中国科学技术信息研究所--国家工程技术数字图书馆

[学位论文] 胡皓彬南华大学 2017年硕士导师: 凌晖共72页

摘要 : 摘要：目的研究胃动蛋白2(GKN2)高表达对CD44(+)SGC7901胃癌干细胞(Gastric cancer stem cells, GCSCs)的增殖、迁移、侵袭、细胞周期及凋亡的影响，及对SHH(Sonic Hedgehog)蛋白表达的调控作用，初步阐明GKN2对胃癌干细胞的抑制作用，为临床设计有效... 展开摘要：目的研究胃动蛋白2(GKN2)高表达对CD44(+)SGC7901胃癌干细胞(Gastric cancer stem cells, GCSCs)的增殖、迁移、侵袭、细胞周期及凋亡的影响，及对SHH(Sonic Hedgehog)蛋白表达的调控作用，初步阐明GKN2对胃癌干细胞的抑制作用，为临床设计有效医治胃癌的策略提供理论依据。方法 1、采用免疫磁珠分选技术(MACS)从人胃癌细胞SGC7901中分选CD44(+)SGC7901细胞，免疫荧光检测阳性效率；将构建好的高表达GKN2的腺病毒载体转染GCSCs，WesternBlot验证转染是否成功。 2、运用肿瘤克隆球形成实验、CCK8实验、流式细胞术、Transwell迁移及侵袭实验等方法，观察GKN2高表达对人GCSCs增殖、细胞周期、凋亡、迁移及侵袭的影响。 3、WesternBlot检测GKN2高表达对SGC7901细胞及GCSCs中SHH蛋白表达的调控作用。结果 1、免疫荧光结果显示CD44阳性细胞的细胞膜表面表达绿色荧光；经免疫磁珠分选后的细胞，CD44(+)细胞数目显著增加，证明成功从SGC7901细胞中富集获得GCSCs。 2、GKN2高表达腺病毒载体转染GCSCs后，荧光结果表明阳性细胞率为80%，WesternBlot结果同样发现GKN2转染组中GKN2的表达明显增加，说明成功获得高表达GKN2的GCSCs。 3、肿瘤克隆球形成实验结果显示，GKN2高表达组的GCSCs，形成克隆球的数目(9.1±3.59)明显低于未转染组(30.7±3.13)及空载体组(25.8±3.47)(P＜0.05)，且成球直径较小、透光度较高，说明GKN2高表达能抑制GCSCs形成肿瘤克隆球的能力。 4、CCK8实验结果显示，在转染GKN2高表达腺病毒载体48h、72h、96h后，GCSCs的OD450值均低于未转染组及空载体组(P＜0.05)，且抑制率随时间逐渐增加,说明GKN2高表达具有抑制GCSCs增殖的作用。 5、Transwell迁移实验结果发现，GKN2高表达组迁移细胞数(31±4.6)，明显低于未转染组(198±9.8)及空载体组(172±8.4)；Transwell侵袭实验结果显示，GKN2高表达组穿过基质胶侵袭至下室的细胞数(14±2.7)，明显低于未转染组(155±9.9)及空载体组(131±8.4)。说明GKN2能显著抑制GCSCs的迁移及侵袭能力。 6、流式细胞术结果显示，转染前后GCSCs的细胞周期未有明显改变；流式细胞术也显示，GKN2高表达组凋亡率(32.90%)明显高于未转染组(18.65%)及空载体组(19.24%)(P＜0.05)，这说明GKN2高表达能促进GCSCs的凋亡。 7、WesternBlot结果显示，GCSCs中SHH蛋白的表达高于SGC7901中SHH的表达，且两种细胞系在GKN2高表达之后SHH的表达量均明显降低。结论 GKN2高表达能抑制GCSCs的增殖、迁移侵袭并诱导凋亡，其作用可能与下调SHH蛋白表达有关。收起

