中国科学技术信息研究所--国家工程技术数字图书馆

[学位论文] 张丽山西农业大学 2020年硕士导师: 贾丽艳共75页

摘要 : 利用嗅闻方法从某清香型白酒的酒醅中分离、筛选出一株产清香风味酵母，初步命名菌株FJZ，通过HS-GC-MS技术确定其发酵过程中主要风味成分；研究菌株形态学，对其生理生化特性进行测定，通过26S rDNA序列系统发育分析，对该菌株进行鉴定；并研究菌株的... 展开利用嗅闻方法从某清香型白酒的酒醅中分离、筛选出一株产清香风味酵母，初步命名菌株FJZ，通过HS-GC-MS技术确定其发酵过程中主要风味成分；研究菌株形态学，对其生理生化特性进行测定，通过26S rDNA序列系统发育分析，对该菌株进行鉴定；并研究菌株的生长情况、产酶能力及其耐受性；通过单因素试验及应面法方法建立高产酯发酵工艺条件，并应用到酒和醋的发酵生产中。试验结果如下：（1）采用GC-MS技术测定该菌株在发酵过程中产生的浓郁酯香物质，其中乙酸乙酯相对含量占酯类物质的20.67%。通过菌落菌体形态观察、生理生化试验及26S rDNA区域序列的测序和比对，确定菌株FJZ为库德毕赤酵母（Pichia kudriavzevii），命名为库德毕赤酵母FJZ。通过对菌株的生物学特性研究发现，该菌株具有较强的耐渗透压、耐酸能力和耐酒精的能力，最适生长糖度20%、酒度为12%、pH2.5；菌株FJZ与酿酒酵母具有竞争关系，且竞争性强于酿酒酵母；该菌株具有一定的产酒精能力。（2）通过单因素及响应面试验，确定库德毕赤酵母FJZ最佳发酵产酯工艺参数为：接种量5%、接种菌龄36h、发酵温度32℃，发酵时间7d。菌株按照此条件进行发酵，总酯含量可达到（6.14±0.02）g/L，与不加菌株发酵组相比，总酯含量提高了57%。（3）将库德毕赤酵母FJZ应用于白酒发酵过程中，得出结论：强化续茬发酵白酒所得白酒总酯含量为（2.41±0.15）g/L，酒度（66.7±0.11）%，GC-MS测定结果得出乙酸乙酯浓度为（2.00±0.01）g/L；二茬发酵白酒最佳发酵组总酯含量（4.95±0.01）g/L，酒度（68.9±1.13）%；通过GC-MS定量分析得出，白酒样品主要乙酸乙酯香气成分浓度增加，达到（4.80±0.20）g/L，与大曲对照组相比提高了6.6倍，赋予白酒轻盈的果香味。（4）将库德毕赤酵母FJZ应用于食醋的酿造过程中发现，经菌种强化发酵后，醋样中的总酸、总酯含量均有明显增加，差异极显著（plt;0.05）。在酒精发酵时加入产酯酵母进行强化发酵，其总酸、总酯含量与正常发酵相比，分别提高了22.05%和30.67%。收起

