中国科学技术信息研究所--国家工程技术数字图书馆

[学位论文] 徐瑜霞贵州大学 2022年硕士导师: 丁玲共101页

摘要 : 职业倦怠概念于20世纪70年代在美国被首次提出，随着经济社会的发展，职业倦怠现象出现在各行各业中，已在全球各地区引起了研究人员、从业人员和社会公众的关注。T市L区税务局为税务部门的县级税务局，该局公务员作为基层公务员，在历年来的各项税收... 展开

关键词 : 税务局基层公务员职业倦怠服务水平

2. 红豆杉多糖PSY-1的抗肿瘤活性及机制研究

[学位论文] 郑造乾浙江大学 2015年硕士导师: 丁玲共94页

摘要 : 目的：转移是恶性肿瘤最显著的特征之一，是大多数肿瘤病人的主要致死原因，临床上90％以上恶性肿瘤病人死于转移相关的并发症，因此抑制转移被认为是改善肿瘤治疗现状最有希望的突破口，因此无论在生物学领域还是医学领域，肿瘤转移的机制研究及药物... 展开目的：转移是恶性肿瘤最显著的特征之一，是大多数肿瘤病人的主要致死原因，临床上90％以上恶性肿瘤病人死于转移相关的并发症，因此抑制转移被认为是改善肿瘤治疗现状最有希望的突破口，因此无论在生物学领域还是医学领域，肿瘤转移的机制研究及药物发现是经久不衰的热点。我们在前期实验中从南方红豆杉的枝叶中分离、提纯和鉴定了一种分子量(Mw)为106 kD的水溶性单组分红豆杉多糖PSY-1，PSY-1在总多糖中含量最高，本研究主要围绕PSY-1开展抗肿瘤活性及相关机制研究，旨在明确PSY-1的抗肿瘤转移作用及可能机制，为PSY-1相关药物设计及其临床用药提供实验依据，同时也将推动红豆杉属植物红豆杉的开发利用。方法：⑴采用磺酰罗丹明B染色法（SRB法），以紫杉醇为阳性对照检测PSY-1对人卵巢癌细胞A2780和SKOV-3、人肝癌细胞HepG2和SMMC-7721、人前列腺癌细胞PC-3、人结肠癌细胞HT-29和鼠黑色素瘤细胞B16-F10的增殖抑制作用。⑵采用细胞划痕修复实验及细胞Transwell实验评价PSY-1对肿瘤细胞运动迁移能力的影响。⑶采用实时荧光定量PCR在转录水平考察PSY-1对基质金属蛋白酶表达的影响。采用蛋白质印迹法考察PSY-1对基质金属蛋白酶及其相关信号通路的蛋白表达水平的影响。采用明胶酶谱法考察PSY-1对基质金属蛋白酶酶活性的影响。⑷建立荷瘤小鼠模型，考察PSY-1对S180肉瘤、HepA肝癌及Lewis肺癌的体内抑制作用。结果：①红豆杉多糖PSY-1对多种肿瘤细胞均具有一定的增殖抑制作用，IC50在1.55 mg/mL和15.03 mg/mL之间，且在HepG2中活性最强，而在SMMC-7721中活性相对较弱，其对鼠黑色素瘤细胞B16-F10的IC50为11.97 mg/mL。②划痕修复实验显示在PSY-1(0.2 mg/mL，1 mg/mL和5 mg/mL)能有效抑制B16-F10细胞的划痕修复，且呈浓度依赖性。Transwell实验表明PSY-1(1mg/mL和5 mg/mL)能有效抑制B16-F10细胞从上室向下室的迁移，抑制率分别为35％和50％。③RT-PCR实验表明PSY-1(1 mg/mL和5 mg/mL)能有效降低MMP-2的mRNA表达水平，且具有浓度依赖性。明胶酶谱实验表明PSY-1（1 mg/mL和5mg/mL）能有效抑制MMP-2和MMP-9的酶活性。蛋白免疫实验表明PSY-1能显著下调MMP-2和MMP-9的蛋白表达水平，PSY-1(1 mg/mL和5 mg/mL)对AKT、p38、ERK的磷酸化水平无显著影响，但能减少IκB的磷酸化。④体内动物实验表明PSY-1能有效抑制S180肉瘤、Lewis肺癌、HepA肝癌荷瘤小鼠模型中的肿瘤生长。结论：本研究表明在体外PSY-1对多株人源及鼠源肿瘤细胞的增殖具有显著的抑制作用，在无毒剂量(0-5 mg/mL)能显著抑制B16-F10细胞的侵袭和转移。在体内PSY-1能抑制S180肉瘤、Lewis肺癌、HepA肝癌荷瘤小鼠模型的肿瘤生长。其抗转移作用可能跟抑制基质金属蛋白酶家族成员MMP-2和MMP-9的表达，及IκB的磷酸化有关。本研究将为临床抗肿瘤转移的药物研发以及红豆杉属植物红豆杉等天然植物类资源的进一步挖掘和利用提供理论支持。收起

