摘要: 研究背景: 外伤、龋病、牙体预备不当等均可引起牙髓暴露，从而导致感染和疼痛，目前临床上针对牙髓病损最常用的治疗方法是根管治疗。但由于牙体组织和牙髓活力的丧失，根管治疗后的牙齿更容易发生折裂，因此维持或再生功能性牙髓对牙齿保存至关重... 展开 研究背景: 外伤、龋病、牙体预备不当等均可引起牙髓暴露，从而导致感染和疼痛，目前临床上针对牙髓病损最常用的治疗方法是根管治疗。但由于牙体组织和牙髓活力的丧失，根管治疗后的牙齿更容易发生折裂，因此维持或再生功能性牙髓对牙齿保存至关重要。以干细胞为基础的牙髓再生已成为一种有前景的临床研究热点。根尖乳头干细胞(Stemcellsfromapicalpapilla,SCAP)的增殖和分化潜能均较强，是牙根发育的重要细胞来源，可作为牙齿组织工程与牙髓再生的种子细胞。长链非编码RNA(longnoncodingRNAs,lncRNAs)是一种长度＞200个核苷酸的非编码RNA,多项研究已证明lncRNAs参与调控牙源性干细胞的增殖分化。然而lncRNAs在SCAP成骨/成牙本质向分化中的作用尚未阐明，其作用机制及功能模式亟需深入研究。 前期研究中本课题组已建立了SCAP矿化诱导前后lncRNAs的表达谱并筛选出了差异表达的lncRNAs,本研究通过qRT-PCR对筛选结果进行验证，从而确定lncRNALINC00704作为研究对象，探究LINC00704在SCAP成骨/成牙本质向分化中的作用并阐明其作用机制，为牙髓再生提供新的治疗靶点。 研究方法: (1)采用酶解组织块法分离培养SCAP,结晶紫染色检测细胞克隆形成率，流式细胞术检测细胞表面标志物，碱性磷酸酶(ALP)和茜素红(ARS)染色检测SCAP成骨向分化，油红O染色检测成脂向分化，验证SCAP的生物学特性; (2)应用细胞转染技术上调或下调LINCOO704的表达，qRT-PCR、WesternBlot实验测定成骨/成牙本质相关基因的表达水平，ALP染色和ARS染色检测成骨向分化水平，探明LINC00704对SCAP成骨/成牙本质向分化的影响; (3)生物信息学分析和双荧光素酶报告基因实验预测并验证LINC00704和miR-323a-3p以及miR-323a-3p和IGF2BP2的结合位点; (4)应用细胞转染技术及功能实验探明miR-323a-3p和IGF2BP2在SCAP成骨/成牙本质向分化中的作用; (5)利用细胞共转染技术和挽救实验验证LINC00704/miR-323a-3p/IGF2BP2信号轴在SCAP成骨/成牙本质向分化过程中的调控关系。 研究结果: (1)酶解组织块法分离培养的SCAP呈克隆样生长，阳性表达间充质干细胞表面标志物，在诱导下能够成骨、成脂向分化; (2)LINC00704促进SCAP成骨/成牙本质向分化; (3)LINC00704可作为分子海绵吸附miR-323a-3p负向调控其表达，miR-323a-3p对SCAP成骨/成牙本质向分化起负向调控作用，miR-323a-3pinhibitor可拮抗干扰LINC00704对SCAP成骨/成牙本质向分化的抑制作用; (4)miR-323a-3p靶向结合IGF2BP2并负向调控其表达，干扰IGF2BP2抑制SCAP成骨/成牙本质向分化，干扰IGF2BP2能够逆转miR-323a-3pinhibitor对SCAP成骨/成牙本质向分化的促进作用; (5)LINC00704通过吸附miR-323a-3p上调IGF2BP2的表达，干扰IGF2BP2可逆转LINC00704对SCAP成骨/成牙本质向分化的促进作用。 结论: (1)首次揭示lncRNALINC00704促进SCAP成骨/成牙本质向分化; (2)LINC00704通过吸附miR-323a-3p上调IGF2BP2的表达; (3)LINC00704通过miR-323a-3p/IGF2BP2轴调控SCAP成骨/成牙本质向分化。 收起