关键词 : 酵母菌株筛选菌株鉴定清香风味

2. 猪粪除臭菌株的筛选、鉴定及复合菌制剂的初步应用

[学位论文] 袁爱平华南农业大学 2018年硕士导师: 陈金顶共63页

摘要 : 我国畜禽养殖业正处于高速发展阶段，而畜禽养殖场排放的大量粪便及污水对环境造成了严重影响。其中，畜禽粪便所产生的恶臭气体（NH3和H2S）不仅会污染空气，还会危害人畜健康、影响畜禽生产性能的发挥。因此，治理畜禽粪便恶臭气体污染已变得非常重... 展开我国畜禽养殖业正处于高速发展阶段，而畜禽养殖场排放的大量粪便及污水对环境造成了严重影响。其中，畜禽粪便所产生的恶臭气体（NH3和H2S）不仅会污染空气，还会危害人畜健康、影响畜禽生产性能的发挥。因此，治理畜禽粪便恶臭气体污染已变得非常重要与迫切。畜禽粪便恶臭气体的处理包括物理、化学和微生物方法，可是物理和化学方法除臭费用昂贵、技术要求高、易造成二次污染；微生物方法除臭费用低、操作简单、效果好，已成为畜禽粪便除臭的主要方式。为了研制有效抑制猪粪恶臭气体挥发的复合菌制剂，本研究利用稀释涂布平板法从堆肥猪粪和活性污泥两种样品中分离菌株，接着通过NH3选择性培养基和H2S选择性培养基筛选到11株可降解利用NH3、H2S的菌株，分别命名为N1、N5、M1、M4、MA1、MA3、MA4、MA5、G1 和 G4。根据形态学和分子生物学方法，对分离到的11株活性菌进行种属鉴定。鉴定结果如下：N1为枯草芽孢杆菌、N5和G4为地衣芽孢杆菌、M1为鼠李糖乳酸菌、M4菌株和MA3菌株为解淀粉芽孢杆菌、MA1鉴定为米根霉、M2 为醋酸钙不动杆菌、MA4 是甲基营养型芽孢杆菌、MA5 为蜡样芽孢杆菌、G1为库德里阿兹威氏毕赤酵母。根据文献报道，MA5和M2 2株菌是条件致病菌，出于安全考虑，将其排除。为了研究各分离菌株对猪粪恶臭气体（NH3和 H2S）的去除效果，将 N1、N5、M1、MA1、MA3、MA4和G1 7种分离菌株分别投入新鲜猪粪中，同时设立未处理的新鲜猪粪对照，在30℃的条件下作用10 d后，用硼酸吸收凯氏定氮法和锌胺络盐吸收比色法分别检测猪粪中 NH3、H2S 的释放量，并计算每种菌株分别对 NH3、H2S的去除率。结果发现，与未处理的新鲜猪粪相比，MA3 对 NH3的去除率最高，可达到85.88%，G1对H2S的去除率最高，可达到87.43%。为了研究各分离菌株对粪水状态的影响，将N1、N5、MA1、MA3和G1 5种分离菌株分别投入粪水中，同时设立未处理的粪水对照。在30℃的条件下作用10 d后，结果发现，与空白对照组相比，5 株菌株处理过的水样均更澄清，其中 MA3 处理过的水样透明度最高，能够有效降低粪水浊度。根据N1、N5、MA1、MA3和G1 5株菌对猪粪恶臭气体（NH3和H2S）的去除率高低进行组合，制备了7种复合菌制剂，分别命名为A、B、C、D、E、F和G组。A组包括MA3、G1、N1、N5和MA1分离菌株，B组包括MA3、G1、N1和N5分离菌株，C组包括MA3、G1、N1和MA1分离菌株，D组包括MA3、G1、N5和MA1分离菌株，E组包括MA3、G1和N1分离菌株，F组包括MA3、G1和N5分离菌株， G组包括MA3、G1和MA1分离菌株。为了研究每种复合菌制剂对猪粪恶臭气体（NH3和H2S）的去除效果，将上述制备的7组复合菌剂及商品化的复合微生物制剂分别投入新鲜猪粪中，同时设立未处理的新鲜猪粪对照，在30℃的条件下处理10 d后，用硼酸吸收凯氏定氮法和锌胺络盐吸收比色法分别检测猪粪中NH3、H2S的释放量，并计算每种复合菌制剂及商品化复合微生物制剂对NH3、H2S的去除率。结果显示，与未处理的新鲜猪粪相比，7组复合菌剂中，C组复合菌制剂对NH3和H2S的去除率均最高，分别达88.75%和90.50%；而商品化复合微生物制剂对NH3和H2S的去除率分别为85.20%和74.54%，与其相比，本研究研制的C组复合菌剂对NH3和H2S的去除率均更高。表明C组复合菌制剂对猪粪的除臭效果好。综上所述，本研究筛选的除臭菌具有高效的除臭能力，并且能够提高粪水透明度，制备成复合菌制剂除臭效果明显，可有效抑制猪粪恶臭气体（NH3和H2S）的释放，在治理规模化畜禽养殖业恶臭气体污染方面具有较好的应用前景。收起

