中国科学技术信息研究所--国家工程技术数字图书馆

[学位论文] 佟豪内蒙古医学院 2008年硕士导师: 王晓娟共33页

摘要 : 目的：利用肝癌细胞表面高表达转铁蛋白受体(transferrin receptor，TfR)的特点，构建转铁蛋白受体介导的Survivin反义RNA/HSP70双基因转移系统并观察其对人肝癌细胞的靶向杀伤效应。方法：用EDC法制备转铁蛋白受体抗体(即CD71抗体)与多聚左旋赖... 展开

关键词 : 介导肝癌靶向性基因转移系统构建体外

2. CNA35I型胶原靶向液气相变氟碳纳米粒的制备及体外靶向性研究

[学位论文] 曾雅琳重庆医科大学 2019年硕士导师: 陈运清共64页

摘要 : 第一部分氟碳纳米粒及CNA35靶向氟碳纳米粒的制备及基本特性检测目的：制备具有Ⅰ型胶原靶向性的液气相变氟碳纳米粒，检测其基本特性。方法：以脂质材料作为外壳，中间包裹相变材料液态氟碳PFP,采用薄膜水化法和声振法制备... 展开第一部分氟碳纳米粒及CNA35靶向氟碳纳米粒的制备及基本特性检测目的：制备具有Ⅰ型胶原靶向性的液气相变氟碳纳米粒，检测其基本特性。方法：以脂质材料作为外壳，中间包裹相变材料液态氟碳PFP,采用薄膜水化法和声振法制备相变型氟碳纳米粒，检测其形态、分布、粒径和表面电位，筛选出制备纳米粒的最佳条件；通过碳二亚胺法连接Ⅰ型胶原特异性抗体CNA35和氟碳纳米粒，制备可特异性结合Ⅰ型胶原的靶向氟碳纳米粒（ CNA35-Perfluoropentane nanoparticles,CNA35-PFP NPs）,并检测其基本特性，激光共聚焦显微镜定性观察、流式细胞仪定量分析其连接率。结果： PFP和脂质悬液以1∶20的比例，进行2次脉冲声振制备的PFP NPs和CNA35-PFP NPs大小均匀、分散性好，纳米粒溶液呈乳白色，光学显微镜及荧光显微镜下观察到纳米粒呈球形或点状，透射电镜显示纳米粒的粒径约250nm。Malvern激光粒径电位仪检测出PFP NPs 和 CNA35-PFP NPs 的粒径分别为（ 255.86±3.13 ） nm 和（295.62±4.19）nm，表面电位分别为（-1.73±0.46）mV和（1.79±0.13） mV；激光共聚焦显微镜观察到代表CNA35的绿荧光和代表PFP NPs的红荧光能够有效结合；流式细胞仪结果显示CNA35和PFP NPs有较高的连接率，约86%。结论：成功制备出符合条件的氟碳纳米粒（PFP NPs）及CNA35靶向氟碳纳米粒（CNA35-PFP NPs），CNA35是Ⅰ型胶原特异性抗体，为后续心肌纤维化体外寻靶实验奠定了基础。第二部分 CNA35靶向氟碳纳米粒的体外相变及超声成像研究目的：制备一种新型的液-气相变型靶向Ⅰ型胶原氟碳纳米粒CNA35-PFP NPs ，通过体外实验探讨加热及低功率聚焦超声（ Low intensity focused ultrasound,LIFU）辐照促使这种新型靶向氟碳纳米粒发生液-气相变的适宜条件，并用诊断超声观察其显影情况。方法：不同温度（37℃、40℃、45℃和50℃）分别水浴加热纳米粒 1min、5 min、10 min ，用光学显微镜及诊断超声观察制备的CNA35-PFP NPs发生相变的情况；用LIFU不同功率（1W/cm2、2W/cm2、3W/cm2、4W/cm2）分别辐照纳米粒1min、2min、3min 、4min后观察纳米粒光学显微镜下发生液气相变的情况及体外超声成像效果；通过加热和超声能量促使CNA35-PFP NPs发生液气相变，从中探讨引发相变的最佳条件。结果：加热和LIFU辐照都能引起CNA35-PFP NPs 发生相变。在未加热及LIFU辐照前，100倍显微镜下难以观察到纳米粒。随着水浴加热温度及时间的延长，镜下可观察到愈加明显的纳米粒相变，纳米粒的数量增多，体积增大，同时可明显增强超声显影；此外，一定功率的LIFU辐照后也可促使纳米粒发生相变并能增强超声显影（p＜0.05），我们观察到辐照强度为3W/cm2，时间为3min时纳米粒超声成像效果最佳。结论：本实验所制备的CNA35-PFP NPs通过加热或一定功率的LIFU辐照均可发生液气相变，增强超声显影，为将来心肌纤维化的诊断及治疗奠定了基础。第三部分 CNA35 Ⅰ型胶原靶向氟碳纳米粒的体外寻靶，超声成像效果及半定量分析目的：探讨CNA35靶向氟碳纳米粒（CNA35-PFP NPs）对心肌Ⅰ型胶原的体外寻靶能力，并作半定量分析。方法：分别制备心肌梗死兔模型及正常兔模型心肌组织冰冻切片（ 10μm ），各5组。用异硫氰酸荧光素（ FITC ）标记CNA35得到FITC-CNA35。采用FITC-CNA35对梗死组和对照组冰冻切片进行染色，通过激光共聚焦显微镜进行观察，并采集图片。将同一张冰冻切片进行天狼星红（PSR）染色，光学显微镜采集图像，与FITC-CNA35染色的图像进行对比，以验证 CNA35 对胶原纤维的靶向能力；将FITC-CNA35用碳二亚胺法与PFP NPs连接，得到带荧光的CNA35靶向氟碳纳米粒（ FITC-CNA35-PFP NPs ）。采用FITC-CNA35-PFP NPs和DNA荧光染料（DAPI）对两组冰冻切片进行染色，在激光共聚焦显微镜下观察染色结果，并采集图片，与梗死组和正常组心肌组织病理切片染色进行对比，包括苏木精-伊红（HE）染色、马松（Masson）染色、PSR染色。应用分析软件ImageJ对Masson染色、PSR染色及荧光染色图像中胶原纤维百分比进行半定量分析，以验证CNA35-PFP NPs的体外寻靶能力。结果：在梗死组荧光图像中可观察到大量绿色荧光，而正常组未见明显绿色荧光，显示绿色荧光的部位与PSR染色胶原纤维的部位基本一致；FITC-CNA35-PFP NPs和DAPI染色结果与HE、Masson、PSR染色结果对比发现，绿色荧光所代表的CNA35-PFP NPs能够大量聚集在胶原纤维丰富区域，通过半定量分析可得到一致结果。结论： CNA35-PFP NPs能够与心肌Ⅰ型胶原纤维结合，并随着心肌胶原纤维沉积而大量聚集，因此，CNA35-PFP NPs具有良好的体外靶向能力，可为后续体内靶向能力的研究提供基础。收起

