中国科学技术信息研究所--国家工程技术数字图书馆

[学位论文] 舒宝连华中科技大学 2019年硕士导师: 沈先涛共51页

摘要 : 开发精准的细菌定量检测分析技术在食品卫生、环境卫生、实验诊断等领域具有重要的实用价值，而靶细菌的高选择性分离是细菌定量检测技术取得成功的前提条件与关键步骤。众所周知，传统方法优缺并存无法满足分子生物学对细菌分离越来越精细的要求,因此... 展开开发精准的细菌定量检测分析技术在食品卫生、环境卫生、实验诊断等领域具有重要的实用价值，而靶细菌的高选择性分离是细菌定量检测技术取得成功的前提条件与关键步骤。众所周知，传统方法优缺并存无法满足分子生物学对细菌分离越来越精细的要求,因此开发新的高选择性分离靶细菌的分离技术对细菌定量检测具有重要意义。作为分离细菌的新技术，细菌印迹技术是一门以靶细菌为模板通过功能单体和交联剂来合成与靶细菌具有互补结构的孔穴的新技术。这种孔穴结构能够通过形状、大小的匹配和化学键作用与靶细菌特异性结合。但是，传统细菌印迹技术分离细菌的方法均只把细菌看做为BIPs (Bacterial imprinted polymers, BIPs)的模板分子，而忽视了细菌作为微生物所存在的生物学特性，因此分离效果不理想。本论文的研究思路是把细菌趋化性和细菌印迹选择性相结合，开发一种分离细菌的新方法。本研究在保证传统细菌印迹材料识别能力的基础上，利用细菌趋化性产生的主动识别对BIPs的吸附选择性进行二次增强。为了确保细菌印迹材料传统的识别能力，本文通过表面压印的方式制备特异性识别靶细菌的BIPs。为了实现细菌的趋化性，微通道结构将被引入到BIPs材料中。该微通道结构将被应用于引诱剂和驱避剂的释放。在细菌吸附过程中，靶细菌趋化剂和非靶细菌驱避剂的释放可避免非靶细菌的干扰而促使靶细菌产生选择性移动和识别以实现靶细菌的高选择性分离。目的：将传统的细菌印迹技术的被动识别与细菌趋化性诱导的主动识别相结合开发出比传统细菌印迹材料具有更高的靶向识别选择性、可用于混合细菌溶液中靶细菌的分离方法。方法：通过表面压印技术制备细菌 PDMS 印迹膜，并用甲基三氯硅烷修饰印迹膜，最后用微针（36孔）在清洗干净的PDMS印迹膜上致孔得到具有微通道的PDMS印迹膜。用PDMS印迹膜的印迹侧朝向细菌液，非印迹侧则朝向趋化剂溶液制备出可以缓慢释放趋化剂的装置来研究单一菌液和混合菌液中PDMS印迹膜的吸附效果和选择性。结果：本论文通过表面印迹技术制备了可选择性识别细菌的PDMS印迹膜；并通过微针致孔方法得到可以引入趋化剂和趋避剂的微通道 PDMS 印迹膜。在单一溶液中，靶细菌趋化剂可明显增加靶细菌的吸附量，而干扰菌趋避剂也可明显降低干扰菌的吸附量；在混合菌液中，同时增加或者减弱靶细菌、干扰菌吸附的趋避剂或趋避剂对靶细菌 MIP 的选择性几乎不产生影响，而只对靶细菌或者干扰菌任意一种产生趋化或趋避作用的趋化剂或趋避剂能增加靶细菌 MIP 对靶细菌的选择性，从而实现靶细菌的选择性分离。结论：基于细菌趋化剂和微通道印迹膜分离细菌的方法可同时实现细菌的被动和主动识别，从而提高 PDMS 印迹膜的选择性以实现细菌的高选择性分离。本研究为解决细菌印迹技术中印迹孔穴选择性不高提出了新思路，推动了细菌印迹技术在临床、环境细菌检测中的发展。收起

关键词 : 细菌定量检测细菌印迹技术细菌趋化性细菌分离

2. 滇池底泥的细菌区系的研究

[学位论文] 樊竹青云南大学 2001年硕士导师: 张灼共39页

摘要 : 用阿斯贝培养基分离底泥自生固氮菌,带菌量为3.30×10个/克土样,共分离到9个属的细菌,芽孢杆菌属为最主要的优势菌属,占优势菌总数的42.8%,而邻单胞菌属、气单胞菌属、微杆菌属(Microbacterium)为首次发现能自生固氮.细菌在无机磷培养基上的... 展开