关键词 : 猪粪除臭菌株菌株筛选菌株鉴定复合菌制剂

3. 红枣果胶性质研究及产红枣果胶酶菌株的筛选鉴定

[学位论文] 张玉杰河北农业大学 2016年硕士导师: 王颉共58页

摘要 : 2014年我国红枣产量大幅提高，约为734.53万吨，但红枣主产区却面临着不同程度的红枣滞销，给农民带来了严重损失。红枣浓缩汁加工是延长红枣产业链，提高枣产业效益的主要途径之一，但由于红枣富含果胶，制汁过程需要使用果胶酶，而目前国内缺少针对... 展开 2014年我国红枣产量大幅提高，约为734.53万吨，但红枣主产区却面临着不同程度的红枣滞销，给农民带来了严重损失。红枣浓缩汁加工是延长红枣产业链，提高枣产业效益的主要途径之一，但由于红枣富含果胶，制汁过程需要使用果胶酶，而目前国内缺少针对红枣果胶性质开发的果胶酶，大型果品加工企业使用的果胶酶是进口法国的用于加工浓缩苹果汁的酶制剂，不适合处理红枣果实，导致果汁超滤困难，成为限制红枣浓缩汁工业化生产的瓶颈。为针对红枣果胶性质开发适合红枣浓缩汁生产的果胶酶，本研究以阜平大枣为原料，制备红枣果胶，研究其理化性质、单糖组成及与商品果胶的区别，并以枣园里的土壤和腐烂枣作为筛选菌株的来源，利用红枣果实中提取的果胶作为唯一的碳源进行初筛，再利用酶活测定法进行复筛，得到果胶酶产酶活力高的菌株，并对其进行分子生物学鉴定，主要研究结果如下: 1.以阜平大枣为原料，采用超声波辅助盐酸提取、乙醇沉淀法获得红枣果胶，并对红枣果胶和商品果胶进行理化分析。结果表明:红枣果胶符合果胶的表观特征;红枣果胶总灰分为4.25％，灰分中盐酸不溶物含量为1.0％，水分含量为7.06％，溶解度为79.2％，酯化度为54.90％，pH为2.7，透明度为62.72％，半乳糖醛酸含量为70.13％。红枣果胶的色差值为:L*=32.48±0.10、a*=13.51±0.09、b*=15.07±0.11。红枣果胶和商品果胶的明显不同是红枣果胶属于高甲氧基果胶，商品果胶属于低甲氧基果胶;红枣果胶属于高酯果胶，商品果胶属于低酯果胶。 2.对红枣果胶和商品果胶的单糖组成进行分析。红枣果胶和商品果胶都是由甘露糖、鼠李糖、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖和半乳糖醛酸等组成的杂多糖，红枣果胶和商品果胶在单糖组成上无明显不同;红枣果胶中含有乙酰基，商品果胶中不含有乙酰基;红枣果胶和商品果胶的红外图谱基本一致，说明红枣果胶具有典型的果胶红外吸收;红枣果胶和商品果胶呈片状结构，上面附着大小不等的颗粒状聚集体，大小在0.1～1.5μm范围内。 3.以红枣果胶为唯一碳源，从保定市阜平县采集的腐烂红枣、土壤等中筛选、分离纯化出一株高产红枣果胶酶的菌株。该菌株编号为M3，该菌株在30℃，摇床转速为160r/min条件下的PDB种子培养基中培养24h后，接种于同等培养条件下的基础培养基后，培养96h后，其果胶酶活性可达941.15U/mL。采用CTAB法提取其基因组总DNA，利用真菌的通用引物ITS1和ITS4扩增菌株的rDNAITS区序列，扩增产物纯化后进行测序。将测序结果在GenBank中进行同源性搜索，并下载部分具有代表性菌种的ITS序列，利用软件MEGA6构建系统发育树，通过序列分析，该菌株鉴定为白地霉(Galactomyces candidum)。该菌株的ITS序列基因已登录GenBank，登录号为:KP399955。收起

