中国科学技术信息研究所--国家工程技术数字图书馆

[学位论文] 李素梅中国疾病预防控制中心 2007年硕士导师: 徐建国共245页

摘要 : 本文采用定性为主，结合定量方法，主要包括二手资料分析、访谈、焦点小组讨论、调查表和现场参与观察等，通过对11个碘缺乏病重点省综合干预项目进行系统回顾，全面了解各省项目实施过程和取得效果。通过回顾认为综合干预项目取得的主要成果包括：大... 展开

关键词 : 碘缺乏病综合干预社区参与健康促进

2. 藏羚羊粪便和高原鼠兔肠内容物可培养菌群结构与新种发现

[学位论文] 李俊琴山西医科大学 2020年博士导师: 徐建国共207页

摘要 : 目的：藏羚羊和高原鼠兔是青藏高原的特有动物，生活在寒冷、低氧和高海拔地区，携带的微生物多是未知的。本课题旨在系统分析藏羚羊粪便和鼠兔肠内容物的可培养菌群，分离疑似新种，发现新的细菌，并探讨其可能的生物学意义。方法： ... 展开目的：藏羚羊和高原鼠兔是青藏高原的特有动物，生活在寒冷、低氧和高海拔地区，携带的微生物多是未知的。本课题旨在系统分析藏羚羊粪便和鼠兔肠内容物的可培养菌群，分离疑似新种，发现新的细菌，并探讨其可能的生物学意义。方法： 1.在28℃和37℃两种温度下，普通和5%CO2气体环境下，采用脑心浸液含羊血培养基、TSA培养基、NA培养基等，根据菌落形态的多样性进行可培养菌群的分离培养与纯化。提取细菌分离株的基因组核酸，PCR扩增和Sanger测序获得16SrRNA基因序列。通过GenBank和EzTaxon数据库在线比对获得16SrRNA基因序列与已知菌种的相似性，完成菌株的初步鉴定。 2.对鉴定结果为疑似新种的菌株，采用革兰氏染色、透射电镜、孔雀蓝染色、动力实验等进行细菌基本特征检测，基于16SrRNA和基因组序列进行系统进化树分析，采用糖发酵、酶活性、药敏实验等检测菌株的生理生化特征，采用反相高压液相色谱法、二维薄层色谱法、HITACHIL-8900高速氨基酸分析仪等检测菌株的菌体成分，采用基因注释和基因组杂交完成基因组分析。综合分析菌株表型、基因型和生化特征，确定菌株的分类学位置，并完成新种的命名和模式菌株的保藏工作。对分离的已知菌，进行多样性和医学意义分析。结果： 1.本课题采用2种相同的培养条件，从鼠兔肠内容物成功鉴定到525株菌，隶属于3个细菌门、6个细菌纲、12个细菌目、20个细菌科、23个属、52个种；从藏羚羊粪便中，成功鉴定到734株菌，隶属于3个细菌门、4个细菌纲、9个细菌目、20个细菌科、28个属、73个种。采用22种培养条件，从青藏高原藏羚羊粪便中成功鉴定1977株菌，分布于4个细菌门、7个细菌纲、15个细菌目、30个细菌科、44个属、123个种。报道从临床患者中分离到的条件致病菌有23个种，包括中华不动杆菌、约翰逊放线菌、圆形芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、摩加夫芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、沙福芽孢杆菌、苏云金芽孢杆菌、产气荚膜梭状芽胞杆菌、脂黄素棒杆菌、海迪茨氏菌、Dietzianatronolimnaea、杜兰肠球菌、粪肠球菌、孟氏肠球菌、鹑鸡肠球菌、玫瑰考克氏菌、骚动厄氏菌、栖稻假单胞菌、科尼葡萄球菌、马胃葡萄球菌、华氏葡萄球菌、人葡萄球菌新霉素败血症亚种。从藏羚羊粪便中分离获得的优势种为柠檬节杆菌、木聚糖芽孢杆菌、屎肠球菌。 2.从藏羚羊粪便中分离鉴定细菌新种7个，分别为菌株449T、194T、2129T、2251T、2183T、2184T、592T。经鉴定：(1)菌株449T为栖霉菌属的新种，命名为朱既明栖霉菌(Mycetocola zhujimingii)，是一种以anteiso-C15:0为主要脂肪酸，以MK-10和MK-11为主要呼吸醌，以二磷脂酰甘油和磷脂酰甘油为主要极性脂，以赖氨酸为诊断性氨基酸，与M.zhadangensis进化关系较近；(2)菌株194T为盐地杆菌属的新种，命名为洪涛盐地杆菌(Salinibacterium hongtaonis)，对NaCl呈高耐受性，以anteiso-C15:0和anteiso-C17:0为主要脂肪酸，以赖氨酸、丙氨酸、甘氨酸和谷氨酸为细胞壁主要氨基酸，以MK-11和MK-10为主要呼吸醌,以二磷脂酰甘油和磷脂酰甘油为主要极性脂，不能发酵D-甘露糖，且萘酚-AS-BI-磷酸水解酶活性阴性；(3)菌株2129T命名为李兰娟放线菌(Actinomyces lilanjuaniae)，以C18:1ω9c和C16:0为主要脂肪酸，以二磷脂酰甘油、糖脂、磷脂酰肌醇、磷脂酰肌醇甘露糖苷和磷酸糖脂为主要极性脂，可以发酵D-己糖醇和D-木糖，但是不能发酵D-甘露糖和D-蜜二糖、酯酶(C4)和脯氨酸芳酰胺酶活性阴性，与A.dentalis和A.slackii进化关系较近；(4)菌株2251T命名为廖万清副球菌(Paracoccus liaowanqingii)，以C18:1ω7c为主要脂肪酸，以泛醌10为主要呼吸醌，以磷脂酰乙醇胺、二磷脂酰甘油、磷脂酰甘油、磷脂、糖脂为主要极性脂，以meso-2,6-二氨基庚二酸、丙氨酸和谷氨酸为细胞壁肽聚糖氨基酸，分类学地位与P.gahaiensis进化关系较近；(5)菌株2183T和2184T分别命名为俞东征棒杆菌(Corynebacterium yudongzhengii)和梁国栋棒杆菌(Corynebacterium liangguodongii)，是两个硝酸盐还原反应阴性、α-胰凝乳蛋白酶和过氧化氢酶活性阳性、D-果糖和5-钾酮葡萄糖酸酵解阳性、D-乳糖酵解阴性的菌种，两株菌均以二磷脂酰甘油、磷脂酰甘油、磷脂酰肌醇和磷脂酰肌醇甘露糖苷为主要极性脂，以MK-8(H2)和MK-9(H2)为主要呼吸醌，肽聚糖中含有meso-2,6-二氨基庚二酸。进化关系上，俞东征棒杆菌与C.doosanense和C.tapiri近，梁国栋棒杆菌与C.lipophiloflavum和C.mycetoides近；(6)菌株592T命名为陈薇气微菌(Aeromicrobium chenweiae)，菌株可以发酵L-鼠李糖、D-木糖和D-纤维二糖，但无法还原硝酸盐，主要脂肪酸为C18:1ω9c和C18:010-methyl，主要极性脂为二磷脂酰甘油、磷脂酰甘油和磷脂酰肌醇，主要呼吸醌为MK-9(H4)和MK-8(H4)，且细胞壁肽聚糖含有LL-二氨基庚二酸。 3.从高原鼠兔肠内容物中分离鉴定细菌新种2个，分别为MF30-AT和MF47T。经鉴定：(1)菌株MF-30AT命名为巴德年壤霉菌(Agromyces badenianii)，为需氧、革兰氏阳性菌，菌株在28℃、有氧、pH7.0的TSA培养基上生长最佳，不能发酵熊果苷、D-果糖、D-蔗糖、糖原、水杨素和淀粉，β-葡萄糖苷酶活性为阴性；(2 )菌株MF-30AT与陈薇气微菌不属于同一个种，被命名为严杰气微菌(Aeromicrobium yanjiei)，菌株可以发酵L-鼠李糖、D-木糖和D-纤维二糖，但无法还原硝酸盐，主要脂肪酸为C18:1ω9c和C18:010-methyl，主要极性脂为二磷脂酰甘油、磷脂酰甘油和磷脂酰肌醇，主要呼吸醌为MK-9(H4)和MK-8(H4)，且细胞壁肽聚糖含有LL-二氨基庚二酸。结论： 1.采用2种相同的培养条件，从鼠兔肠内容物成功鉴定到525株菌，隶属于3个细菌门、6个细菌纲、12个细菌目、20个细菌科、23个属、52个种；从藏羚羊粪便中，成功鉴定到734株菌，隶属于3个细菌门、4个细菌纲、9个细菌目、20个细菌科、28个属、73个种。采用22种培养条件，从藏羚羊粪便中成功分离到1977株菌，鉴定为4个门、7个纲、15个目、30个科、44个属和123个种，报道从临床患者样本中分离到的细菌种有23个。 2我们发现和命名了九个细菌新种，分别是朱既明栖霉菌(Mycetocola zhujimingii)、洪涛盐地杆菌(Salinibacterium hongtaonis)、李兰娟放线菌(Actinomyces lilanjuaniae)、廖万清副球菌(Paracoccus liaowanqingii)、巴德年壤霉菌(Agromyces badenianii )、俞东征棒杆菌(Corynebacterium yudongzhengii)、梁国栋棒杆菌(Corynebacterium liangguodongii)、陈薇气微菌(Aeromicrobium chenweiae)和严杰气微菌(Aeromicrobium yanjiei)。已经发表新种5个，正在投稿新种4个。收起