关键词 : 滇池底泥细菌区系磷细菌钾细菌

3. 植物和内生菌提取物抗耐药细菌的筛选与活性成分研究

[学位论文] 杨再昌重庆大学 2007年博士导师: 王伯初;杨小生共140页

摘要 : 近年来，细菌对各类抗菌药物产生耐药性发展迅速，耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）、耐青霉素肺炎链球菌（PRSP）、多重耐药性结核杆菌尤其是耐万古霉素肠球菌（VRE）的出现，给临床治疗造成了困难。由于现有药物较难控制耐药菌感染，研制抗耐药菌药... 展开近年来，细菌对各类抗菌药物产生耐药性发展迅速，耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）、耐青霉素肺炎链球菌（PRSP）、多重耐药性结核杆菌尤其是耐万古霉素肠球菌（VRE）的出现，给临床治疗造成了困难。由于现有药物较难控制耐药菌感染，研制抗耐药菌药物已经成为药学领域中的研究热点。本实验的目的是建立植物和内生菌提取物库，以细菌、细菌外排泵及β－内酰胺酶为靶点，筛选对耐药菌有抗菌作用的样本，通过活性跟踪分离，得到活性单体或组分，为研制新的抗耐药菌药物奠定基础。植物及植物内生菌的次生代谢产物是一个庞大的化合物库，是发现新的抗菌物质的天然资源。本实验的样本库由植物及植物内生菌的提取物组成，共300个个样本。以临床分离的金黄色葡萄球菌、肺炎克雷伯氏菌、铜绿假单胞菌耐药菌株为靶点，采用Kirby-Barer纸片法及药基法进行筛选，发现橙色串珠霉（M.erythraea Sh.Et Dodge）的菌丝提取物具有较强的抑菌活性，用TLC进行活性跟踪、柱色谱分离，得到具有抗菌活性的单体化合物1，根据化合物1的1H、13C NMR谱及高分辨质谱，鉴定为21,25-二甲基-24-乙基-8,15,22-三烯-3β-甾醇。检测了化合物1对9株细菌的MIC浓度，在8-128μg/ml之间，对G+菌的抑制效果强，为杀菌作用，对G-菌的抑制效果较弱，对金黄色葡萄球菌ATCC25923及耐药株的MIC、MBC浓度相同，说明敏感株和耐药株存在共同靶位。用金黄色葡萄球菌、肺炎克雷伯氏菌、铜绿假单胞菌耐药菌株感染小鼠，化合物1的保护率在70-100％之间，呈明显的量-效关系。化合物1属于甾醇类化合物，毒性低（化疗指数﹥7），尚无类似结构的抗菌药物上市，因此，可作为抗菌先导物进行结构修饰，值得进一步研究。将抗菌药物泵出胞外是细菌广泛存在的耐药机制，抑制细菌外排泵(efflux pump)，可以增加细菌胞内药物浓度，使耐药菌恢复对原抗菌药物的敏感性。以小蘖碱为细菌外排泵底物，建立细菌外排泵抑制剂双平板筛选模型，从样本库中筛选出白前、牡丹皮乙醇提取物及橙色串珠霉菌液提取物，经活性跟踪分离，得到化合物2、3、4三个抑制细菌外派泵的活性单体，通过波谱解析，其结构鉴定为：2,4-二羟基苯乙酮(化合物2)、5,7-二羟基-4′-羟甲基异黄酮(化合物3)、2-羟基-4-甲氧基苯乙酮(化合物4)。体外试验表明，三种化合物均能提高耐药菌对环丙沙星、红霉素、四环素、小蘖碱的敏感性。体内抗耐药菌感染试验发现，化合物2可能存在神经毒性，化合物4可以抑制动物细胞外排泵，不是细菌外排泵专一性抑制剂，化合物3能提高环丙沙星对感染小鼠的保护率。测定细菌胞内小蘖碱的相对荧光强度，表明化合物2、3、4对细菌外排泵有抑制作用。化合物3属黄酮类化合物，安全无毒，可以作为抗菌药物增敏剂。很多病原菌能分泌β-内酰胺酶(β-lactamase)，将β-内酰胺类抗菌素水解失活，β-内酰胺酶抑制剂可以提高产酶菌株对β-内酰胺类抗菌素的敏感性。本实验从铜绿假单胞菌耐药株分离纯化了一种β-内酰胺酶，按Bush-Jacoby-Medeiros分类方法，属2br酶。首次建立了β-内酰胺酶抑制剂的Starch-iodine平板筛选模型，从样本库中筛选到2种提取物，活性跟踪分离，得到单体化合物5、6，经波谱解析，鉴定为酒石酸、水杨酸。另从39种化合物中筛选出2个具有很强抑制活性的化合物，其中二硫联苯体内外试验都能提高甲氧西林的抗菌活性。以该酶为靶点，初步对水杨酸极其类似物的抑酶活性进行构效关系分析，表明水杨酸苯环上的羟基和羧基是活性基团之一，在苯环上增加羧基取代基可以较大提高抑酶活性，增加磺酸基、硝基能提高抑酶活性，苯环上的氨基降低抑酶活性。为设计新的β-内酰胺酶抑制剂奠定了基础。多糖广泛存在于植物中，但植物多糖抗细菌感染方面的研究不多，本课题研究了鸡屎藤、白前粗多糖的体内抗耐药菌感染效果。用沙门氏菌感染小鼠，感染前给药时，鸡屎藤粗多糖对感染小鼠的保护率为83％，白前粗多糖为66％，保护率随多糖样品含糖量的增加而提高；感染时同时给药，两种粗多糖的保护率均下降。鸡屎藤、白前粗多糖均能提高感染小鼠红细胞C3b受体活性，提高小鼠清除抗原-抗体复合物的功能，提高嗜中性白细胞的吞噬活性，提高血清中特异性抗体的滴度。因此，粗多糖对小鼠的保护作用与提高免疫功能有关。采用GC-MS技术，分析了油茶树、白前挥发油的化学组成。油茶树挥发油能抑制耐药菌的生长，杀菌曲线表明，当浓度为2×MIC时，6 h杀死金黄色葡萄球菌，24 h杀死铜绿假单胞菌。抗菌活性成分估计是芳樟醇、壬醛、萜品醇、水杨酸甲酯等化合物。白前挥发油无抑菌活性，但能明显降低鸡胚中鸡传染性支气管炎病毒（IBV）的毒价，抑制鸡痘病毒感染雏鸡。细胞及小鼠感染试验表明，白前挥发油对流感病毒也具有较强的抑制作用。白前挥发油的广谱抗病毒作用值得重视。收起

