中国科学技术信息研究所--国家工程技术数字图书馆

[学位论文] 徐亮中国科学院大学 2020年博士导师: 姜海共101页

摘要 : Hippo信号通路最初是在果蝇中利用遗传学手段发现并命名的，且在进化上高度保守，可以调控器官大小和组织稳态。Hippo信号通路的失活可以促使细胞逃逸接触抑制，从而为肿瘤细胞的过度生长提供有利条件。然而，在某些癌症类型中，Hippo信号通路的功能是... 展开 Hippo信号通路最初是在果蝇中利用遗传学手段发现并命名的，且在进化上高度保守，可以调控器官大小和组织稳态。Hippo信号通路的失活可以促使细胞逃逸接触抑制，从而为肿瘤细胞的过度生长提供有利条件。然而，在某些癌症类型中，Hippo信号通路的功能是如何发生紊乱的尚不清楚。为了揭示这一现象，我们在果蝇中对影响Hippo信号通路的基因进行了全基因组的筛选，并将候选基因与人类癌症基因组数据进行比对。通过我们的筛选，我们发现Prosap作为Hippo信号通路的新调控基因，过度激活能够促进果蝇器官的异常增大。有趣的是，Prosap在哺乳动物中的同源基因SHANK2，是染色体11q13上扩增频率最高的基因，而11q13又是人类癌症中常见的肿瘤扩增子。11q13扩增子的基因扩增图谱清楚的显示肿瘤细胞对SHANK2扩增的选择倾向性。更重要的是，SHANK2是人类癌症基因组中不在MYC扩增子上的扩增频率最高的基因。进一步的研究发现SHANK2能够通过竞争结合LATS1的激活蛋白而抑制Hippo信号通路的活性，且作为一个潜在的原癌基因，SHANK2能够促进细胞的转化和肿瘤的形成。在Hippo信号通路已经紊乱的细胞系中，SHANK2的敲低能恢复Hippo信号通路活性，抑制细胞的增殖。这些结果表明SHANK2作为一个在进化上保守的Hippo信号通路调控蛋白，在肿瘤细胞中高度扩增，能够促进癌症的发生。我们的研究首次系统地阐述了癌症中高频扩增的SHANK2基因的致癌功能，结合SHANK2在成年组织中主要表达在神经系统这一特性，在未来可以设计靶向SHANK2而不能通过血脑屏障的药物，既能实现对SHANK2高表达肿瘤的特异性杀伤，又能降低药物引起的毒副作用。总之，本研究发现了一个在癌症中高频扩增的新原癌基因SHANK2，该基因通过调控Hippo信号通路活性而抑制细胞的增殖和肿瘤的形成，这为临床治疗癌症和药物开发提供新的靶点和理论基础。收起

关键词 : 癌症信号通路原癌基因 SHANK2 Hippo信号通路

2. 探究YAP调控肝脏生长的下游效应因子

[学位论文] 高寒厦门大学 2022年硕士导师: 周大旺共75页

摘要 : 器官生长起止的精准调控是保证多细胞动物个体正常生长、发育以及稳态维持的基础。肝脏是重要的代谢器官，生理状态下，肝脏生长受到严格的调控，肝脏大小相对于个体大小的比例是恒定的，而异常的肝脏生长调控和失衡的肝体比例与许多肝脏病理过程密切... 展开

