摘要: 目的： 根尖乳头干细胞(stem cells from the apical papilla，SCAPs)，位于未发育完成的年轻恒牙的根尖部，是取于正在发育组织的一种成体间充质干细胞(mesenchymal stem cells，MSCs)。SCAPs有多向分化潜能，与牙髓干细胞相比，SCAPs具有更强的增... 展开 目的： 根尖乳头干细胞(stem cells from the apical papilla，SCAPs)，位于未发育完成的年轻恒牙的根尖部，是取于正在发育组织的一种成体间充质干细胞(mesenchymal stem cells，MSCs)。SCAPs有多向分化潜能，与牙髓干细胞相比，SCAPs具有更强的增殖与分化潜能，在牙根发育过程中，SCAPs可以分化为成牙本质细胞和形成根部的牙本质，然而，涉及调控SCAPs分化的细胞因子还未阐明清楚。锌指结构同源结构域2(Zinc fingers and homeoboxes2，ZHX2)是一种新的转录抑制因子。ZHX2mRNA在多种组织中广泛表达，有报道显示ZHX2参与调节神经细胞、肝细胞、B细胞和红系细胞等的发育。但是关于ZHX2对牙根发育的作用还不清楚。牙齿的发育形成是由一系列信号分子共同调节，在此过程中，ZHX2是否参与其中呢？在本实验中，我们主要探讨ZHX2对SCAPs增殖及成骨/成牙本质向分化的作用。 方法与结果： 1.根尖乳头干细胞的分离，培养及鉴定 酶消化法分离培养人根尖乳头干细胞，分别矿化诱导两周和成脂诱导四周，观察SCPAs的成骨和成脂分化潜能，显微镜下观察茜素红和油红O染色，结果显示有大量矿化结节和脂滴的形成;细胞免疫荧光法检测到STRO-1在SCAPs中有明显的高表达;流式细胞仪分析根尖乳头干细胞的表面标记分子，结果显示SCAPs阳性表达CD146和CD24，对上皮细胞源性的CD45则呈阴性表达。 2.ZHX2在SCAPs中的内源性表达以及ZHX2与成骨/成牙本质向分化的相关性 SCAPs在常规培养基下培养，RT-PCR检测ZHX2在SCAPs中的内源性表达，结果发现SCAPs中有显著的ZHX2的表达;矿化诱导不同时间点，qRT-PCR和Western Blotting共同检测ZHX2与成骨/成牙本质向分化的相关性，结果显示在一定诱导时间段内，ZHX2的表达随矿化时间的延长而升高，提示ZHX2与细胞矿化呈正相关关系，与成骨/成牙本质向分化有密切关联。 3.ZHX2对SCAPs增殖及成骨/成牙本质向分化的影响 过表达或干扰ZHX2后常规培养细胞，CCK8法检测ZHX2对SCAPs增殖的影响，结果显示ZHX2对SCAPs的增殖有明显抑制作用。 过表达ZHX2后矿化诱导一周，qRT-PCR和Western Blotting分别检测牙本质特异性标记物牙本质涎磷蛋白(dentin sialophosphoprotein，DSPP)以及成骨相关转录因子(runt-related transcription factor2，RUNX2)、骨涎蛋白(bonesialoprotein，BSP)、骨钙素(osteocalcin，OCN) mRNA和蛋白水平的表达。结果显示过表达ZHX2后DSPP、RUNX2、BSP、OCN mRNA和蛋白水平均上升。同时，检测碱性磷酸酶(alkaline phosphatase，ALP)的活性，结果表明ZHX2过表达后SCAPs的ALP活性明显升高。 慢病毒干扰ZHX2后矿化诱导3天和5天，检测ALP活性;诱导一周后，qRT-PCR和Western Blotting分别检测矿化相关基因(DSPP、Runx2、BSP、OCN)的表达变化;诱导两周后，茜素红染色观察矿化结节的形成以及进行钙离子的半定量检测。结果显示干扰ZHX2后，ALP活性下降，DSPP、RUNX2、BSP、OCN mRNA和蛋白水平明显降低，与对照组相比矿化结节数量减少，相应的干扰组钙离子含量明显降低。 结论： SCAPs中存在内源性表达的ZHX2，并且ZHX2的表达水平随细胞矿化时间延长而升高;ZHX2能够抑制SCAPs的增殖;ZHX2对SCAPs成骨/成牙本质向分化起正向调控作用。 收起