关键词 : 细菌藏羚羊鼠兔菌群结构菌株鉴定

3. 细菌毒力岛寡聚核苷酸微阵列芯片和致泻性大肠杆菌毒力岛的分布

[学位论文] 齐小保中国疾病预防控制中心 2005年博士导师: 徐建国共179页

摘要 : 细菌毒力岛是指细菌染色体一段可通过水平转移而获得的与细菌毒力相关的基因簇，主要编码毒素，粘附因子，分泌系统，侵袭因子等。毒力岛具有共同的特征：毒力岛的G+C含量往往不同于宿主DNA，密码子使用率也不同，往往位于tRNA位点附近，常携带有隐性... 展开细菌毒力岛是指细菌染色体一段可通过水平转移而获得的与细菌毒力相关的基因簇，主要编码毒素，粘附因子，分泌系统，侵袭因子等。毒力岛具有共同的特征：毒力岛的G+C含量往往不同于宿主DNA，密码子使用率也不同，往往位于tRNA位点附近，常携带有隐性或功能性移动因子(如IS元件、整合酶、转座酶等)的编码基因。随着对细菌毒力岛的深入研究，发现了许多具有毒力岛结构的遗传元件并不具有毒力岛的毒力性质，产生了基因组岛的概念。我们根据已发表的毒力岛序列和大肠杆菌0157：H7特异性的0岛、大肠杆菌K12特异性的K岛以及毒素基因，发展了毒力岛寡聚核苷酸微阵列芯片。毒力岛芯片有2870条探针，可检测42个毒力岛，111个0岛，129个K岛以及66个毒素基因。其寡聚核苷酸探针是用Oligoarray2.0软件设计，保证其Tm值和长度的一致性，并在GenBank数据库中进行比较，保证其探针的特异性。通过对参照菌株杂交试验显示准确性达100％。在对73菌株的重复性实验显示有71株菌两两附合，附合率达97.2％。对9株大肠杆菌参照菌株如EIEC、EPEC、ETEC、ETEC、EAggEC、EHEC及K-12杂交试验，发现它们的杂交谱在0岛差别相当大，在K岛中拥有其同的基因缺失。对大肠杆菌0157及其疑似菌株262株的杂交分析，根据0157抗原基因簇(084岛)和志贺毒素基因(stx1和stx2)，可以将大肠杆菌0157菌株及其疑似菌株检测的菌株分为三类，第一类是产志贺毒素的大肠杆菌0157：H7，第二类为不产志贺毒素的大肠杆菌0157，第三类为疑似0157大肠杆菌；其中产志贺毒素的大肠杆菌0157：H7可根据志贺毒素及0岛的缺失情况又可分为A、B、C三类。A类为045岛(Z1476-Z1504)部分缺失，050岛(Z1476-Z1504)部分缺失，093岛(Z3347-Z3363)，0108岛(Z3937-Z3947)部分缺失，stx1为阴性stx2为阳性，共123株。其中一些菌株在其它0岛显示有缺失，有4株菌株显示0172岛(Z5878-Z5889)部分缺失；有3株菌株显示043岛(Z1193-Z1201)部分缺失；有5株显示043岛(Z1139-Z1152)部分缺失。B类为076岛完整缺失，050岛部分缺失，stx1和stx2均为阳性，这类菌株共32株，其中部分菌株093岛(Z3347-Z3363)部分缺失，stx1为阴性，stx2为阳性。C类为045岛(Z1476-Z1504)部分缺失，050岛(Z1797-Z1799)部分缺失，051岛(Z1840-Z1844)部分缺失，055岛完整缺失，057岛(Z2075-Z2121)呈间隔部分缺失，076岛完整缺失，093岛(Z3347-Z3363)部分缺失，0108岛(Z3937-Z3947)部分缺失，stx1为阴性stx2为阳性，这类菌株最少为3株。不产志贺毒素的大肠杆菌0157特征是084岛为阳性，但志贺毒素(stx1和stx2)为阴性。共88株。其中有重要特征的菌株为：有4株菌HPI毒力岛为阳性，有2株菌STⅡ毒素基因为阳性，PCR扩增也成阳性。有5株菌LEE岛、Espc岛为阳性。疑似0157大肠杆菌的数量不多，其主要特征为084岛阴性。共16株，其中有典型意义的菌株是安徽168菌株，它不仅携带HPI岛，而且还拥有志贺氏菌的多个岛包括she，Shi-2，shi-3以及SRL岛，同时还带有的TAI岛、0115岛、043岛亚碲酸盐结合蛋白、0139岛、0140岛和0166岛。105株非五类大肠杆菌杂交结果显示，大多数菌株缺失的0岛：07、08、014、015、025、040、043、044、045、047、051、057、071、084、087、089、090、091、093、095、0106、0108、0109、01 12、0122、0132、0135、0138、0141、0144、0148、0161、0167、0172、0176。大多数菌株拥有的0岛：01、010、028、054、055、060、068、081、082、092、0115、01 18、0126、0127、0140、0142、0149、0159、0166、0169。在K岛中，多数菌株缺失的K岛基因为b2031、b2032、b2033、b2034、b2035、b2036、 b2037基因簇以及b3214、b3215、b3216基因簇。其中有10株菌拥有完整的亚碲酸盐抗性基因簇，但是并没有检测到尿毒酶基因簇，包括7-3、20-3、93、96、97、99、106、156、192、316。我们通PCR方法检测terZ和terC基因，均为阳性。对亚碲酸钾的抗性方面，9株菌大于128μg/ml，仅菌株97抗性为大于16μg/ml。将芯片的结果用Cluster软件聚类分析显示，尽管它们的来源不同，但192、106、93、99、96、97菌株可聚为一类。这些菌株含有与致病性有关的TAI岛，01岛、028岛和0115岛。有4株菌LTAB毒素基因为阳性，包括1326、F99、人55，人86；有4株S7Ⅰ毒素基因为阳性，包括E1093、E1074、E1098、人92。有一株菌LTAB和STI毒素基因均为阳性菌株(137/89菌株)；有一株菌CNF1毒素基因为阳性(R142菌株)。收起