关键词 : 胃肿瘤肿瘤干细胞 GKN2蛋白 SHH蛋白

2. Shh与Gli2在喉鳞状细胞癌组织中的表达及相关性研究

[学位论文] 林霞福建医科大学 2014年硕士导师: 王德生共112页

摘要 : 目的：探讨Shh(Sonic Hedgehog)与Gli2(Glioma-associated oncogene homolog2)在喉鳞状细胞癌组织中的表达、临床病理关系及两者间相关性。方法： 1、采用SABC法（免疫组织化学链霉亲和素一生物素复合物法）检测Shh、Gl12蛋白在60例... 展开目的：探讨Shh(Sonic Hedgehog)与Gli2(Glioma-associated oncogene homolog2)在喉鳞状细胞癌组织中的表达、临床病理关系及两者间相关性。方法： 1、采用SABC法（免疫组织化学链霉亲和素一生物素复合物法）检测Shh、Gl12蛋白在60例喉鳞状细胞癌组织、30例喉不典型增生组织、30例喉息肉组织中的表达，分别统计分析二者表达与临床病理特征的关系及相关性。 2、采用Rt-PCR法检测Shh、Gli2 mRNA在50例新鲜喉鳞状细胞癌组织及40例鳞癌切缘组织的表达，分别统计分析二者表达与相关性。 3、采用Western Blot方法检测Shh、Gli2蛋白在50例新鲜喉鳞状细胞癌组织及40例鳞癌切缘组织的表达，分别统计分析二者表达与临床病理特征的关系及相关性。结果： (1)免疫组化显示：a、Shh在喉息肉组织、喉不典型增生组织和喉鳞状细胞癌组织的阳性表达率分别为10.00%(3/30)、33.33%(10/30)、60.00%(36/60)，Gli2在三组的阳性表达率分别为6.67%(2/30)、23.33%(7/30)、45.00%(27/60)。三组比较有统计学差异(P<0.05)。b、在喉鳞状细胞癌组织中，Shh蛋白的阳性表达率随着临床分期的增加而升高，Ⅰ+Ⅱ期的达率为83.33%，Gl12蛋白的阳性表达率Ⅰ+Ⅱ期、Ⅲ+Ⅳ期分别为33.33%、62.50%，Shh、Gli2蛋白在这两组的比较有统计学差异（P<0.05）。c、在喉鳞状细胞癌组织中，Shh、Gli2蛋白的阳性表达率随着鳞癌组织学分级升高而增加，Shh、G112在高分化组、中低分化组的阳性率分别为41.18%、84.62%和32.35%、61.54%，两蛋白在高分化组、中低分化组比较有统计学差异（P<0.05）。d、在喉鳞状细胞癌组织患者中，有淋巴结转移组的喉鳞癌组织Shh蛋白的阳性表达率为88.24%，无淋巴结转移组阳性表达率为48.84%，两组比较具有统计学差异（P<0.05）。而Gli2蛋白具有同样的趋势，有淋巴结转移组和无淋巴结转移组的阳性表达率为64.71%、37.21%，两组比较同样有统计学差异（P<0.05）。e、Shh、Gl12蛋白与患者的性别、年龄、吸烟、喝酒、喉鳞癌的原发部位无明显相关性，统计学无明显差异（P>0.05）。 (2)Rt-PCR示：在50例喉鳞状细胞癌组织和40例鳞癌切缘组织中，Shh、Gl12 mRNA表达的阳性率喉鳞状细胞癌组织明显高于鳞癌切缘组织。两种蛋白在喉鳞状细胞癌组织相对于癌切缘组织的相对表达量有显著性差异(Shh:0.698±0.094、0.212±0.073,P<0.05;Gl12:0.721±0.025、0.425±0.031,P<0.05). (3)Western Blot示：在50例喉鳞状细胞癌组织以及40例鳞癌切缘组织，两者在喉鳞癌组织相对于癌切缘组织的表达量具有显著差异(Shh：1.53±0.40、0.44±0.37, P<0.01;Gli2:1.72±0.31、0.56±0.29, P<0.01), Shh、Gl12蛋白与喉鳞状细胞癌的组织学分级、喉鳞状细胞癌患者的临床分期、喉鳞状细胞癌患者有无淋巴结转移有关(P<0.05)，与性别、年龄、吸烟、喝酒及肿瘤发生部位无关(P>0.05)。 (4)喉鳞状细胞癌组织中，Shh蛋白与Gl12蛋白表达水平呈正相关(免疫组织化学：F0.546，P<0.05；Western blot:r=0.61，P<0.05)；Shh mRNA表达与Gli2mRNA表达呈正相关(Rt-PCR: r=0.59)。达率为83.33%，Gl12蛋白的阳性阳性表结论： (1)Shh、Gl12的异常表达可能参与了喉鳞状细胞癌的发生、侵润和转移。 (2)推测可能Sonic Hedeghog(言号通路对喉鳞状细胞癌的发生、发展有一定作用。 (3)联合检测Shh和Gli2的表达可作为喉鳞状细胞癌诊断及治疗的靶标。收起