关键词 : 抗肿瘤药细胞调控红豆杉多糖实验药理

3. miR-144-3p靶向调控YTHDF2对宫颈癌细胞增殖的影响及作用机制研究

[学位论文] 冉朝霞山西医科大学 2023年硕士导师: 丁玲共92页

摘要 : 目的: 宫颈癌是全球女性癌症新发和死亡的重要原因，人乳头瘤病毒(Humanpapillomavirus,HPV),特别是HPV16感染是导致宫颈癌发生的主要原因，但仍存在许多其他影响因素。N6-甲基腺嘌吟(m6A)是最常见的RNA甲基化修饰，可被识别蛋白YTHDF1、YTHDF2、... 展开目的: 宫颈癌是全球女性癌症新发和死亡的重要原因，人乳头瘤病毒(Humanpapillomavirus,HPV),特别是HPV16感染是导致宫颈癌发生的主要原因，但仍存在许多其他影响因素。N6-甲基腺嘌吟(m6A)是最常见的RNA甲基化修饰，可被识别蛋白YTHDF1、YTHDF2、hnRNPA2B1等识别并结合，调控RNA的稳定性、定位、运输、剪切和翻译等，影响细胞的增殖、生长和分化。其中YTHDF2是第一个被发现的识别蛋白，与宫颈癌变发生可能存在关联。miRNA作为转录后调控基因表达的重要分子机制，是否对YTHDF2的表达及后续效应发挥作用目前尚不清楚。因此，本研究基于生信分析探讨YTHDF2在正常宫颈与宫颈癌人群的表达情况以及YTHDF2在宫颈癌细胞中作用功能和信号分析，探索YTHDF2与宫颈癌变发生发展的关系;利用生信分析方法预测YTHDF2的靶向miRNA;进一步借助体外细胞实验，选择Caski(HPV16阳性宫颈癌细胞)采用miRNA沉默和过表达技术干扰Caski细胞中前期预测的YTHDF2靶向miRNA,检测细胞中YTHDF2表达情况，观察Caski细胞迁移、侵袭、凋亡和周期等生物学特征，并利用生信分析预测YTHDF2的下游关键靶基因及其功能和信号通路，以此评价预测的靶向miRNA是否通过调控YTHDF2的表达进而对宫颈癌细胞生物学特征产生影响，并对可能的分子机制进行预测，为宫颈癌发生发展的机制研究提供理论依据。方法: 一.数据来源 (一)生物信息学数据 1.YTHDF2与宫颈癌的关系及功能预测:从公共数据库GEO(geneexpressionomnious）获取正常宫颈和宫颈癌组织转录组mRNA基因表达数据集（GSE9750、GSE7803）,GSE9750包括24例正常宫颈和33例宫颈癌组织样本，GSE7803包括10例正常宫颈和21例宫颈癌组织样本;GEO数据库中获取敲除YTHDF2前后宫颈癌细胞转录组测序数据集GSE49339。TCGA数据库获取274例宫颈癌患者基因表达RNA-seq数据和生存数据。 2.YTHDF2上游靶向miRNA预测:GEO数据库下载正常宫颈和宫颈癌组织转录组miRNA基因表达数据集GSE30656,其中包括10例正常宫颈和10例宫颈癌组织样本。ENCORI（starbase）数据平台获取预测的YTHDF2靶向miRNA基因集。 3.HPV16E2、E6、E7基因m6A位点预测:HPV16E2、E6、E7基因m6A位点预测由SRMAP数据库选取。 