关键词 : 大肠杆菌细菌毒力岛毒素基因基因表达

4. 大跨连续梁桥锌铝芯GFRP高阻尼橡胶支座减震性能研究

[学位论文] 缪锋阳郑州大学 2023年硕士导师: 徐建国共169页

摘要 : 大跨连续梁桥在公路、铁路、城市交通中应用广泛，是重要的生命线工程,其抗震性能一直是桥梁工程领域的研究重点。减隔震装置作为有效的抗震技术措施之一，在桥梁工程中应用广泛，但是由于大跨连续梁桥主梁的惯性力较大,现有减隔震支座无法满足大跨连... 展开大跨连续梁桥在公路、铁路、城市交通中应用广泛，是重要的生命线工程,其抗震性能一直是桥梁工程领域的研究重点。减隔震装置作为有效的抗震技术措施之一，在桥梁工程中应用广泛，但是由于大跨连续梁桥主梁的惯性力较大,现有减隔震支座无法满足大跨连续梁桥的抗震需求，需搭配相关阻尼器才能有效地减弱桥梁的地震响应，但阻尼器安装造成了结构复杂、不便施工且造价成本高等缺点，故亟需设计力学性能稳定、减震耗能能力强、结构简单、造价成本低的新型减隔震支座，以满足大跨连续梁桥的抗震需求。本文以某黄河特大桥为研究对象，设计了一种新型减隔震支座——Zn-22％Al芯玻璃纤维增强板高阻尼橡胶支座(Zn-22％AlalloycoreGlassFiberReinforcedPlateHighDampingRubberBearing简称ZA-GFRPHDR支座)。围绕ZA-GFRPHDR支座的力学性能和减隔震性能开展了拟静力试验、振动台试验，并探究了ZA-GFRPHDR支座在一致地震激励和行波效应下对大跨连续梁桥地震响应的控制作用。具体工作及研究内容如下: (1)提出并设计了ZA-GFRPHDR支座，开展了该隔震支座的拟静力试验,对该隔震支座进行了轴压刚度、水平刚度、剪应变相关性、压应力相关性、阻尼特性以及极限压缩性能等试验研究。试验结果表明，ZA-GFRPHDR支座的竖向和水平力学性能稳定，滞回曲线饱满，变形能力优秀，具备良好的滞回耗能能力。 (2)开展了地震模拟振动台试验，以检验ZA-GFRPHDR支座的减震性能。通过与普通橡胶支座对比，试验结果表明，ZA-GFRPHDR支座可有效降低结构的地震响应，其减震耗能能力随着地震强度的增大而增强，且其具备抵抗强震的能力。 (3)对ZA-GFRPHDR支座进行了有限元分析和参数优化。ZA-GFRPHDR支座的力学性能有限元模拟值与试验值吻合良好，验证了ZA-GFRPHDR支座有限元模型的正确性。分析了压剪状态下ZA-GFRPHDR支座的应力分布规律，发现玻璃纤维增强板处于弹性状态，能够有效约束住支座内部橡胶层和Zn-22％Al芯，ZA-GFRPHDR支座主要通过Zn-22％Al芯的塑性变形耗能。最后分析了橡胶和玻璃纤维增强板厚度比、Zn-22％Al芯的直径和数目对支座力学性能的影响。结果表明，橡胶和玻璃纤维增强板厚度比过小、Zn-22％Al芯的直径过大，均会导致支座整体刚度增大，变形能力减弱，多芯棒的布置形式可以增强支座的滞回耗能能力和稳定性能。 (4)建立了大跨连续梁桥有限元分析模型，选取不同场地地震波、不同类型支座进行计算，对比分析桥梁关键部位的地震动力响应。结果表明，ZA-GFRPHDR支座具有良好的减震性能，能够有效地降低大跨连续梁桥的地震响应，增强桥梁的抗震能力。 (5)开展了行波效应对桥梁地震响应和ZA-GFRPHDR支座减隔震性能影响的研究。考虑视波速取值变化，采用大质量法对使用不同支座的桥梁进行非一致激励分析，并与一致激励进行对比。结果表明，视波速越低，桥梁地震响应越大，随着视波速增大，桥梁地震响应趋于一致激励下的结果，在行波效应下，ZA-GFRPHDR支座仍能有效降低大跨连续梁桥的地震响应。收起