关键词 : 喉鳞状细胞癌病理机制 Shh蛋白 Gli2蛋白

3. Shh、Gli1在宫颈癌中的表达及意义

[学位论文] 李琼中南大学 2013年硕士导师: 刘凤英共44页

摘要 : 目的:检测Shh蛋白和Gli1蛋白在宫颈癌、宫颈上皮内瘤变及宫颈炎组织中的表达情况，并分析Shh和Gli1在宫颈癌中的表达水平与宫颈癌临床病理参数之间的关系，以探讨Shh和Gli1在宫颈癌发生、发展、侵袭及转移中的作用及相互关系。方法:收集114例宫... 展开目的:检测Shh蛋白和Gli1蛋白在宫颈癌、宫颈上皮内瘤变及宫颈炎组织中的表达情况，并分析Shh和Gli1在宫颈癌中的表达水平与宫颈癌临床病理参数之间的关系，以探讨Shh和Gli1在宫颈癌发生、发展、侵袭及转移中的作用及相互关系。方法:收集114例宫颈组织标本（其中包括45例宫颈癌，23例CINⅡ-Ⅲ，22例CINⅠ和24例宫颈炎组织），标本取自于2011年3月-2012年10月就诊于中南大学湘雅二医院妇产科门诊及住院患者的宫颈组织蜡块。所有宫颈癌患者就诊前均未接受放化疗。所有组织均用10％甲醛固定，常规石蜡包埋后连续切片，利用HE染色再次确认114例标本的病理诊断，通过免疫组织化学二步法检测Shh和Gli1在45例宫颈癌，其中包括鳞状细胞癌35例和腺癌10例，FIGOⅠ期28例，FIGOⅡ期17例，大于40岁者23例，小于或者等于40岁者22例，高危型HPV阳性者41例，高危型HPV阴性者4例，高中分化27例，低分化18例，淋巴结转移阳性者12例，淋巴结转移阴性者33例。23例CINⅡ-Ⅲ，22例CINⅠ和24例宫颈炎组织中的表达及其分布。并采用卡方检验分析Shh和Gli1在宫颈癌、宫颈上皮内瘤变及宫颈炎中表达的关系，再采用卡方检验分析宫颈癌中Shh和Gli1的表达水平与临床病理参数之间的关系，采用Spearman等级相关检验对Shh和Gli1在宫颈癌中的表达进行相关性分析。结果:1.Shh在宫颈癌、宫颈上皮内瘤变及宫颈炎中的表达 (1)在宫颈炎组、CINⅠ级组、CINⅡ-Ⅲ级组和宫颈癌组中，Shh蛋白的阳性表达率分别为12.5％，40.9％，69.6％，86.7％，四组之间比较差异有统计学意义(P＜0.05)。Shh蛋白的表达水平在宫颈炎，宫颈上皮内瘤变向宫颈癌转变的过程中呈现逐步递增趋势。Shh蛋白的表达部位主要位于细胞质，偶见于细胞核。四组之间两两比较，CINⅡ-Ⅲ组与宫颈炎组、宫颈癌组与宫颈炎组、宫颈癌组与CINⅠ组比较差异有统计学意义(P＜0.008)，CINⅠ组与宫颈炎、CINⅡ-Ⅲ组与CINⅠ组、宫颈癌组与CINⅡ-Ⅲ组比较差异无统计学意义(P＞0.008)。 (2)宫颈癌组织中Shh蛋白的表达与患者的年龄、是否伴高危型HPV感染、肿瘤病理类型、肿瘤分化程度及有无淋巴结转移均无明显相关性(P＞0.05)。与FIGO分期相关(P＜0.05)。 2.Gli1在宫颈癌、宫颈上皮内瘤变及宫颈炎中的表达 (1)在宫颈炎组、CINⅠ级组、CINⅡ-Ⅲ级组和宫颈癌组中，Gli1基因的阳性表达率分别为16.7％，36.4％，65.2％，80.0％，四组之间比较差异有统计学意义(P＜0.05)。Gli1蛋白的表达水平在宫颈炎，宫颈上皮内瘤变向宫颈癌转变的过程中呈现逐步递增趋势。Gli1蛋白的表达位于细胞核和细胞质。四组之间两两比较，CINⅡ-Ⅲ组与宫颈炎组、宫颈癌组与宫颈炎组、宫颈癌组与CINⅠ组比较差异有统计学意义（P＜0.008），CINⅠ组与宫颈炎组、CINⅡ-Ⅲ组与CINⅠ组、宫颈癌组与CINⅡ-Ⅲ组比较差异无统计学意义(P＞0.008) (2) Gli1蛋白的表达与患者年龄、高危型HPV感染、肿瘤病理类型及肿瘤分化程度均无明显相关性(P＞0.05)。与FIGO分期及淋巴结转移相关(P＜0.05)。 3.Shh、Gli1蛋白表达的相关性分析研究结果显示，在宫颈炎，宫颈上皮内瘤变向宫颈癌转变的过程中，Shh蛋白的表达呈现逐步递增的趋势，Gli1蛋白的表达也呈现逐渐递增的趋势，两者在宫颈癌中的表达呈现出显著正相关，差异有统计学意义（R=0.485，P＜0.05）结论:1.Shh和Gli1的表达在宫颈炎，宫颈上皮内瘤变向宫颈癌转变的过程中呈现逐步递增趋势，提示Shh、Gli1与宫颈癌的发生发展有关。 2.Shh的表达与宫颈癌FIGO分期相关，Gli1的表达与宫颈癌的FIGO分期及淋巴结转移相关，提示Shh、Gli1与宫颈癌的侵袭、转移有关。收起