4.YTHDF2下游潜在靶基因预测及分析:GEO数据库获取m6A位点测序meRIP-seq数据集GSE165690;ENCORI数据库中宫颈癌细胞YTHDF2蛋白-RNA互作（CLIP-seq）数据。（二）细胞干预实验选择HPV16阳性细胞Caski为实验对象，转染不同干扰序列miRNA,分为miRNA过表达组（mimcs）、抑制组（inhabitor）、阴性对照（NC-mimcs与NC-inhabitor）组和未转染任何序列的空白对照（blank）。加尾法Real-timePCR法检验mir-144-3p表达量。Real-timePCR法和western-blot检测YTHDF2的转录和翻译水平，Real-timePCR法测定HPV16E2、E6、E7基因表达量。CCK8实验测定细胞增殖，流式细胞术（FCM）测定细胞生长周期与凋亡。划痕和小室检测细胞迁移和侵袭能力。二.数据分析（一）生物信息学分析 1.YTHDF2与宫颈癌的关系及功能预测:运用R4.1.1软件进行mRNA转录组数据获取、整理、分析和图形绘制。gcrma程序包进行数据标准化处理，inSilicoMerging程序包去除GSE7803、GSE9750批次效应。clusterProfiler程序包的enrichGO和enrichKEGG函数对GSE49339差异基因分别进行基因本体论（GO）和基因组百科全书（KEGG）通路富集分析。R4.1.1软件包survival的survfit函数对生存数据进行logrank检验分析两组的预后差异与风险比(HR)及其95％可信区间计算，ggplot2绘制图形，检验水准α为0.05。 2.YTHDF2上游靶向miRNA预测:R4.1.1软件进行miRNA转录组数据GSE30656获取、整理、分析和图形绘制，Limma程序包进行miRNA差异表达分析。ENCORI(starbase)数据平台预测YTHDF2靶向miRNA基因集。 3.HPV16E2、E6、E7基因m6A位点预测:SRMAP数据库进行HPV16E2、E6、E7m6A位点序列比对。 4.YTHDF2下游潜在靶基因预测和分析:GSE165690meRIP-seq数据使用R4.1.1程序包CHIPseeker注释m6A位点信息及对应的基因，exomePeak包鉴定差异表达峰peak。CLIP-seq数据、GSE49339和GSE165690数据集取交集，筛选YTHDF2潜在靶基因。clusterProfiler程序包的enrichGO对潜在靶基因分别进行GO富集分析，检验水准α为0.05。 (二)实验数据整理与分析本研究使用SPSS26.0分析实验结果数据，采用GraphPadPrimer8.0软件进行相关资料的图表制作，计量资料符合正态分布，以均数±标准差((x)±s)表示,采用t检验进行两组间差异比较，多组间差异比较使用方差分析，LSD法进行事后检验，运用Pearson法进行相关性分析，检验水准α为0.05 结果: (一)生物信息学分析 1.YTHDF2与宫颈癌的关系及功能预测 YTHDF2mRNA表达量在宫颈癌组9.24±0.40高于正常宫颈组9.04±0.38,差异有统计学意义（t=2.32,P=0.022)。