关键词 : 氟碳纳米粒靶向性 LIFU辐照体外靶向性半定量分析

3. 靶向干扰Akt对耐顺铂人卵巢癌细胞系SKOV3/DDP细胞体外生长的研究

[学位论文] 刘俊丽南昌大学医学院 2014年硕士导师: 谭布珍共47页

摘要 : 目的: 通过siRNA靶向沉默Akt基因,探讨其对卵巢癌细胞系SKOV3/DDP细胞生长的影响作用,为卵巢癌的基因治疗,提供新的实验依据。方法: 1、采用Lipofectamine2000脂质体介导法将特异性的Akt siRNA转染入人卵巢癌SKOV3/DDP细胞,检测siRNA... 展开目的: 通过siRNA靶向沉默Akt基因,探讨其对卵巢癌细胞系SKOV3/DDP细胞生长的影响作用,为卵巢癌的基因治疗,提供新的实验依据。方法: 1、采用Lipofectamine2000脂质体介导法将特异性的Akt siRNA转染入人卵巢癌SKOV3/DDP细胞,检测siRNA靶向沉默Akt后对卵巢癌细胞生长的影响。 2、用转染试剂 Lipofectamine2000包裹不同浓度荧光标记的 siRNA(FAM-siRNA)转染SKOV3/DDP细胞,采用流式细胞仪检测其转染效率,确定siRNA最佳转染浓度。 3、筛选有效Akt siRNA片段,实验分为5组:①空白对照组(control)②Akt siRNA-1③ Akt siRNA-2④Akt siRNA-3⑤阴性对照组(Negative Control, NC)。转染48h后,用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测各组Akt mRNA的表达情况,筛选出Akt siRNA片段。 4、Akt siRNA片段转染到卵巢癌SKOV3/DDP细胞后对细胞生长的影响。将筛选出的Akt siRNA片段经Lipofectamine2000转染到卵巢癌SKOV3/DDP细胞,实验分3组:①空白对照组(control)②Akt siRNA转染组③阴性对照组(Negative Control,NC)。 5、转染48h后,采用流式细胞仪分别检测各组的细胞周期、细胞的凋亡变化;CCK8法检测细胞的增殖活性;Western Blot法检测Akt及p-Akt蛋白的表达水平。结果: 1、Lipofectamine2000分别包裹50nM、80nM、100nM的FAM-siRNA转染SKOV3/DDP细胞6h后,流式细胞仪检测结果示:转染效率都在80%以上,考虑lipo2000对细胞的毒害作用,siRNA为50nM时转染效率最佳。 2、转染48h后,qRT-PCR检测各组Akt mRNA的表达情况示:3个siRNA片段组Akt mRNA的表达水平与control组、NC组比较,表达水平明显下调,差异有统计学意义(P<0.05),其中siRNA-2片段降低Akt mRNA的表达最显著。NC组与control组相比,无明显差异(P>0.05)。本实验选取siRNA片段Ⅱ作为有效的siRNA片段。 3、转染48h后,采用流式细胞仪检测各组的细胞周期,结果示:Akt siRNA转染组G0/G1期所占比例与control组、NC组比较明显上调,S期、G2/M期所占比例与control组、NC组比较,各期所占比例明显下调,差异均具有统计学意义(P<0.05),NC组与control组比较,无明显差异(P>0.05)。 4、转染48h后,采用流式细胞仪检测各组的细胞凋亡,结果示:Akt siRNA转染组的早、晚期凋亡率,与control组及NC组相比,其凋亡率明显增高,差异有统计学意义(P<0.05),NC组和control组相比,无明显差异(P>0.05)。 5、转染24h、48h、72h后,CCK-8结果示:随着时间推移,Akt siRNA特异性转染组细胞生长明显受限,抑制率相应升高,转染后72h,细胞生长受到最明显的抑制,NC组与control组相比,细胞生长程度无明显改变。 6、转染48h后,Western Blot法结果示:Akt siRNA特异性转染组Akt、p-Akt的蛋白表达,与control组、NC组相比,明显降低蛋白表达水平,差异有显著性(P<0.05),NC组和control组相比,差异不显著。结论: 1、siRNA沉默Akt基因,下调Akt mRNA的表达,可有效抑制SKOV3/DDP细胞的生长。 2、siRNA沉默Akt基因能明显抑制人卵巢癌SKOV3/DDP细胞的增殖活性,阻滞细胞周期在G0/G1期,并且下调Akt在SKOV3/DDP细胞中蛋白的表达,其抑制机制可能与敲除PI3K/Akt信号通路中Akt基因,阻断其对下游多种效应分子的活化,促进细胞凋亡有关。 3、siRNA特异性沉默人卵巢癌SKOV3/DDP细胞中Akt基因,抑制该肿瘤细胞的生长,有望成为卵巢癌基因治疗的新靶点。收起