关键词 : 肝脏生长 Hippo信号通路 YAP TCPOBOP

3. AJUBA调控Hippo信号通路在食管鳞癌发展的作用研究

[学位论文] 路子扬新疆医科大学 2021年硕士导师: 蒲红伟共70页

摘要 : 目的：探讨AJUBA蛋白在食管鳞癌细胞中的表达以及通过调控Hippo信号通路蛋白MST1、YAP1与TAZ对食管鳞癌增殖、侵袭及转移的作用及意义。方法：(1)通过免疫组化法测定组织芯片中136例食管鳞癌及相应的癌旁组织中AJUBA、MST1、YAP1与TAZ的蛋白表达，分析... 展开目的：探讨AJUBA蛋白在食管鳞癌细胞中的表达以及通过调控Hippo信号通路蛋白MST1、YAP1与TAZ对食管鳞癌增殖、侵袭及转移的作用及意义。方法：(1)通过免疫组化法测定组织芯片中136例食管鳞癌及相应的癌旁组织中AJUBA、MST1、YAP1与TAZ的蛋白表达，分析AJUBA与MST1、YAP1与TAZ之间的相关性，根据免疫组织化学结果对AJUBA进行临床病理参数及生存预后分析；(2)采用Westernblotting法测定AJUBA分别在食管鳞癌细胞株KYSE30、KYSE150及KYSE450中的蛋白表达情况，并从中挑选出AJUBA蛋白表达最高的食管鳞癌细胞株；(3)采用慢病毒转染方法敲低食管鳞癌中AJUBA蛋白的表达，并采用Westernblotting与qRT-PCR方法验证敲降效率及Hippo信号通路相关因子的表达；(4)通过CCK8增殖实验、平板克隆、划痕实验、Transwell迁移实验、Transwell侵袭实验，验证下调AJUBA在食管鳞癌细胞中的表达水平后是否影响其增殖、迁移和侵袭；(5)采用流式细胞术检测AJUBA在食管鳞癌细胞中低表达对细胞周期的影响。结果：(1)AJUBA、MST1、YAP1、TAZ均在食管鳞癌细胞中高表达，在癌旁组织细胞中低表达(P＜0.05)；AJUBA分别与MST1(P=0.000；r=0.627)、YAP1(P=0.003；r=0.249)、TAZ(P=0.000；r=0.518)相关联，且呈正相关；AJUBA呈阳性表达主要与患者的肿瘤大小(P=0.000)、浸润深度(P=0.000)和淋巴结转移(P=0.035)相关；与患者的年龄(P=0.700)、性别(P=0.308)、分化程度(P=0.774)和TNM分期(P=0.795)无关；食管鳞癌患者中AJUBA阳性表达的患者生存率低于AJUBA阴性表达的患者(P＜0.05)；(2)Westernblotting本底实验结果显示：KYSE150中AJUBA蛋白表达量最高(P＜0.05)；(3)Westernblotting核质分离实验结果显示：AJUBA在SHEE细胞核中表达，在KYSE150细胞质与细胞核表达；YAP1在SHEE中不表达，在KYSE150中细胞质与细胞核表达；TAZ在SHEE中不表达，在KYSE150中细胞质与细胞核表达，以上结果差异均有统计学意义(P＜0.05)；(4)细胞功能实验结果显示：敲低AJUBA后，KYSE150细胞株的增殖、侵袭与迁移能力均减弱(P＜0.05)。流式细胞周期实验结果显示敲低AJUBA表达，细胞阻滞于G0/G1期，G2/M期与S期细胞减少(P＜0.05)；(5)qRT-PCR与Westernblotting实验结果共同表明，与对照组相比，KYSE150细胞株敲低AJUBA后Hippo信号通路下游因子MST1、YAP1、TAZ的mRNA与蛋白表达水平均降低(P＜0.05)。结论：(1)AJUBA在食管鳞癌中高表达影响食管鳞癌患者的生存预后，同时AJUBA在食管鳞癌细胞系KYSE150中促进食管鳞癌增殖、迁移与侵袭；(2)敲低AJUBA在食管鳞癌细胞系KYSE150中的表达，可下调Hippo信号通路相关因子表达，调控食管鳞癌发展。收起