生存分析结果表明YTHDF2的表达与宫颈癌预后生存率相关，HR为2.02(1.18-3.47)。GSE49339数据集中筛选出3763个差异表达基因，GO分析结果显示，差异表达基因主要发挥RNA聚合酶Ⅱ启动子的转录调控、DNA模板转录调控和RNA聚合酶Ⅱ核心启动子近端区序列特异性DNA结合的功能;KEGG分析表明，差异基因主要参与HPV感染、MAPK、mTOR、Wnt等细胞信号通路。 2.YTHDF2上游靶向miRNA预测 GSE30656中共鉴定出40个差异表达miRNA,ENCORI(starbase)数据平台预测出44条YTHDF2靶向miRNA,两者取交集共得到4条，分别为hsa-miR-301、hsa-miR-323、hsa-miR-141、hsa-miR-144,其中hsa-miR-144平均表达量6.02最低，序列上也存在多个可能结合位点。 3.HPV16E2、E6、E7基因m6A位点预测 HPV16关键基因E2、E6、E7m6A位点预测显示，仅HPV16E2可能包含8个m6A位点。 4.YTHDF2下游潜在靶基因预测研究运用meRIP-seq、CLIP-seq和RNA-seq多维组学数据集共筛选出671个YTHDF2下游潜在靶基因，GO富集分析表明其参与多个与细胞增殖、凋亡和周期调控过程。 (二)细胞干预实验 miR-144-3p不同干扰序列成功转染前后YTHDF2mRNA和蛋白表达量均出现变化，结果显示，miR-144-3p过表达组(mimcs组)YTHDF2mRNA和蛋白表达量(0.92±0.14,0.57±0.01)低于其阴性对照NC-m组(1.28±0.14,1.04±0.06),组间差异有统计学意义(P＜0.05);miR-144-3p抑制组(inhabitor组)YTHDF2mRNA和蛋白表达量(2.36±0.34,1.14±0.06)高于其阴性对照NC-i组(1.28±0.16,0.89±0.01),组间差异有统计学意义(P＜0.05)。HPV16E2、E6、E7mRNA在干扰前后均未出现显著改变。YTHDF2表达量与细胞生物功能相关性分析结果显示,细胞抑制率和凋亡率与YTHDF2mRNA和蛋白表达量呈负相关(r＜0,P＜0.05),细胞增殖指数(PI)、迁移率、侵袭数与YTHDF2mRNA和蛋白表达量呈正相关(r＞0,P＜0.05)。结论: 1.YTHDF2在宫颈癌中高表达，可参与细胞周期、凋亡，特别是HPV感染等多种信号转导通路,影响宫颈癌患者的生存期,在宫颈癌的发展可能发挥作用。 2.miR-144-3p可靶向调控YTHDF2表达，抑制宫颈癌细胞增殖，促进其凋亡，降低其迁移、侵袭能力。提示YTHDF2受到miR-144-3p调节，进而可能参与宫颈癌变的进程。 3.宫颈癌中YTHDF2可能参与调控多个下游靶基因的表达，影响细胞凋亡、周期和增殖，促进癌症的发生。收起

