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1. 鸭乙型肝炎病毒(DHBV)共价闭环DNA(cccDNA)的定量及3TC,FLG单独、联合给药对DHBV DNA复制抑制作用的研究

[学位论文] 王珺北京协和医学院(中国医学科学院) 2000年硕士导师: 陶佩珍共63页

摘要 : HBV感染是影响人类健康的重大问题.该实验选用目前新的抗HBV药3TC和另一个处于是的核苷类似物FLG,利用DHBV模型对它们进行全面的DHBV DNA作用的研究,并利用已建立的cccDNA的定量方法,观察其cccDNA水平在给药动物中的变化.其次,研究人员从血清病毒DN... 展开

关键词 : 乙型肝炎病毒 HBV 鸭乙型肝炎病毒 3TC FLG cccDNA

2. 乙型肝炎病毒感染与非霍奇金淋巴瘤关系的探讨

[学位论文] 缪璐璐浙江大学 2008年硕士导师: 金洁共41页

摘要 : 目的:采用病例对照研究方法研究乙型肝炎病毒(HBV)感染与非霍奇金淋巴瘤(NHL)发病的关系。方法:采用酶联免疫发光法检测我院2000-2006年收治的316例非霍奇金淋巴瘤患者的乙型肝炎病毒抗原抗体，并以性别、居住环境、居住年限相近的316例健康者为... 展开

关键词 : 乙型肝炎病毒感染

3. CH25H对乙肝病毒感染及复制的双重调控

[学位论文] 魏骐吉林大学 2022年博士导师: 麻海春共143页

摘要 : 乙型肝炎病毒（HepatitisBvirus，HBV）感染，是全球性公共卫生问题。中国是乙肝重灾区，尽管乙肝疫苗的广泛接种明显降低了感染率，但目前仍有近一亿人携带HBV。HBV感染导致肝功能损伤、肝硬化，甚至肝癌，带来巨大的社会负担和经济压力。彻底清除HB... 展开乙型肝炎病毒（HepatitisBvirus，HBV）感染，是全球性公共卫生问题。中国是乙肝重灾区，尽管乙肝疫苗的广泛接种明显降低了感染率，但目前仍有近一亿人携带HBV。HBV感染导致肝功能损伤、肝硬化，甚至肝癌，带来巨大的社会负担和经济压力。彻底清除HBV，治疗HBV相关疾病，是我国非常迫切的社会问题。核苷/核苷酸类似物（NUCs，nucleos(t)ideanalogs）和干扰素（Interferon，IFN）是治疗乙肝的一线药物，但其存在药物副作用大及病毒耐药等问题，且长期抗病毒治疗后仍难以实现病毒学治愈。因此筛选新的治疗靶点，探索乙肝治疗新方法，具有至关重要的意义。胆固醇-25-羟化酶基因（Cholesterol-25-hydroxylase，CH25H），是干扰素诱导基因（IFNStimulatedGenes，ISGs）的一员，其编码蛋白胆固醇-25-羟化酶能将胆固醇羟基化为25-羟基胆固醇（25-hydroxycholesterol，25HC）。25HC为氧甾醇，可通过激活LXRs及抑制SREBPs活化来调节胆固醇稳态。最新国际研究表明，CH25H及25HC具有广泛的抗病毒作用，能抑制多种病毒复制及感染，包括COVID-19，VSV、HCV、KSHV、EBV、HIV、LASV、ZIKV、HRoV、EBOV、HSV、influenzavirus等病毒。但其是否可以调控HBV复制及感染，国际几乎无研究报道。本课题旨在探究CH25H对HBV复制及感染的影响，并探讨其分子生物学机制，并为寻找乙肝治疗药物提供新方向。本课题首先采集了HBV感染患者和健康对照静脉血，分离外周血单个核细胞（PBMCs，Peripheralbloodmononuclearcells）后，检测CH25H表达水平。实验发现，HBV患者CH25HmRNA的水平高于健康对照，且HBV刺激健康对照PBMCs24h能诱导CH25H表达。随后在HepG2细胞和Huh7细胞中共转染pHBV1.2/pHBV1.3质粒和CH25H野生型、酶活性突变体质粒，通过Elisa、western、qPCR等检测手段检测后，发现CH25H野生型及酶活性突变体均能降低上清中HBeAg和HBsAg水平，降低细胞中HBVpgRNA和HBVDNA水平。但是在HepG2.2.15细胞模型及转染了pHBV1.2质粒的HepG2细胞系中，加入25HC后，对HBV的复制没有明显的抑制作用或促进作用。以上结果说明CH25H野生行及酶活性突变体均能抑制HBV复制，且CH25H的抗HBV作用并不依赖于其催化产物25HC。随后为了探究CH25H蛋白与HBV编码蛋白之间的相互作用，进行了免疫共沉淀。实验发现CH25H蛋白与HBx蛋白具有相互作用。进一步的免疫荧光共定位、pHBV1.2?X质粒转染功能实验和免疫共沉淀实验，证明了HBx蛋白在CH25H的抗病毒作用中起关键作用，且CH25H对HBV的抑制作用，并不是通过经典HBx-DDB1-smc5/6通路来实现的。随后荧光共聚焦及免疫印迹分析，发现了CH25H的作用机制，即CH25H蛋白通过与HBx蛋白相互作用改变HBx蛋白的亚细胞定位，抑制HBx蛋白入核，从而发挥其抑制HBV复制的作用。之后通过CH25H截短突变体与HBx截短体的免疫共沉淀进行功能区鉴定，发现CH25H蛋白与HBx蛋白的C端相互作用，CH25H的TM3结构域在其抗HBV重发挥重要作用。明确了CH25H及25HC对HBV复制的作用后，本课题进一步探究其对HBV感染的影响。本实验应用了HBV感染的经典PHH模型和常用HepG2-NTCP模型。25HC预处理HepG2-NTCP细胞/PHH细胞24h后，进行HBV感染实验。出乎意料的是，在两个细胞系中，25HC均能促进HBV感染。接下来本实验采用了CVB3病毒和EV71病毒做对照，25HC预处理HepG2细胞/293T细胞24h后，感染CVB3/EV71病毒，发现25HC对这两种肠道病毒的感染具有强烈抑制作用。随后为了探究CH25H对HBV感染的影响，本实验用CH25H-WT/Mut慢病毒及Neg慢病毒（对照组）感染HepG2-NTCP细胞，构建了稳定表达细胞株。随后用构建的细胞模型进行HBV感染实验，发现CH25H野生型和突变体均能抑制HBV感染。CH25H及25HC对HBV复制及感染的双重调控机制，还需要进一步研究。经过研究，本课题得出以下结论：（1）与健康人相比，HBV感染者PBMCs中CH25HmRNA表达较高；（2）CH25H野生型及酶活性突变体均能抑制HBV复制；（3）CH25H对HBV复制的抑制作用不依赖于其催化产物25HC；（4）HBx蛋白在CH25H的抗HBV作用中发挥重要作用；（5）CH25H表达蛋白通过与HBx蛋白相互作用，抑制HBx入核，从而抑制HBV复制；（6）HBx蛋白的C端与CH25H蛋白相互作用；（7）CH25H的TM3结构域在其抗HBV中发挥重要作用；（8）CH25H野生型和突变体均能抑制HBV感染；（9）25HC促进HBV感染。综上所述，本课题利用分子生物学、细胞生物学以及病毒学手段，证明了CH25H对HBV复制及感染的双重调控作用。本课题还揭示CH25H蛋白通过与HBx蛋白相互作用，改变HBx蛋白在细胞内的定位，抑制HBx蛋白入核，从而抑制HBV复制的机制。本研究为HBV的治疗提供有潜力的新途径，并为今后其他病毒的研究起到启示作用。收起