关键词 : 内生菌耐药细菌细菌外排泵

4. 中等嗜热浸矿菌共培养体系的培养条件优化研究

[学位论文] 吴俊子中南大学 2013年硕士导师: 周洪波共80页

摘要 : 中等嗜热菌不仅热力学效率比较高，而且可以耐受更高的金属离子浓度和矿浆浓度。也有大量的研究表明，单一菌株浸矿存在一定的局限性，不同代谢类型的微生物混合浸矿可以明显提高浸出率，所以中等嗜热混合菌在工业上具有广阔的应用前景。生物冶金技术... 展开中等嗜热菌不仅热力学效率比较高，而且可以耐受更高的金属离子浓度和矿浆浓度。也有大量的研究表明，单一菌株浸矿存在一定的局限性，不同代谢类型的微生物混合浸矿可以明显提高浸出率，所以中等嗜热混合菌在工业上具有广阔的应用前景。生物冶金技术在工业应用中需要接种大量的浸矿微生物，获得大量的中等嗜热混合菌是迫切需要解决的技术难题。本研究首先构建一个含有铁氧化代谢和硫氧化代谢、自养菌和兼性自养菌、细菌和古菌的中等嗜热浸矿菌共培养体系，包括Sulfobacillus sp.TPY、 Leptospirillum ferriphilum YSK、Acidithiobacilluscaldus S2和Ferroplasma thermophilum L1四株菌。本研究考察了初始pH值、温度、FeSO4·7H2O添加量、硫粉添加量和酵母粉添加量等五个因素对中等嗜热浸矿菌共培养体系的菌体浓度和群落结构的影响，采用响应面分析法进一步优化该共培养体系的培养条件探究了影响共培养体系微生物生长的显著性因素及不同因素之间的交互作用。初始pH值对中等嗜热浸矿菌共培养体系的生长具有明显的影响，初始pH为1.5时菌体浓度在第22小时已达到了最大值4.8×108个/mL，该条件下Sulfobacillus sp.TPY一直是体系中的优势种群。FeSO4·7H2O添加量为40 g/L时，共培养体系的最大菌体浓度可以达到5.21×108个/mL，硫养菌Acidithiobacilluscaldus S2也占有20.18％。硫粉添加量为8g/L和10g/L的情况相差不大，但更加节省能源物质。温度过高或过低都不利于共培养体系微生物的生长，温度为45℃的实验组的菌体浓度的最大值为5.80×108个/mL。酵母粉添加量选择0.02％更为合理，此条件的菌体浓度在第58小时可以达到5.68×108个/mL，Acidithiobacilluscaldus S2的所占的比例为17.55％，Sulfobacillus sp.TPY占44.68％，而Leptospirillumferriphilum YSK占36.9％。Plackett-Burman实验结果表明初始pH值、温度和MgSO4·7H2O添加量三个因素对中等嗜热菌共培养体系的微生物生长的影响最显著。通过最陡爬坡实验和中心组合实验得到这三个最显著因素的最优值为:初始pH值1.38，温度44℃，MgSO4·7H2O添加量0.552 g/L。在最优的条件下进行验证实验，在第58小时所获得的微生物浓度为7.55×108个/mL，且体系中的微生物群落结构情况为:Sulfobacillus sp.TPY(22.33％)，Leptospirillum ferriphilum YSK(37.53％),Acidithiobacilluscaldus S2(36.8％),Ferroplasma thermophilum L1(3.34％)。初始pH值和温度两个重要因素对中等嗜热混合菌共培养体系微生物生长的交互影响显著，在一定范围的初始pH值(1.38-1.52)内，初始pH值越大，微生物生长的最优温度越低;且随着初始pH值的增大，温度对中等嗜热混合菌共培养体系微生物生长影响越来越大。初始pH值和MgSO4·7H2O添加量这两个重要因素之间只有略微的交互作用，而温度和MgSO4·7H2O添加量两个重要因素交互作用则不显著。收起