关键词 : 红枣果胶果胶酶菌株筛选菌株鉴定

4. 解磷细菌的筛选鉴定及对植物生长的影响

[学位论文] 谢晨星河北工业大学 2016年硕士导师: 史延茂;黄亚丽共73页

摘要 : 解磷微生物（PSM）是一类可以将土壤中难溶磷酸盐化合物转化为容易被植物体吸收利用的可溶性磷酸盐，提高植物尤其是农作物对磷肥利用率的一类微生物的统称，其在生态圈中磷素循环相关的生态系统中担任着非常重要的角色。本研究从石家庄、邯郸、... 展开解磷微生物（PSM）是一类可以将土壤中难溶磷酸盐化合物转化为容易被植物体吸收利用的可溶性磷酸盐，提高植物尤其是农作物对磷肥利用率的一类微生物的统称，其在生态圈中磷素循环相关的生态系统中担任着非常重要的角色。本研究从石家庄、邯郸、邢台、哈尔滨等地植物根际土中采集了30份土壤样本，采用逐级稀释的方法在无机固体解磷平板上筛选出了188株具备一定解磷能力的解磷菌，通过解磷能力的比较，一株标号为H9的解磷细菌具有较高的解磷活性，其在解磷固体平板上的D/d值达4.4，在液体解磷培养基中培养120h，上清液可溶磷含量最高可达481.3mg/L，解磷效率可达4.813％。经过生理生化性质和16S rDNA测序结果分析，H9为Pseudomonas brassicacearum。通过对其在LB培养基中的培养条件及在解磷培养基中解磷特性的测定得知，H9在LB培养基中的最适pH为7，最适温度为28℃，最适的装液量为50ml/100ml，在0-80g/L的NaCl浓度下均可以正常生长；在无机解磷培养基中H9的最适碳源是葡萄糖，最适氮源为硫酸铵，最适的培养温度为20-37℃，最适的初始pH值为6-9。小麦、黄瓜种子浸种实验结果分析，一定浓度的H9菌悬液可以显著促进小麦种子萌发及胚根胚芽生长，H9同样可以显著促进黄瓜种子的萌发。使用山区土壤的盆栽试验结果表明，接种H9黄瓜苗株高、叶宽、鲜重、生物量均显著的高于未处理对照组，且土壤中的全磷、速效磷含量也有不同程度的增加。使用蛭石和混合基质的盆栽试验表明，用H9菌液的处理黄瓜苗株高、叶宽等指标同样显著高于未处理对照组，说明解磷菌在不同的基质土壤中的促生活性依然存在。作为解磷促生新机理的探究，又对H9做了相关的实验。内生菌检测实验结果表明，H9可以在一段时间内在黄瓜植株内定殖。信号分子检测实验表明H9可以分泌群体感应信号分子，为进一步的理论研究奠定基础。收起

关键词 : 解磷细菌菌株筛选菌株鉴定植物生长

5. 毛木耳优良菌株的筛选及富硒规律的研究

[学位论文] 张慧河北工程大学 2018年硕士导师: 郑素月共65页

摘要 : 本文以10种毛木耳菌株为试验材料，通过拮抗试验和ISSR分子鉴定，确定了10种毛木耳菌株的亲缘关系;通过出耳品比试验筛选出了适宜冀中南地区生产栽培的毛木耳优良菌株;进一步以“北京8号”和“上海1号”这2个主栽品种为试验材料，通过在培养基中和栽培... 展开本文以10种毛木耳菌株为试验材料，通过拮抗试验和ISSR分子鉴定，确定了10种毛木耳菌株的亲缘关系;通过出耳品比试验筛选出了适宜冀中南地区生产栽培的毛木耳优良菌株;进一步以“北京8号”和“上海1号”这2个主栽品种为试验材料，通过在培养基中和栽培料中添加不同浓度的亚硒酸钠以及对毛木耳子实体喷洒不同浓度的亚硒酸钠，再采用原子荧光光谱分析测定子实体硒的含量，最终研究出了这两个菌株的富硒规律，并进行了可食性评价，主要结论如下： 1.拮抗试验和ISSR分子标记技术测定结果表明，10种毛木耳菌株在相似数0.78时，可以分为四类：第一类为“黄耳10号”、“北京8号”和“北京1号”，第二类为“川黄耳1号”，第三类“川白耳1号”、“川耳5号”、“上海1号”、 “琥珀木耳”共四个菌株，第四类为“43-1”和“毛9722”。 2.母种、原种及出耳试验结果表明： “川耳5号”、“上海1号”“琥珀木耳”、“43-1”和“毛9722”在母种固体培养基培养特性试验中菌丝长势好，颜色洁白且浓密，整齐度好。其中，“川耳5号”和“上海1号”菌丝长速显著优于其他菌株（P≤0.05）;麦粒原种培养特性试验中，结果表明10种菌株里“43-1”菌株长势最好，“北京8号”菌株长势最弱，“43-1”和“毛9722”日均长速分别为1.21mm和1.23mm，均显著高于其他菌株（P≤0.05）;出耳试验中测得结果表明，三潮出耳试验产量最高的是北京1号，生物学效率为343.47%，其次是北京8号，生物学效率为292.77%。而产量最低的是川黄耳1号，生物学效率为133.87%。 3.以“北京8号”和“上海1号“为试验材料进行不同毛木耳品种富硒结果表明：（1）添加不同Na2SeO3浓度的平板培养基中，“北京8号”菌株在Na2SeO3浓度为60mg/L时，菌丝的生长特性最好，菌丝生长速率显著大于其他浓度以及对照组（P≤0.05），而浓度在90mg/L 之后，“北京8号”菌丝生长速度明显呈下降趋势。“上海1号”菌株在Na2SeO3浓度为200mg/L和400mg/L菌丝洁白，粗壮、长势强、菌落形态最好，随着浓度的增高，对菌丝生长的抑制作用越强。（2）添加不同Na2SeO3浓度的出耳栽培试验中,对“上海1号”进行母种培养基富硒和栽培料同时富硒，Na2SeO3浓度为800mg/L时，生物学效率为39.5%，“北京8号”的生物学效率最高为102.5%。另外对“上海1号”子实体喷硒试验结果表明，随着Na2SeO3浓度逐渐升高，硒含量过高，部分硒无法被子实体转换，使得该菌株子实体硒富集过多，最终导致该子实体无法正常生长，出现皱缩现象，当Na2SeO3浓度高达800mg/L-1000mg/L时，该子实体颜色变成了紫褐色、局部橘红，耳片卷缩严重，长势极弱。 4.富硒菌株子实体硒含量和可食性评价结果表明：（1）栽培料富硒试验结果表明：栽培料和菌株同时富硒试验结果表明：“北京8号”在Na2SeO3浓度为200mg/L时，试样中出现硒含量最高点为1.6294μg/L。“上海1号”在Na2SeO3浓度为1000mg/L试样中出现硒含量最高点为54.138μg/L。在喷硒富硒试验中，“上海1号”在喷硒浓度为800mg/L试样中出现硒含量最高点为42.3528μg/L。（2）根据DBS42/002-2014 富有机硒食品硒含量要求食用菌（干基）20.0～100.0μg/100g 或 100mL （以 Se 计），可得在Na2SeO3浓度0mg/L到300mg/L之间对“北京8号”富硒栽培，子实体具有可食性，在Na2SeO3浓度0mg/L到1000mg/L之间对“上海1号”富硒栽培，子实体也具有可食性。收起