关键词 : 卵巢癌细胞凋亡体外生长耐顺铂性靶向干扰

4. 以叶酸-BSA为载体的靶向性钆造影剂的制备及其体外弛豫和细胞摄取研究

[学位论文] 龙娜华中科技大学 2007年硕士导师: 项光亚共76页

摘要 : 随着肿瘤病例的极速增加，肿瘤的早期诊断就变得尤为重要。磁共振成像技术就是一种临床上常用的肿瘤诊断技术。目前，临床上应用的大部分磁共振造影剂（包括常用的钆类造影剂）对肿瘤组织并无特异性的靶向作用，因而降低了造影效果。因此，磁共振成像... 展开随着肿瘤病例的极速增加，肿瘤的早期诊断就变得尤为重要。磁共振成像技术就是一种临床上常用的肿瘤诊断技术。目前，临床上应用的大部分磁共振造影剂（包括常用的钆类造影剂）对肿瘤组织并无特异性的靶向作用，因而降低了造影效果。因此，磁共振成像技术应用于肿瘤诊断的关键在于研发靶向性的磁共振造影剂以提高肿瘤定位能力，并增强检测的灵敏性和准确性。叶酸-叶酸受体靶向就是近来备受关注的新型抗肿瘤机制，它是利用叶酸受体在某些肿瘤部位过度表达、而在正常组织中低水平表达的特征而实现叶酸偶联药物的靶向输送。基于叶酸受体的表达特征和叶酸配体的独特优势，叶酸受体已成为肿瘤诊断和治疗的理想靶点。本文结合叶酸介导靶向输送的理念和磁共振造影成像的安全性与灵敏性，设计合成了叶酸介导的靶向性钆造影剂—叶酸-BSA-(Gd-DTPA)n。首先运用正交设计实验优化了牛血清白蛋白（BSA）与二乙三胺五乙酸环酸酐（cDTPAA）的偶联条件。接着在最佳条件的反应介质中，叶酸活化酯与BSA 反应生成叶酸-白蛋白偶联物，该偶联物再与DTPA的酸酐反应，最后与氯化钆进行螯合并经SephadexG-25 分离纯化制得叶酸-BSA-(Gd-DTPA)n。通过紫外光谱法对造影剂的结构进行了鉴定，并定量测定了造影剂中叶酸、Gd-DTPA对BSA的偶联率。通过测定造影剂的体外弛豫时间T1，进一步分析其弛豫性能R1。用异硫氰酸荧光素（FITC）对造影剂进行荧光标记，以叶酸受体阳性的KB、HeLa细胞和叶酸受体阴性的A549细胞为模型细胞，通过倒置荧光显微镜定性观察，研究了细胞对造影剂的特异性摄取作用；同时也通过钆含量的测定来分析细胞的摄取情况。结果表明，叶酸-BSA-(Gd-DTPA)n 造影剂中，叶酸对BSA的偶联比约为5，Gd-DTPA的偶联比随着酸酐投量的增加而增大；体外弛豫性能R1 约为6×10-3L·mmoL-1 ms-1，与未偶联叶酸的BSA-(Gd-DTPA)n的弛豫性能无显著性差异，但比小分子Gd-DTPA的弛豫性能提高了2 倍左右。在细胞摄取实验中，荧光标记的叶酸-BSA-(Gd-DTPA)n 在叶酸受体阳性细胞KB和HeLa的胞浆内有明亮的荧光，荧光强度随着加入的游离叶酸浓度的增大而减弱，而在叶酸受体阴性的A549细胞中荧光很弱；未偶联叶酸的BSA-(Gd-DTPA)n 在三种细胞中荧光都很弱。在细胞摄取的影响因素实验中发现，随着培养时间的延长、给药浓度的增大，KB细胞中的荧光强度增强，但有饱和性；当蛋白上偶联的Gd-DTPA数目过大时，会因结合位阻增大而荧光减弱。钆含量的测定结果也初步显示了KB细胞与偶联叶酸的造影剂之间的特异性作用。总之，本文制备的大分子造影剂—叶酸-BSA-(Gd-DTPA)n 具有高弛豫性能和靶向叶酸受体阳性细胞的特异性。收起