关键词 : 细菌选矿浸矿微生物嗜热细菌细菌培养

5. 纳米细菌在上尿路结石中的检测

[学位论文] 任海林兰州大学 2006年硕士导师: 颜东文;陈一戎共40页

摘要 : 本文对纳米细菌在上尿路结石中的检测进行了探讨。本研究将17枚上尿路结石分别由肾盂、肾实质以及输尿管切开取出或用输尿管镜取出，所有结石均经处理后在细胞培养条件下培养4-5周后通过相差显微镜、透射电镜、扫描电镜观察，用Hoechst33258进行纳米细... 展开

关键词 : 尿路结石纳米细菌细菌检测

6. 粪肠球菌感染根管形成根尖生物膜及根管预备对其影响的体外研究

[学位论文] 赵洁重庆医科大学 2015年硕士导师: 钟晓波共42页

摘要 : 在口腔细菌学研究发展愈加前沿以来，国内外大量学者研究表明根尖周炎的发病来源中最重要的是细菌的影响[1]。而细菌生物膜由依靠胞外产物（如多糖及蛋白质）而粘附于固体表面的细菌群落组成。细菌生物膜能够通过结合有机和无机成分，形成稳定的生物群... 展开在口腔细菌学研究发展愈加前沿以来，国内外大量学者研究表明根尖周炎的发病来源中最重要的是细菌的影响[1]。而细菌生物膜由依靠胞外产物（如多糖及蛋白质）而粘附于固体表面的细菌群落组成。细菌生物膜能够通过结合有机和无机成分，形成稳定的生物群落从而产生相互影响及作用[2]。因此，从细菌学的角度看，生物膜为细菌提供了一个稳定的生存环境，起到了屏障作用以及占位性保护作用，从而使细菌不那么容易被破坏，以此显著提高细菌的生存能力及外界抵抗力[3,4]。现阶段，关于牙体牙髓疾病和牙周病中的细菌生物膜的实验，大多数为根管里面的生物膜以及牙颈部和牙齿表面的菌斑生物膜[5,6]。但是由于根尖及牙周的组织和细菌难以取材，因此对于感染根管形成根尖周炎和根尖生物膜的原因尚未完全明了。Plakunov研究发现：当有外界刺激干扰感染根管时，稳定的细菌生物膜会释放出游离的细菌，从而导致再次感染甚至在其他部位繁殖形成新的[7]。在牙体牙髓疾病致病菌中，粪肠球菌（E.faecalis）的检出率在治疗前与治疗后有着明显差异,特别是在根尖周疾病中，许多研究证明粪肠球菌是难治性根尖周炎的优势菌[8,9]。本课题小组的前期研究显示，对于暴露在空气中所形成的感染根管，根管下段以下的预备对根尖生物膜的形成有促进作用。本实验利用前期实验完成的体外模型形成粪肠球菌感染根管[10]，在不考虑机体免疫机制的条件下，研究根管预备对粪肠球菌感染根管形成根尖周炎的影响，为临床预防根尖生物膜的形成提供参考。目的：感染根管内粪肠球菌的体外模型的建立，探讨根管预备对根尖细菌渗漏的体外细菌生物膜的形成条件的影响。材料和方法： 1.离体牙拣选：正畸患者的健康前磨牙选择：二十。模型制作：将离体牙各自密封于盛有BHI琼脂培养基的无菌小瓶内，使其根尖四毫米浸没于培养基中。随机抽取10个作为实验组进行开髓，之后将粪肠球菌接种于髓腔。于建模后21d将标本戊二醛固定后酒精梯度脱水，石蜡包埋后，分别对牙颈部、根中1/3及根尖1/3进行组织切片，厚度为7μm。切片经Brown and Brenn染色法（改良革兰氏染色法）染色后，置于光学显微镜下从低到高的倍数进行观察，记录观察结果并保存图片。 2.离体牙选择：因正畸情况而拔除的健康双尖牙三百二十颗。模型制作：将离体牙各自密封于盛有BHI琼脂培养基的无菌小瓶内，使其根尖四毫米浸没于培养基中。建模后将其随机分为对照组A（n=70）、实验组（n=250）。实验组做开髓处理后接种粪肠球菌，对照组不做任何处理。全部置于三气培养箱中（含5%O2，85%N2，10%CO2；温度37℃）。在做干扰前先将320个模型放置21d，并于1d及21d分别利用16SrRNA通用引物PCR法检测根尖周细菌。确保体外模型未被细菌感染后随机将实验组分为组B、C、D、E。B组为开髓组，C组为根管上2/3干扰组， D组为全长干扰组，E组为超长干扰组。5组分别于干扰后1d，7d，21d，35d，49d，63d进行PCR检测（期间每两天用灭菌针管通过开髓孔滴入新鲜灭菌BHI液态培养基）。根据结果利用SEM进行Ef根尖生物膜观察并对根尖周细菌进行细菌培养。结果： 1.建立模型后二十一天利用16SrDNA通用引物PCR检测根管内及根尖周细菌，对照组根管内及根尖周均未检测到细菌；实验组根管内检测到粪肠球菌，并且组织切片Brown&Brenn染色可见粪肠球菌感染根管样本的牙本质小管中有深浅、长短不一的染色，证明牙本质小管中有粪肠球菌定植。说明粪肠球菌感染根管的体外模型建模成功。 2.确定建模成功后，分别对5组于干扰1d，7d，21d，35d，49d，63d进行粪肠球菌16SrRNA的PCR检测。其中A、B、C组始终未检测到粪肠球菌；组D于7d检测到；组E于1d检测到。SEM下可以观察到D组及E组的根尖周粪肠球菌生物膜。结论： 1.粪肠球菌感染根管体外模型，经组织学切片后Brown&Brenn染色。结果证实在粪肠球菌接种于髓腔中21天后，可形成粪肠球菌感染根管。 2.本离体实验显示，根管预备与根尖周生物膜的产生为正相关非必要关系。对于粪肠球菌感染根管，在根管及根管下段未受干扰的情况下，细菌不会轻易穿出根尖孔，当根管下段受到干扰后，细菌会穿出根尖孔并形成根尖生物膜。收起