关键词 : 食管鳞癌信号通路 AJUBA Hippo信号通路 YAP1

4. Hippo通路在肺癌发生发展中的作用及调控机制

[学位论文] 张雯婧中国科学院大学 2015年博士导师: 季红斌共128页

摘要 : 肺癌是当今全球范围内危害性最大的疾病之一。肺癌的发生发展是一个多步骤的复杂事件，涉及多个基因的改变和多条信号通路的异常调控。Hippo通路是近年来在果蝇中发现的与生长发育相关的信号通路，参与器官大小的调控。越来越多的研究表明，Hippo通路... 展开肺癌是当今全球范围内危害性最大的疾病之一。肺癌的发生发展是一个多步骤的复杂事件，涉及多个基因的改变和多条信号通路的异常调控。Hippo通路是近年来在果蝇中发现的与生长发育相关的信号通路，参与器官大小的调控。越来越多的研究表明，Hippo通路的异常调控在癌症的发生发展过程中起着重要作用。然而，Hippo通路在肺癌发生发展中的功能及作用机理还尚待阐明。 LKB1是肺癌中常见的突变抑癌基因之一，在大约30％的非小细胞肺癌中存在着LKB1基因的突变。已有研究表明，LKB1缺失的肿瘤中YAP高度激活，然而YAP是否介导了LKB1缺失所引起的肿瘤进展目前还缺乏实验证据。第一部分工作中，利用肺癌小鼠模型发现肺泡二型上皮细胞特异性过表达YAP产生肺组织增生;过表达YAP显著促进KrasG12D小鼠肺肿瘤的发展进程;双拷贝敲除Yap显著抑制Lkb1L/L/KrasG12D小鼠肺肿瘤的发展进程，提示YAP介导了LKB1缺失促进肿瘤发生发展的功能。机制研究表明，YAP通过转录调控下游基因Survivin的表达从而促进肺癌的恶性进展。这部分工作为YAP介导LKB1缺失肺腺癌的恶性进展提供了实验证据，提示靶向YAP可能是治疗LKB1缺失肺腺癌的策略。本实验室前期工作中，发现Lkb1缺失的肺腺癌在恶性进展到一定程度后会转分化成肺鳞癌，但这一过程发生的分子机制还有待阐释。基于YAP在正常胚胎发育和成体干细胞的分化及命运决定过程中的重要作用，猜测YAP也可能参与病理条件下尤其是肿瘤发生发展过程中的细胞谱系转变过程。第二部分工作中，通过肺癌临床样本、肺癌细胞系和肺癌小鼠模型的整合性研究，发现YAP在肺腺癌和肺鳞癌中的表达和定位呈现明显差异;功能研究发现抑制YAP表达显著加速肺腺癌向肺鳞癌的转分化，YAP的持续性激活明显抑制转分化;机制研究表明LKB1的缺失导致肺腺癌中YAP高表达并激活，YAP活化后上调ZEB2的表达进而抑制DNp63的转录;肺腺癌向鳞癌转分化过程中，YAP的失活导致了ZEB2表达的下调进而引起DNp63转录的去抑制，DNp63的表达最终开启了肺腺癌向鳞癌转分化相关的一系列程序。这部分工作揭示了YAP在肺腺癌向肺鳞癌转分化中的重要作用及其分子机制，增进了人们对于Hippo通路在肿瘤细胞可塑性中功能的认识，为肺癌的临床治疗提供了潜在的新思路和新策略。合作课题组前期工作筛选到了调控Hippo通路的分子——Sd-Binding-Protein(SdBP)，进一步的功能研究表明SdBP能抑制由Yorkie(Yki)诱导的过度增殖，提示SdBP可能在器官大小调控及肿瘤形成中起着重要的作用。第三部分工作中，通过分析小鼠肺腺癌肿瘤和肺腺癌临床样本，文章发现VGLL4（SdBP在哺乳动物中的同源物）在肺腺癌肿瘤中低表达;功能学实验证实VGLL4能抑制肺癌细胞的生长，VGLL4过表达能抑制肺癌小鼠的肿瘤发展进程;机制研究表明VGLL4通过与YAP竞争性地结合TEADs，抑制Hippo通路下游效应分子YAP-TEADs复合物的转录活性，进而抑制肺癌细胞的生长。这部分工作阐释了VGLL4抑制肺癌生长的分子机理，为Hippo信号通路的研究增加了新的内容，提示VGLL4可能是治疗YAP异常激活的肺癌的新切入点。本论文针对Hippo通路下游效应分子YAP在肺癌发生发展过程中的作用和机理展开了系统性的研究，同时发现了调控Hippo通路的新分子，阐明其在肺癌中的功能和作用机制，这些工作为将来肺癌的临床治疗提供了潜在的新分子靶点和治疗策略。收起