关键词 : Shh蛋白 Gli1蛋白宫颈癌免疫组化临床病理

4. Shh、Gli1、β-catenin在三阴性乳腺癌组织中的表达及意义

[学位论文] 王之昱内蒙古医科大学 2022年硕士导师: 张惠洁共68页

摘要 : 目的：通过采用qRT-PCR法和免疫组化法测定Shh、Gli1、β-catenin在三阴性乳腺癌组织及癌旁乳腺组织中的表达情况，并分析三者的相关性及其与临床病理特征的关系。方法： 1、应用qRT-PCR法分别检测30例三阴性乳腺癌及对应的30例癌旁... 展开目的：通过采用qRT-PCR法和免疫组化法测定Shh、Gli1、β-catenin在三阴性乳腺癌组织及癌旁乳腺组织中的表达情况，并分析三者的相关性及其与临床病理特征的关系。方法： 1、应用qRT-PCR法分别检测30例三阴性乳腺癌及对应的30例癌旁组织中Shh、Gli1和β-catenin mRNA的表达，并分析三者之间的相关性。 2、应用免疫组化法分别检测30例三阴性乳腺癌及对应的30例癌旁组织中Shh、Gli1和β-catenin蛋白的表达，并分析三者在三阴性乳腺癌组织中表达的相关性及其与临床病理特征的关系。结果： 1、三阴性乳腺癌组织中Shh mRNA表达（1.2334?0.27867）、Gli1mRNA表达（1.2135?0.20636）和β-catenin mRNA表达（1.1421?0.32330）均高于癌旁组织中Shh mRNA表达（1.0022?0.06721）、Gli1mRNA表达（1.0003?0.02420）和β-catenin mRNA表达（1.0033?0.07920），差异均具有统计学意义（plt;0.05）。三阴性乳腺癌组织中，Shh和Gli1mRNA的表达存在显著的正相关关系（r=0.989，plt;0.001），Shh和β-catenin的表达存在显著的正相关关系（r=0.868，plt;0.001），Gli1和β-catenin的表达存在显著的正相关关系（r=0.869，plt;0.001）。 2、三阴性乳腺癌组织中Shh、Gli1、β-catenin的阳性表达率分别为93.3%（28/30）、96.7%（29/30）、93.3%（28/30）高于癌旁组织阳性表达率60%（18/30）、73.3%（22/30）、73.3%（22/30），差异均有统计学意义（Plt;0.05）。三阴性乳腺癌组织中Shh与Gli1的表达存在显著的正相关关系（r=0.958，plt;0.001），Shh与β-catenin的表达存在显著的正相关关系（r=0.952，plt;0.001），Gli1和β-catenin的表达存在显著的正相关关系（r=0.927，plt;0.001）。三阴性乳腺癌中Shh，Gli1和β-catenin蛋白的表达与年龄、肿瘤大小均无关（pgt;0.05），Shh与组织学分级（G）呈正相关（r=0.774，plt;0.001）；Gli1与组织学分级呈正相关（r=0.757，plt;0.001）；β-catenin与组织学分级呈正相关（r=0.739，plt;0.001）。Shh与TNM分期呈正相关（r=0.460，p=0.010）；Gli1与TNM分期呈正相关（r=0.414，p=0.023）；β-catenin与TNM分期呈正相关（r=0.404，p=0.027）。Shh与淋巴结转移呈正相关（r=0.540，p=0.002）；Gli1与淋巴结转移呈正相关（r=0.515，p=0.004）；β-catenin与淋巴结转移呈正相关（r=0.559，p=0.001）。结论： 1、Shh、Gli1、β-catenin蛋白在三阴性乳腺癌中表达上调，提示Shh、Gli1和β-catenin蛋白参与肿瘤的发生，三者的联合检测可能对三阴性乳腺癌的诊断及预后评价提供理论依据。 2、Shh与Gli1蛋白表达呈正相关；Shh与β-catenin蛋白表达呈正相关；Gli1与β-catenin蛋白表达呈正相关，这一结果提示三者在TNBC的发生、发展中起协同作用。在TNBC中Wnt/β-catenin和Hedgehog信号通路可能存在一定的串扰，这可能会对TNBC的治疗提供新的途径。 3、Shh、Gli1和β-catenin蛋白表达与三阴性乳腺癌的分化程度、TNM分期、淋巴结转移状况相关，而与年龄、肿块大小无明显相关，因此预测三者与TNBC的侵袭、转移及预后有关。收起

关键词 : 三阴性乳腺癌临床病理 Shh蛋白 Gli1蛋白 &beta -catenin蛋白蛋白表达

5. 牦牛睫毛毛囊的形态发生及其SHH与β-catenin的表达

[学位论文] 李静西北农林科技大学 2008年硕士导师: 郁枫共45页

摘要 : 本研究用胚龄(Ed)45～240牦牛胚胎上睑皮肤为实验材料，相同个体的牦牛背部皮肤和相同胚龄的当地黄牛上睑皮肤作为对照，通过制作石蜡组织切片，HE染色和EnVision免疫组化法，研究牦牛睫毛毛囊的形态发生过程中的组织形态学变化，并定性定量检测SHH(S... 展开