关键词 : 靶向性钆造影剂磁共振成像体外弛豫细胞摄取

5. 携抗PSMA 多肽的超声-磁共振双模态靶向造影剂诊断前列腺癌的实验研究

[学位论文] 朱云开上海交通大学 2016年博士导师: 陈亚青共128页

摘要 : 目的：研发以前列腺癌细胞表面表达的PSMA为靶点的超声－磁共振双模态靶向造影剂。方法：通过改良的双乳化方法制备携抗PSMA多肽超声-磁共振双模态靶向造影剂。通过表征分析、体外靶向实验、体外成像实验及体外细胞毒性实验来研究携抗PSMA多肽超... 展开目的：研发以前列腺癌细胞表面表达的PSMA为靶点的超声－磁共振双模态靶向造影剂。方法：通过改良的双乳化方法制备携抗PSMA多肽超声-磁共振双模态靶向造影剂。通过表征分析、体外靶向实验、体外成像实验及体外细胞毒性实验来研究携抗PSMA多肽超声-磁共振双模态靶向造影剂的稳定性、靶向性、双模态显像能力及安全性。在动物体内成像实验中，首先通过体内成像明确造影剂的最佳剂量。在磁共振—超声双模态靶向显像实验中，对前列腺癌荷瘤裸鼠在注射造影剂前及注射后不同时间段行磁共振T2加权成像，分析并比较不同组裸鼠皮下移植瘤的肿瘤相对增强强度（RSE）。在注射造影剂后即刻行超声成像，分析并比较不同组裸鼠皮下移植瘤的造影剂到达时间（AT）、达峰时间（TTP）及峰值强度（PI）。并进一步通过体内实验研究造影剂的体内生物分布及安全性。结果：携抗PSMA多肽超声-磁共振双模态靶向造影剂平均粒径为415 nm，Zeta电位为-6.11mV，呈球形，分布均匀，无明显团聚现象，成功包裹 Fe3O4纳米粒，具有超顺磁性。在体外靶向实验中，携抗PSMA多肽超声-磁共振双模态靶向造影剂能与LNCaP细胞靶向结合。造影剂在超声下表现为高回声，在磁共振T2加权成像上表现为低信号，在体外细胞实验中造影剂对细胞无明显细胞毒性。体内成像实验确定造影剂的最佳浓度为12mg/ml，在体内磁共振靶向成像实验中，LNCaP荷瘤裸鼠在注射该浓度携抗 PSMA多肽的超声－磁共振双模态靶向造影剂后肿瘤内T2信号明显降低，注射后2小时、6小时12小时及24小时RSE值分别为41.0±1.9%、28.2±6.5%、21.4±5.0%及16.2±3.6，明显高于对照组。LNCaP荷瘤裸鼠在注射携抗 PSMA多肽的超声－磁共振双模态靶向造影剂后肿瘤超声增强 PI值为8.9±1.7dB，明显高于对照组(5.6±1.7dB、6.9±1.2dB及7.0±1.4，P<0.05)。普鲁士蓝染色证实造影剂与肿瘤组织的靶向结合。造影剂在静脉注射后主要被网状内皮系统所摄取，对裸鼠的主要脏器无明显毒性。结论：携抗PSMA多肽的超声－磁共振双模态靶向造影剂能通过与前列腺癌细胞表面的PSMA靶向结合特异增强前列腺癌的超声及磁共振图像。第一篇：携抗PSMA多肽超声－磁共振双模态靶向造影剂的制备及体外实验第一部分：携抗PSMA多肽超声－磁共振双模态靶向造影剂的制备与表征分析目的：研发以前列腺癌细胞表面表达的PSMA为靶点的超声－磁共振双模态靶向造影剂。材料与方法：通过改良的双乳化方法制备携抗PSMA多肽超声-磁共振双模态靶向造影剂（Fe3O4/Polypeptide-PLGA MNBs）。采用动态激光散射仪分析携抗 PSMA多肽超声－磁共振双模态靶向造影剂的粒径分布及Zeta电位，采用透射电镜、扫描电镜及光学显微镜分析造影剂的形态结构及分散情况，通过X射线衍射、能量色散X射线谱及原子吸收光谱分析造影剂的构成，采用振动样品磁强计分析造影剂的磁性特征。结果：动态激光散射仪分析显示造影剂平均粒径为415±11.4 nm，聚合物分散指数为0.142，Zeta电位为-6.11mV，造影剂放置七天后粒径分布无显著变化。透射电镜、扫描电镜及光学显微镜显示造影剂形态呈球形，分布均匀，无明显团聚现象，高分辨率透射电镜可见造影剂中 Fe3O4纳米粒均匀分布。X射线衍射、能量色散X射线谱证实造影剂中成功包裹Fe3O4纳米粒，原子吸收光谱分析测得造影剂中铁含量为12.8ug/mg。振动样品磁强计分析显示造影剂具有超顺磁性。结论：本研究成功制备了用于前列腺癌靶向成像的携抗PSMA多肽的超声-磁共振双模态靶向造影剂，表征分析结果显示该造影剂的理化特性符合超声/磁共振双模态显影的要求。第二部分：携抗PSMA多肽超声－磁共振双模态靶向造影剂的体外靶向性实验目的：研究携抗PSMA多肽超声－磁共振双模态靶向造影剂的体外靶向性。材料与方法：通过免疫荧光实验验证造影剂配体K(FITC)]CQ[K(Dde)]HHNYLC与前列腺癌LNCaP细胞的靶向结合。在进一步的造影剂靶向结合实验中，我们将实验分为以下四组：LNCaP细胞+携抗PSMA多肽超声－磁共振双模态靶向造影剂、LNCaP细胞+普通超声-磁共振双模态造影剂、抗体封闭的LNCaP细胞+携抗PSMA多肽超声－磁共振双模态靶向造影剂以及PC3细胞+携抗PSMA多肽超声－磁共振双模态靶向造影剂。分别通过普鲁士蓝染色、细胞磁共振实验、花环形成实验及免疫荧光实验来研究造影剂的靶向性。结果：免疫荧光实验证实了多肽K(FITC)]CQ[K(Dde)]HHNYLC能与前列腺癌LNCaP细胞靶向结合。在造影剂靶向结合实验中，普鲁士蓝染色发现LNCaP细胞与携抗PSMA多肽超声－磁共振双模态靶向造影剂孵育后细胞周围出现蓝染颗粒，而对照组及竞争组细胞周围无蓝染颗粒。细胞磁共振实验发现LNCaP细胞与携抗PSMA多肽超声－磁共振双模态靶向造影剂孵育后其磁共振T2加权成像SNR值为 624.6±18.7，明显低于对照组及竞争组(818.6±23.3、814.4±10.9、790.2±23.7，P<0.05)。免疫荧光及花环形成实验发现LNCaP细胞能与携抗PSMA多肽超声－磁共振双模态靶向造影剂靶向结合，而对照组细胞与造影剂无靶向结合。结论：我们所合成的携抗PSMA多肽超声－磁共振双模态靶向造影剂在体外能与前列腺癌LNCaP细胞表达的PSMA特异结合。第三部分：携抗PSMA多肽超声－磁共振双模态靶向造影剂的体外成像实验目的：研究携抗PSMA多肽超声－磁共振双模态靶向造影剂的体外超声/磁共振显像性。材料与方法：配置不同浓度梯度的携抗PSMA多肽超声－磁共振双模态靶向造影剂，同时以去离子水作为阴性对照。采用灰阶成像模式研究造影剂的回声强度。通过磁共振T2加权成像研究造影剂的磁共振显影能力，并采用Carr–Purcell–Meiboom–Gill序列测定不同浓度造影剂的横向弛豫时间（T2），研究造影剂中铁浓度与1/T2的关系，并计算得出造影剂的横向弛豫率R2。结果：携抗PSMA多肽超声－磁共振双模态靶向造影剂在灰阶超声模式下均表现为高回声，且其回声强度随造影浓度升高而升高，而去离子水则表现为无回声。在磁共振T2加权成像上，携抗PSMA多肽超声－磁共振双模态靶向造影剂表现为低信号，且其信号随造影剂浓度升高而减低，去离子水表现为高信号。造影剂中铁浓度与1/T2呈正比，造影剂的横向弛豫率R2为46.58 mM-1s-1。结论：我们所合成的携抗PSMA多肽超声－磁共振双模态靶向造影剂在体外具有双模态显影能力。第四部分：携抗PSMA多肽超声－磁共振双模态靶向造影剂的体外细胞毒性实验目的：研究携抗PSMA多肽超声－磁共振双模态靶向造影剂的体外细胞毒性。材料与方法：分别将不同浓度梯度的造影剂与前列腺癌LNCaP及PC3细胞孵育24小时、48小时及72小时。孵育后采用MTT法测定细胞的细胞活性。结果：不同浓度的携抗PSMA多肽超声－磁共振双模态靶向造影剂与PC3细胞及LNCaP细胞孵育后，细胞活性均大于90%。且随着实验细胞与造影剂孵育时间的延长，细胞活性无明显改变（图3-1）。经方差分析，各组之间的细胞活性无显著差异（P>0.05）。结论：携抗PSMA多肽超声－磁共振双模态靶向造影剂无明显细胞毒性。第二篇：携抗PSMA多肽超声－磁共振双模态靶向造影剂的体内实验第一部分：携抗PSMA多肽的超声－磁共振双模态靶向造影剂的体内最佳成像浓度筛选目的：研究携抗PSMA多肽的超声－磁共振双模态靶向造影剂的体内成像最佳浓度。材料与方法：分别对LNCaP荷瘤裸鼠注射不同浓度的携抗PSMA多肽的超声-磁共振双模态靶向造影剂，在注射造影剂前及注射后2小时、6小时及12小时行磁共振T2加权成像，分析并比较注射不同浓度造影剂后裸鼠皮下移植瘤的相对增强强度（RSE）。采用磁共振体内成像实验所得的最佳浓度对LNCaP荷瘤裸鼠行超声造影检查，评估该浓度的体内超声成像效果。结果：LNCaP荷瘤裸鼠在注射携抗PSMA多肽的超声-磁共振双模态靶向造影剂后肿瘤内磁共振T2信号减低，浓度为12mg/ml的携抗PSMA多肽的超声－磁共振双模态靶向造影剂磁共振增强效果最佳，注射后2小时、6小时及12小时RSE值分别为19.9±3.4%、34.3±3.6%及30.9±1.4%。体内超声成像实验发现注射浓度为12mg/ml的双模态靶向造影剂后裸鼠皮下移植肿瘤呈均匀的高增强。结论：裸鼠体内磁共振的增强效果与携抗PSMA多肽的超声－磁共振双模态靶向造影剂浓度相关，浓度为12mg/ml的造影剂体内磁共振及超声成像效果俱佳。第二部分：携抗PSMA多肽的超声－磁共振双模态靶向造影剂的体内靶向成像实验目的：研究携抗PSMA多肽的超声－磁共振双模态靶向造影剂的体内超声/磁共振双模态靶向显像能力。材料与方法：在体内超声/磁共振双模态靶向显像实验中，我们将实验动物分为以下四组：LNCaP荷瘤裸鼠注射携抗PSMA多肽的超声-磁共振双模态靶向造影剂，LNCaP荷瘤裸鼠注射普通超声-磁共振双模态造影剂，抗体封闭的LNCaP荷瘤裸鼠注射携抗PSMA多肽的超声-磁共振双模态靶向造影剂，PC3荷瘤裸鼠注射携抗PSMA多肽的超声－磁共振双模态靶向造影剂。在注射造影剂前及注射后2小时、6小时、12小时及24小时行磁共振T2加权成像，分析并比较裸鼠皮下移植瘤的肿瘤相对增强强度（RSE）。在注射造影剂后即刻行超声成像，分析并比较裸鼠皮下移植瘤的造影剂到达时间（AT）、达峰时间（TTP）及峰值强度（PI）。完成靶向成像后将裸鼠行安乐死，收集裸鼠肿瘤，通过病理检查研究肿瘤镜下形态、PSMA表达情况及与造影剂靶向结合情况。结果：磁共振成像发现LNCaP荷瘤裸鼠在注射双模态靶向造影剂后肿瘤内T2信号明显降低，注射后2小时、6小时、12小时及24小时的RSE值分别为41.0±1.9%、28.2±6.5%、21.4±5.0%及16.2±3.6，明显高于对照组及竞争组（P<0.05），RSE在注射造影剂后2小时达到峰值。在体内超声成像实验中，LNCaP荷瘤裸鼠在注射携抗PSMA多肽的超声－磁共振双模态靶向造影剂后肿瘤PI值为8.9±1.7dB，明显高于三组对照组（5.6±1.7dB、6.9±1.2dB及7.0±1.4，P<0.05），四组之间的造影剂AT及TTP无显著差异。病理HE染色结果显示所有肿瘤均未见到明显的出血坏死。免疫组化染色证实了LNCaP移植瘤表达PSMA而PC3移植瘤不表达PSMA。病理普鲁士蓝染色发现LNCaP荷瘤裸鼠在注射携抗PSMA多肽的超声－磁共振双模态靶向造影剂后肿瘤组织内可见蓝染颗粒，而三组对照组在注射造影剂后肿瘤组织内未见到明显蓝染颗粒。结论：携抗PSMA多肽的超声－磁共振双模态靶向造影剂能通过与PSMA靶向结合来特异性增强前列腺癌组织的超声及磁共振成像图像。第三部分：携抗PSMA多肽的超声－磁共振双模态靶向造影剂的体内生物分布研究目的：研究携抗PSMA多肽的超声－磁共振双模态靶向造影剂的体内生物分布。材料与方法：采用电感耦合等离子体原子发射光谱法(inductively coupled plasma atomic emission spectroscopy，ICP-AES)技术检测裸鼠在注射携抗PSMA多肽的超声－磁共振双模态靶向造影剂前及注射后2小时、6小时、12小时及24小时各主要脏器的铁元素含量。在裸鼠注射携抗PSMA多肽的超声－磁共振双模态靶向造影剂前及注射后2小时、6小时、收起