关键词 : 乙型肝炎病毒病毒感染干扰素诱导基因乙型肝炎病毒x蛋白

4. 玉郎伞多糖及其与拉米夫定组合抗乙型肝炎病毒及其作用机制研究

[学位论文] 左巧云广西医科大学 2014年硕士导师: 黄仁彬共83页

摘要 : 目的:研究玉郎伞多糖(YLSP)及其与拉米夫定组(YLSP/3TC)体内外抗乙型肝炎病毒的效果。方法:(1)体外抗HBV作用:体外研究以HBV基因转染的HepG2.2.15细胞株为细胞模型，MTT法检测YLSP对HepG2.2.15细胞的半数毒性浓度(TC50)和最大无毒浓度(TCO);采用... 展开目的:研究玉郎伞多糖(YLSP)及其与拉米夫定组(YLSP/3TC)体内外抗乙型肝炎病毒的效果。方法:(1)体外抗HBV作用:体外研究以HBV基因转染的HepG2.2.15细胞株为细胞模型，MTT法检测YLSP对HepG2.2.15细胞的半数毒性浓度(TC50)和最大无毒浓度(TCO);采用直接加药法进行实验，在最大无毒浓度(TCO)下，研究不同浓度的含YLSP及YLSP/3TC的培养基，对HepG2.2.15细胞株进行培养，于第72h和第144h分别收集不同组别的细胞培养上清液，以实时荧光定量PCR(FQ-PCR)技术检测其HBVDNA的载量，并以ELISA法检测其HBsAg和HBeAg的滴度。以HBVDNA，HBsAg和HBeAg作为药物抗HBV的重要观察指标，对YLSP及YLSP/3TC体外抗HBV作用进行评价。(2)体内抗DHBV作用:体内研究中，以1日龄感染DHBV广西麻鸭作为动物模型，7d后采用PCR法筛选出DHBV感染强阳性鸭。随机分为6组:YLSP高、中、低剂量组3个剂量组;YLSP/3TC剂量组;模型组和拉米夫定(3TC)阳性对照组。每组10只，各组雏鸭均持续灌胃给药14d。观察用药前(T0)、用药后7d(T7)、14d(T14)及停药3d(P3)后，鸭血清上清中DHBsAg、DHBeAg，DHBVDNA的表达以及转氨酶(ALT，AST)活性变化;同时在停药3d后，取新鲜肝组织，观察HE染色肝组织病理变化，并用新鲜肝组织匀浆，观察各剂量组肝匀浆液上清中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)的活性以及丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)的含量，从而评价YLSP及YLSP/3TC体内抗DHBV作用。结果:(1)体外抗HBV作用:①YLSP在11.72mg/L浓度时，对HepG2.2.15细胞基本没有毒性。②在最大无毒浓度(TCO)下，不同浓度组别的YLSP及YLSP/3TC对HepG2.2.15细胞HBsAg及HBeAg的分泌和HBVDNA的合成均有显著的抑制作用，且抑制作用呈现明显的时效及量效关系;与YLSP组和3TC对照组相比，YLSP/3TC各剂量组对HepG2.2.15细胞上清HBsAg、HBeAg和HBV-DNA的抑制作用有显著性差异(P＜0.05或P＜0.01)。③YLSP对HBsAg和HBeAg的TI分别为29.27和15.05，揭示YLSP安全性较好。(2)体内抗DHBV作用:用药7d(T7)、14d(T14)后，YLSP高、中剂量及YLSP/3TC组与模型组比较，鸭血清上清中DHBVDNA的含量，DHBsAg和DHBeAg的滴度，AST及ALT的活性均明显下降;且YLSP/3TC组与YLSP高剂量组和3TC对照组相比较，鸭血清上清中DHBVDNA的含量，DHBsAg和DHBeAg的滴度，AST及ALT的活性均明显低于YLSP高剂量组和3TC对照组。停药3d后，YLSP中、低剂量组及3TC组鸭血清上清中DHBVDNA的含量，DHBsAg和DHBeAg的滴度，AST及ALT的活性，均出现反跳现象，而反跳现象在YLSP/3TC组不明显，YLSP高剂量没有出现反跳现象。