关键词 : 牦牛睫毛毛囊 SHH蛋白 &beta -连环蛋白组织形态学

6. Sufu伴随Gli蛋白产生Shh信号的转录应答

[学位论文] 张子宇南京医科大学 2015年博士导师: 程雁共102页

摘要 : Hh蛋白家族调控着一系列发育的过程和肿瘤的产生，Hh通路的失调在发育紊乱和癌症中均有作用。例如，对于指导从四肢到中枢神经系统发育、基底细胞癌和髓母细胞瘤的产生，具有深远的影响。美国药监局批准的对抗BCC转移的Hh通路抑制剂表明了Hh在癌症治疗... 展开 Hh蛋白家族调控着一系列发育的过程和肿瘤的产生，Hh通路的失调在发育紊乱和癌症中均有作用。例如，对于指导从四肢到中枢神经系统发育、基底细胞癌和髓母细胞瘤的产生，具有深远的影响。美国药监局批准的对抗BCC转移的Hh通路抑制剂表明了Hh在癌症治疗中的重要性；而且对于其它癌症的研究，许多临床试验仍在开展当中。 Hh是一个形态发生因子，它沿着发育轴线形成浓度梯度而发挥作用。在神经管发育过程中，它从脊索和底板中表达，并且一直延伸到背部。Hh蛋白是Ptch的配基。Ptch是一种12次跨膜蛋白，它能反向调节7次跨膜蛋白Smo。Hh配基与Ptch结合，导致Smo的激活。这将导致Smo转运至原纤毛中，Hh通路也得以正常转运。Smo的下游是Gli家族，它们是一组锌指转录因子。在哺乳动物中具有三个同源蛋白，Gli1、Gli2和Gli3。 Sufu作为Gli蛋白的分子伴侣，能够与所有的Gli蛋白结合而形成复合物。Sufu能够与Gli氨基端高度保守的SYGH结构域结合，又或者通过遮挡Gli的核输入信号（NLS），从而将Gli阻滞在细胞浆中，使得Gli蛋白被Sufu抑制。然而现在并不清楚Sufu对于调节Gli胞浆阻滞的具体机制。随着Hh的刺激，Gli蛋白转运至细胞核中，暗示Sufu对于Gli在胞浆中的锚定功能被解除了。然而，生物化学和遗传学研究表明Sufu调节Gli的活性是通过其它非胞浆阻滞机制。这就暗示Sufu与Gli蛋白在细胞核中仍然能够结合。然而，Sufu调控Gli蛋白的详细机制还不明确。由于Hh在小脑发育中起到十分重要的作用，我们利用小脑为模型进行研究。在成年小鼠小脑中，Hh通路是处于静息状态，但是在出生一周多之后，小脑发育处于高强度，Sufu的水平与 Gli一样，在外胚层颗粒神经元前体中表达都很高。这部分细胞的发育高度依赖Hh信号的输出。在髓母细胞瘤这一来自于颗粒神经元前体的小脑肿瘤中，Hh通路被重新激活，与之前一样的是，Sufu的水平同Gli1一致高度上调。除此之外，Sufu在细胞核和细胞浆中均有定位。为了进一步观察Sufu在细胞核和细胞浆中的分布，我们检测了小鼠胚胎成纤维细胞系（MEFs）。在正常的MEFs中，无论Shh处理与否，Sufu在胞核和胞浆中均有分布。当我们检测Gli2/3缺失的细胞时，令我们惊讶的是Sufu在没有Shh时几乎处于细胞浆中。而当有Shh时，Sufu被诱导至细胞核中，在Gli2/3缺失的细胞中是不存在抑制子的。这就暗示在正常 MEFs 中，在没有 Shh 处理的情况下，Sufu很有可能是被抑制子带入到细胞核的。在Gli2/3缺失的细胞中，Shh诱导Sufu入核是由Gli1介导的。为了证明这一点，我们在Gli2/3缺失的细胞中稳定表达Gli1的shRNA，从而构建三种Gli都没有的细胞系。在这种细胞系中，Sufu的入核不再受到Shh的诱导。 Sufu能够招募Sin3A和HDAC从而抑制Gli的转录活性。我们重新考虑了这个模式并且探究Sufu能否出现在Gli结合位点的染色质上。我们以Gli1和Ptch1的启动子为例，利用ChIP实验，两个位点在Shh处理之后，Gli结合元件的含量增加，暗示Shh能够诱导Sufu招募至其靶基因启动子区域。有趣的是，我们同样发现SAP18在Hh的靶基因启动子上，Hh能够促使其从染色质上脱落。这些结果暗示Hh能够诱导Gli1-Sufu复合物附着在它的靶基因启动子区域，而且这是依赖于Gli1和Gli3抑制子。为了找到决定Sufu在胞浆和胞核中分布的序列原件，我们做了缺失定位，最后确定在人类Sufu的308-318残基中具有潜在的NES信号。我们将其中两个亮氨酸突变成丙氨酸并且在MEFs中进行检测。相比于野生型的Sufu，NES突变的Sufu更多的出现在细胞核中。而且NES的受体CRM1也不再与突变的Sufu结合。本实验室之前报道了一个PKA和GSK3β双磷酸化位点能够调节Sufu的稳定性和原纤毛转运。这个双磷酸化位点正好处于NES的附近。在CoIP实验中，我们发现在342或者346位点不能被磷酸化而突变的Sufu与CRM1具有有效的结合能力，而模拟磷酸化的Sufu则失去了与CRM1结合的能力。最后，我们将正常Sufu-GFP与GSK-3β、PKA单独或者二者联合共转染，发现更多的Sufu在细胞核中，但是这些激酶对非磷酸化的Sufu，即双A突变并不能起到作用。上述结果阐明了Sufu不仅能够参与Gli介导的转录、抑制信号通路，同时还能通过提高 Gli1 蛋白的细胞核转运和稳定性，从而提高 Hh 通路活性，这对于Shh通路的最大化激活是必须的。使我们对于Sufu作为Gli蛋白分子伴侣有了新的认识。收起

