摘要: 背景和目的： WWP2（WWdomain–containingE3ubiquitinproteinligase2）属于HECTE3泛素连接酶家族，能通过将泛素连接到底物蛋白上而促进其被泛素化降解。多项研究表明WWP2在多种肿瘤中表达异常升高，如胶质瘤、肺癌、肝癌及口腔肿瘤等，且能通过不... 展开 背景和目的： WWP2（WWdomain–containingE3ubiquitinproteinligase2）属于HECTE3泛素连接酶家族，能通过将泛素连接到底物蛋白上而促进其被泛素化降解。多项研究表明WWP2在多种肿瘤中表达异常升高，如胶质瘤、肺癌、肝癌及口腔肿瘤等，且能通过不同的调控机制实现其促肿瘤发生进展的重要作用。本课题分析了WWP2在胃癌细胞系及组织中的表达情况,并进一步探讨了WWP2通过泛素化降解LATS1从而调控Hippo-YAP信号通路促进胃癌（GC）侵袭转移的调控机制。 方法： 利用蛋白质免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation,Co-IP）实验和免疫荧光实验（Immunofluorescencestaining，IF）鉴定WWP2是能与Hippo信号通路上游组分LATS1蛋白结合的分子。通过免疫组织化学染色实验（Immunohistochemistry，IHC）和相关生物信息学网站分析WWP2在胃癌组织中的表达情况，并进一步探讨其蛋白水平的高低与GC患者临床病理特征及预后之间的相关性。蛋白质印迹（Westernblotting）实验检测WWP2在胃癌细胞系和临床胃癌组织标本中的表达；采用细胞学功能实验验证了调控WWP2后对胃癌细胞增殖、克隆形成、迁移和侵袭的影响。Westernblotting和实时定量PCR实验（quantitativereal-timePCR）检测WWP2蛋白表达的高低和Hippo-YAP通路之间的关系；蛋白质半衰期实验（cycloheximide，CHX）、泛素化实验、逆转实验探讨WWP2和Hippo-YAP信号通路之间的潜在调控机制。裸鼠体内成瘤实验进一步验证WWP2对胃癌细胞体内生长能力的影响和分子机制。 结果： WWP2能与LATS1相互结合。生物信息学分析显示WWP2在多种常见的癌症中异常表达，包括胃癌。免疫组化结果提示过表达WWP2与GC患者临床分期差、出现转移及预后不佳密切相关。WWP2在胃癌细胞系和组织中表达显著升高，上调WWP2明显促进胃癌细胞的恶性生物学行为，干扰WWP2则产生相反的效应。分子机制研究发现WWP2可以作为LATS1的负向调节因子从而诱导Hippo通路下游靶基因如CTGF、CYR61的转录；而逆转实验结果发现干扰LATS1能部分逆转干扰WWP2对胃癌细胞的抑制作用。裸鼠体内成瘤实验显示干扰WWP2能通过调控Hippo信号通路从而抑制胃癌细胞体内生长能力。 结论： WWP2表达升高可能成为胃癌患者疾病进展和生存期较差的分子指标。WWP2可能通过泛素化降解LATS1进而调控Hippo-YAP信号通路活性促进胃癌发生进展。本研究首次阐明WWP2-LATS1-YAP信号轴在胃癌发生进展过程中发挥着重要的作用，可能为GC患者提供潜在的诊治新靶点。 收起