理的重大举措，逐步实现社会向共同富裕的共产主义社会迈进。在党的十九大报告中，习近平总书记也指出要打造共建共治共享的社会治理新格局，将社会治理重心向基层下移，鼓励社会多元主体参与社会治理，逐步完善由党委领导、政府负责、社会协同、公众参与、法治保障的社会治理体制，坚持以提高和改善人民生活水平为落脚点，切实解决好人民内部矛盾，坚决依法打击社会违反犯罪活动，保障人民人身财产安全，最终实现政府治理和社会调节、居民自治的良性互动。当前我国在实现社会治理的过程也取得了显著成果，以实践探索的方式也证明了实施社会治理的转向是一个具有重要实践意义的活动，是有效化解我国社会矛盾，推动我国社会发展的重要举措。作为以马克思主义为指导思想的执政党，在领导全国人民进行社会主义建设的过程中，始终坚持理论与实践相结合的原则。因此，在实施社会治理的过程中，也必须深入挖掘马克思的社会治理思想的内在价值，与我国当前的社会发展相结合，使我国所实施的社会治理更具针对性和科学性。党中央提出建设生态文明，是结合了当前社会现状所提出来并具有现实意义的发展新道路，也是一条坚持“五位一体”的发展总布局，秉承五大发展理念，实现人与自然、人与社会、人与人的绿色协调发展的道路。在十九大报告中，习近平总书记也明确指出要坚持人与自然和谐共生，坚定不移的走生产发展、生活富裕、生态良好的文明发展道路。这是将生态文明的建设纳入到了整个社会建设体系中，人与自然的和谐共生，也不能仅局限与环境保护领域，而是要从整个社会的角度和层面，坚持社会治理的方式，实现多个领域的协调发展，即实现生态化社会的构建。基于这样的社会背景，针对目前存在的社会问题，为实现生态化社会的目标构建，须将马克思主义社会治理思想与我国的具体实际相结合。通过研究马克思社会治理思想的理论内容和方法论，为生态化社会的构建提供科学化的理论指导。本文总体分为五个部分，第一部分是引言，主要包含选题背景、研究意义、国内外研究综述、研究思路、创新之处以及主要研究方法。第二部分是马克思社会治理思想的相关概念，对马克思社会治理思想的基本内容以及特征进行论述。第三部分是生态化社会构建的现状与存在的问题以及构建生态化社会的必要性分析。根据马克思社会治理思想的基本内容与特征，对生态化社会进行界定，并指出生态化社会的目标指向，并以此对生态化社会构建的目前状况进行资料收集整理，总结生态化社会构建目前所取得的成果和存在的问题，从而突显生态化社会构建的必要性。第四部分是马克思社会治理思想对生态化社会构建的指导作用，通过之前第三部分和第四部分的总结分析，把握马克思社会治理思想对于生态化社会构建的指导作用，即理论意义和现实意义。第五部分是马克思社会治理下生态化社会构建的路径探讨，通过之前理论与现实的相关论述，提出实现生态化社会构建的途径与方法，即营造政府机构为主导的社会多元化治理新环境；打造创新驱动为核心的社会经济治理新动力；构建廉政为目标的生态化社会政治治理新模式；营造红色文化为中心的生态化社会文化治理新氛围；开辟多元协同为导向的生态化社会治理新路径；健全人民主体为根本的社会民生治理新体系。收起