关键词 : 粪肠球菌细菌感染根尖细菌渗漏体外细菌生物膜

7. 白令海北部浮游细菌及表层沉积物细菌的系统发育多样性分析

[学位论文] 邹扬厦门大学 2009年硕士导师: 郑天凌;曾胤新共99页

摘要 : 本研究结合变性梯度凝胶电泳(DGGE)技术、克隆文库技术和限制酶切片段长度多态性(RFLP)等分子生物学手段，首次对白令海北部底、表层水体以及表层沉积物中的细菌群落结构进行比较与分析，并利用Bandscan及多样性指数对该区域浮游细菌及表层沉积物细菌... 展开本研究结合变性梯度凝胶电泳(DGGE)技术、克隆文库技术和限制酶切片段长度多态性(RFLP)等分子生物学手段，首次对白令海北部底、表层水体以及表层沉积物中的细菌群落结构进行比较与分析，并利用Bandscan及多样性指数对该区域浮游细菌及表层沉积物细菌的生物多样性进行评估，取得了以下主要结果： 1.通过PCR-DGGE分析，发现白令海北部底、表层海水中的细菌生物多样性水平总体较高，而且底层水体中细菌多样性指数及丰度明显高于表层水体；St. Lawrence岛北部7个站位的表层和底层水样，其丰度和多样性指数平均值低于南部区域；采样深度大于100m的3个站位的底层水样，其多样性指数随着深度的增加出现递增现象。获得的36条DGGE条带，其序列除了有2条属于环境样品中的未知菌群以外，涵盖了以Proteobacteria和Actinobacteria为主的6个门。其中，gamma-Proteobacteria和alpha-Proteobacterium分别以25.0％和22.2％占据优势地位。另外还包括：Actinobacteria(16.70％)，Cyanobacteria(11.1％)，delta-Proteobacteria(5.6％)，beta-Proteobacteria(2.8％)，Firmicutes(5.6％)，Bacteroidetes(2.8％)和Verrucomicrobia(2.8％)。其中83.3％的序列与GenBank数据库中未培养微生物的相似性很高，说明白令海北部底、表层海水中，蕴藏着丰富的未培养微生物资源。 2.对该海域19个站位沉积物样品的PCR-DGGE分析表明，白令海北部表层沉积物中的细菌多样性指数、均匀度指数以及丰度的平均值，均明显高于底、表层水样的结果。在深度大于100m的几个站位中，.DBSA站位的多样性指数及均匀度指数均为最大，而DBSE和DBS1站位的丰度值则在沉积物的19个站位中处于最高。获得的37条DGGE条带，有56.8％属于Proteobacteria，其中delta-Proteobacteria(32.4％)与gamma-Proteobacteria(18.9％)占据优势地位。此外还有：Bacteroidetes(13.5％)，Actinobacteria(8.1％)，Acidobacteria(8.10％)和Cyanobacteria(2.7％)。另有10.8％的序列属于环境样品中的未知菌群。 3.构建了NEC5、DBSE和DBS1三个站位表层沉积物细菌的16S rDNA文库，发现其涵盖了包括Proteobacteria和Acidobacteria等在内的10-13个门。