关键词 : Gli蛋白 Shh信号转录应答细胞核转运

7. Sonic hedgehog (Shh)对大鼠永久性脑缺血的潜在治疗作用及机制研究

[学位论文] 夏远鹏华中科技大学 2012年博士导师: 胡波;梅元武共90页

摘要 : 目的:研究Shh蛋白对大鼠永久性脑缺血模型的保护作用及其潜在机制。方法:原代大鼠脑微血管内皮细胞1-2代后,应用糖氧剥夺模拟体外缺血模型,分别给予rHu Shh、Cyclopamine预处理,选取2小时、4小时或6小时三个作用时间点为检测终点,用MTT法或 Brd... 展开目的:研究Shh蛋白对大鼠永久性脑缺血模型的保护作用及其潜在机制。方法:原代大鼠脑微血管内皮细胞1-2代后,应用糖氧剥夺模拟体外缺血模型,分别给予rHu Shh、Cyclopamine预处理,选取2小时、4小时或6小时三个作用时间点为检测终点,用MTT法或 BrdU染色法检测细胞存活和细胞增殖;建立大鼠永久性脑缺血模型,侧脑室注射rHu Shh或PBS,观察神经行为学评分,应用TTC法检测脑梗塞面积,干湿称重法检测脑水肿,依文思蓝外渗法检测血脑屏障通透性,激光散斑衬比技术检测皮层血流灌注,免疫组织化学法检测缺血梗塞区边缘CD31和α-SMA的阳性表达,用CD31和Ki-67两种抗体进行免疫荧光双标,用共聚焦显微镜观察缺血梗塞区边缘内皮细胞增殖状况。应用实时荧光定量PCR的方法检测Sonic hedgehog(Shh)信号通路中的关键成份(Shh,Patched-1,Gli-1)及血管新生因子(VEGF、Ang-1和Ang-2)的mRNA水平,用免疫印迹法(Western blotting)检测上述因子的蛋白水平。结果:1)rHu Shh可促进OGD处理下原代培养的脑微血管内皮细胞的存活和增殖能力;2)大鼠永久性脑缺血模型后24小时可见脑组织Shh,Patched-1,Gli-1的mRNA水平和蛋白水平的表达增高,而侧脑室给予rHu Shh可以进一步提高Patched-1的蛋白表达水平;3)侧脑室给予rHu Shh可以显著减轻脑缺血导致的神经功能缺损,降低梗塞面积,减轻脑水肿,改善血脑屏障通透性,提高皮层血流灌注;4)侧脑室给予rHu Shh可以增加缺血梗塞区边缘CD31和α-SMA阳性表达的细胞,增加CD31和Ki-67共定位的阳性细胞;5)侧脑室给予rHu Shh,在大鼠永久性脑缺血模型后24小时的脑组织可见VEGF和Ang-1的mRNA水平和蛋白水平的表达增高。结论:Shh对缺血损伤的脑微血管内皮细胞具有保护作用;脑缺血后Shh信号通路存在激活;外源性给予Shh可调控血管新生因子的表达,促进血管新生和血管成熟,增加皮层血流灌注,改善血脑屏障通透性,减轻脑梗塞面积和脑水肿程度,进而改善神经功能缺损。提示Shh对缺血性脑损伤具有一定的保护作用,可能成为脑缺血的治疗靶点。收起