关键词 : 大跨连续梁桥 ZA-GFRPHDR支座拟静力试验振动台试验行波效应抗震性能

5. 全身麻醉下肾上腺素在血运丰富部位局部浸润麻醉时对血流动力学的影响

[学位论文] 杨建军南京大学 2005年博士导师: 徐建国共142页

摘要 : 肾上腺素能够激动所有的肾上腺素能受体，其临床治疗效应主要包括β1受体激动引起的正性肌力、正性频率、正性传导作用；β2受体激动引起的血管和支气管平滑肌的松弛作用；以及α1受体激动引起的血管收缩作用。静脉注射或输注肾上腺素主要用在一... 展开肾上腺素能够激动所有的肾上腺素能受体，其临床治疗效应主要包括β1受体激动引起的正性肌力、正性频率、正性传导作用；β2受体激动引起的血管和支气管平滑肌的松弛作用；以及α1受体激动引起的血管收缩作用。静脉注射或输注肾上腺素主要用在一些危及生命的情况下，例如心搏骤停、循环衰竭和严重过敏反应等情况。另外，局部麻醉时，局麻药中常常会加入小量的肾上腺素，以其达到延长麻醉作用时间；增加神经阻滞强度；降低血管内局麻药吸收速率，减少局部麻醉药的峰浓度及全身毒性；收缩局部血管，减少术野出血等作用。肾上腺素的吸收会引发机体心血管系统出现一些副作用，其发生情况与肾上腺素的血液中水平有关。在血流丰富部位注射含肾上腺素的局部麻醉药止血时，机体会快速吸收肾上腺素并引起相应的血流动力学变化。临床医生对机体吸收肾上腺素的情况进行了大量的研究，但是肾上腺素引起的血流动力学变化情况却不是很清楚。我们设计了四个连续的又相对独立的一系列实验来探讨肾上腺素在血运丰富部位局部浸润麻醉时对血流动力学的影响。目的研究全身麻醉下鼻内窥镜手术中局部浸润麻醉时，局麻药中肾上腺素对机体血流动力学的影响。方法76例择期在全身麻醉下行鼻内窥镜手术的患者随机分成三组：Ⅰ组（26例）注射含1：20万肾上腺素的1％利多卡因2ml，Ⅱ组（25例）注射含1：20万肾上腺素的生理盐水2ml，Ⅲ组（对照组，25例）注射生理盐水2ml。术中记录浸润注射前和注射后0.5、1、1.5、2、2.5、3、3.5、4、5分时血压和心率的数值，比较并分析其变化趋势。结果与基础值相比，I组、II组出现明显的血流动力学变化，尤其是在大约1.5分时出现明显的血压下降（P＜0.001）伴有一定的心率增快（P＜0.001）；大约3分时出现轻度的SBP上升（P＜0.01）；Ⅲ组血压则轻度上升（P＜0.05），HR无明显变化。组间比较时，I组、II组与Ⅲ组相比出现类似的结果，大约在1.5分时出现明显的血压下降（P＜0.001）伴有一定的心率增快（P＜0.001）；而Ⅰ组与Ⅱ组相比无明显变化。结论全身麻醉下鼻内窥镜手术中局部浸润麻醉时，局麻药中小剂量肾上腺素会引起明显的以短暂的血压下降为主的血流动力学变化。第二部分：全身麻醉下局部浸润麻醉时不同剂量的肾上腺素对血流动力学的影响目的探讨在全身麻醉下鼻内窥镜手术中局部浸润麻醉时不同剂量和浓度的肾上腺素对血流动力学的影响。方法采取前瞻性、对照的方法，将108例在全身麻醉下行鼻内窥镜手术的患者分成4组，每组27例。采用不同浓度的利多卡因和肾上腺素进行鼻粘膜下多点浸润注射。Ⅱ组：含l:20万肾上腺素的2％利多卡因2m1；Ⅱ组：含1:40万肾上腺素的1％利多卡因4ml；Ⅲ组：含1:20万肾上腺素的1％利多卡因4ml；Ⅳ组（对照组）注射1％利多卡因4ml。术中常规行心电图及桡动脉有创测压，监测心率和血压。记录注射前（基础值）和注射后0.5、1、1.5、2、2.5、3、3.5、4、5.6min的收缩压（SBP）、舒张压（DBP）、平均动脉压（MAP）和心率（HR）数值，比较分析其变化趋势。同时记录该时段最低SBP、DBP和MAP的数值，进行比较分析。结果与注射前的基础值相比，Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ组均出现明显的血流动力学变化，血压下降于注射后lmin开始出现，多在1.5min时达最低值（P<0.001）左右，同时伴有心率增快（P<0.001），其中SBP最大降幅大约25％，MAF最大降幅大于28％，DBP最大降幅大于30％；约3min时SBP开始回升（P<0.01）。上述血流动力学变化的持续时间通常少于4min；Ⅳ组则无以上变化。各组与Ⅳ组（对照组）进行组间比较时均有类似的结果（P<0.001）。而Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组之间两两比较在各个时间点上均无明显的差别（P>0.05）。结论全身麻醉下鼻内窥镜手术中局部浸润麻醉时，局麻药中的小剂量肾上腺素对血流动力学的影响较大，应当引起临床医生的特别关注。在鼻内窥镜手术中局部浸润麻醉时使用l0或20μg肾上腺素引起的血流动力学变化过程基本相同；但从理论上来说，使用更大剂量的肾上腺素有可能引起不同的血流动力学变化过程。目的采用胸阻抗法监测在全身麻醉下鼻内窥镜手术中，使用含不同剂量肾上腺素的局部麻药浸润麻醉时机体的血流动力学变化，探讨分析其原因。方法采取前瞻性、随机对照的方法，将69例在全身麻醉下行鼻内窥镜手术的患者随机分成3组，每组23例。采用含不同浓度肾上腺素的1％利多卡因进行鼻粘膜下多点浸润注射。I组：含1：20万肾上腺素的1％利多卡因4ml（20μg）；II组：含1：10万肾上腺素的1％利多卡因4ml（40μg）；Ⅲ组（对照组）：不含肾上腺素的1％利多卡因4ml（0μg）。术中行阻抗心动描记器监测，每间隔45秒，在以下9各时间点；浸润麻醉开始前（基础值）、浸润麻醉开始后0.75、1.5、2.25、3、3.75、4.5、5.25、6min测量并记录平均动脉压（MAP）、心率（HR）、心脏指数（CI），外周血管阻力指数（SVRI）和加速度指数（ACI）数值，比较分析其变化趋势。手术后记录出血评分并进行分析。结果与注射前的基础值相比，I组和II组主要有以下明显的血流动力学变化；在1.5分钟时MAP下降伴有HR增快（P<0.01）；从1.5分钟起出现SVRI下降和CI，ACI上升，到6分钟时仍未恢复（P<0.01orP<0.05）；Ⅲ组则无明显血流动力学变化。I组、II组与Ⅲ组在相同时间点上进行组间比较时均有类似的趋势。I组和II组之间比较时，工组在2.25、3、3.75分钟时MAP相对较低，从2.25分钟起CI相对较低（P<0.01orP<0.05）。I组、II组与Ⅲ组相比，出血评分明显较低，而I组和II组之间无明显差别。结论全身麻醉下鼻内窥镜手术中局部浸润麻醉时，局麻药中的小剂量肾上腺素引起明显的血流动力学的变化；因时间短暂，建议加强监测但不需要特别治疗。血流动力学变化的程度与肾上腺素的用量有关；在鼻内窥镜手术中，肾上腺素一次性使用超过40μg或所用浓度大于5μg／mL是没有必要的，也是不科学的。目的探讨在神经外科手术中全身麻醉下头皮切开前局部浸润麻醉时，局部麻醉药中不同剂量肾上腺素对血流动力学的影响。方法采取前瞻性、随机对照控制的方法，将100例在全身麻醉下行头皮切开术的患者随机分成4组，每组25例。采用1％利多卡因16ml和不同剂量肾上腺进行头皮下多点浸润注射：Ⅰ组40μg肾上腺素（2.5μg／mL）；Ⅱ组80μg肾上腺素（5μg／ml）： Ⅲ组160μg肾上腺素（10μg／mL）；Ⅳ组（对照组）不含肾上腺素。术中常规行心电图及桡动脉有创测压，监测心率和血压。记录注射前（基础值）和注射后0.5、1、1.5、2、2.5、3、3.5、4、4.5、5min的平均动脉压（MAP）和心率（HR）数值，比较分析其变化趋势；记录该时段MAP达到最低和最高值时收缩压（SBP）和舒张压（DBP）对应的数值，进行比较分析；同时记录并分析头皮出血程度分级。结果与注射前的基础值相比，Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ组均出现明显的血流动力学变化，在1min，1.5min，and 2min等时间点出现明显的MAP下降（P<0.05）伴有一定的心率增快（P<0.05），Ⅳ组则无以上变化。在相同时间点上，各组与Ⅳ组（对照组）进行组间比较时均有类似的结果（P<0.05）。与Ⅳ组相比，头皮下浸润注射含肾上腺素的局麻药可以明显减少头皮出血（P<0.01）。而Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组之间两两比较，在各个对应时间点上MAP和HR均无明显的差别；在MAP达到最低和最高值时对应的SBP和DBP均无明显的差别；出现血压下降的比例以及出血程度分级均无明显的差别。结论神经外科手术中在全身麻醉头皮切开前进行局部浸润麻醉时，局麻药中的肾上腺素会引起剧烈的血流动力学变化，血压下降和心率增快，尤其是在1.5分钟左右达到高峰。在神经外科手术中临床常用剂量的肾上腺素（40-160μg）均会引发类似的血流动力学变化过程，临床常用浓度的肾上腺素（2.5-10μg／mL）均可明显的减少头皮出血。在耳鼻喉科、神经外科、口腔科、头颈外科以及整形科等手术过程中，由于手术及局部浸润麻醉部位血流丰富，在注射含肾上腺素的局部麻醉药时，机体会快速吸收。肾上腺素并引起一系列血流动力学变化；血流动力学变化情况与肾上腺素的用量有关；在较深的全身麻醉下，临床上常用剂量的肾上腺素通常引起以外周血管阻力下降、血压下降、心肌收缩力增强和心率增快为主的血流动力学变化过程；临床上常用浓度的肾上腺素可以明显的减少手术野出血，进一步提高肾上腺素的浓度不能提高止血效果，却会引起更大更复杂的血流动力学变化。收起