YLSP高、中剂量组及YLSP/3TC组与模型组对比，鸭肝匀浆上清中SOD和GSH-PX的活性与GSH的含量明显升高，MDA的含量明显降低。YLSP/3TC组鸭肝匀浆上清SOD和GSH-PX的活性与GSH的含量显著高于YLSP高剂量组和3TC对照组，YLSP/3TC组鸭肝匀浆上清MDA的含量显著低于YLSP高剂量组和3TC对照组;药物的抗病毒作用与剂量大小及时间相关。此外，鸭肝脏组织病理学检查发现YLSP及YLSP/3TC对DHBV引起的肝损伤有明显的保护作用，YLSP/3TC组保护作用更显著。结论:体内外，YLSP及YLSP/3TC抗HBV疗效显著，且毒性较低，同时还可以缓解DHBV所引起的鸭肝损伤，改善肝功能。YLSP与3TC组合不仅比二者单用有更强的抗病毒效果，而且对DHBV所致的鸭肝损伤也有更强的保护作用。收起

关键词 : 玉郎伞多糖拉米夫定乙型肝炎病毒鸭乙型肝炎病毒作用机制

5. 乙型肝炎病毒感染调控细胞铁死亡的分子机制研究

[学位论文] 曹晓霞 2022年硕士导师: 龙泉鑫共78页

摘要 : 目的：研究HBV感染调控细胞铁死亡的分子机制。方法： 1.通过铁死亡诱导剂erastin处理HBV细胞复制模型HepAD38和HBV细胞感染模型HepG2-NTCP，检测细胞死亡率、线粒体活性氧（ROS）和脂质过氧化物等铁死亡相关指标。 2.采用瞬时转染方... 展开目的：研究HBV感染调控细胞铁死亡的分子机制。方法： 1.通过铁死亡诱导剂erastin处理HBV细胞复制模型HepAD38和HBV细胞感染模型HepG2-NTCP，检测细胞死亡率、线粒体活性氧（ROS）和脂质过氧化物等铁死亡相关指标。 2.采用瞬时转染方式，在肝癌细胞HepG2上分别过表达HBV编码的三种病毒蛋白：HBx、HBs和HBc，通过Westernblot实验验证三种蛋白的表达；使用铁死亡诱导剂erastin处理，检测铁死亡相关指标。 3.通过pull-down联合液相色谱与串联质谱（LC-MS/MS）鉴定与HBx发生相互作用的蛋白，免疫共沉淀验证HBx与FSP1相互作用，免疫荧光检测HBx与FSP1的共定位。 4.利用基因特异性CRISPR-Cas9基因敲除方法，设计特异性靶向FSP1的sgRNA，在肝癌细胞HepG2中构建稳定敲除FSP1的细胞系（HepG2-FSP1KO），通过CCK-8实验检测细胞活力。在HepG2-FSP1KO细胞中过表达HBx，检测erastin处理后铁死亡相关指标。结果： Erastin处理HBV细胞复制模型HepAD38和HBV细胞感染模型HepG2-NTCP细胞后，表达HBV或HBV感染后的细胞死亡率、线粒体ROS水平以及脂质过氧化物水平均有明显下降。在肝癌细胞HepG2过表达HBV各组分蛋白（HBx、HBs和HBc）后，仅HBx过表达组细胞能够抑制erastin诱导的细胞死亡、线粒体ROS生成以及脂质过氧化物的产生。通过LC-MS/MS鉴定出HBx互作的蛋白FSP1，免疫共沉淀实验验证HBx与FSP1相互作用；免疫荧光实验证明HBx与FSP1共定位。与对照组相比，HepG2-FSP1KO细胞系对erastin的敏感性增加。在HepG2-FSP1KO细胞中过表达HBx后，erastin处理发现细胞死亡率、线粒体ROS水平以及脂质过氧化物水平与对照组相比无明显差异。结论： HBV抑制铁死亡诱导剂erastin诱导的铁死亡；并且这种抑制作用主要源于HBx蛋白组分，而非HBs和HBc。HBx与FSP1存在相互作用和共定位。HepG2细胞基因敲除FSP1后，细胞对铁死亡的敏感性增加，而在敲除FSP1后，HBx对erastin诱导的铁死亡无明显抑制作用。收起