关键词 : 宫颈癌人乳头瘤病毒16 YTDHF2蛋白 miR-144-3p 基因表达细胞增殖

4. 新型HDAC抑制剂CPS013的啮齿类一般毒理研究

[学位论文] 袁晨星浙江大学 2020年硕士导师: 丁玲共85页

摘要 : CPS013是一类我国自主开发的新型双噻唑类广谱组蛋白去乙酰化酶抑制剂(histone deacetylase inhibitor，HDACi)，能够维系组蛋白乙酰化与去乙酰化的平衡状态，与癌相关基因转录表达、细胞增殖分化及细胞凋亡等诸多过程密切相关。前期研究已经明确CPS0... 展开 CPS013是一类我国自主开发的新型双噻唑类广谱组蛋白去乙酰化酶抑制剂(histone deacetylase inhibitor，HDACi)，能够维系组蛋白乙酰化与去乙酰化的平衡状态，与癌相关基因转录表达、细胞增殖分化及细胞凋亡等诸多过程密切相关。前期研究已经明确CPS013具有较强的抗肿瘤活性，能够诱导T细胞淋巴瘤细胞株Jurkat和Hut78的凋亡，不同浓度的CPS013可明显抑制OVCAR-3细胞增殖，并呈剂量及时间依赖性。另外，前期研究也发现CPS013对乳腺癌细胞株T47D和MDA-MB-231增殖、细胞周期及凋亡具有一定的影响。在荷瘤裸小鼠上，对那些神经胶质瘤、肺癌、乳腺癌瘤等肿瘤具有良好的治疗效果。综上所述，在抗肿瘤的效果上，CPS013具有非常好的开发前景。药物开发过程中，需要考虑其有效性、安全性和质量可控性。为考察CPS013的安全性，我们开展了啮齿类一般毒理研究，以阐明其毒性反应及其靶器官、剂量依赖性、毒性与药物暴露关系，同时关注其潜在的可逆性(如适用)，为临床试验的安全起始剂量、剂量范围、选择潜在不良反应的临床监测指标提供参考依据。本次研究采用了啮齿类动物中的2个种属(SD大鼠和ICR小鼠)进行了一般毒理学研究。大鼠单次灌胃给药毒性试验中，SD大鼠单次灌胃给予0、500、1000和2000mg/kg剂量的CPS013后，在2000mg/kg的剂量下可引起动物死亡，主要毒性反应可能是胃肠道反应，最大耐受量(Maximal Tolerance Dose, MTD)为1000mg/kg。大鼠30天重复灌胃给药毒性试验中，SD大鼠每天1次、连续30天灌胃给予0、10、30和90mg/kg剂量的CPS013后，≥30mg/kg剂量下，粒系细胞成熟受到可逆性的抑制;90mg/kg剂量见可逆的体重下降、胸腺改变(皮质髓质厚度降低，细胞数减少)和骨髓腔改变(造血细胞数量减少，脂肪增多)和可能的胰腺改变(单个胰岛周围轻度纤维化，周围可见数个吞噬色素类物质的吞噬细胞);未观察到明显有害作用水平(No Observed Adverse Effect Level，NOAEL)为10mg/kg。小鼠单次灌胃给药毒性试验中，ICR小鼠单次灌胃给予0、500、1000和2000mg/kg剂量的CPS013后，2000mg/kg剂量下动物可见迟发性死亡，主要毒性反应可见竖毛、毛发无光泽、脱毛、肛周污秽和体重下降，MTD为1000mg/kg。小鼠30天重复给药毒性试验中，ICR小鼠每天1次、连续30天灌胃给予0、50、100、250mg/kg剂量的CPS013后，≥50mg/kg剂量下，动物可见竖毛、摄食量降低、粒系细胞抑制、凝血时间延长、代偿性的髓外造血(肝脏、脾脏以及淋巴结髓索)、子宫萎缩等改变;≥100mg/kg剂量下，动物可见增重减缓、尿液潜血、胸腺萎缩、卵巢萎缩等;250mg/kg剂量下，动物可见死亡，睾丸萎缩与附睾内无成熟精子。停药恢复4周后，各项改变均得到一定恢复，50mg/kg剂量下所有改变全部恢复至正常水平。NOAEL<50mg/kg，无严重毒性反应剂量水平为50mg/kg。一般毒性研究结果提示，啮齿类动物单次给予CPS013后，大剂量下动物可见体重下降、胃肠道反应(腹泻)和死亡，ICR小鼠还可见毛发相关改变等;啮齿类动物30天重复给予CPS013后，动物可见体重下降、胸腺萎缩、骨髓改变，SD大鼠还可见胰腺改变，而ICR小鼠还可见竖毛、摄食量减少、免疫抑制(肝、脾、粒细胞等)和生殖系统(睾丸、附睾、卵巢和子宫)萎缩，毒性反应严重程度或发生率随剂量升高而增加，停药后可全部或部分恢复。收起