关键词 : 前列腺癌 PSMA蛋白超声造影剂磁共振造影剂体外靶向性

6. 载99m锝靶向前列腺癌纳米金胶囊的构建及其体外实验研究

[学位论文] 陈飞华中科技大学 2013年硕士导师: 赵明共63页

摘要 : 目的:构建载99mTc靶向前列腺癌的纳米金胶囊,评估其对人前列腺癌PC-3细胞的体外靶向性及细胞毒性。方法:通过两步还原反应制得中空的纳米金胶囊:首先用纳米钴粒子还原氯金酸,然后以硼氢化钠还原氯金酸;将99mTc包裹于中空的纳米金胶囊(GoldHollo... 展开目的:构建载99mTc靶向前列腺癌的纳米金胶囊,评估其对人前列腺癌PC-3细胞的体外靶向性及细胞毒性。方法:通过两步还原反应制得中空的纳米金胶囊:首先用纳米钴粒子还原氯金酸,然后以硼氢化钠还原氯金酸;将99mTc包裹于中空的纳米金胶囊(GoldHollowNanocapsules,GHNCs)中,然后通过与FA-PEG-SH反应制备出FA-PEG-GHNCs-99mTc。然后进行:(1)FA-PEG-GHNCs-99mTc的表征测定:分别用透射电子显微镜、扫描电子显微镜观察纳米粒子的形态、表面形貌。(2)放射性配体结合试验计算出Kd及Bmax:采用含不同浓度FA-PEG-GHNCs-99mTc(0.1nM、1nM、10nM、20nM、40nM、60nM、80nM、100nM)的细胞培养液作用于人前列腺癌细胞PC-3,待2h后弃旧培养基、PBS清洗、胰酶消化细胞后测定γ计数。(3)MTT法检测其对前列腺癌细胞PC-3的细胞毒性:培养液中加入含不同浓度的(1nM、10nM、20nM、40nM、60nM、80nM、100nM)的FA-PEG-GHNCs-99mTc溶液,并计算各组细胞的相对增殖率(RGD)值。(4)流式细胞术检测不同浓度的FA-PEG-GHNCs-99mTc溶液是否诱导PC-3细胞凋亡:分为对照组与实验组(20nM、40nM、80nM),共培养24h后,消化、离心、重悬,加入AnnexinV/PI试剂,以流式细胞仪分析样品。结果:1.结合试验数据输入GraphPadPRISM5.0处理后得到平均Kd值为39.42nM,Bmax值为2202。2.PC-3细胞与不同浓度的FA-PEG-GHNCs-99mTc共培养24h后的细胞相对增值率(RGR)分别为105.174%、103.487%、105.999%、99.587%、90.251%、84.217%、80.278%。细胞毒性等级分别为0级、0级、0级、0级、Ⅰ级、Ⅰ级、Ⅰ级。3.PC-3细胞凋亡率(早期细胞凋亡率+晚期细胞凋亡率)分别为8.97%±1.71%、9.71%±3.50%、10.37%±3.64%,与对照组细胞凋亡率9.28%±2.79%相比较,无显著性差异。结论:本研究合成的FA-PEG-GHNCs-99mTc纳米金胶囊成功地与人前列腺癌PC-3细胞表面的叶酸受体结合,拥有很好的靶向性;其在较低浓度条件下对PC-3细胞无明显毒性,也未引起细胞凋亡,具有良好的生物相容性。因此,在肿瘤靶向药物运载和肿瘤靶向显像,具有广阔的应用前景,为后期实施SPECT/CT显像引导多功能金纳米胶囊体外控释靶向治疗前列腺癌奠定基础。收起