关键词 : 乙型肝炎病毒病毒感染乙型肝炎病毒X蛋白铁死亡抑制蛋白1

6. 乙型肝炎病毒X蛋白对整合型与分离型乙型肝炎病毒前基因组启动子的作用比较

[学位论文] 刘子洋郑州大学 2021年硕士导师: 韩双印共61页

摘要 : 背景与目的由于含有两个完整的整合型D基因型头尾拷贝序列并能稳定地复制HBV，HepG2.2.15细胞目前最常被用来评估抗病毒化合物的影响。然而，HBV基因组的结构是一个部分双链的环状DNA，使用cccDNA作为复制模板。为了研究对不同HBV复制形式的抗病... 展开背景与目的由于含有两个完整的整合型D基因型头尾拷贝序列并能稳定地复制HBV，HepG2.2.15细胞目前最常被用来评估抗病毒化合物的影响。然而，HBV基因组的结构是一个部分双链的环状DNA，使用cccDNA作为复制模板。为了研究对不同HBV复制形式的抗病毒作用，我们建立了一种新型的稳定表达HBV的细胞系，该细胞系利用Huh7细胞在分离形式下复制HBV来模拟真实的HBV复制形式。与以往常用的HepG2.2.15细胞不同的是，表达HBV的Huh7细胞的复制在干扰素a(IFN-a)治疗9天后显著减少。在本研究中，我们旨在验证HBx对HBV启动子表达的调控是否受DNA形式的影响，并讨论了分离形式和整合形式之间的差异。材料与方法我们通过Huh7细胞和两个含有HBV基因组的不同质粒分别建立了两个表达HBV的细胞系，用来模拟以分离形式和整合形式复制HBV的细胞。然后我们使用荧光素酶报告系统在两个细胞系中检测在用不同浓度的IFN-a和HBx处理后的HBV启动子的表达。接着转染表达HBx蛋白的质粒，评价其对HBV复制的影响。测定HBx基因敲除细胞系中的HBVDNA和pgRNA，再次转染表达HBx蛋白的质粒进行进一步验证并评价其对以分离形式复制HBV细胞的作用。研究结果两个目的细胞系构建成功并在筛选后进行了实验。IFN-a对乙型肝炎病毒(HBV)前基因组启动子在分离型细胞系中有明显的抑制作用而在整合型细胞系中并未观察到。同时转染HBx蛋白表达质粒后，HBV前基因组启动子活性以分离形式明显高于整合形式。在分离型细胞系中，HBV的复制与HBx的表达成正相关，敲除HBx基因HBV复制显著减少，转染表达HBx的质粒HBV复制显著增强。结论 HBx对HBV前基因组启动子的调控作用受HBV基因组在体内形式的影响，HBx对HBV前基因组启动子表达的调控作用在分离型更为有效而不是整合型。收起