关键词 : 生态化社会马克思社会治理思想生态文明

9. 青海省西宁市男男性行为人群HIV感染状况及危险因素研究

[学位论文] 王朝才山西医科大学 2012年硕士导师: 王素萍共76页

摘要 : 目的：掌握西宁市MSM人群HIV、梅毒感染率、艾滋病知识知晓率和艾滋病传播高危因素，为制定我省MSM人群艾滋病防治策略提供科学依据。方法：采用滚雪球、关键知情人介绍、MSM网络信息发布等方法在西宁市招募本市前来参加艾滋病自愿咨... 展开目的：掌握西宁市MSM人群HIV、梅毒感染率、艾滋病知识知晓率和艾滋病传播高危因素，为制定我省MSM人群艾滋病防治策略提供科学依据。方法：采用滚雪球、关键知情人介绍、MSM网络信息发布等方法在西宁市招募本市前来参加艾滋病自愿咨询与检测的MSM。调查开始前，挑选西宁市MSM人群中影响力比较大、有一定责任心的MSM做为调查知情人，对其进行专业培训，发展为同伴教育员，由他们在西宁市MSM人群活动场所和同志网站、QQ群进行宣传教育，动员其同伴接受调查，专业人员到他们活动的场所或者他们主动到疾控中心配合调查和检测，调查对象同意接受问卷调查，并经筛选合格后填写知情同意书，由统一培训的调查员进行面对面一对一匿名的问卷调查，并抽血5mL进行艾滋病、梅毒、丙肝检测。在群体流调同时对10名不同层次、不同场所的MSM进行个人深入访谈和开放式问卷调查，以了解MSM活动的场所和特征、心理需求、性行为情况以及性病感染情况等。结果：本次共调查403人，其中回族和藏族99人。西宁市MSM活动的主要场所有酒吧、浴池、公园、公厕、录像厅和同性恋网站、QQ群。大部分MSM主要来自浴池，其次汉族主要在酒吧活动，而回族主要在录像厅、公园、公厕活动。 MSM人群艾滋病知识知晓率为74.19％。不同民族、文化程度、年龄MSM人群艾滋病知识知晓率差异有显著性。汉族艾滋病知识知晓率最高，为79.1％，其他少数民族（主要为藏族）最低，为50.0％；大专及以上知晓率为94.3％，大专以下为85.8％；20岁年龄组知晓率最高为90.9％，大于50岁组知晓率最低为52.4％。 MSM人群的HIV感染率为11.66％，梅毒感染率为9.93％，调查者中无人感染丙肝。对同事/朋友感染艾滋病的态度，建议单位开除或让本人辞职者占36.48％；对家庭成员感染艾滋病的态度，建议离开家到其它地方生活者占13.90％；对孩子的同学感染艾滋病的态度，建议学校开除该学生或安排该学生单独上课者占17.12％。最近半年87.84％的调查对象与男性有肛交性行为，其中14.13％的MSM每次坚持使用安全套；48.89％发生过异性性行为,3.56％的每次坚持使用安全套。最近半年有4人发生过同性商业性行为。与其它民族相比回族不论和同性还是和异性发生性行为每次使用安全套比例都比较低。多因素Logistic回归显示患淋病、梅毒、生殖道沙眼衣原体感染、尖锐湿疣、生殖器疱疹的MSM感染艾滋病的风险分别是未患这些疾病的5.737、9.267、17.694、41.064、12.16倍。最近六个月，是否采用保护性肛交性行为者进行多因素分析，结果显示在婚或同居、有同伴教育及艾滋病知识知晓率高的MSM采用保护性肛交性行为分别是未婚、离异或丧偶、无同伴教育和艾滋病知识知晓率低的2.029、2.828和2.851倍；初中及以下文化程度、未接受过艾滋病咨询和检测和未接受吸毒干预的MSM人群采用保护性肛交性行为分别是高中及以上文化程度、接受过咨询和检测和吸毒干预MSM人群的0.426、0.491及0.139倍。结论：西宁市不同类型的MSM活动场所中具有不同的特征，MSM人群中回族和藏族占有一定的比例，因此在MSM人群中存在不同的亚群；MSM人群的艾滋病知识知晓率普遍低，尤其是少数民族，低于全国和相邻省份；西宁市MSM人群艾滋病和梅毒感染率高，高于全国和相邻省份水平，传播严重，目前的防治方法和手段不能改变此类人群的高危行为和遏制传播速度，存在“知行分离”现象；淋病、梅毒、生殖道沙眼衣原体感染、尖锐湿疣、生殖器疱疹均为MSM感染艾滋病的危险因素；在婚或同居、接受同伴教育、艾滋病知识知晓率高是MSM人群肛交性行为的保护因素，文化程度低和不接受艾滋病咨询和检测是MSM人群肛交性行为的危险因素；MSM人群之间互相传播的同时，MSM的异性配偶和性伴健康受到威胁，MSM将性传播疾病传播给女性，或以女性性伴为桥梁向非同性恋的男性传播，将艾滋病由高危人群传向一般人群；MSM人群对家人和小孩感染艾滋病的态度比较宽容。所以针对MSM不同特征，急需行之有效的健康教育和干预措施、方法，扩大干预覆盖面，改变高危性行为。收起

关键词 : 艾滋病梅毒知晓率男男性行为疾病感染防治策略

10. 资源型区域生态安全问题研究——以山西省为例

[学位论文] 何欣山西财经大学 2019年硕士导师: 王素萍共74页

摘要 : 资源型区域由于其自身发展特性与自然界密切相关，人类长期过度开采使资源枯竭严重，生态系统功能退化，进而诱发的生态安全问题十分严峻。本文以资源型区域的典例——山西省为例，以目标意识、问题意识为导向，结合恩格斯“自然观”的相关论述，从系... 展开

关键词 : 资源型区域生态安全环境质量