摘要 :
目的：研究“促疫热成熟”蒙药—悬钩子木（RUBI RAMULUS）的质量控制指标性成分，和质量控制方法及其对免疫细胞增殖的影响。通过对化学成分系统研究和指纹图谱结合HPLC-MS/MS分析鉴定研究，选取质量控制指标性成分。建立药材鉴别和含量测定方法，并...
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目的：研究“促疫热成熟”蒙药—悬钩子木（RUBI RAMULUS）的质量控制指标性成分，和质量控制方法及其对免疫细胞增殖的影响。通过对化学成分系统研究和指纹图谱结合HPLC-MS/MS分析鉴定研究，选取质量控制指标性成分。建立药材鉴别和含量测定方法，并对不同产地、加工方法、商品药材进行质量研究。检测悬钩子木水提物和不同极性溶剂萃取部位，对小鼠脾淋巴细胞的免疫增殖影响。本论文为阐明悬钩子木的药效物质基础，建立质量控制方法，保证临床用药的安全可靠提供依据。
方法：1）化学成分分离：利用反相硅胶柱色谱，Sephadex LH-20和制备高效液相等方法，对悬钩子木的醇提物进行分离纯化，并运用1D，2D-NMR，HRMS等波谱分析法和文献对照法鉴定化合物结构。2）采用 HPLC建立药材指纹图谱，利用 HPLC-MS/MS对悬钩子木指纹图谱中化学成分进行快速鉴定，并通过与文献数据及部分对照品的一级、二级质谱的质谱信息比较，推测化合物结构。3）对指标成分表儿茶素与主成分咖啡酸和鞣花酸进行TLC鉴别与H P L C含量测定研究。4）采用CCK-8细胞染色法检测悬钩子木萃取物石油醚层、氯仿层、乙酸乙酯层、正丁醇层和水层对小鼠脾淋巴细胞的增值影响。
结果:1）从悬钩子木乙酸乙酯萃取物中分离得到19个化合物，其中3个新化合物，分别为1α,2β,3β,19α-四羟基-乌苏-12-烯-28-酸-β-D-吡喃葡萄糖苷（5），1,6-二咖啡酰基-葡萄糖（11），悬钩子木质素A（14）；16个已知化合物，分别为香叶基-1-O-α-D-呋喃糖基-（1→2）-β-D-吡喃葡萄糖苷（1），2α,3α,19α,24-四羟基-乌苏-12-烯-28-酸-β-D-吡喃葡萄糖苷（2），2α,3α,19α-三羟基-23-酮-乌苏-12-烯-28-酸-β-D-吡喃葡萄糖苷（3），3α,19α,24-三羟基-2-氧-乌苏-12-烯-28-酸-β-D-吡喃葡萄糖苷（4），2α,3β,19α-三羟基-23-酮-乌苏-12-烯-28-酸-β-D-吡喃葡萄糖苷（6），2α,3β,19α,23-四羟基-乌苏-12-烯-28-酸-β-D-吡喃葡萄糖苷（7），2α,3β,19α-三羟基-23,28-二酸-乌苏-12-烯-28-β-D-吡喃葡萄糖苷（8），鞣花酸（9），槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（10），7S,8S-苏式-3',4,7,9-四羟基-5',3-二甲氧基8-O-4'-新木脂素-9'-O-α-L-吡喃鼠李糖苷（12），7S,8S-苏式-3',4,9-三羟基-3-甲氧-7，8-二氢苯并呋喃-1'-丙醇基新木脂素-9'-O-α-L-吡喃鼠李糖苷（13），对羟基桂皮酸（15），七叶内酯（16），咖啡酸（17），表儿茶素（18），儿茶素（19）。2）建立悬钩子木 H P L C指纹图谱测定方法，并对9批次不同来源的悬钩子木药材进行了初步的指纹图谱研究；HPLC-MS/MS分析鉴定悬钩子木药材指纹图谱中17个化学成分，包括5个黄酮类化合物，6个三萜皂苷，5个酚酸类化合物和1个香豆素类化合物。首次对悬钩子木中三萜皂苷化合物的 ESI质谱裂解规律进行总结。3）对7个不同批次的药材中表儿茶素，咖啡酸和鞣花酸进行准确的 TLC鉴别与HPLC含量测定。4）活性检测表明悬钩子木水提物提取物具有促进小鼠脾淋巴细胞增殖作用，石油醚层、乙酸乙酯层、氯仿层、正丁醇层和水层均无明显的淋巴细胞增殖促进作用。
结论:化合物5，11，14为新化合物，化合物1，3，4，5-12，18，19为首次从该植物中得到；首次建立悬钩子木药材指纹图谱及HPLC-MS/MS鉴定方法，为后续血清药物化学研究奠定了基础；首次以表儿茶素为指标性成分建立悬钩子木药材的质量控制方法，为悬钩子木质量标准的建立提供指导依据；首次以CCK-8细胞染色法检测悬钩子木水提物促进小鼠脾淋巴细胞增殖作用，推测可能活性物质为其中的水溶性化合物。
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