关键词 : 毛木耳菌株鉴定菌株筛选富硒规律

6. 天然海鱼共附生放线菌农用活性菌株的分离、筛选及分类鉴定

[学位论文] 杜丹超福建农林大学 2009年硕士导师: 欧阳明安共78页

摘要 : 海洋覆盖全球面积的70%，蕴含丰富的海洋微生物资源。海洋来源放线菌是一类有重要价值的微生物资源，其丰富的次级代谢产物是寻找新型抗生素的重要来源。海洋鱼类作为海洋生态环境中的重要组成部分、洄游性和杂食性等生活习性使其体内富集了大量的共附... 展开海洋覆盖全球面积的70%，蕴含丰富的海洋微生物资源。海洋来源放线菌是一类有重要价值的微生物资源，其丰富的次级代谢产物是寻找新型抗生素的重要来源。海洋鱼类作为海洋生态环境中的重要组成部分、洄游性和杂食性等生活习性使其体内富集了大量的共附生微生物，成为我们获取海洋来源微生物的载体。不同鱼种由于其生活习性（水深、食性、洄游性等）不同，其共附生微生物群落可以在一定程度上反映不同的海洋生态环境微生物群落信息。由此我们将海洋鱼类共附生微生物作为海洋微生物研究便捷的菌种来源途径。本研究以福建平潭周边海域海洋鱼类作为海洋放线菌分离来源，分离获取具有开发利用价值的海鱼共附生放线菌天然菌种。先后采用7种放线菌分离培养基以及不同的抗生素组合，共分离纯化获得海洋鱼类共附生放线菌29株。通过平板对峙法和抑制菌丝生长速率法筛选出具有抑菌活性的放线菌19株；其中，菌株030603是我们筛选得到的具有高效、广谱性抑制植物病原真菌活性的放线菌野生菌株。发酵液粗提物在0.12～6.61g/L对小麦纹枯（Rhizoctonia cerealis）等14种供试植物病原真菌具有明显的抑菌活性，其中对小麦全蚀（Ophiclus graminis）有高效抑菌活性，EC50值达到0.12 g/L。进一步对分离到的29株海洋鱼类共附生放线菌进行了抗烟草花叶病毒（Tobacco Mosaic Vrus，TMV）和抗肿瘤活性筛选。筛选出对烟草花叶病毒增殖的抑制率达到50%以上的活性菌株6株；通过MTT法筛选到一株抗胃癌SGC-7901高效活性野生菌株042403，在供试浓度500μg/mL下，发酵液粗提物与菌丝体粗提物抑制活性分别达97.67%和99.5%。同时，结合培养形态、生理生化实验和16S rDNA对活性菌株010204、020101、030603、042403进行分类鉴定，初步鉴定结果为假浅灰链霉菌Streptomyces pseudogriseolus010204，球孢链霉菌Streptomyces globisporus020101，微白黄链霉菌属Streptomycesalbidoflavus030603，吸水链霉菌属Streptomyces.hygroscopicus042403。另外对活性菌株030603，以小麦纹枯为靶标菌，进行了发酵工艺的优化。采用单因子试验与正交设计相结合的方法，确定菌株030603液体发酵培养基组成及培养条件为：黄豆粉1.5%，蛋白胨3%，甘油1.5%，可溶性淀粉2%，盐度0%，PH5-7，种龄2d，接种量：6%，培养时间：5d，250 mL三角瓶装液量75 mL。菌株030603发酵优化后，次级代谢产物粗提物（1 mg/mL）对小麦纹枯病菌的抑菌活性达到98.78%，较基础发酵培养基抑菌活性（87.5%）有大幅度的提高。收起