关键词 : 乙型肝炎病毒 X蛋白乙型肝炎病毒X蛋白前基因组启动子

7. 抗乙型肝炎病毒核酸药物的筛选与验证

[学位论文] 黄海河南中医学院 2013年硕士导师: 王升启共81页

摘要 : 乙型肝炎病毒(hepatitis Bvirus,HBV)感染及其相关疾病严重影响人类健康,同时也使患者家庭及社会承受着巨大的经济负担。目前针对HBV感染仍未找到可以根治的药物。当前临床上广泛使用的抗HBV感染药物包括干扰素和核苷类似物,但是这两类药物都存在不同... 展开乙型肝炎病毒(hepatitis Bvirus,HBV)感染及其相关疾病严重影响人类健康,同时也使患者家庭及社会承受着巨大的经济负担。目前针对HBV感染仍未找到可以根治的药物。当前临床上广泛使用的抗HBV感染药物包括干扰素和核苷类似物,但是这两类药物都存在不同程度的副作用并且均不能彻底清除患者体内的HBV,尤其对HBV表面抗原(hepatitis Bsurfaceprotein,HBsAg)的清除作用微弱,而HBsAg的表达是造成HBV免疫耐受的关键因素之一[1],因此寻找能够抑制HBsAg的药物将是未来抗HBV治疗的重中之重。以生物技术药物为主要手段的抗HBV治疗是当前研究热点之一,如DNA疫苗、核酶、反义核酸、RNA干扰(RNA interference,RNAi)、抗体药物和Dominant negative突变体(DN突变体)等。本研究就核酸技术在抗HBV感染中的应用进行探讨: 目的:研究靶向c-Raf-1基因反义核酸和CpG-ODN1826体内外抗HBV的活性,并对其作用机制进行初步的探讨。方法:1.通过HepG2.2.15细胞瞬时转染反义核酸药物,在细胞水平验证靶向c-Raf-1基因的反义核酸药物是否具有抗HBV活性;通过细胞活性检测反义核酸的毒性;通过RT-PCR检测c-Raf-1基因mRNA水平的变化;通过HBV小鼠水动力模型验证反义核酸药物Raf-3145体内是否具有抗HBV活性;2.通过HBV小鼠水动力模型体内评价CT102是否对HBV复制具有抑制作用,并检测CT102是否对干扰素-α和干扰素-γ的表达具有诱导作用;3.通过HBV小鼠水动力模型体内评价CpG-ODN1826对HBV复制的抑制效果,并通过对小鼠血清中干扰素-α和干扰素-γ的检测验证CpG-ODN1826对两者的强诱导作用。结果:1.经体外筛选,靶向c-Raf-1基因的反义核酸Raf-3145具有相对明显的抑制HBsAg的作用,mRNA水平结果显示Raf-3145可剂量依赖性的抑制c-Raf-1基因的表达;体内药效学结果显示反义核酸Raf-3145在30mg/kg剂量下对HBsAg的表达具有一定的抑制作用,并呈现显著性差异(p<0.001),并且在该剂量下未见明显的毒性;2.体内药效学结果显示CT102在腹腔注射隔天给药12次第28天检测时高剂量30mg/kg可完全抑制表面抗原的表达,并呈现显著性差异(p<0.001),中剂量10mg/kg和低剂量3mg/kg时呈现一定促进作用(p<0.01);检测血清中干扰素分泌结果显示在30mg/kg剂量下CT102对干扰素-α和干扰素-γ具有一定诱导作用;3.经体内验证,在腹腔注射隔天给药12次第28天后发现,CpG-ODN1826对血清HBsAg和e抗原的表达、肝内HBVDNA的复制和肝内HBV核心抗原(HBcAg)的表达均具有明显的抑制作用并呈现一定的剂量依赖效应;血清中干扰素检测结果显示不同剂量的CpG-ODN1826对干扰素-α和干扰素-γ均具有一定诱导作用。结论:1.经体内外活性评价初步确定了靶向宿主基因c-Raf-1的反义核酸Raf-3145具有一定的抑制HBsAg表达的活性,也进一步验证了c-Raf-1基因可以作为抗HBV药物设计的候选靶点;2.CT102的抗HBV效果可能与其干扰素诱导作用相关;3.小鼠强效免疫刺激剂CpG-ODN1826可以有效抑制HBV的复制,尤其对HBsAg的清除作用明显,是当前干扰素和核苷类药物的有益补充,可能有利于打破HBV慢性感染的免疫耐受,为将来深入研究CpG-ODN抗HBV活性提供了前期借鉴。收起

