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国家工程技术图书馆
2022年11月29日
摘要: 目的: 骨桥蛋白(osteopontin,OPN)与人体生长发育密切相关,同时OPN人体内大量恶性肿瘤中都呈现高表达的状态,在胰腺癌中也是如此。OPN的高表达至少部分是由异常激活的胶质细胞相关癌基因1(Gli1)引起的,Gli1是Sonichedgehog信号通路(SHH)通路的... 展开 目的: 骨桥蛋白(osteopontin,OPN)与人体生长发育密切相关,同时OPN人体内大量恶性肿瘤中都呈现高表达的状态,在胰腺癌中也是如此。OPN的高表达至少部分是由异常激活的胶质细胞相关癌基因1(Gli1)引起的,Gli1是Sonichedgehog信号通路(SHH)通路的末端效应物。SHH信号通路在成熟机体中低表达或不表达,在肿瘤组织中常高表达。SHH信号通路与OPN关系密切。OPN在胰腺癌细胞生长、存活和转移中的确切作用,以及其在该恶性肿瘤中较高表达的原因尚待阐明。因此可以通过影响SHH信号通路调控OPN表达水平,探究OPN对胰腺癌细胞恶性行为的影响。本课题旨在选择高表达OPN的胰腺癌细胞,探讨在体外实验中,使用Gli1抑制剂GANT61阻断SHH信号后,OPN表达水平的变化情况。进而研究OPN表达水平变化后对胰腺癌细胞的生长、迁移和侵袭等行为的影响。 方法: (1)采用聚合酶链式反应(PolymeraseChainReaction)技术,从常见的胰腺癌细胞株BxPC-3、Panc-1和SW1990中选择高表达OPN的细胞作为实验细胞。 (2)体外培养高表达OPN胰腺癌细胞,加入抑制剂GANT61后,采用蛋白免疫印迹(WesternBlot)技术观察Gli1和OPN表达水平的变化。 (3)在前两步实验的基础上,采用CCK8法、划痕实验、transwell迁移实验、transwell侵袭实验探讨加入抑制剂GANT61后,OPN表达水平变化对体外胰腺癌细胞恶性行为的影响。 结果: (1)OPN在胰腺癌中普遍表达,Panc-1、BxPC-3、SW1990细胞株内中均有表达,且Panc-1细胞株表达水平最高。所以我们选取Panc-1细胞株作为实验细胞。 (2)使用GANT61抑制Gli1后,Panc-1细胞中Gli1表达水平降低,SHH信号通路受到抑制。受此影响,OPN表达水平也降低。 (3)使用抑制剂GANT61抑制SHH通路后,OPN表达水平降低。这使得Panc-1细胞增殖、迁移、侵袭能力降低。 结论: SHH信号通路在多种恶性肿瘤中十分活跃。胰腺恶性肿瘤细胞Panc-1中,我们通过抑制SHH通路末端转录调控因子Gli1,从而抑制了SHH信号通路的表达。在这种情况下,检测发现OPN的表达水平降低,同时胰腺癌细胞Panc-1的增殖、迁移和侵袭能力降低。因此,抑制SHH信号通路可以降低OPN表达水平,抑制胰腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭。 收起
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