具体包括：alpha-，beta-，gamma-，delta-和epsilon-Proteobacteria，Acidobacteria，Bacteroidetes，Actinobacteria，Planctomycetes，Nitrospirae，Verrucomicrobia，Chloroflexi，Firmicutes，Chlorobi bacterium.Gemmatimonadetes，Cyanobacterium，Fibrobacteres和Spirochaetes等。在表层沉积物中最丰富的微生物类群为Proteobacteria，约占所有克隆子的一半。其中delta-Proteobacteria在3个站位中均为优势类群，其次是gamma-Proteobacteria和Acidobacteria。所测序列与GeneBank中已知细菌序列的相似性在84.1-99.8％，其中41％的序列同源性≤95％，说明该海域沉积物环境中蕴藏着丰富的未知微生物资源。与白令海沉积物细菌具有较近亲缘关系的序列，有99.8％都来自不可培养的细菌。收起

关键词 : 白令海 rDNA文库细菌多样性浮游细菌沉积物细菌

8. 基于介电泳与电阻抗技术的细菌检测技术研究

[学位论文] 张志伟天津科技大学 2020年硕士导师: 周卫斌共78页

摘要 : 细菌的即时检测技术(PointofCareTesting，POCT)是细菌检测的重要研究目标，也是一大难点。基于电阻抗技术的检测方法因其非标记、灵敏度高、操作简单等优势，有望实现POCT。但目前多数研究都只对被测细菌细胞的大小实现了区分，对于不同细菌的形状和... 展开细菌的即时检测技术(PointofCareTesting，POCT)是细菌检测的重要研究目标，也是一大难点。基于电阻抗技术的检测方法因其非标记、灵敏度高、操作简单等优势，有望实现POCT。但目前多数研究都只对被测细菌细胞的大小实现了区分，对于不同细菌的形状和死活的检测分析研究较少。本文提出一种基于电阻抗技术对不同细菌细胞的体积、形状以及死活进行检测的方法，并结合介电泳技术对细菌细胞进行富集，从而实现一种集待测细菌细胞样本富集、计数及区分的检测技术，以实现对细菌等微生物的快速、高效的检测分析。根据以上研究目标，本文通过对介电泳与电阻抗技术的理论研究分析，搭建了软硬件检测平台，围绕核心传感器——微流控检测芯片开展研究，设计、优化了检测芯片的管道结构与电极分布，获得良好的检测性能。深入研究微流控管道流体特性与微粒在管道中姿态的变化规律，提出一种对微粒形态进行检测区分的方法;设计多级收缩管道和共面电极，通过阻抗芯片检测、采集信号数据，以聚苯乙烯微球和SU-8微杆类比不同球形、杆形细菌，进行了区分实验;以脉冲宽度和脉冲高度参数为依据，获得了很好的区分效果(P＜0.005)，验证了该方法的有效性;进而对不同时期的酵母菌进行了检测和高效区分，当真阳性率TPR(TruePositiveRate)为～0.95时假阳性率FPR(FalsePositiveRate)仅为～0.05。深入分析微生物细胞电学模型及电阻抗检测规律，得到生物细胞与微球、生物细胞不同活性状态下电阻抗信号的差异，依据相位参数的差异，对酵母菌死活实现了区分(P＜0.01)，设计对比实验，比较分析了采用电阻抗流式分析法与传统平板培养及计数法对于样本溶液中微生物存活率的检测结果，二者相关系数大于0.96，说明电阻抗检测能够很好地实现微生物死活检测。最后，用电阻抗流式芯片对体积接近的不同种类细菌进行检测，并实现了有效的区分(P＜0.01)。系列实验结果验证了本文基于电阻抗检测芯片的方法可以实现细菌体积、形态、死活等的检测区分，具有灵敏度高、实验时间短、操作流程简单等优点，有望实现细菌细胞的现场快速检测。收起