关键词 : 抗乙型肝炎病毒乙型肝炎病毒表面抗原核酸药物作用机制

8. 影响乙型肝炎病毒宫内感染的相关临床研究

[学位论文] 潘文涛中山大学 2008年硕士导师: 谌小卫共50页

摘要 : 本文就影响乙型肝炎病毒宫内感染的相关进行临床研究，分以下二部分：第一部分：目的与设计：以HBsAg阳性孕妇的婴儿为研究对象，以出生后24小时内乙肝主一被动联合免疫前的外周血HBsAg阳性或(和)HBV DNA阳性的新生儿为阳性组，HBs... 展开本文就影响乙型肝炎病毒宫内感染的相关进行临床研究，分以下二部分：第一部分：目的与设计：以HBsAg阳性孕妇的婴儿为研究对象，以出生后24小时内乙肝主一被动联合免疫前的外周血HBsAg阳性或(和)HBV DNA阳性的新生儿为阳性组，HBshg阴性和HBVDNA阴性新生儿为阴性组，探讨影响新生儿GHsAg阳性或(和)HBV DNA阳性的相关临床因素。所有研究对象都接受乙肝主被动联合免疫(即0，1，6方案(10ug，5ug，5ug)+出生6小时内肌注HBIG200IU)后，在婴儿满6月龄时和12月龄时对其进行随访并复查乙型肝炎病毒血清标志物(HBV-M)，以出生24小时内免疫前和满6月龄时HBsAg阳性的婴儿为HBV宫内感染组(以下简称感染组)，其他婴儿为非感染组，探讨HBV宫内感染的相关临床因素。此部分为病例对照研究。资料与方法：把2006年6月至2008年2月在中山大学附属第三医院产科分娩的符合纳入标准的血清rmsAg阳性孕妇的新生儿417例作为研究和随访对象。至论文撰写时，满6月龄婴儿211例，满12月龄婴儿56例。 (1)根据新生儿出生24小时内，免疫前外周血HBsAg阳性或(和)HBV DNA阳性的检查结果，417例新生儿分为2组：阳性组(33例)、阴性组(384例)。 (2)满6月龄婴儿211例，以出生24小时内免疫前和满6月龄时HBsAg阳性的婴儿为感染组(4例)，其他婴儿为非感染组(207例)。比较组间母亲naeAg阳性率、HBV DNA阳性率、母亲年龄、孕期间注射HBIG、孕期肝功能异常、先兆流产、先兆早产、胎膜早破、分娩方式、父亲HBsAg阳性、新生儿体重和性别等临床因素。 HBV宫内感染诊断标准：新生儿出生时从其外周静脉采血测到乙肝病毒复制标志物的存在，且持续阳性至少3个月以上，以及尽管同样采用主被动联合免疫，但近期无免疫效果。血清样本分别采用ELISA法和荧光定量PCR法检测，根据荧光信号强弱(无荧光信号、有荧光信号和强荧光信号)，分为3个等级：<103copies／ml、≥103copies／ml和<106copies／ml、≥106copies／ml三种HBV DNA水平；<103copies／ml为HBV DNA阴性，≥103copies／ml为阳性。所得数据采用SPSS15．0医学统计软件包进行统计学分析；显著性水准α=0．05，双侧检验。结果： 1．HBsAg阳性孕妇的新生儿nBsAg阳性率为6．2％(26／417)，HBV DNA阳性率为3．4％(14／417)，新生儿HBsAg阳性或(和)HBV DNA阳性的总阳性率为7．91％(33／417)。 2．阳性组与阴性组中的母亲年龄、孕期间注射HBIG、孕期肝功能异常、先兆流产、先兆早产、胎膜早破、分娩方式、父亲HBsAg阳性、新生儿体重、男性新生儿，均无显著性差异(p>O．05)；阳性组的母亲HBeAg阳性率和HBV DNA阳性率分别为72．7％(24／33)、87．9％(29／33)，阴性组的分别为38．3％(147／384)、54．2％(208／384)，均具有显著性差异(p<0．05)。 3．将单因素分析中有意义的因素以及可能与新生儿HBsAg阳性或(和)HBV DNA阳性有关的因素(母亲HBeAg阳性、母亲HBV DNA阳性和母亲孕期使用HBIG)进行多元logistic回归(前向逐步法筛选)分析，结果只有母亲HBV DNA阳性被引入回归模型，OR为6．135，95％CI为(2．116-17．786)，p=Exp(-3．784+1．814*x)／(1+Exp(-3．784+1．814*x))，表明HBV DNA阳性孕妇发生新生儿HBsAg阳性或(和)HBV DNA阳性危险性是HBVDNA阴性孕妇的6．135倍。 4．满6月龄婴儿乙肝免疫应答率为79．15％，满12月龄时的免疫应答率为82．14％。 5．乙肝联合免疫前婴儿的HBV．M以类型2和类型3(---++、--+-+)为主，免疫接种完成后主要以类型4和类型5(-+---、-----)为主，类型1(+-+-+1在婴儿免疫前后相对稳定。 