关键词 : 列腺癌纳米金胶囊 PC-3细胞体外靶向性细胞毒性

7. HBsAg修饰的阳离子型丁香苦苷PEG-PLGA纳米给药系统的研究

[学位论文] 陈晓莉黑龙江中医药大学 2014年硕士导师: 李永吉共84页

摘要 : 本实验的目的是研究乙型肝炎表面抗原(HBSAg)修饰的阳离子型丁香苦苷PEG-PLGA纳米粒的肝靶向性。本论文将进行HBSAg修饰的阳离子型丁香苦苷PEG-PLGA纳米给药系统的制备、纳米形态特征、体外释药特征以及肝靶向性的研究。具体内容如下： 1.阳离子... 展开本实验的目的是研究乙型肝炎表面抗原(HBSAg)修饰的阳离子型丁香苦苷PEG-PLGA纳米粒的肝靶向性。本论文将进行HBSAg修饰的阳离子型丁香苦苷PEG-PLGA纳米给药系统的制备、纳米形态特征、体外释药特征以及肝靶向性的研究。具体内容如下： 1.阳离子型PEG-PLGA空白纳米粒的制备方法研究。本章采取三种方法进行阳离子型PEG-PLGA空白纳米粒的制备，且制备过程中采用了三种不同的外水相，并对制备好的纳米粒进行表征考察，最终优选出的方法为双乳化溶剂蒸发法，且外水相为CTAB与吐温80的水溶液，制得的粒子表面电位为+45mV左右，平均粒径都在70nm左右。 2.HBSAg修饰的阳离子型丁香苦苷PEG-PLGA纳米粒的制备。采用双乳化溶剂蒸发法制得HBSAg修饰的SYR-PEG-PLGA纳米粒，以包封率和纳米粒径为主要指标，通过单因素考察及星点设计-效应面积法实验，确定最佳处方：共聚物的浓度(A)：10mg/mL，药物浓度(B)：15mg/mL，内水相与油相的比例(C)：1：5。测得包封率为60.1±1.21%，载药量为6.01±0.21%。通在透射电镜观察下的形态为类圆球形实体粒子，粒度分布均匀，平均粒径都在(131.4±0.93)nm范围内。 3.HBSAg修饰的阳离子型丁香苦苷PEG-PLGA纳米粒冻干粉的制备。为提高HBSAg修饰的阳离子型丁香苦苷PEG-PLGA纳米粒的稳定性，对其冷冻干燥技术进行了考察，通过对冻干保护剂及其浓度的筛选，以外观、形态、再分散性和包封率为考察指标，优选出的最佳处方，以5%甘露醇为冻干保护剂各项指标较好。 4.HBSAg修饰的阳离子型丁香苦苷PEG-PLGA纳米粒的体外释放研究。采用动态透析法研究HBSAg修饰的阳离子型丁香苦苷PEG-PLGA纳米粒在37℃、pH值为7.4的磷酸盐缓冲液中的释药特性。结果表明：36h体外释放88.07%，HBSAg修饰的阳离子型丁香苦苷PEG-PLGA纳米粒冻干粉的体外释放规律基本符合Higuchi方程的释药模型。其拟合的释药动力学方程为：Q=0.0187+0.1279t1/2(r=0.9678)，体外实验结果表明制得的HBSAg修饰的阳离子型丁香苦苷PEG-PLGA纳米粒有着良好的缓释特征。 5.HBSAg修饰的阳离子型丁香苦苷PEG-PLGA纳米粒的肝靶向性研究。小鼠尾静脉注射HBSAg修饰的SYR-PEG-PLGA-NP溶液及丁香苦苷溶液，HPLC法检测各组织中丁香苦苷浓度，采用梯形法计算不同剂型的丁香苦苷在小鼠各组织的蓄积情况。以药物选择性指数(re)和药物靶向指数(te)评价HBSAg修饰的SYR-PEG-PLGA-NP给药后小鼠体内分布情况。结果表明，丁香苦苷单体组与HBSAg修饰的SYR-PEG-PLGA-NP组肝的te均大于1，并且HBSAg修饰的SYR-PEG-PLGA-NP溶液组是丁香苦苷溶液组的2倍，这一方面说明了丁香苦苷单体本身在肝脏选择性分布较多，与丁香苦苷具有保肝作用相符，另一方面也显示了制成HBSAg修饰的SYR-PEG-PLGA-NP后，提高了丁香苦苷的在肝组织中的分布，更好地起到肝靶向的作用。同时re为1.97，也说明HBSAg修饰的SYR-PEG-PLGA-NP具有良好的肝靶向性。本实验通过对阳离子型空白纳米粒子的制备研究，最终确定使用双乳化溶剂蒸发法制备载有丁香苦苷的阳离子型PEG-APLGA纳米粒，脱脂的乙型肝炎表面抗原通过使用简单的浸渍和干燥方法，被动吸附在纳米粒子表面上，实现主动靶向的目的。用电子扫描显微镜和动态光散射法对纳米粒子的表面形态和粒径分布分别进行分析。并通过对空白组、HBSAg修饰的SYR-PEG-PLGA纳米粒组以及未修饰的SYR-PEG-PLGA纳米粒组进行静脉注射来研究药物在小鼠体内的药物经时变化规律和在各脏器的分布情况，并且通过多个参数来评价纳米粒给药系统的肝靶向性。结果表明：修饰组肝脏中丁香苦苷的re为1.97，未修饰组re为1.63，re＞1，表明修饰组和未修饰组的纳米给药系统在肝脏中均具有良好的靶向性，能明显提高丁香苦苷在肝脏中的分布；从靶向效率te来看，修饰后的纳米粒组对肝脏的靶向性明显高于丁香苦苷溶液组和未修饰的纳米粒组，说明修饰的纳米粒经静脉注射后能很快浓集于肝脏，从而达到肝靶向的目的，因此，也说明了，HBSAg对SYR-PEG-PLGA纳米粒进行表面修饰后明显提高了药物的肝靶向性。收起