关键词 : Hippo信号通路调控机制肺癌细胞

5. WWP2通过调控Hippo-YAP信号通路促进胃癌侵袭转移的机制研究

[学位论文] 邹建萍南昌大学 2021年硕士导师: 项晓军共59页

摘要 : 背景和目的： WWP2（WWdomain–containingE3ubiquitinproteinligase2）属于HECTE3泛素连接酶家族，能通过将泛素连接到底物蛋白上而促进其被泛素化降解。多项研究表明WWP2在多种肿瘤中表达异常升高，如胶质瘤、肺癌、肝癌及口腔肿瘤等，且能通过... 展开背景和目的： WWP2（WWdomain–containingE3ubiquitinproteinligase2）属于HECTE3泛素连接酶家族，能通过将泛素连接到底物蛋白上而促进其被泛素化降解。多项研究表明WWP2在多种肿瘤中表达异常升高，如胶质瘤、肺癌、肝癌及口腔肿瘤等，且能通过不同的调控机制实现其促肿瘤发生进展的重要作用。本课题分析了WWP2在胃癌细胞系及组织中的表达情况,并进一步探讨了WWP2通过泛素化降解LATS1从而调控Hippo-YAP信号通路促进胃癌（GC）侵袭转移的调控机制。方法：利用蛋白质免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation,Co-IP）实验和免疫荧光实验（Immunofluorescencestaining，IF）鉴定WWP2是能与Hippo信号通路上游组分LATS1蛋白结合的分子。通过免疫组织化学染色实验（Immunohistochemistry，IHC）和相关生物信息学网站分析WWP2在胃癌组织中的表达情况，并进一步探讨其蛋白水平的高低与GC患者临床病理特征及预后之间的相关性。蛋白质印迹（Westernblotting）实验检测WWP2在胃癌细胞系和临床胃癌组织标本中的表达；采用细胞学功能实验验证了调控WWP2后对胃癌细胞增殖、克隆形成、迁移和侵袭的影响。Westernblotting和实时定量PCR实验（quantitativereal-timePCR）检测WWP2蛋白表达的高低和Hippo-YAP通路之间的关系；蛋白质半衰期实验（cycloheximide，CHX）、泛素化实验、逆转实验探讨WWP2和Hippo-YAP信号通路之间的潜在调控机制。裸鼠体内成瘤实验进一步验证WWP2对胃癌细胞体内生长能力的影响和分子机制。结果： WWP2能与LATS1相互结合。生物信息学分析显示WWP2在多种常见的癌症中异常表达，包括胃癌。免疫组化结果提示过表达WWP2与GC患者临床分期差、出现转移及预后不佳密切相关。WWP2在胃癌细胞系和组织中表达显著升高，上调WWP2明显促进胃癌细胞的恶性生物学行为，干扰WWP2则产生相反的效应。分子机制研究发现WWP2可以作为LATS1的负向调节因子从而诱导Hippo通路下游靶基因如CTGF、CYR61的转录；而逆转实验结果发现干扰LATS1能部分逆转干扰WWP2对胃癌细胞的抑制作用。裸鼠体内成瘤实验显示干扰WWP2能通过调控Hippo信号通路从而抑制胃癌细胞体内生长能力。结论： WWP2表达升高可能成为胃癌患者疾病进展和生存期较差的分子指标。WWP2可能通过泛素化降解LATS1进而调控Hippo-YAP信号通路活性促进胃癌发生进展。本研究首次阐明WWP2-LATS1-YAP信号轴在胃癌发生进展过程中发挥着重要的作用，可能为GC患者提供潜在的诊治新靶点。收起

关键词 : 胃癌 WWP2蛋白 LATS1蛋白 Hippo信号通路

6. XMU-MP-1通过Hippo信号通路对胆管癌细胞作用及其机制的研究

[学位论文] 石颖方佳木斯大学 2022年硕士导师: 杨彦民共43页

摘要 : 目的：胆管癌是世界常见消化道恶性肿瘤之一，发病率逐年升高。大部分临床胆管癌患者发现时已到达中晚期，治疗效果不佳。Hippo信号通路在各哺乳动物细胞内作用较为稳定，其核心组分在各种细胞中均发挥着调控细胞生长的重要作用。本研究借探索XMU-MP-... 展开目的：胆管癌是世界常见消化道恶性肿瘤之一，发病率逐年升高。大部分临床胆管癌患者发现时已到达中晚期，治疗效果不佳。Hippo信号通路在各哺乳动物细胞内作用较为稳定，其核心组分在各种细胞中均发挥着调控细胞生长的重要作用。本研究借探索XMU-MP-1通过Hippo信号通路对胆管癌细胞增殖、侵袭、迁移的影响，通过检测下游蛋白表达水平探究其作用机制。期望能对未来胆管癌的靶向治疗提供更多参考依据。方法：1、选用CCK-8实验，依相关文献及试剂说明，调整完全培养基中XMU-MP-1浓度（0、0.05、0.10、0.20、0.40、0.80、1.60、3.20μM），共分为8组，于24h、48h、72h检测其对胆管癌细胞增殖活性的影响；2、依CCK-8实验结果选用适宜XMU-MP-1浓度。依据培养基不同分2组，实验组（含XMU-MP-1和胎牛血清）、对照组（胎牛血清），分别培养胆管癌细胞；3、Transwell侵袭实验检测XMU-MP-1对胆管癌细胞体外侵袭能力的影响；4、细胞划痕实验检测XMU-MP-1对胆管癌细胞体外迁移能力的影响；5、WesternBlot检测2组中XMU-MP-1作用位点下游Hippo信号通路中相关因子LATS1、LATS2、YAP、TAZ蛋白表达情况。结果：1、CCK-8实验发现，本次实验浓度范围内，胆管癌细胞增殖活性随XMU-MP-1培养浓度及培养时间的增加而增加；2、Transwell侵袭实验发现，XMU-MP-1可有效提升胆管癌细胞的侵袭能力；3、细胞划痕实验发现，XMU-MP-1可有效提升胆管癌细胞的迁移能力；4、WesternBlot实验结果表明，XMU-MP-1处理后，胆管癌细胞中LATS1、LATS2蛋白表达降低，YAP、TAZ蛋白表达升高。结论：1、XMU-MP-1可有效增强胆管癌细胞的增殖、侵袭、迁移能力；2、XMU-MP-1可通过抑制Hippo通路，下调LATS1、LATS2蛋白表达以及上调YAP、TAZ蛋白表达，来实现对胆管癌细胞增殖、侵袭、迁移的促进作用。收起