6．HBV宫内感染率为1．9％(4／211)。 7．感染组(4例)和非感染组(207例)的父亲HBsAg阳性率、男性新生儿、新生儿体重、新生儿窒息率，均无显著差异(p>0．05)；感染组的母亲HBeAg阳性率为100％(4／4)，非感染组的为41．5％(86／207)，差异具有显著性(p<0．05)。感染组的母亲HBV DNA阳性率为100％(4／4)，非感染组的为53．1％(110／207)，无显著性差异(p>0．05)；但在感染组，母亲的三个HBV DNA水平级的例数分别为0，0，4，而非感染组的分别为97，39，71，差异具有显著性(p<0．05)。在感染组中，新生儿HBsAg阳性或(和)HBV DNA阳性的总阳性率为100％(4／4)：在非感染组，为8．70％(18／207)，2组的新生)LHBsAg阳性或(和)HBV DNA阳性的总阳性率差异具有统计学意义(p<0．05)。 8．在各级母亲HBV DNA载量的层面上分别比较，当母亲HBV DNA≥104copies／ml时，感染组和非感染组的母亲的HBVDNA载量方具有显著性差异(1)<0．05)，同时，当母亲HBV DNA载量≥108copies／ml时，发生宫内感染的危险系数为11．938。 9．以新生儿HBsAg阳性或新生儿HBV DNA阳性预测婴儿HBV宫内感染，均无统计学意义(p>0．05)。但是，ROC曲线分析表明，新生儿HBsAg阳性联合HBV DNA阳性预测HBV宫内感染有统计学意义(p<0．05)，曲线下面积为0．833，95％CI(0．602-1．065)，其敏感度为100％，特异度为99．03％，阳性预测值为66．67％，阴性预测值为100％。结论： 1．HBV DNA载量是HBV宫内感染的独立高危因素；HBV DNA载量越高，HBV宫内感染的危险性越大。HBsAg阳性母亲晚孕期间注射HBIG暂未见是HBV宫内感染的保护因素。 2．新生儿出生后24小时内乙肝主一被动免疫前HBsAg阳性联合HBV DNA阳性可较准确预示HBV宫内感染。 3．对HBsAg阳性母亲的婴儿进行密切随访和监测的意义重大，应大力推广。第二部分：随访以HBsAg阳性孕妇为研究队列，以孕晚期注射HBIG200IU或400IU的孕妇为干预组，未注射的为对照组，随访两组的婴儿至少6个月，比较两组婴儿发生HBV宫内感染的差异，探讨HBsAg阳性孕妇孕晚期注射HBIG200IU或400IU，每四周一次，至少3次的预防方案和婴儿发生HBV宫内感染的关系。本部分为前瞻性队列研究。资料与方法： 2006年6月至2008年2月在中山大学附属第三医院产科产检、分娩和随访的HBsAg阳性孕妇，进行相关检查符合纳入标准的产妇及其婴儿211例，根据其晚孕期间是否注射过HBIG(HBV宫内感染的预防方案：按知情、同意、自愿原则，晚孕期间肌注HBIG200IU或400IU，每四周一次，至少3次)分为干预组169例，对照组42例。 (1)对孕妇本身：比较干预组和对照组孕妇肝功能异常率的差异;比较干预组56例孕妇使用HBIG前后的HBV DNA载量。 (2)对新生儿：比较干预组和对照组新生儿出生24小时内乙肝主一被动联合免疫前HBsng阳性或(和)HBV DNA阳性的总阳性率、HBsAb阳性率的差异。 (3)对研究队列的满6个月的婴儿进行随访，比较干预组和对照组HBV宫内感染差异；比较2组婴儿免疫成功率的差异。血清样本分别采用ELISA．法和荧光定量PCR法检测，根据荧光信号强弱(无荧光信号、有荧光信号和强荧光信号)，分为3个等级：<103copies／ml、≥103copies／ml和<106copies／ml、≥106copies／ml三种HBV DNA水平。所得数据采用SPSS15．0医学统计软件包进行统计学分析；显著性水准α=0．05，双侧检验。结论： 1．HBsAg阳性孕妇孕晚期注射HBIG200IU或400IU，每四周一次，至少3次，不能明显降低孕妇体内HBV DNA载量，不会引起孕妇肝炎活动。 2．HBsAg阳性孕妇孕晚期注射HBIG200IU或400IU，每四周一次，至少3次，未能提高新生儿出生24小时内乙肝主一被动联合免疫前HBsAb阳性率和婴儿乙肝免疫成功率。 3．HBsAg阳性孕妇孕晚期注射HBIG200IU或400IU，每四周一次，至少3次，与新生儿HBsAg阳性或(和)HBV DNA阳性，与HBV宫内感染，在本研究中，均暂未见明显相关性。收起