关键词 : 细菌检测技术电阻抗介电泳细菌形状细菌死活

9. 网箱养殖沉积物中有机物降解细菌与硫氧化细菌的筛选及鉴定

[学位论文] 孟霞上海海洋大学 2010年硕士导师: 贾晓平;黄洪辉共55页

摘要 : 海水鱼类网箱养殖是一种开放式、人工营养型、高密度和集约化的科学养鱼方式，在我国经过近30年的发展，已成为广大沿海地区最重要的海水养殖产业之一。然而，海水鱼类网箱养殖方式自身又是一个对海域生态环境产生负面影响的污染源，尤其在我国浅海网... 展开海水鱼类网箱养殖是一种开放式、人工营养型、高密度和集约化的科学养鱼方式，在我国经过近30年的发展，已成为广大沿海地区最重要的海水养殖产业之一。然而，海水鱼类网箱养殖方式自身又是一个对海域生态环境产生负面影响的污染源，尤其在我国浅海网箱养殖生产过程中产生的残饵和鱼类排泄物直接沉积在网箱底部并长期积累，已导致大多数网箱养殖场生态环境出现不同程度的恶化。其中，有机污染和硫化物污染是网箱养殖环境的主要污染特征，本研究从大亚湾大鹏澳网箱养殖场沉积环境中筛选出能将残饵有机物降解和硫化物转化为硫酸盐的高效土著细菌，为进一步探索网箱养殖环境微生物原位修复技术研究，解决网箱养殖业面临的重要环境制约问题有一定的科学意义。主要研究结果如下： 1、以网箱养殖饵料（野杂鱼鱼糜）作为选择压力，通过2个月的间歇曝气选择性富集，分离出6株细菌，通过测定其对野生杂鱼鱼糜饵料有机物的降解能力，进一步筛选出4株对鱼糜饵料有机物有快速、高效降解能力的细菌，7日培养生化需氧量(BOD7)在1040～1140mg·L-1之间，5日培养化学需氧量(CODMn)去除率在13.58%～46.9%之间，有机物的可生化降解性(BOD5/COD0)在81.56%～89.43%之间。4株细菌两两组合的5日培养CODMn平均去除率为64.91±6.51%，是单株菌平均去除率(30.60±13.63%)的2倍多；而BOD5/COD0在86.10%～89.13%之间，与单株菌间没有明显差。通过部分长度16SrDNA序列分析，与GenBank和EMBL数据进行同源性检索，并结合细菌形态及生理生化特征，结果表明，有2株细菌分别隶属于表皮葡萄球菌属（Staphylococcus sp.）和盐单胞菌属(Halomonas sp.)，另2株分别与盐单胞菌属(Halomonas sp.)和假单胞菌属（Pseudomonas sp.）相近。 2、以浓度为2mg·L-1的Na2S·5H2O作为选择压力，通过2个月的间歇曝气选择性富集，分离筛选出10株能将硫化物高效转化为硫酸盐的细菌。筛选出来的细菌在浓度为5mg·L-1的硫代硫酸钠(Na2S2O3·5H2O)液体培养基中连续培养8日，pH值由最初的6.8下降到5.0以下后趋于稳定；硫化物质量浓度从最初的1280mg·L-1降到374～424mg·L-1之间，硫化物去除率在66.9%～70.8%之间；硫酸根离子的质量浓度从最初的2327mg·L-1增加到5903～6243mg·L-1，硫酸根转化率在60%以上。通过部分长度16S rDNA序列分析，与GenBank和EMBL数据进行同源性检索，并结合细菌形态及生理生化特征，结果表明，有8株细菌属于盐硫杆状菌属(Halothiobacillus sp.)，另外2株则属于食烷菌属(Alcanivorax sp.)。收起