关键词 : 永久性脑缺血 Shh蛋白保护机制动物实验

8. SHH蛋白在胃癌组织中的表达及临床意义

[学位论文] 陈小鱼重庆医科大学 2010年硕士导师: 王子卫共30页

摘要 : 目的：SHH(Sonic hedgehog)是一种在多种人类组织中广泛表达的锌指转录因子,在许多不同的生理活动中具有重要作用,研究表明SHH基因与多种肿瘤的发生发展有关,本研究中通过检测癌组织中SHH蛋白的表达,探讨SHH蛋白与胃癌临床病理间的关系。方法：... 展开

关键词 : 胃脏肿瘤 SHH蛋白基因表达病理细胞学

9. Ptch-1和Smo在不同级别胶质瘤中的表达及相关性研究

[学位论文] 苏旭明河北医科大学 2017年硕士导师: 张学新共47页

摘要 : 目的：研究SHH信号通路中Ptch-1蛋白和Smo蛋白在不同级别胶质瘤及正常脑组织中的表达情况及其相关性。方法： 1.收集我院神经外科2014年至2016年手术获得胶质瘤患者标本（依据《中国中枢神经系统胶质瘤诊断和治疗指南》中WHO中枢神经系统肿... 展开目的：研究SHH信号通路中Ptch-1蛋白和Smo蛋白在不同级别胶质瘤及正常脑组织中的表达情况及其相关性。方法： 1.收集我院神经外科2014年至2016年手术获得胶质瘤患者标本（依据《中国中枢神经系统胶质瘤诊断和治疗指南》中WHO中枢神经系统肿瘤分类将胶质瘤分为 WHOⅠ-Ⅳ级，Ⅰ、Ⅱ级为低级别胶质瘤，Ⅲ、Ⅳ级为高级别胶质瘤。故将实验分为高级别胶质瘤组和低级别胶质瘤组）。 2.将不同级别的胶质瘤组织共65例（其中高级别胶质瘤组41例，低级别胶质瘤组24例）及正常脑组织共10例，经甲醛固定待用。不同级别的胶质瘤组织共20例（其中高级别胶质瘤10例，低级别胶质瘤10例）及正常脑组织共10例，冻存于-80℃冰箱待用。（正常脑组织标本均来自神经外科颅脑外伤患者需行减压的正常脑组织，术前已告知患者家属标本的用途并取得患者家属同意） 3.应用免疫组织化学检测Ptch-1蛋白及Smo蛋白在不同级别的胶质瘤组和正常脑组织组中的表达水平。 4.应用qRT-PCR技术检测Ptch-1蛋白及Smo蛋白的mRNA在不同级别的胶质瘤组和正常脑组织组中的表达水平。 5.应用蛋白质免疫印迹实验（Western Blot）检测Ptch-1蛋白及Smo蛋白在不同级别的胶质瘤组和正常脑组织组中的表达水平。 6.应用统计软件IBM SPSS21.0对实验数据进行统计分析。结果： 1.免疫组化实验结果：Ptch-1蛋白的表达水平：低级别胶质瘤组阳性表达率为62.5%（15/24），高级别胶质瘤组阳性表达率为92.7%（38/41），两者之间的阳性表达率差异有统计学意义（P＜0.05）。正常脑组织组中Ptch-1蛋白的阳性表达率为10%（1/10）。低级别胶质瘤组和高级别胶质瘤组阳性表达率与正常脑组织组的阳性表达率差异均有统计学意义（P＜0.05）。Smo蛋白的表达水平：低级别胶质瘤组阳性表达率为75.0%（18/24），高级别胶质瘤组阳性表达率为95.1%（39/41），两者之间的阳性表达率差异有统计学意义（P＜0.05）。正常脑组织中 Smo蛋白的阳性表达率为：20%（2/10）。正常脑组织组的阳性表达率分别与低级别胶质瘤组、高级别胶质瘤组之间差异有统计学意义（P＜0.05）。 2.qRT-PCR实验结果：各组中均可见目的蛋白mRNA的表达。其中低级别胶质瘤组Ptch-1 mRNA相对表达量是0.0018364±0.0015966，高级别胶质瘤组Ptch-1 mRNA相对表达量是0.0027659±0.0028038，两者之间差异无统计学意义（P=0.374＞0.05）。正常脑组织组Ptch-1 mRNA相对表达量是0.0006005±0.0005233。正常脑组织组分别和低级别胶质瘤组、高级别胶质瘤组之间的相对表达量差异有统计学意义（P＜0.05）。Smo mRNA在高级别胶质瘤组的相对表达量是0.0078187±0.0054682，其在低级别胶质瘤组的相对表达量是0.0037597±0.0016477，两者之间相对表达量差异有统计学意义（P＜0.05）。Smo mRNA正常脑组织组相对表达量是0.0007974±0.0005546，正常脑组织组和低级别胶质瘤组、高级别胶质瘤组之间相对表达量差异均有统计学意义（P＜0.05）。 3.Western Blot实验结果：Ptch-1的相对表达量在低级别胶质瘤组中是0.4771±0.1187，在高级别胶质瘤中为0.6967±0.1880，两者之间差异有统计学意义（P＜0.05）。Ptch-1在正常脑组织组中相对表达量为0.3155±0.1314。正常脑组织组与低级别胶质瘤组及高级别胶质瘤组之间相对表达量差异均有统计学意义（P＜0.05）。Smo的相对表达量在低级别胶质瘤组中为0.4976±0.1039，高级别胶质瘤组为0.6477±0.1730，二者之间的差异有统计学意义（P＜0.05）。正常脑组织中 Smo相对表达量为0.2703±0.0914。正常脑组织组与低级别胶质瘤组和高级别胶质瘤组之间的相对表达量差异均有统计学意义（P＜0.05）。 4.Ptch-1和Smo蛋白相关性统计：在qRT-PCR实验中，Ptch-1和Smo蛋白的相关系数为：R=0.514（P＜0.05）；在Western Blot实验中，Ptch-1和Smo蛋白的相关系数为：R=0.655（P＜0.05）。结论： 1.Ptch-1、Smo在胶质瘤及正常脑组织中均有表达，但在胶质瘤组织中表达水平显著高于正常脑组织，提示SHH信号通路在胶质瘤中普遍处于激活状态，其可能参与了胶质瘤的发生。 2.在高级别胶质瘤中Ptch-1、Smo的表达水平较低级别胶质瘤显著增高，提示随着SHH信号通路的激活水平的增高，胶质瘤的级别增高即恶性程度亦显著增高。收起