关键词 : 乙型肝炎病毒宫内感染

9. HBsAg定量对peg干扰素联合LAM治疗后持续性病毒学应答的预测价值

[学位论文] 陆蒂青郑州大学 2010年硕士导师: 孙长宇共53页

摘要 : 背景乙型病毒性肝炎是全球病毒性肝炎中的重点防治传染病,呈世界性流行,具有广泛的传染性,是全球性感染性疾病,严重危害人类健康。据世界卫生组织报道,全球约20亿人曾感染过HBV,其中3.5～4亿人为CHB病毒(HBV)感染者[1]。我国属HBV感染高流行区,... 展开背景乙型病毒性肝炎是全球病毒性肝炎中的重点防治传染病,呈世界性流行,具有广泛的传染性,是全球性感染性疾病,严重危害人类健康。据世界卫生组织报道,全球约20亿人曾感染过HBV,其中3.5～4亿人为CHB病毒(HBV)感染者[1]。我国属HBV感染高流行区,一般人群的乙型肝炎表面抗原(HBsAg)阳性率为9.09％,约1.5亿人。慢性乙型病毒性肝炎(CHB)患者中,肝硬化失代偿的年发生率约3％,5年累计发生率约16％[2]。CHB、代偿期和失代偿期肝硬化的5年病死率分别为0％～2％、14％～20％和70％～86％。HBV感染还是原发性肝细胞性肝癌(HCC)的重要相关因素,HBsAg和乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg)均阳性者的HCC发生率显著高于单纯HBsAg阳性者[3]。每年约有100万人死于HBV感染所致的肝衰竭、肝硬化和HCC[4],而肝硬化和HCC的发生与HBV的持续复制密切相关。病毒持续复制和机体免疫清除障碍是乙肝发病的两个基本要素,抗病毒治疗是治疗慢乙肝的关键[5]。尽管CHB的治疗取得了一定的进展,抗病毒药物具有强有力的抑制病毒复制的作用,但目前抗HBV的药物疗效有限,乙肝单一治疗的局限性突出。联合用药可提高抗病毒效果,推迟耐药发生的时间,减少耐药率,许多学者认为联合治疗为今后抗病毒治疗发展的方向。目前,HBV DNA是常用的检测治疗反应的指标。获得HBeAg血清学转换且HBV DNA为阴性的患者,有相当数量的肝炎复发[6],这种现象说明血清HBVDNA可能不完全代表体内总的HBV DNA。体内总的HBV DNA己被证实可以用来预测持久性病毒学应答[7]。HBsAg是HBV感染的标志物,HBsAg的血清学转换是清除慢性HBV感染的重要指标[8],不仅能反映HBV的复制状态,而且能反映肝细胞内共价闭合环状DNA(cccDNA)的水平变化,对判断抗病毒治疗的疗效具有一定意义。目的评估HBsAg定量对peg干扰素和拉米夫定(LAM)联合抗病毒治疗后持续性病毒学应答的预测价值。方法：将30例HBeAg阳性的CHB患者分成3组,peg干扰素α-2a治疗8周后联合LAM治疗组,LAM治疗8周后联合peg干扰素α-2a治疗组,peg干扰素α-2a同时联合LAM治疗,LAM疗程为40周,peg干扰素α-2a疗程为32周。应用荧光定量聚合酶链反应技术(PCR)检测所有的患者抗病毒治疗前后血清HBV DNA的量,应用时间分辨荧光免疫分析技术(IRFIA)检测所有的患者抗病毒治疗前后血清HBsAg滴度。应用乙型肝炎病毒标志物血清/血浆检测试剂板检测所有的患者抗病毒治疗前后血清HBeAg的定性。应用肝功能测定试剂盒,在全自动生化分析仪上测定血清肝功能(ALT)的水平。把治疗1年后,持续HBeAg血清转化和HBV DNA低于10,000copies/ml称为持续病毒学应答。结果： 4例患者在治疗过程中退出。其余26例患者中,治疗结束时12例患者(46％)获得病毒学应答,7例患者获得持续性病毒学应答,4例患者出现LAM基因型耐药。停止治疗后第24周,7例(25％)获得持续性病毒学应答。治疗前,具有较低水平HBsAg的患者,更容易获得持续性的病毒学应答。在治疗前,HBsAg水平低于10,000IU/ml的患者,其发生持续性病毒学应答的敏感性,特异性,阳性及阴性预测值分别是86％,56％,43％和92％。治疗结束时HBsAg水平小于1500IU/mL时,持续性病毒学应答的敏感性71％,特异性84％,阳性预测值63％,阴性预测值8996。治疗结束后6个月,7例持续应答者的血清HBsAg维持在低水平(中位数,1016IU/mL；范围231-4127IU/mL)。治疗结束时,与非持续应答且没有产生LAM耐药的患者相比,LAM耐药的4例患者往往有较高的}|BsAg水平,但是差异无统计学意义(p=0.27)。治疗结束时,HBV DNA阴性时,持续病毒学应答的敏感性8696,特异性74％,阳性预测值55％,阴性预测值9396。结论：治疗前低水平的HBsAg比血清HBV DNA对Peg干扰素和LAM联合抗病毒治疗后持续性病毒学应答有更好的预测价值。收起

关键词 : 慢性乙型肝炎 peg干扰素拉米夫定基因型变异乙型肝炎病毒表面抗原乙型肝炎病毒标志物乙型肝炎病毒DNA

10. 肝康栓抗乙型肝炎病毒作用的研究

[学位论文] 曾娟华中科技大学 2004年硕士导师: 田德英共41页

摘要 : 目的:观察肝康栓抗乙型肝炎病毒(HBV)体外药效评价,进一步探讨其抗病毒机制.且观察肝康栓对慢性HBV感染患者的临床疗效和不良反应.方法:采用乙型肝炎病毒基因转染的2.2.15细胞系,运用不同浓度的肝康栓作用于此细胞系,留取培养上清液.应用ELISA、PCR技... 展开

关键词 : 2.2.15细胞乙型肝炎病毒肝康栓