关键词 : 浸润麻醉全身麻醉局部麻醉药肾上腺素血压血流动力学

6. 青藏高原植物中殷大奎藤黄单胞菌和董小平类诺卡氏菌两个细菌新种的发现和生物学分析

[学位论文] 张思慧山西医科大学 2020年硕士导师: 徐建国共137页

摘要 : 目的：因青藏高原区特殊的气候条件和地貌特征，形成了特殊的高寒生态系统，植物资源典型而独特，极端环境下存在于其内部的微生物可能具有特殊的功能，研究青藏高原野生植物微生物不仅可以对其微生物群落认识更加深入，还为开发新结构新功能活... 展开目的：因青藏高原区特殊的气候条件和地貌特征，形成了特殊的高寒生态系统，植物资源典型而独特，极端环境下存在于其内部的微生物可能具有特殊的功能，研究青藏高原野生植物微生物不仅可以对其微生物群落认识更加深入，还为开发新结构新功能活性物质提供来源。本研究根据培养组学的思路，对青藏高原的野生植物进行菌群分析，发现潜在的人类病原菌和动物/植物病原体，并对未知细菌进行分离和鉴定，分析其可能的生物学功能，为未来生物菌剂及工农业应用的研究提供依据。方法： (1)用分离培养的方法对青藏高原植物叶子进行处理，然后对其悬液进行梯度稀释，选择合适的梯度稀释液涂布到不同种类的培养基上，在不同的培养条件下进行培养。根据菌落特征挑取单菌落纯化，并对16SrRNA基因进行扩增测序，通过GeneBank和EzBioCloud数据库对16SrRNA基因序列进行比对，完成菌株初步鉴定。 (2)初步鉴定为细菌已知种，根据鉴定结果对菌株多样性进行分析。 (3)初步鉴定为疑似细菌新种，完成表型及遗传特征分析。包括：细胞形状、菌落形态、最佳生长条件和生化指标、细菌化学成分、系统进化分析、核酸分子杂交、基因组初步分析和生物学分析(采用GO、COG、KEGG和Swiss-Prot数据库进行氨基酸序列比对及分析)。完成对细菌新种的命名，并将模式菌株寄往中国普通微生物菌种保藏中心和日本菌种保藏中心进行保藏，获得相应的保藏号。结果： (1)本研究从青藏高原植物叶子样本中分离获得1068株菌，隶属于4个细菌门，6个细菌纲，18个细菌目，37个细菌科和86个细菌属。优势菌属为红球菌属(Rhodococcus)、棒形杆菌属(Clavibacter)、微杆菌属(Microbacterium)和短小杆菌属(Curtobacterium)。可能存在的人类病原菌和动物/植物病原体包括：萎蔫短小杆菌(Curtobacteriumflaccumfaciens，73株)、蒙氏肠球菌(Enterococcusmundtii，3株)、内生微球菌(Micrococcusendophyticus，1株)、成团泛菌(Pantoeaagglomerans，3株)、菊粉血杆菌(Sanguibacterinulinus，19株)、克氏血杆菌(Sanguibacterkeddieii，9株)、葡萄细菌性疫病菌(Xylophilusampelinus，1株)。有71株菌为疑似细菌新种，隶属于24个属，50个种，目前已完成藤黄单胞菌属(Luteimonas)和类诺卡氏菌属(Nocardioides)两个细菌新种的分类鉴定和命名研究。 (2)结合表型、生理生化、16SrRNA基因序列系统发育、基因组特征及基因组进化分析等方法，完成了两株疑似细菌新种(S-1072T和1626)的分类鉴定和描述。结果表明，菌株S-1072T和1626是藤黄单胞菌属(Luteimonas)的一个新种，将其命名为殷大奎藤黄单胞菌(Luteimonasyindakuiisp.nov.)，模式菌株为S-1072T(=CGMCC1.13927T=JCM33487T)。菌株S-1072T和1626分离来自青藏高原蒲公英［Dandelion(Taraxacum officinale)］叶片，蒲公英可作为一种中草药和食物而被食用。菌株S-1072T和1626为革兰氏染色阴性，需氧，氧化酶和过氧化氢酶阳性，杆状，单鞭毛，动力实验阳性。最适宜的生长条件为28℃，pH7.0，0.5%(w/v)NaCl。基于16SrRNA基因序列的系统进化分析结果显示，菌株S-1072T和1626属于藤黄单胞菌属(Luteimonas)，与LuteimonasarsenicaCCTCCAB2014326T(97.0%)，LuteimonasterricolaCGMCC1.8985T(96.9%)和LuteimonasaestuariiKCTC22048T(96.6%)相似性最高，菌株S-1072T和1626的16SrDNA序列相似度为99.9%，为同一个种。全基因组系统进化分析结果表明菌株S-1072T与1626和LuteimonasabyssiCGMCC1.12611T的进化距离最近。菌株S-1072T和1626的染色体DNAG+C含量分别为69.2mol%和69.3mol%。菌株S-1072T和1626间的dDDH值为83.1%，与邻近参考菌株之间的dDDH值低于70%。Q-8(98.7%)是主要的呼吸醌；主要极性脂包括二磷脂酰甘油、磷脂酰甘油和磷脂酰乙醇胺；主要脂肪酸(＞10%)包括iso-C15:0,iso-C16:0和summedfeature9(10-methylC16:0and/oriso-C17:1ω9c)。 (3)结合表型、生理生化、16SrRNA基因序列系统发育、基因组特征及基因组进化分析等方法，完成了两株疑似细菌新种(S-1144T和4053)的分类鉴定和描述。结果表明，菌株S-1144T和4053是类诺卡氏菌属(Nocardioides)的一个新种，将其命名为董小平类诺卡氏菌(Nocardioidesdongxiaopingiisp.nov.)，模式菌株为S-1144T(=CGMCC4.7568T=JCM33469T)。菌株S-1144T和4053分离来自青藏高原一种重要药用植物独一味(Lamiophlomis rotata)的叶片。菌株S-1144T和4053为革兰氏染色阳性，需氧，氧化酶阴性，过氧化氢酶阳性，不规则杆状菌，在R2A培养基上培养2天后，菌落形态为淡黄色、圆形、透亮、光滑、凸起。其最适宜生长条件为28℃，pH7.5，0%(w/v)NaCl。多相分析结果显示，菌株S-1144T和4053属于类诺卡氏菌属(Nocardioides)，与NocardioideslitorisDSM103718T(98.4%)，NocardioidesrubriscoriaeDSM23986T(98.2%)和NocardioidesplantarumDSM11054T(97.8%)的相似性最高。菌株S-1144T和4053的染色体DNAG+C含量均为73.5mol%。菌株S-1144T和4053间的dDDH值为90.2%，与邻近参考菌株之间的dDDH值低于70%。左旋2,6二氨基庚二酸是细胞壁肽聚糖中的诊断性氨基酸；主要的呼吸醌为MK-8(H4)；极性脂由二磷脂酰甘油，磷脂酰甘油，三种未鉴别的磷脂，一种未鉴别的糖脂和一种未鉴别的脂质组成；主要脂肪酸包括iso-C16:0,C17:1ω8c,C17:0和C18:1ω9c。 (4)根据基因组测序结果，菌株S-1072T和S-1144T基因组大小分别为3,040,302bp，4,427,648bp，分别有2,685个和4,011个编码基因。通过与COG、KEGG和Swiss-Prot数据库进行比对，发现菌株S-1072T和S-1144T基因组中存在低温适应相关基因[编码热激蛋白、冷激蛋白及分子伴侣(DnaJ-DnaK-GrpE、GroESL)的基因，DEAD-boxRNA解旋酶基因(deaD)等]；耐辐射相关基因(重组修复相关基因：recABCDFGJOR，ruvABC，ssb，priA；切除修复相关基因：uvrABCD、mfd、编码糖基化酶和核酸内切酶的相关基因；碱基错配修复相关基因等)。此外，在KEGG数据库中还注释到了甜菜碱、异黄酮、玉米素及铁载体类非核糖体肽次级代谢产物生物合成的基因。结论： (1)本研究从青藏高原植物叶子样本中分离获得1068株菌，隶属于86个细菌属，其中有109株为潜在的人类病原菌和动物/植物病原体；71株为疑似的细菌新种，隶属于24个属，50个种。 (2)完成四株疑似新种鉴定工作，菌株S-1072T和1626鉴定为藤黄单胞菌属(Luteimonas)的一个细菌新种，命名为殷大奎藤黄单胞菌(Luteimonas yindakuii sp. nov.)，模式菌株为S-1072T(=CGMCC1.13927T=JCM33487T)。菌株S-1144T和4053鉴定为类诺卡氏菌属(Nocardioides)的一个细菌新种，命名为董小平类诺卡氏菌(Nocardioidesdongxiaopingiisp.nov.)，模式菌株为S-1144T(=CGMCC4.7568T=JCM33469T)。菌株S-1072T和S-1144T基因组分析发现低温适应、耐辐射及合成具有生理功能的次级代谢产物的相关基因，但这些基因的功能及编码产物的应用仍有待进一步研究。收起