关键词 : 胆管癌信号通路 Hippo信号通路 XMU-MP-1

7. TAZ-TEAD通过影响RORγt-Foxp3相互作用调控CD4+ T细胞分化

[学位论文] 赵昊厦门大学 2021年博士导师: 陈兰芬共110页

摘要 : Th17细胞与Treg细胞作为—对相互拮抗的CD4+T细胞亚型，两者的动态平衡，对于机体的免疫稳态至关重要，与类风湿性关节炎和干燥综合征等自身免疫性疾病的发生发展具有直接相关性。研究表明，TGFβ既可驱动Th17核心转录因子RORγt表达，也可促进Treg核... 展开

关键词 : Th17细胞 Treg细胞 TAZ TEAD Hippo信号通路

8. Brg1通过miR-187-5p/Hippo信号通路调节小鼠肝再生的机制研究

[学位论文] 龚俊华 2022年博士导师: 吴忠均共109页

摘要 : 目的： 1.观察小鼠肝脏特异性Brahma相关基因1（Brahma-relatedgene1，Brg1）缺失对肝再生（LiverRegeneration，LR）的影响。 2.研究miR-187-5p在Brg1调控LR过程中的作用。 3.探讨Brg1及miR-187-5p与Hippo信号通路的联系，并初步阐明... 展开目的： 1.观察小鼠肝脏特异性Brahma相关基因1（Brahma-relatedgene1，Brg1）缺失对肝再生（LiverRegeneration，LR）的影响。 2.研究miR-187-5p在Brg1调控LR过程中的作用。 3.探讨Brg1及miR-187-5p与Hippo信号通路的联系，并初步阐明Brg1调控LR过程中的机制。方法： 1.将Brg1loxP/loxP小鼠与albumin-Cre小鼠交配，选择性地敲除肝细胞中的Brg1。用蛋白质印迹法（WesternBlot，WB）检测肝脏特异性Brg1缺失（Brg1?/?)小鼠（KO组)肝组织样本中Brg1蛋白的表达，以验证Brg1基因敲除率；检测KO组小鼠肝体重比及肝功(ALT、AST)与正常C57BL/6小鼠（WT组）相比有无差别，并用HE染色及Ki-67免疫组化分别检测KO小鼠肝脏与WT小鼠相比有无病理学及肝细胞增殖情况改变。对8周龄雄性KO组小鼠及其同周龄、性别的WT组小鼠进行了2/3部分肝切除术（Partialhepatectomy，Ph）。在术后0h、24h、36h、48h、72h和168h（7d）采集小鼠肝脏组织样本并观察小鼠肝脏再生情况，并用免疫组化检测两组样本中反应肝细胞增殖指标（Ki-67及BrdU阳性细胞率）的情况。 2.利用TargetScan和miRWalk两个在线数据库对Brg1及Hippo信号通路中关键调控激酶LATS1的潜在靶miRNA进行相关性预测分析，并用定量实时聚合酶链反应（RT-qPCR）对样本中目标miRNA的表达进行验证。根据验证结果进行回复实验：对Brg1缺失小鼠（Brg1?/?)小鼠（KO组）注射相应外源性miRNA功能模拟物（agomir），并将其与同周龄、同性别的C57BL/6小鼠（WT组）上进行了2/3Ph。在术后0h、24h、36h、48h、72h和168h（7d）采集小鼠肝脏组织样本，观察小鼠肝脏再生情况，用免疫组化检测两组样本中反应肝细胞增殖指标（Ki-67和BrdU阳性细胞率）的情况。 3.用WB法检查KO组和WT组小鼠肝脏组织样本中周期蛋白（CyclinD1、CyclinA和CyclinE1）、周期蛋白激酶CDKs、Hippo信号通路中关键调控激酶LATS1及下游蛋白YAP表达情况，探讨Brg1及miR-187-5p与Hippo信号通路的联系，并初步阐明Brg1调控LR过程中的机制，以及miR-187-5p模似物回输后对上述细胞周期蛋白、周期蛋白激酶和LATS1及YAP的影响。 4.本实验所有数据采用SPSS22.0统计分析软件进行统计分析，结果用均数±标准差（M±SD）表示，以P＜0.05或Plt;0.01表示差异有统计学意义。