关键词 : 海水网箱养殖有机物降解细菌硫氧化细菌细菌筛选细菌鉴定

10. 毛竹根部内生细菌多样性研究

[学位论文] 夏冬亮河北大学 2009年硕士导师: 韩继刚共63页

摘要 : 本研究采用培养方法和非培养方法（PCR-DGGE技术）对毛竹根部内生细菌和根际细菌多样性进行了研究。以天然林毛竹为样品，利用LB和KB两种培养基分离毛竹可培养根际细菌、根面细菌和根部内生细菌，结果表明毛竹根际细菌种群数量最高，其次为根面... 展开本研究采用培养方法和非培养方法（PCR-DGGE技术）对毛竹根部内生细菌和根际细菌多样性进行了研究。以天然林毛竹为样品，利用LB和KB两种培养基分离毛竹可培养根际细菌、根面细菌和根部内生细菌，结果表明毛竹根际细菌种群数量最高，其次为根面细菌和根部内生细菌。根据细菌菌落形态特征不同共分离获得186株细菌，经16SrDNA序列分析，92株根际细菌分为Firmicutes（66.3％）、Actinobacteria（18.5％）和Proteobacteria（15.2％）三个分类单元，与34个已知细菌的序列同源性高于97％；54株根面细菌分为Firmicutes（70.4％）、Actinobacteria（24.1％）和Proteobacteria（5.5％）三个分类单元，与23个已知细菌的序列同源性高于97％；40株根部内生细菌分为Firmicutes（67.5％）、Actinobacteria（22.5％）和Proteobacteria（10.0％）三个分类单元，与16个已知种的序列同源性高于97％。天然林毛竹根面细菌和根部内生细菌中均含有Gammaproteobacteria，所占比例分别为13.0％和32.5％；而毛竹根际细菌中没有分离到这一类别的细菌。天然林毛竹根际细菌、根面细菌和根部内生细菌的优势菌属分别为Bacillus（42.4％）、Bacillus（44.4％）和Burkholderia（35.0％）。以天然林和人工林毛竹为样品，采用非培养方法（PCR-DGGE技术）研究毛竹根际细菌和根部内生细菌多样性，结果表明天然林毛竹根际细菌多样性最高，其次为人工林毛竹根际细菌和天然林毛竹根部内生细菌，人工林毛竹根部内生细菌多样性最低。天然林、人工林毛竹根际细菌和根部内生细菌均包括Proteobacteria、Acidobacteria和Actinobacteria3个分类单元，各分类单元所占比例分别为：天然林毛竹根际细菌，58.8％、11.8％、29.4％；天然林毛竹根部内生细菌，66.6％、16.7％、16.7％；人工林毛竹根际细菌，63.3％、9.1％、27.3％；人工林毛竹根部内生细菌，76.9％、15.4％、7.7％。天然林毛竹根际细菌和根部内生细菌的优势菌属分别为Terriglobus（8.8％）和Microbacterium（22.8％），而人工林毛竹根际细菌和根部内生细菌的优势菌属分别为Microbacterium（17.3％）和Pelomonas（11.5％）。此外，天然林、人工林毛竹根际和根内细菌中存在着一些共有的细菌种类，也存在着一些各自特有的细菌种类。DGGE电泳回收条带中，51.9％条带的序列与GenBank中不可培养细菌的序列相似性最高，表明天然林和人工林毛竹根际、根内均具有大量的未培养细菌资源。利用传统培养方法和非培养方法（DGGE技术）研究天然林毛竹根际细菌和根部内生细菌，两种方法得到的细菌多样性信息存在显著差异。培养方法得到的毛竹根际细菌和根部内生细菌属于Proteobacteria，Actinobacteria和Firmicutes三个分类单元；而非培养方法得到的毛竹根际细菌和根部内生细菌属于Proteobacteria、Actinobacteria和Acidobacteria三个分类单元。培养方法得到的毛竹根际细菌和根部内生细菌的优势菌属分别为Bacillus（42.4％）和Burkholderia（35.0％），而非培养方法得到的毛竹根际细菌和根部内生细菌的优势菌属分别为Terriglobus（8.8％）和Microbacterium（22.8％）。但培养方法和非培养方法均得到毛竹根际细菌Microbacteriumsp.（所占比例分别为1.1％，5.5％）和根部内生细菌Pseudomonassp.（所占比例分别为17.5％，8.5％）、Pantoeasp.（所占比例分别为2.5％，6.9％）。结合两种方法能够得到更加全面准确的细菌多样性信息。收起

关键词 : 毛竹根际细菌内生细菌细菌多样性 PCR-DGGE技术