关键词 : 微生物青藏高原菌群分析殷大奎藤黄单胞菌董小平类诺卡氏菌生物学功能

7. 青藏高原藏羚羊粪便中两个细菌新种的分类鉴定和基因组分析

[学位论文] 王晓霞广西医科大学 2019年硕士导师: 徐建国共132页

摘要 : 目的：许多野生动物是重要人类传染病病原体的自然宿主，尤其是分布在高原和热带等特殊环境和气候条件的野生动物，可能携带和传播已知和未知病原体。这些病原体一旦接触并感染人类，可能引起新发传染病，造成重大公共卫生事件。青藏高原藏羚羊... 展开目的：许多野生动物是重要人类传染病病原体的自然宿主，尤其是分布在高原和热带等特殊环境和气候条件的野生动物，可能携带和传播已知和未知病原体。这些病原体一旦接触并感染人类，可能引起新发传染病，造成重大公共卫生事件。青藏高原藏羚羊粪便标本中含有大量的细菌新种和未培养的细菌类群，本课题利用培养组学的思路设计培养方案，对藏羚羊粪便标本中含有的未知细菌和病原体进行分离和鉴定，这有助于扩宽我们对青藏高原野生动物粪便（肠道）菌群多样性的研究，还为应对、预防控制未来可能发生的新传染病提供科学依据。方法： (1)借鉴培养组学的方法，通过多组合方式设计72种培养条件对2014年5月13至15日采集于青海可可西里国家级自然保护区的104份藏羚羊粪便进行细菌分离培养。根据菌落形态多样性原则（菌落颜色，大小，质地，边缘状况等）进行单菌落的挑取和传代纯化。细菌分离株基因组核酸制备后，扩增16S rRNA基因和进行序列测定。通过GeneBank和EzTaxon数据库对获得的菌株16S rRNA基因序列进行比对，完成菌株初步鉴定。根据以上结果，按照菌株多样性原则进行菌株甘油管的长期保存。 (2)根据菌株初步鉴定结果，对所分离的菌株进行菌群多样性分析。 (3)对于疑似细菌新种，完成分类学鉴定和基因组分析，包括:针对不同菌属特点开展的表型、生理生化和细胞壁化学分类特征实验、系统进化分析、毒力基因等基因组分析。并完成细菌新种的命名和模式菌株在中国和德国两个国际菌种保藏中心保藏。结果： (1)本研究从青藏高原可可西里自然保护区的藏羚羊粪便样本中成功鉴定976株菌，分布于3个细菌门，5个细菌纲，16个细菌目，30个细菌科，60个菌属和117个菌种。优势菌属为节杆菌属、类芽孢杆菌属、肠球菌属和芽孢杆菌属。其中67株菌为疑似细菌新种，可分为21个菌种，14个菌属，有28株菌为可能具有医学意义的菌株，可分为6个菌种，4个菌属，包括链球菌属，分枝杆菌属，红球菌属和玫瑰单胞菌属。目前已完成类诺卡氏菌属和副芽孢杆菌属两个细菌新种鉴定和命名研究。 (2)综合分子生物学、形态学、生理生化特征分析、系统进化分析和基因组分析结果，支持将菌株78T和601划分为类诺卡氏菌属的一个细菌新种，命名为侯云德类诺卡氏菌(Nocardioides houyundeii sp.nov.)，模式菌株为78T(=CGMCC4.7461T=DSM106424T)。两株革兰氏阳性，不规则杆状菌株78T和601，在BHI-5％脱纤维羊血培养基上，菌落呈奶油色，圆形，光滑和凸起。基于全长16S rRNA基因序列的系统发育分析结果表明，菌株78T和601的分类学地位属于类诺卡氏菌属，与Nocardioides solisilvae JCM31492T(98.3％)，Nocardioides gilvus XZ17T(97.4％)和Nocardioides daejeonensis JCM16922T(97.4％)具有最高的相似性，菌株78T和601的16S rRNA基因序列相似性为99.7％。菌株78T和601间，基因组的平均核苷酸相似性为98.9％（远高于原核生物物种界限值划分阈值），与邻近参考菌株之间的平均核苷酸相似性低于95-96％原核生物物种界限值划分阈值。菌株78T和601染色体的DNA G+C含量分别为71.2mol％和71.3mol％。MK-8(H4)是主要的呼吸醌;左旋2，6二氨基庚二酸是其细胞壁肽聚糖中的诊断性氨基酸;极性脂质含有二磷脂酰甘油，磷脂酰甘油，磷脂酰肌醇，一个未知的磷脂和和一个未知的脂质;主要脂肪酸(＞10％)是C17∶1ω8c，iso-C16∶0和C18∶1ω9c。 (3)综合分子生物学、形态学、生理生化特征分析、系统进化分析和基因组分析结果，支持将菌株X-1125T和X-1174划分为副芽孢杆菌属的一个新种，命名为曾毅副芽孢杆菌（Paraliobacillus zengyii sp.nov.），模式菌株为X-1125T(=DSM107811T=CGMCC1.16464T)。菌株X-1125T和X-1174是革兰氏阳性杆状菌，具有轻微嗜盐和极度耐盐特点。兼性厌氧，以周围鞭毛运动。基于16S rRNA基因序列的系统发育分析结果表明，菌株X-1125T和X-1174的分类学地位属于副芽孢杆菌属，与Paraliobacillus sediminis KCTC33762T(98.4％),Paraliobacillus quinghaiensis CGMCC1.6333T(96.9％)和Paraliobacillus ryukyuensis NBRC100001T(95.9％)具有较高相似性，菌株X-1125T和X-1174的16S rRNA基因序列相似性为99.7％。菌株X-1125T和X-1174间的DNA-DNA杂交值为97.8％（远高于原核生物物种界限值划分阈值），与邻近参考菌株之间的DNA-DNA杂交值低于70％原核生物物种界限值划分阈值。菌株X-1125T和X-1174的染色体DNA G+C含量分别为35.2mol％和35.1mol％。极性脂质包括二磷脂酰甘油，两个未知的磷脂和和四个未知的脂质;MK-7是主要的呼吸醌;细胞壁含有丙氨酸，甘氨酸，谷氨酸和内消旋2，6-二氨基庚二酸;主要脂肪酸(＞9％)是anteiso-C15∶0,anteiso-C17∶0和C16∶1ω11c。 (4)对模式菌株78T和X-1125T进行基因组组分和功能分析，菌株78T和X-1125T基因组大小分别为3，840，802bp，3，728，451bp，分别有3，437个和3，470个编码基因。通过与COG和KEGG数据库比对进行功能聚类分析，发现菌株78T和X-1125T大多基因与菌株代谢相关（包括氨基酸，碳水化合物，核苷酸和脂类的转运和代谢等）。NR数据库注释结果支持菌株78T和X-1125T分别划分为类诺卡氏菌属和副芽孢杆菌属。基于副芽孢杆菌属的轻微嗜盐和极度耐盐特点，通过基因组分析发现mrp基因簇，可能编码Na+/H+逆向转运蛋白，并在盐耐受性和pH稳态中起主要作用。此外通过PHI和VFDB数据库对基因组致病性分析，发现菌株78T基因组中有12个基因与结核分枝杆菌双组分信号转导系统相关，对细菌的毒力和生长有重要作用，此外还发现25个毒力相关基因;菌株X-1125T基因组中也发现24个毒力相关基因。相关毒力因子功能和该菌株致病性仍有待进一步研究。结论： 1.本研究从青藏高原可可西里自然保护区的藏羚羊粪便样本中成功鉴定976株菌，隶属于3个细菌门，5个细菌纲，16个细菌目，30个细菌科，60个菌属和117个菌种。有67株菌为疑似细菌新种，其中有28株菌可能具有医学意义。 2.完成四株疑似新种鉴定工作，菌株78T和601鉴定为类诺卡氏菌属的一个细菌新种，命名为侯云德类诺卡氏菌（Nocardioides houyundeii sp.nov.），模式菌株为78T(=CGMCC4.7461T=DSM106424T)。菌株X-1125T和X-1174鉴定为副芽孢杆菌属的一个新种，命名为曾毅副芽孢杆菌（Paraliobacillus zengyii sp.nov.），模式菌株为X-1125T(=DSM107811T=CGMCC1.16464T)。菌株78T和X-1125T基因组分析发现多个基因与宿主间相互作用相关和毒力相关基因，相关毒力因子功能和该菌株致病性仍有待进一步研究。收起