关键词 : 丁香苦苷纳米粒制药工艺体外释放性能肝靶向性

8. 基于两步释放的术连微丸口服结肠靶向胶囊的研制及体内外评价

[学位论文] 唐晓萌海军军医大学 2019年硕士导师: 刘继勇共102页

摘要 : 溃疡性结肠炎(ulcerative colitis，UC)是一种常见的自身免疫性疾病，临床表现以消化系统症状为主，包括腹痛、腹泻、粘液脓血便等，其病程迁延难愈，常反复发作，严重者可致结肠癌。目前UC的临床治疗仍以药物手段为主，而常用的化药类存在只能缓解症... 展开溃疡性结肠炎(ulcerative colitis，UC)是一种常见的自身免疫性疾病，临床表现以消化系统症状为主，包括腹痛、腹泻、粘液脓血便等，其病程迁延难愈，常反复发作，严重者可致结肠癌。目前UC的临床治疗仍以药物手段为主，而常用的化药类存在只能缓解症状，难以根治及不良反应明显等缺点，降低了患者的顺应性。中医药在治疗多病因综合导致的慢性胃肠道疾病方面独具优势，在对症治疗的同时重视整体的平衡。因此，从传统中药中寻找和开发新型抗UC药物具有良好的发展潜力和实用意义。白术挥发油中的主要成分白术内酯Ⅰ能够健脾运脾，促进肠管吸收，调节肠管运动。黄连中的盐酸小檗碱等生物碱类成分则具有清热燥湿、抗菌消炎的药理活性，能够显著抑制右旋葡聚糖硫酸钠(dextran sulfate sodium，DSS)诱导的小鼠UC症状。防风含有的挥发油、色原酮类、香豆素类等成分则具有解热镇痛、抗炎抗氧化、免疫调节等作用。对于溃疡性结肠炎的药物治疗，传统的口服及直肠给药都存在一定的不足。使用不便，药物难以到达作用部位等影响了药物疗效的发挥。口服结肠靶向给药系统具有良好的稳定性和重现性，能够将药物定位于小肠末端至结肠处释放，使药物在病变处能够维持较长时间的高药物浓度，并提高药物的生物利用度。本研究将上述三味中药与口服结肠靶向给药系统相结合，围绕术连微丸的制备和体内外评价开展研究，主要包括：原料药的质量控制;术连微丸的处方组成和制备工艺考察;微丸中指标成分含量测定方法的建立及制剂学特性和稳定性的考察，并对肠溶微丸的体外释放特性和体内靶向性进行评价;考察原料药与术连微丸在大鼠灌胃给药后指标成分在血浆中的药代动力学过程;建立大鼠溃疡性结肠炎模型，对术连微丸抗UC的疗效和机制进行探究。本研究第一部分建立了三种原料药中指标成分的含量测定方法，包括LC-MS/MS法测定白术挥发油中的白术内酯Ⅰ的含量，HPLC法分别测定黄连提取物中的盐酸小檗碱和防风提取物中的升麻素。三种条件的系统适用性实验均符合标准，可以用于三种指标成分的定量检测。本研究第二部分采用白术挥发油包合物，黄连、防风提取物为原料，制备了术连微丸口服结肠靶向胶囊，通过单因素实验和正交实验优化了包合工艺，微丸处方组成和挤出-滚圆制备微丸的工艺参数，同时对肠溶衣的处方组成进行了筛选，最终制备的胃溶和肠溶微丸具有较好的圆整度和收率。本研究第三部分对胃溶和肠溶微丸中的指标成分进行了含量测定。两种微丸的肉眼观察图像和扫描电镜图像显示微丸为光滑的球形或椭球形，粒度分布均匀，表明微丸的制备工艺合理且稳定。两种微丸的制剂学性质符合标准且贮存稳定性良好，主要成分的含量和释放特性受环境影响小。肠溶微丸的体外评价结果表明其具备良好的抗酸能力，口服后可以在肠道内释放药物，提高药物的生物利用度。其释药行为更符合Higuchi方程释药模型（r=0.8682），回归方程为Q=34.615t1/2-52.463。本研究第四部分对术连微丸的药代动力学进行了考察。建立了血浆中白术内酯Ⅰ和盐酸小檗碱的LC-MS/MS含量测定方法，此法能够对血浆中微量药物进行定量且方法专属性良好，受血浆内源性物质影响较小;对于白术内酯Ⅰ，微丸组的AUC0→36是原料药组的1.53倍，MRT是原料药组的1.37倍，达峰后的血药浓度更加平稳，生物利用度明显提高。盐酸小檗碱采用原料药给药时Cmax较低，制备成微丸给药后，Tmax后延，而Cmax和AUC0→54明显升高，药物在盲肠和结肠部位释放，使病变处能够维持较高的药物浓度，从而提高了药物的生物利用度。本研究第五部分对术连微丸的药效学进行了研究。建立DSS诱导的大鼠UC模型，考察术连微丸对大鼠体重变化、便血腹泻情况、结肠黏膜损伤情况和组织病理形态的影响。采用ELISA方法测定血清和组织中IL-1β、IL-4、IL-6、TNF-α和MPO的表达水平。术连微丸中、高剂量组能够改善大鼠的体重降低和便血腹泻情况，降低各类评分，有效控制结肠粘膜上皮细胞的损伤并改善结肠粘膜的充血和肿胀。其抗UC的作用机制主要是抑制炎症因子和减少氧自由基的生成。肠溶微丸的体内靶向性评价结果表明微丸在到达结肠后仍能保持较高的完整性，这说明其具备良好的抗酸能力和结肠靶向特性，口服后可以在胃肠道内释放药物，从而促进药物的吸收，提高生物利用度。本课题的研究，将为溃疡性结肠炎的临床治疗提供一种新的有效药物，能够丰富中药制剂学的研究内容，对促进溃疡性结肠炎的治疗和中药现代化具有重要意义。收起