结果： 1.小鼠胚胎中肝细胞特异性Brg1缺失并未导致胚胎的死亡。KO组小鼠肝细胞中Brg1蛋白的表达值为（0.22±0.04），与WT组小鼠的（0.81±0.04）相比表达显著降低（Plt;0.01）。KO组小鼠与WT小鼠相比较，肝脏没有明显病理学改变。术前KO小鼠与WT小鼠相比，肝体重比（4.4%vs4.3%）、ALT(71.3U/Lvs76.0U/L)和AST(282.0U/Lvs290.0U/L)均无明显差异（Pgt;0.05）。Ph术后早期（36h、48h和72h），KO小鼠肝组织再生情况（肝体重比：2.48%、2.78%和2.77%）显著低于WT组（2.96%、3.26%和3.27%）（Plt;0.01）；36h-48h时，KO组小鼠肝细胞Ki-67阳性细胞比率（17.67%和16.34%）也显著低于WT组（69.23%和57.07%）（Plt;0.01）。两组BrdU阳性细胞率也与Ki-67结果相似。以上结果表明肝脏特异性Brg1敲除不会导致小鼠死亡，但会造成小鼠Ph后早期肝再生的延迟。 2.TargetScan和miRWalk在线数据库对miRNA的相关性进行了预测性分析，结果提示miR-187-5p对Hippo信号通路中关键激酶LATS1存在潜在调控作用，且与WT组miR-187-5p的表达（1.33）相比较，KO组中miR-187-5p的表达显著降低（0.34）（Plt;0.01）。通过荧光素酶报告实验，我们证明miR-187-5p可以直接结合LATS1。Ph术后早期（36h、48h和72h），与WT组肝体重比（2.87%、3.50%和3.43%）相比，注射相应外源性miR-187-5p功能模拟物agomir的KO组小鼠肝体重比（2.53%、3.18%和3.41%）无统计学差异（Pgt;0.05），表明补充外源性miR-187-5p后在Ph术后早期恢复了Brg1敲除造成的肝组织再生延迟现象。术后36h和48h时，KO小鼠肝细胞的增殖情况（Ki-67阳性细胞比率分别为71.33%和65.50%）与同时期WT组（73.33%和67.53%）相比无统计学差异（Pgt;0.05）。两组BrdU阳性细胞率也与Ki-67结果相似。以上结果表明Brg1可以正向调控miR-187-5p的表达，促进Ph后早期肝再生。 3.Ph后36h和48h，KO组小鼠肝细胞中的细胞周期蛋白激酶CDK1的表达量（0.20和0.13）显著低于WT小鼠（0.69和0.74）（Plt;0.05）。Ph后0h、24h、36h和48h时，细胞周期蛋白cyclinD1的表达量（0.01、0.23、0.20和0.26）低于WT小鼠（0.17、0.31、0.83和0.71）（Plt;0.05）。Ph后36h和48h，LATS1在KO组小鼠肝脏中表达量（0.83和0.70）显著高于WT组（0.60和0.36），而同时间点KO组去磷酸化的YAP表达量显著低于WT组（0.30和0.35vs0.43和0.64）（Plt;0.05）。输注外源性miR-187-5pagomir后，KO组小鼠与WT组小鼠在0h-72h中cyclinD1、CDK1、LATS1和去磷酸化的YAP的表达量的统计学差异几乎被消除（Pgt;0.05）。以上结果表明miR-187-5p模似物回输后能恢复因Brg1基因缺失所致的上述细胞周期蛋白、周期蛋白激酶和Hippo信号通路关键调控激酶、蛋白的表达。因此，Brg1可能通过miR-187-5p抑制Hippo信号通路并促进小鼠肝再生。结论： 1.肝脏特异性Brg1敲除不会导致小鼠胚胎死亡或引起其他病理学改变，但会造成小鼠Ph后早期肝再生的延迟。 2.Brg1可以正向调控miR-187-5p的表达，补充外源性miR-187-5p能恢复小鼠由于肝脏特异性Brg1敲除造成的Ph后早期肝再生的延迟。 3.Brg1可能通过miR-187-5p抑制Hippo信号通路正向调控小鼠肝再生。收起