关键词 : 海洋海鱼放线菌农用活性菌株菌株分离菌株筛选菌株鉴定抑菌活性

7. 基于DNA屏蔽和qPCR的乳酸菌菌株水平活菌计数研究

[学位论文] 虞星彤扬州大学 2022年硕士导师: 张臣臣；汪家琦共96页

摘要 : 由于益生菌的功能特性和生长特性具有菌株特异性，因此对同一物种中特定的某一菌株进行计数是至关重要的，同时也是现存的难题。本文对2株鼠李糖乳杆菌进行了基因家族分析，设计了特异性引物，利用qPCR技术，建立了一种高分辨能力(菌株水平)、低延时的... 展开由于益生菌的功能特性和生长特性具有菌株特异性，因此对同一物种中特定的某一菌株进行计数是至关重要的，同时也是现存的难题。本文对2株鼠李糖乳杆菌进行了基因家族分析，设计了特异性引物，利用qPCR技术，建立了一种高分辨能力(菌株水平)、低延时的选择计数方法，为动态监测混菌发酵体系中菌株的活性变化规律和混菌产品的活菌检测提供技术支持。具体研究内容如下: (1)菌株鉴定引物的设计及验证。本文对鼠李糖乳杆菌hsryfm1301和鼠李糖乳杆菌LV108进行全基因组测序，并以鼠李糖乳杆菌GG和鼠李糖乳杆菌Lc705为参考菌株进行基因家族分析。在鼠李糖乳杆菌hsryfm1301和鼠李糖乳杆菌LV108中分别发现了31个和19个菌株特异性开放阅读框(ORF)。在菌株特异性ORF(及其相邻区域)内设计了多对引物，经验证菌株特异引物性对能够将鼠李糖乳杆菌LV108(引物对V2、V4、V5和V9)或鼠李糖乳杆菌hsryfm1301(引物对H1、H2、H3和H4)与其他12个鼠李糖乳杆菌菌株快速区分。 (2)菌株计数引物的设计。本文在菌株鉴定引物扩增区内，分别为鼠李糖乳杆菌LV108和鼠李糖乳杆菌hsryfm1301设计了三对引物(L1、L2、L3和Y1、Y2、Y3)。根据扩增条带选择L2和Y3进行标准曲线绘制，通过构建标准品质粒pMD.L2和pMD.Y3，分别得出鼠李糖乳杆菌hsryfm1301计数的标准曲线方程为:y=-3.3357x+44.983(R2=99.88％，e=0.986)，鼠李糖乳杆菌LV108计数的标准曲线方程为:y=-3.411x+45.635(R2=99.95％，e=0.964)。L2引物对和Y3引物对对瑞士乳杆菌、植物乳杆菌、发酵乳杆菌、嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌，以及鼠李糖乳杆菌GG和HN001等干扰菌株没有扩增反应，具有较好的菌株特异性。 (3)鼠李糖乳杆菌的菌株水平计数。本文优化了菌株计数过程中的DNA提取流程:取500μL菌悬液，收集菌体，采用细菌基因组DNA快速提取试剂盒提取DNA，180μL20mg/mL的溶菌酶处理2h后，继续使用20μL20mg/mL蛋白酶K处理30min，后续按照说明书进行。单菌培养时，qPCR法结果与OD600值具有一致性，由于qPCR法会同时检测死菌和非可培养菌体，在生长后期的计数结果大于平板计数法。混菌培养时，qPCR成功对体系中的菌株进行了计数，并发现了菌株间的拮抗作用。采用PMA屏蔽死亡菌体后，PMA-qPCR法与平板计数法得到的结果进一步接近。但在衰亡期时，PMA-qPCR法结果仍高于平板计数。总而言之，本文建立了一种菌株特异性鉴定引物的设计方法，实现了菌种内不同菌株的选择计数，使多菌株混合培养体系的菌株监测成为可能。收起