关键词 : 病原细菌侯云德类诺卡氏菌曾毅副芽孢杆菌物种鉴定基因组学

8. DAB2IP通过Hippo/YAP信号通路调控胶质瘤细胞增殖、迁移及对TMZ化疗敏感性的机制研究

[学位论文] 雷波四川大学 2021年博士导师: 徐建国共125页

摘要 : 胶质瘤是中枢神经系统中最常见的恶性肿瘤，近些年其患病人数持续增加，已成为全球性的公共卫生问题。尽管胶质瘤的诊治水平不断提高，但由于高级别胶质瘤高度的异质性和侵袭能力，导致患者长期预后仍较差，对人类的生命及健康造成严重威胁。因此，深... 展开胶质瘤是中枢神经系统中最常见的恶性肿瘤，近些年其患病人数持续增加，已成为全球性的公共卫生问题。尽管胶质瘤的诊治水平不断提高，但由于高级别胶质瘤高度的异质性和侵袭能力，导致患者长期预后仍较差，对人类的生命及健康造成严重威胁。因此，深入探究胶质瘤发生发展的分子机制对寻找新的诊治靶点，改善患者预后具有重要意义。DAB2IP基因是新近研究才发现的GAP蛋白家族成员，在多种恶性肿瘤中扮演抑癌基因的角色，但其对胶质瘤发生的影响和机制还未见报道，因此DAB2IP在胶质瘤中的作用及机制有待进一步研究。目的：本研究利用生物信息学、基因沉默、分子生物学和细胞生物学等技术，通过体内外实验在临床、细胞和动物学水平探究DAB2IP在胶质瘤组织中的表达及对胶质瘤细胞增殖、细胞周期、凋亡、迁移、侵袭力和替莫唑胺（TMZ）化疗敏感性的调控及作用机制，以期揭示DAB2IP参与胶质瘤成瘤的分子机制，为其作为胶质瘤新的诊疗靶点提供理论支持。材料和方法：（1）首先利用生物信息学分析进入中国脑胶质瘤基因组图谱数据库（CGGA）中DAB2IP在胶质瘤组织中的表达及与患者术后生存周期、WHO分期、性别之间的相关性；之后，利用RT-qPCR法对胶质瘤组织及癌旁组织、胶质瘤细胞和星形胶质细胞中DAB2IPmRNA的表达情况进行检测。（2）构建针对DAB2IP基因的干扰RNA质粒（siRNA），并将DAB2IPsiRNA质粒及阴性对照质粒转染至U87和U251细胞，建立DAB2IP沉默细胞株；用Westernblot验证DAB2IP的沉默效果，通过MTT法、流式细胞术研究DAB2IP沉默对胶质瘤细胞增殖、周期生长和细胞凋亡的影响；用划痕实验研究DAB2IP沉默对胶质瘤细胞迁移水平的影响；用Transwell实验研究DAB2IP沉默对胶质瘤细胞侵袭力的影响；用Westernblot法研究DAB2IP沉默后胶质瘤细胞中周期关键调控蛋白cyclinD1和c-Myc表达；用MTT法和流式细胞术检测DAB2IP沉默对胶质瘤细胞TMZ化疗药物敏感性的影响，并利用透射电镜和Westernblot法研究了DAB2IP沉默对TMZ作用后的胶质瘤细胞中自噬体数量和自噬相关蛋白表达的影响；最后利用自噬抑制剂3MA进一步探究DAB2IP沉默促胶质瘤细胞TMZ化疗抵抗的机制。（3）利用Westernblot法检测DAB2IP沉默对U87和U251细胞Wnt/β-catenin信号通路中GSK3β、β-catenin、p-GSK3β、p-β-catenin蛋白以及Hippo/YAP信号通路中p-YAP1、YAP1、p-LASt1、LASt1、MST1、MST2蛋白表达的影响；利用免疫荧光染色检测YAP1核入位情况，利用β-catenin特异性抑制剂XAV939研究抑制β-catenin后，DAB2IP沉默对U87和U251细胞中Hippo/YAP信号通路活化和YAP1核入位影响；再用YAP抑制剂Peptide17干预DAB2IP沉默胶质瘤细胞，检测各组细胞增殖、细胞周期、凋亡、迁移、侵袭力和TMZ耐药情况；（4）采用裸鼠成瘤实验检测DAB2IP沉默对肿瘤生长的影响，用免疫组化染色检测肿瘤组织中Ki-67蛋白表达，并用westernblot法检测Hippo/YAP信号通路活化和YAP1核入位情况。结果：（1）通过CGGA数据库分析发现相较于癌旁组织，DAB2IP在胶质瘤组织中低表达；随着WHO分级级别的增加，DAB2IP表达呈降低趋势，在WHOIV级胶质瘤中其表达最低；（2）临床样本检测显示DAB2IP显著低表达于胶质瘤组织；DAB2IP在U87、SHG-44、U251细胞中表达量显著性低于在Astrocyte细胞中的表达，以U87、U251表达量最低；（3）Westernblot结果显示，成功构建了DAB2IP沉默细胞株；MTT法、流式细胞术、划痕实验、Transwell实验结果显示，DAB2IP沉默可促进细胞增殖、迁移和侵袭力增加，降低G1期细胞数，增加G2期和S期细胞数，能抑制胶质瘤细胞的凋亡；DAB2IP沉默能导致TMZ敏感性降低；Westernblot实验结果显示DAB2IP沉默可上调细胞中cyclinD1和c-Myc蛋白表达；（4）Westernblot结果显示，DAB2IP沉默可上调细胞中p-GSK3β、GSK3β、β-catenin、p-β-catenin、YAP1、LASt1蛋白表达，并抑制p-YAP1、p-LASt1、MST1、MST2蛋白表达；免疫荧光染色显示，DAB2IP沉默可促进胶质瘤细胞中YAP1的核转移；β-catenin抑制剂能下调Hippo/YAP信号通路活化和YAP1核入位；Hippo/YAP信号通路抑制可拮抗DAB2IP沉默对胶质瘤细胞增殖、迁移、凋亡、侵袭力和TMZ化疗敏感性的调控；（5）裸鼠移植瘤实验表明DAB2IP沉默可显著促进移植瘤生长；免疫组化染色结果表明，DAB2IP沉默可显著促进肿瘤组织中Ki-67蛋白表达；Westernblot结果提示，DAB2IP沉默可促进Hippo/YAP信号通路活化。结论：（1）DAB2IP在胶质瘤组织表达降低，且DAB2IP表达量越低，患者预后越差，其可能是胶质瘤患者预后的新生物标记物；（2）DAB2IP沉默能促进胶质瘤细胞的增殖、迁移及侵袭能力，并导致胶质瘤细胞对TMZ化疗敏感性的降低；（3）DAB2IP沉默导致胶质瘤细胞对TMZ化疗敏感性降低的机制与其诱导细胞自噬水平增加有关；（4）DAB2IP沉默能够激活胶质瘤细胞中Wnt/β-catenin和Hippo/YAP信号通路；（5）DAB2IP沉默对胶质瘤细胞增殖、迁移、侵袭力和TMZ化疗敏感性等恶性行为的促进作用是通过β-catenin介导的Hippo/YAP信号通路活化实现的；（6）DAB2IP沉默能促进胶质瘤细胞在裸鼠体内的生长。收起