关键词 : 术连微丸口服结肠靶向胶囊制备工艺体外释放特性体内靶向性溃疡性结肠炎实验药理

9. 乳糖脂修饰苦参碱脂质体的肝靶向性和体外抑瘤作用研究

[学位论文] 张方宇重庆医科大学 2009年硕士导师: 何松共61页

摘要 : 苦参碱（Matrine）是中药苦参、山豆根、苦豆子的主要活性成分，具有抗炎、抗心律失常、抗动脉粥样硬化、免疫调节、抗病毒等多种药理作用。特别是在治疗病毒性肝炎方面取得了良好疗效，临床结果显示对慢性乙型肝炎，肝纤维化等具有良好的治疗效果。但... 展开苦参碱（Matrine）是中药苦参、山豆根、苦豆子的主要活性成分，具有抗炎、抗心律失常、抗动脉粥样硬化、免疫调节、抗病毒等多种药理作用。特别是在治疗病毒性肝炎方面取得了良好疗效，临床结果显示对慢性乙型肝炎，肝纤维化等具有良好的治疗效果。但临床常用的苦参碱制剂在体内吸收分布广泛，半衰期短，到达肝脏的药物浓度低，有一定副作用的缺点。制备苦参碱的肝脏靶向制剂，可减少药物不良反应，提高药物浓度，增强疗效，是目前苦参碱临床应用研究中的热点课题。脂质体（Liposome）是一种良好的药物载体，具有缓释作用、降低药物毒性、保护药物免受酶的降解等优点，未经修饰的脂质体进入人体内主要被网状内皮系统吞噬，而在肝、脾、肺、骨髓等组织器官中蓄积，有一定的系统靶向性，但器官靶向性差。为进一步提高肝靶向性，本实验根据肝实质细胞膜上存在能够专一性识别含有半乳糖基或乳糖基化合物的去唾液糖蛋白受体（Asialoglycoprotein receptor，ASGP-R），合成了乳糖酰磷脂酰乙醇胺（Lactosylphospha-tidylethanolamine，Lac-PE）修饰苦参碱脂质体，期望通过Lac-PE与ASGP-R特异性结合使载药脂质体具有主动肝靶向效果，为靶向治疗肝脏疾病提供实验基础。本文采用逆向蒸发法制备苦参碱脂质体，通过正交实验，筛选出制备苦参碱脂质体的最佳处方为：药脂比1：10，磷脂-胆固醇比例4：1，外水相pH值为6.8，孵育温度为60℃。以最佳处方制备的脂质体平均包封率为48.1%。采用高效液相色谱法测定了脂质体制剂中苦参碱的含量和脂质体的包封率，以及小鼠组织匀浆中的苦参碱的含量。实验结果表明，方法灵敏度高、专属性强，可满足分析的要求。用透射电镜观察脂质体呈完整的小单室结构，粒径范围为80～150 nm左右。将脂质体分别在4℃和25℃下密闭放置1个月，以包封率、过氧化值为指标考察其稳定性。结果显示，脂质体于4℃贮存时，以上指标无显著变化，脂质体比较稳定。脂质体的体外释药实验表明苦参碱经脂质体包裹后具有一定的缓释效果。本文研究了乳糖脂苦参碱脂质体、苦参碱脂质体和苦参碱溶液在小鼠体内的组织分布。小鼠体内组织分布实验结果表明，与苦参碱溶液相比，普通苦参碱脂质体及乳糖脂苦参碱脂质体的体内循环时间明显延长，且乳糖脂苦参碱脂质体的肝脏药-时曲线下面积（Area under curve，AUC）值相对于苦参碱脂质体和苦参碱溶液具有显著性差异（p<0.05）。LML组中的肝脏相对于其它脏器的靶向效率（Targeting efficiency，Te）值均大于1，是脾脏的2.7倍，是肺脏的3倍，是肾脏的6.6倍，是心脏的8.5倍，具有显著性差异，提高了药物靶向性的效果。本文在上述基础上，进行了体外细胞学研究，通过MTT法检测LML对人肝癌细胞系HepG2的体外抑制作用，以人卵巢癌细胞系Skov3作对照，对比了乳糖脂苦参碱脂质体，苦参碱脂质体，游离苦参碱药物体外对两种癌细胞的抑制作用。体外试验结果表明，随着苦参碱浓度的升高，抑制率亦随之升高，在0.5 mg/ml时，LML杀伤肝癌细胞的能力明显强于MJ和M-sol，而对非靶细胞Skov3卵巢癌细胞三者接近。表明LML对肝癌细胞有靶向杀伤作用。应用高效液相色谱法测定人肝癌细胞系HepG2细胞中苦参碱的含量，结果表明：乳糖脂苦参碱脂质体中苦参碱含量最高，与杀伤作用相一致。收起

关键词 : 乳糖脂修饰苦参碱脂质体肝靶向性肝癌细胞系体外抑瘤

10. 叶酸功能化纳米钻石载药体系的制备及体外细胞靶向性的研究

[学位论文] 曹瑞霞山西大学 2014年硕士导师: 李英奇共73页

摘要 : 化疗是肿瘤疾病治疗的主要方案之一,但是其最大的缺陷是对肿瘤组织和正常组织无选择识别性,导致在治疗过程中给肿瘤患者带来严重的毒副作用。基于肿瘤细胞表面过度表达可与特异性配体结合的受体,采用特异性配体将抗癌纳米药物通过受体介导途径输送到特... 展开化疗是肿瘤疾病治疗的主要方案之一,但是其最大的缺陷是对肿瘤组织和正常组织无选择识别性,导致在治疗过程中给肿瘤患者带来严重的毒副作用。基于肿瘤细胞表面过度表达可与特异性配体结合的受体,采用特异性配体将抗癌纳米药物通过受体介导途径输送到特定的靶部位,提高治疗效果,降低对正常组织的毒副作用。随着纳米医学的发展,有关纳米材料用于药物靶向输送的研究已引起广泛的兴趣。通常使用的特异性配体有叶酸、脂蛋白、转铁蛋白、多肽类等,其中叶酸是一种具有低免疫原性并易于其它物质进行共价偶联的小分子物质,基于癌细胞表面超表达的叶酸受体与叶酸分子的高度亲和性,用叶酸修饰的纳米载药体系,可实现对肿瘤的靶向治疗。本论文主要以纳米钻石(NDs)为载体,化疗药物阿霉素(DOX)为药物模型,叶酸(FA)为靶向配体分子,制备了ND-PEG-FA/DOX纳米药物,运用激光扫描共聚焦显微镜成像法、流式细胞术和MTT比色法等研究了ND-PEG-FA/DOX与细胞的作用。主要研究内容包括: 1.以NDs为载体,聚乙醇二胺(H2N-PEG-NH2)作为嵌段共聚物将配体小子FA通过化学共价键修饰于NDs表面制备得ND-PEG-FA靶向载体,采用红外光谱法对其表面官能团进行了表征,运用紫外-可见分光光度法和荧光光度法计算NDs表面偶联H2N-PEG-NH2和FA的量分别为200μg/mg和44μg/mg。 2.利用物理吸附作用将DOX负载于ND-PEG-FA纳米颗粒上,得到ND-PEG-FA/DOX纳米靶向载药系统。首先研究了ND-PEG-FA与DOX相互作用达到饱和平衡状态时的条件;其次探讨了不同pH值条件下,ND-PEG-FA/DOX纳米药物体外释药行为。结果表明ND-PEG-FA与DOX相互作用达到饱和平衡状态的最佳时间为6h,最大吸附DOX的量为(47±1.26)μg/mg;体外释药实验说明ND-PEG-FA/DOX药物在pH5.0(模拟细胞内涵体环境)和pH6.5(模拟肿瘤环境)比pH7.4(模拟生理环境)时释药速率快且释药总量较大,揭示了ND-PEG-FA/DOX药物在血液循环中有较少的药物释放,可以减少对正常组织的损伤。 3.以细胞表面叶酸受体表达量不同的HeLa、C6、HepG2和HEK293作为体外模型组。MTT比色法检测结果表明NDs、ND-PEG-NH2和ND-PEG-FA材料几乎无细胞毒性;采用流式细胞术研究了细胞对ND-PEG-FA/DOX纳米药物的摄取具有时间、浓度、温度、能量依赖性而且是以网格蛋白(clathrin)介导的内吞途径进入细胞,此外ND-PEG-FA/DOX对药物DOX起到较好的缓释效果并具有良好的肿瘤靶向性;用激光扫描共聚焦成像法进一步证明ND-PEG-FA/DOX纳米药物具有良好的肿瘤靶向性,另外说明ND-PEG-FA/DOX纳米药物进入细胞主要位于细胞质并在此释放药物DOX,小分子药物DOX进入细胞核起到抑制肿瘤生长作用。收起