关键词 : 混菌发酵鼠李糖乳杆菌菌株鉴定菌株计数

8. 链霉菌ⅡR21菌株抗农作物病原真菌天然产物的分离纯化及其合成基因簇的挖掘

[学位论文] 吴金龙中南民族大学 2016年硕士导师: 李晓华共71页

摘要 : 本实验室从土壤中分离得到了一株具有抗农作物病原真菌活性的链霉菌ⅡR21菌株，对其抗真菌活性、发酵条件、抗真菌化合物分离纯化、attB位点以及全基因组等方面进行了研究，为新型农用抗生素的开发奠定基础。利用琼脂块法和杯碟法测定链霉菌ⅡR21菌株... 展开本实验室从土壤中分离得到了一株具有抗农作物病原真菌活性的链霉菌ⅡR21菌株，对其抗真菌活性、发酵条件、抗真菌化合物分离纯化、attB位点以及全基因组等方面进行了研究，为新型农用抗生素的开发奠定基础。利用琼脂块法和杯碟法测定链霉菌ⅡR21菌株次级代谢产物对七种指示菌的抑菌活性，链霉菌ⅡR21菌株的菌块和发酵上清液对稻瘟病菌168菌株、稻瘟病菌NO-1菌株、立枯丝核病菌的抑菌圈直径都达到了40 mm以上；同时，链霉菌ⅡR21菌株的菌块和发酵上清液对禾谷镰刀病菌、黄色镰刀病菌及腐霉病菌的生长也具有一定的抑菌活性。本研究主要内容包括：⑴发酵培养基为优化菌丝体发酵培养基时，链霉菌ⅡR21菌株发酵液抑菌活性较高，抑菌圈直径达到了53.31 mm。发酵时间为第7天时，链霉菌ⅡR21菌株发酵上清液的抑菌活性较高，抑菌圈直径为49.40 mm。培养温度为30℃时，链霉菌ⅡR21菌株发酵上清液抑菌圈较大，抑菌圈直径52.30 mm。转速为180 r/min时，链霉菌ⅡR21菌株的发酵上清液抑菌圈直径较大，为50.02 mm。从而确定了链霉菌ⅡR21菌株发酵培养基为优化菌丝体培养基，培养时间为7天，发酵温度为30℃，转速为180 r/min。⑵利用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇作为萃取剂，对链霉菌ⅡR21菌株发酵滤液进行萃取，发现发酵液中有效抑菌活性成分主要集中在乙酸乙酯部位。进一步通过薄层层析和硅胶柱层析对链霉菌ⅡR21菌株乙酸乙酯粗提物进行分离，最终获得F1、F2和F3三个活性较好的组分，三个活性组分的抑菌圈直径分别为21.26 mm、47.28 mm和30.78 mm。利用制备型高效液相色谱对活性组分进行纯化，从F1组分中分离到1个纯度在90%以上的具有抗真菌活性的化合物单体。⑶以链霉菌ⅡR21菌株总DNA为模板，引物为通用引物，利用PCR技术获得了链霉菌ⅡR21菌株的attB位点序列，链霉菌ⅡR21菌株的attB位点序列长269 bp，与Streptomyces. natalensis的attB位点核心区域的序列的相似度最高，达到92%，具有发生交换的核心区域5’-TT。含有ΦC31attP位点的整合型质粒pSET152通过attP位点能与链霉菌ⅡR21菌株的染色体上的attB位点发生位点特异性重组。⑷对链霉菌ⅡR21全基因组的580个contigs进行次级代谢产物合成基因簇分析，共预测得到61个contigs含有合成基因簇，其中6个已知合成基因簇分别合成的6种产物具有抗真菌活性(BE-14106、Ambruticin、Clavams、Dorrigocin/migrastatin、ECO-02301、Lactimidomycin)；对 Contig51中的基因合成簇的分析，表明链霉菌ⅡR21菌株具备合成clavams代谢产物的相关基因。收起