关键词 : 胶质瘤 DAB2IP Hippo/YAP信号通路化疗敏感性

9. 基于微型涡轴发动机的双效溴冷机及其控制系统开发

[学位论文] 袁志亮南京航空航天大学 2020年硕士导师: 徐建国共121页

摘要 : 溴化锂吸收式制冷机具有环保、高可靠稳定性等优点，得到学术界和工业界越来越多的研究和应用。本文以制冷量为8kW的小型溴化锂吸收式制冷机作为对象开展研究与设计制作，主要涉及方案设计、建模与仿真、控制系统设计和硬件在环试验等4个方面的内容。... 展开

关键词 : 微型涡轴发动机双效溴冷机控制系统系统开发

10. 青藏高原藏羚羊、牦牛和岩羊肠道病毒组学及新型小双节RNA病毒的研究

[学位论文] 戴琰广西医科大学 2021年硕士导师: 徐建国共118页

摘要 : 目的：青藏高原被誉为“世界屋脊”，是世界上海拔最高、面积最大、形成最晚的高原，具有独特的气候和生态环境。青藏高原上生活着多种野生动物。高寒低氧的自然环境以及丰富的动物资源蕴藏着大量的、原始的、鲜为人知的微生物资源。在本研究中... 展开目的：青藏高原被誉为“世界屋脊”，是世界上海拔最高、面积最大、形成最晚的高原，具有独特的气候和生态环境。青藏高原上生活着多种野生动物。高寒低氧的自然环境以及丰富的动物资源蕴藏着大量的、原始的、鲜为人知的微生物资源。在本研究中，我们在青藏高原多地采集藏羚羊、岩羊和家养牦牛粪便样本，利用病毒宏基因组学（Viralmetagenomics，VM）技术分析肠道病毒组成，对新型小双节RNA病毒（Picobirnavirus，PBV）作了比较深入的研究。方法： 1.对青藏高原多地采集的藏羚羊、家养牦牛和岩羊粪便样本，提取核酸，质检合格后，进行转录组测序。 2.根据转录组测序结果设计特异性巣式RT-PCR引物验证接近全长（大于1500nt）的PBV序列，基于PBV的RdRp氨基酸序列构建系统进化树确定分类学地位。 3.针对藏羚羊不分节段PBV阳性样本，利用电子显微镜观察PBV的颗粒形态，选取Vero-E6细胞进行病毒的分离培养，利用生物信息学软件预测衣壳蛋白的二级结构、B细胞抗原表位和跨膜结构域。根据预测结果设计截短蛋白进行原核表达，利用目的蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体。在此基础上，建立间接ELISA方法。结果： 1.藏羚羊肠道病毒转录组测序结果显示：LY-KK和LY-XZ两个病毒文库共检测到773条病毒相关contigs，除去未分类和未知病毒序列，可以注释到砂粒病毒科(Arenaviridae)等27个病毒科。 2.家养牦牛肠道病毒转录组测序结果显示：ML-GQ、ML-LB、ML-HX和ML-ZD四个病毒文库共检测到3948条病毒相关contigs，除去未分类和未知病毒序列，可以注释到Alphaflexiviridae(目前该科没有中文名)等29个病毒科。 3.岩羊肠道病毒转录组测序结果显示：YY-DL病毒文库共检测到117条病毒相关contigs，除去未分类病毒序列，可以注释到Alphaflexiviridae(目前该科没有中文名)等17个病毒科。 4.上述样本共检测到4798条病毒相关contigs，除去未分类和未知病毒序列，可以注释到39个病毒科，其中小双节RNA病毒科(Picobirnaviridae)占比很高，高达79.51%。基于ViralZone数据库（https://viralzone.expasy.org/664）和在线Blastx比对结果，藏羚羊等牛科动物粪便携带星状病毒(Arenaviridae)等能够感染人的病毒。 5.我们利用巣式RT-PCR验证得到32条大于1500nt的新型PBV序列，其中包括一条不分节段PBV。同源性比对发现新型PBV与亲缘关系最近毒株的RdRp核苷酸和氨基酸序列一致性分别为26.6%~90.1%和18.0%~93.4%；新型PBV两两比对，结果显示核苷酸和氨基酸序列一致性分别为17.4%~97.7%和11.2%~98.2%。系统进化树表明65.63%（21/32）属于GI。 6.针对藏羚羊不分节段PBV样本，利用透射电镜没有观察到PBV存在，选取Vero-E6细胞进行病毒分离培养，没有观察到明显的细胞病变，1-5代细胞收取物PCR检测结果为阴性。根据生物信息学预测结果，我们选取衣壳蛋白N段271AA氨基酸序列进行原核表达，结果显示目的蛋白条带单一，浓度比较理想。以重组蛋白作为抗原免疫新西兰大白兔，得到效价合格，具有良好反应性和特异性的多克隆抗体。在此基础上，建立间接ELISA检测方法，结果显示抗原包被浓度为3.91μg/mL，一抗和二抗稀释度分别为1:50k和1:5000以及显色时间为10min时是间接ELISA的最佳工作条件。结论： 1.青藏高原藏羚羊等牛科动物肠道病毒组成丰富，可能携带多种人兽共患性病毒。 2.PBVs占比很高，同源性比对与系统进化结果表明PBVs具有高度遗传多样性。 3.建立了新型PBV的间接ELISA检测方法，为计划开展的人群血清学筛检奠定了基础。收起

关键词 : 藏羚羊家养牦牛岩羊小双节RNA病毒病毒宏基因组学青藏高原