摘要: 目的：探讨AJUBA蛋白在食管鳞癌细胞中的表达以及通过调控Hippo信号通路蛋白MST1、YAP1与TAZ对食管鳞癌增殖、侵袭及转移的作用及意义。方法：(1)通过免疫组化法测定组织芯片中136例食管鳞癌及相应的癌旁组织中AJUBA、MST1、YAP1与TAZ的蛋白表达，分析... 展开 目的：探讨AJUBA蛋白在食管鳞癌细胞中的表达以及通过调控Hippo信号通路蛋白MST1、YAP1与TAZ对食管鳞癌增殖、侵袭及转移的作用及意义。方法：(1)通过免疫组化法测定组织芯片中136例食管鳞癌及相应的癌旁组织中AJUBA、MST1、YAP1与TAZ的蛋白表达，分析AJUBA与MST1、YAP1与TAZ之间的相关性，根据免疫组织化学结果对AJUBA进行临床病理参数及生存预后分析；(2)采用Westernblotting法测定AJUBA分别在食管鳞癌细胞株KYSE30、KYSE150及KYSE450中的蛋白表达情况，并从中挑选出AJUBA蛋白表达最高的食管鳞癌细胞株；(3)采用慢病毒转染方法敲低食管鳞癌中AJUBA蛋白的表达，并采用Westernblotting与qRT-PCR方法验证敲降效率及Hippo信号通路相关因子的表达；(4)通过CCK8增殖实验、平板克隆、划痕实验、Transwell迁移实验、Transwell侵袭实验，验证下调AJUBA在食管鳞癌细胞中的表达水平后是否影响其增殖、迁移和侵袭；(5)采用流式细胞术检测AJUBA在食管鳞癌细胞中低表达对细胞周期的影响。结果：(1)AJUBA、MST1、YAP1、TAZ均在食管鳞癌细胞中高表达，在癌旁组织细胞中低表达(P＜0.05)；AJUBA分别与MST1(P=0.000；r=0.627)、YAP1(P=0.003；r=0.249)、TAZ(P=0.000；r=0.518)相关联，且呈正相关；AJUBA呈阳性表达主要与患者的肿瘤大小(P=0.000)、浸润深度(P=0.000)和淋巴结转移(P=0.035)相关；与患者的年龄(P=0.700)、性别(P=0.308)、分化程度(P=0.774)和TNM分期(P=0.795)无关；食管鳞癌患者中AJUBA阳性表达的患者生存率低于AJUBA阴性表达的患者(P＜0.05)；(2)Westernblotting本底实验结果显示：KYSE150中AJUBA蛋白表达量最高(P＜0.05)；(3)Westernblotting核质分离实验结果显示：AJUBA在SHEE细胞核中表达，在KYSE150细胞质与细胞核表达；YAP1在SHEE中不表达，在KYSE150中细胞质与细胞核表达；TAZ在SHEE中不表达，在KYSE150中细胞质与细胞核表达，以上结果差异均有统计学意义(P＜0.05)；(4)细胞功能实验结果显示：敲低AJUBA后，KYSE150细胞株的增殖、侵袭与迁移能力均减弱(P＜0.05)。流式细胞周期实验结果显示敲低AJUBA表达，细胞阻滞于G0/G1期，G2/M期与S期细胞减少(P＜0.05)；(5)qRT-PCR与Westernblotting实验结果共同表明，与对照组相比，KYSE150细胞株敲低AJUBA后Hippo信号通路下游因子MST1、YAP1、TAZ的mRNA与蛋白表达水平均降低(P＜0.05)。结论：(1)AJUBA在食管鳞癌中高表达影响食管鳞癌患者的生存预后，同时AJUBA在食管鳞癌细胞系KYSE150中促进食管鳞癌增殖、迁移与侵袭；(2)敲低AJUBA在食管鳞癌细胞系KYSE150中的表达，可下调Hippo信号通路相关因子表达，调控食管鳞癌发展。 收起