关键词 : 链霉菌株抑菌活性菌株鉴定 ⅡR21全基因组

9. 福建地区51株新型隐球菌的基因型鉴定及体外药物敏感性分析

[学位论文] 朱纪婷福建医科大学 2015年硕士导师: 李智文共57页

摘要 : 目的：⑴对2010-2014年福建省经脑脊液分离培养隐球菌确诊的51例隐球菌性脑膜（脑）炎患者的临床资料进行分析。⑵分析51株临床分离隐球菌菌株的基因型组成。3、观察51株隐球菌临床株在体外对两性霉素B、氟康唑、氟胞嘧啶、伏立康唑、伊曲康唑等抗真菌... 展开目的：⑴对2010-2014年福建省经脑脊液分离培养隐球菌确诊的51例隐球菌性脑膜（脑）炎患者的临床资料进行分析。⑵分析51株临床分离隐球菌菌株的基因型组成。3、观察51株隐球菌临床株在体外对两性霉素B、氟康唑、氟胞嘧啶、伏立康唑、伊曲康唑等抗真菌药物的药物敏感性。方法：①分析51例隐脑的流行病学、临床特点、治疗预后。②应用PCR指纹技术以微卫星M13(5'-GAGGGTGGCGGTTCT-3')为单引物做PCR，将各隐球菌菌株鉴定至基因型水平。③采用法国梅里埃ATB Fungus3法测定51株临床分离的隐球菌菌株对两性霉素B、氟康唑、氟胞嘧啶、伏立康唑、伊曲康唑等抗真菌药物的体外药物敏感性及MIC值。比较不同基因型的隐球菌临床株对常见抗真菌药物敏感性的差异。结果：⑴临床表现：51例隐脑患者男女比例1.26：1；发病年龄<50岁占74.5%；初次颅内压?250mmH2O占78.4%；86.2%合并基础疾病，其中AIDS占21.6%；2周死亡率3.9%；10周死亡率9.8%。⑵基因分型：分离自临床感染患者的51株隐球菌临床株中，41株（73.77%）为VNⅠ基因型菌株；5株（8.20％）为VNⅡ基因型菌株；1株（3.28％）为VNⅢ基因型菌株；4株（14.75％）为VGⅠ基因型，未检出其他基因型。47株为新生隐球菌，4株为格特隐球菌。⑶体外药物敏感性：51株隐球菌临床分离株对两性霉素B、氟康唑、伊曲康唑、伏立康唑、氟胞嘧啶的最小抑菌浓度范围分别为0.5~2 mg/l，1~4 mg/l，0.125~4mg/l，0.0625~0.25 mg/l，4~16 mg/l。从隐球菌种属分类角度，这两种种属的隐球菌对5种抗真菌药物的MIC无统计学差异。从基因型角度，这8种基因型的隐球菌对5种抗真菌药物的MIC无统计学差异。结论：①新型隐球菌性脑膜（脑）炎以颅内压增高为突出表现，多合并其他基础疾病，常合并AIDS，死亡率高。②分离自我省临床患者的隐球菌临床株以VN I基因型菌株为主；各基因型与死亡率高低无明显关系；③我省隐球菌临床株绝大部分对常见抗真菌药两性霉素B、氟康唑、伊曲康唑、氟胞嘧啶、伏立康唑基本敏感；隐球菌各基因型对这5种抗真菌药物的体外药敏无显著差异。收起

关键词 : 脑膜感染隐球菌菌株菌株鉴定基因测序

10. 纤维素酶高产菌株的选育

[学位论文] 吴旻南京理工大学 2004年硕士导师: 杨树林共52页

摘要 : 从南京紫金山采来的样品中筛选出纤维素酶活力高的菌株9株,其中细菌1株、霉菌8株,其中4株霉菌的纤维素酶活力高于该实验室保藏的购自北微所的公认的纤维素酶高产菌株里氏木霉3.3010和绿色木霉3.3711.对获得的细菌和酶活力最高的霉菌进行鉴定,所筛细菌... 展开

关键词 : 纤维素酶菌株选育菌株鉴定条件优化