关键词 : 肝再生 miR-187-5p Hippo信号通路

9. Piezo1通过重塑巨噬细胞刚度促进宿主防御

[学位论文] 史一然厦门大学 2021年博士导师: 陈兰芬共102页

摘要 : 机体在健康状态或疾病状态下，内体微环境中都存在着各种形式的机械力。在面对这些机械力作用，巨噬细胞可以通过改变自身性质来调控机体的稳态，然而，这些机械力微环境造成的细胞水平机械性质的改变是如何影响固有免疫应答至今仍没有被揭示。本课题... 展开

关键词 : 巨噬细胞 Piezo1 Hippo信号通路 ROS 吞噬杀菌

10. TRIM29通过上调YAP1蛋白水平促进胰腺癌生长和进展的机制研究

[学位论文] 方路南昌大学医学部 2022年博士导师: 祝新根共88页

摘要 : 背景及目的：胰腺癌（pancreaticcancer，PC）是一种侵袭性极高的消化系统恶性肿瘤，俗称“癌中之王”，其发病率和死亡率在全球范围内逐年上升，严重危害人类健康。胰腺癌早期诊断困难、恶性程度高，手术切除率低，患者总体5年生存率仅10%。因... 展开背景及目的：胰腺癌（pancreaticcancer，PC）是一种侵袭性极高的消化系统恶性肿瘤，俗称“癌中之王”，其发病率和死亡率在全球范围内逐年上升，严重危害人类健康。胰腺癌早期诊断困难、恶性程度高，手术切除率低，患者总体5年生存率仅10%。因此，当前胰腺癌的诊治形势依然十分严峻，积极探索胰腺癌发生发展的分子机制以及寻求新的有效治疗靶点具有重要临床意义。TRIM29，作为TRIM蛋白家族中的成员之一，是近年来逐渐受到关注的具有多种生物学功能的蛋白。近年来，已证实TRIM29表达失调与肿瘤的发生发展、增殖、侵袭和转移等密切相关。然而，TRIM29在胰腺癌中的具体生物学功能及机制尚不明确。YAP1蛋白作为细胞内连接蛋白及转录激活因子，是Hippo信号通路中最主要的效应蛋白。大量研究表明YAP1蛋白通过各种方式影响癌症发展，包括促进肿瘤细胞的恶性表型，干性转化和化疗耐药等。然而，YAP1在胰腺癌中的具体调控机制尚未阐明。本研究旨在探讨胰腺癌中TRIM29及YAP1的表达及相关性，进一步深入研究其影响胰腺癌生长及进展的机制。方法：（1）通过GEPIA数据库在线分析TRIM29在胰腺癌组织中的表达，并采用蛋白质印迹（Westernblotting，WB）、实时荧光定量PCR（QuantitativeRealTimePolymeraseChainReaction，qRT-PCR）及免疫组化（immunohistochemistry，IHC）法检测TRIM29在胰腺癌组织中的表达。统计分析TRIM29表达与胰腺癌患者主要临床特征及预后的关系。（2）干扰胰腺癌细胞中TRIM29的表达，通过CCK8及EdU实验观察细胞生长能力的变化。构建裸鼠皮下异种移植模型，体内研究TRIM29表达对胰腺癌细胞生长的影响。通过流式细胞术及TUNEL实验检测TRIM29表达改变对细胞周期及细胞凋亡的影响，进一步免疫印迹法检测周期相关蛋白及凋亡相关蛋白的表达。（3）改变TRIM29表达后，WB及qRT-PCR法检测胰腺癌细胞中YAP1的表达。WB、qRT-PCR及免疫组化法检测胰腺癌组织及相应非癌组织中YAP1的表达，进一步分析肿瘤组织中TRIM29与YAP1蛋白表达的相关性。设计回复实验，在高表达TRIM29的胰腺癌细胞中敲减TRIM29，同时下调YAP1的表达；在低表达TRIM29的胰腺癌细胞中过表达TRIM29的同时上调YAP1的表达，通过CCK8及EdU实验观察细胞生长能力的变化。