关键词 : 胶质瘤 Ptch-1蛋白 Smo蛋白免疫组化 SHH信号通路

10. SHH信号通路通过骨桥蛋白调控胰腺癌相关机制研究

[学位论文] 杨韩清江苏大学 2019年硕士导师: 王旭青共67页

摘要 : 目的：骨桥蛋白(osteopontin,OPN)与人体生长发育密切相关，同时OPN人体内大量恶性肿瘤中都呈现高表达的状态，在胰腺癌中也是如此。OPN的高表达至少部分是由异常激活的胶质细胞相关癌基因1(Gli1)引起的，Gli1是Sonichedgehog信号通路(SHH)通路... 展开目的：骨桥蛋白(osteopontin,OPN)与人体生长发育密切相关，同时OPN人体内大量恶性肿瘤中都呈现高表达的状态，在胰腺癌中也是如此。OPN的高表达至少部分是由异常激活的胶质细胞相关癌基因1(Gli1)引起的，Gli1是Sonichedgehog信号通路(SHH)通路的末端效应物。SHH信号通路在成熟机体中低表达或不表达，在肿瘤组织中常高表达。SHH信号通路与OPN关系密切。OPN在胰腺癌细胞生长、存活和转移中的确切作用，以及其在该恶性肿瘤中较高表达的原因尚待阐明。因此可以通过影响SHH信号通路调控OPN表达水平，探究OPN对胰腺癌细胞恶性行为的影响。本课题旨在选择高表达OPN的胰腺癌细胞，探讨在体外实验中，使用Gli1抑制剂GANT61阻断SHH信号后，OPN表达水平的变化情况。进而研究OPN表达水平变化后对胰腺癌细胞的生长、迁移和侵袭等行为的影响。方法：（1）采用聚合酶链式反应（PolymeraseChainReaction）技术，从常见的胰腺癌细胞株BxPC-3、Panc-1和SW1990中选择高表达OPN的细胞作为实验细胞。（2）体外培养高表达OPN胰腺癌细胞，加入抑制剂GANT61后，采用蛋白免疫印迹（WesternBlot）技术观察Gli1和OPN表达水平的变化。（3）在前两步实验的基础上，采用CCK8法、划痕实验、transwell迁移实验、transwell侵袭实验探讨加入抑制剂GANT61后，OPN表达水平变化对体外胰腺癌细胞恶性行为的影响。结果: （1）OPN在胰腺癌中普遍表达，Panc-1、BxPC-3、SW1990细胞株内中均有表达，且Panc-1细胞株表达水平最高。所以我们选取Panc-1细胞株作为实验细胞。（2）使用GANT61抑制Gli1后，Panc-1细胞中Gli1表达水平降低，SHH信号通路受到抑制。受此影响，OPN表达水平也降低。（3）使用抑制剂GANT61抑制SHH通路后，OPN表达水平降低。这使得Panc-1细胞增殖、迁移、侵袭能力降低。结论： SHH信号通路在多种恶性肿瘤中十分活跃。胰腺恶性肿瘤细胞Panc-1中，我们通过抑制SHH通路末端转录调控因子Gli1，从而抑制了SHH信号通路的表达。在这种情况下，检测发现OPN的表达水平降低，同时胰腺癌细胞Panc-1的增殖、迁移和侵袭能力降低。因此，抑制SHH信号通路可以降低OPN表达水平，抑制胰腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭。收起

关键词 : 胰腺癌 SHH信号通路骨桥蛋白调控