（4）采用蛋白免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation，Co-IP）检测胰腺癌细胞中TRIM29与YAP1之间能否直接相互结合。在阻断胰腺癌细胞蛋白降解及合成的基础下，WB法检测过表达或干扰TRIM29后对YAP1蛋白表达的影响。Co-IP实验检测过表达或干扰胰腺癌细胞TRIM29表达后中对YAP1泛素化水平的影响。结果：（1）GEPIA在线数据库显示TRIM29在胰腺癌组织中的表达显著高于在邻近非肿瘤组织中。WB、qRT-PCR及IHC结果也证实TRIM29在胰腺癌组织中的表达水平显著升高。统计分析提示TRIM29高表达与肿瘤大小（P=0.003）和淋巴结转移（P=0.001）密切相关，但与年龄（P=0.951）、性别（P=0.531）、病理分级（P=0.328）、血管侵袭（P=0.568）及神经浸润（P=0.460）等无显著相关性。且TRIM29表达水平高的患者比TRIM29表达水平低的患者表现出更短的术后总生存期和无瘤生存期。（2）WB及qRT-PCR结果提示TRIM29在胰腺癌细胞中高表达。CCK8及EdU实验表明，下调胰腺癌细胞中TRIM29的表达后，细胞的生长能力减弱。动物实验也证实干扰TRIM29表达可以显著抑制胰腺癌的生长。流式细胞术检测结果显示，下调胰腺癌细胞TRIM29的表达可以将细胞周期阻滞在G1期，并促进胰腺癌细胞凋亡。免疫印迹结果显示，下调TRIM29的表达可以显著抑制细胞周期相关蛋白cyclinD1和PCNA的表达。同时，敲低TRIM29的表达可以上调BCL-2，并下调Bax和Caspase3的表达。TUNEL分析进一步证实，下调TRIM29的表达增加了异种移植瘤中凋亡细胞的数量。免疫组化分析表明，下调TRIM29可以抑制Ki67的表达。（3）qRT-PCR及WB结果显示TRIM29可以促进胰腺癌细胞中YAP1的蛋白表达，而对其信使RNA（MessengerRNA，mRNA）表达水平无影响。WB、qRT-PCR及IHC结果证实，YAP1在胰腺癌组织中显著高表达，且与TRIM29的表达水平呈正相关。Kaplan-Meier生存曲线显示，YAP1表达水平高的患者比YAP1表达水平低的患者具有更短的术后总生存时间和无瘤生存时间。回复实验表明，上调YAP1可以促进胰腺癌细胞的增殖能力；且下调TRIM29引起的细胞增殖能力下降可被YAP上调部分逆转；相反，下调YAP1可以抑制胰腺癌细胞的增殖能力；且上调TRIM29引起的细胞增殖能力上升可被YAP下调部分逆转。（4）Co-IP实验结果显示，胰腺癌细胞中TRIM29蛋白可以和YAP1蛋白直接结合。YAP1蛋白的表达随着蛋白酶抑制剂MG132作用时间的增加而逐渐累积。用阻断蛋白合成的放线菌酮（Cycloheximide，CHX）处理胰腺癌细胞后，过表达TRIM29可以减慢YAP1蛋白的降解速率。进一步研究证实上调TRIM29可以显著抑制YAP1的泛素化水平，而下调TRIM29可以显著增加YAP1的泛素化水平。结论： TRIM29在胰腺癌组织中高表达，其表达水平与胰腺癌患者恶性进展密切相关。此外，TRIM29可以通过调控YAP1的蛋白表达，进而促进胰腺癌细胞的生长和增殖。机制上，TRIM29直接与YAP1相互结合，通过抑制YAP1的泛素化来稳定其表达，进而发挥促癌功能。我们的结果为研究胰腺癌生长提供了新的理论基础，并将为胰腺癌的靶向治疗提供一个新的理论研究方向。收起

关键词 : 胰腺癌 TRIM29 YAP1蛋白 Hippo信号通路