关键词 : 组蛋白去乙酰化酶抑制剂 CPS013 啮齿类动物毒性反应抗肿瘤效果

5. 新橙皮苷生殖发育毒性研究

[学位论文] 林春琴浙江大学 2019年硕士导师: 丁玲共81页

摘要 : 目的: 实验室前期研究显示，新橙皮苷(Neohesperidin，Neo)具有良好的降血糖和降血脂效果，具有潜在的临床应用价值。本研究旨在系统考察Neo的生殖发育毒性，包括亲代动物配子形成、交配、受孕、分娩、哺乳以及对子代生长发育等过程的不良影响，... 展开目的: 实验室前期研究显示，新橙皮苷(Neohesperidin，Neo)具有良好的降血糖和降血脂效果，具有潜在的临床应用价值。本研究旨在系统考察Neo的生殖发育毒性，包括亲代动物配子形成、交配、受孕、分娩、哺乳以及对子代生长发育等过程的不良影响，为Neo的进一步研发和应用提供实验室资料。方法: (1)Neo对大鼠生育力与早期胚胎发育的影响设置溶媒对照(5％ sodium carboxymethylcellulose，5％ CMC-Na)组、Neo0.45g/kg组、Neo0.9g/kg组、Neo1.8g/kg组和环磷酰胺(Cyclophosphamide，CP)0.02g/kg组，每组每性别20只。溶媒对照组和Neo0.45、0.9、1.8g/kg组每天灌胃给予10ml/kg容量的相应受试物;CP0.02g/kg组每周皮下注射1次，孕鼠于妊娠期第3天(gestation day 3，GD3)和GD6注射，给药容量2ml/kg。雄鼠于交配前4周开始给药至交配期结束;雌鼠于交配前2周开始给药至妊娠第6天。期间进行临床症状观察、体重和摄食量测定，雄鼠于交配期结束后处死，进行大体解剖观察、病理组织学检查和精子检测;孕鼠于GD15处死，进行大体解剖观察、病理组织学检查和子宫内容物检查。 (2)Neo对大鼠胚胎-胎仔发育的影响设置溶媒对照(5％ CMC-Na)组、Neo0.45g/kg组、Neo0.9g/kg组、Neo1.8g/kg组和CP0.012g/kg组，每组至少20只孕鼠。溶媒对照组和Neo0.45、0.9、1.8g/kg组于GD6至GD15每天灌胃给予10ml/kg容量的相应受试物;CP0.012g/kg组于GD12进行皮下注射，给药容量2ml/kg。期间进行临床症状观察、体重和摄食量测定，GD20处死孕鼠，进行大体解剖观察、子宫内容物检查以及胎仔外观、骨骼和内脏检查。 (3)Neo对大鼠围产期的影响设置溶媒对照(5％ CMC-Na)组、Neo0.45g/kg组、Neo0.9g/kg组、Neo1.8g/kg组和CP0.012g/kg组，每组至少20只孕鼠。溶媒对照组和Neo0.45、0.9、1.8g/kg组孕鼠于GD15至子代出生后第21天(Postnatal day 21，PND21)每天灌胃给予10ml/kg容量的相应受试物;CP0.012g/kg组于GD15、PND1、PND6、PND12、PND18进行皮下注射，给药容量2ml/kg。期间对孕鼠或母鼠进行临床症状观察、体重和摄食量测定，PND21处死。子一代(Firstfilialgeneration，F1代)进行临床症状观察、体重和摄食量测定和生长发育检查，包括体格发育、神经反射功能、四肢运动行为、平衡与协调能力、自主活动、学习和记忆能力、生殖功能检查、病理组织学检查等。结果: (1)Neo对大鼠生育力与早期胚胎发育的影响雄性动物给予0.02g/kgCP后，动物临床症状、体重、摄食、精子活力、精子计数以及生殖器官均未见明显毒性反应，但精子畸形的异常发生率明显升高。雌鼠给予0.02g/kgCP后，对雌鼠着床前阶段黄体生成、着床过程影响较小，但对于着床后胚胎发育过程有显著的毒性作用。 SD大鼠给予Neo0.45、0.9、1.8g/kg后，临床症状观察、体重、摄食、妊娠期增重、生殖系统功能、交配行为、生育力、早期胚胎发育等均未见明显毒性反应。 (2)Neo对大鼠胚胎-胎仔发育的影响 GD12皮下注射0.012g/kgCP，孕鼠于GD15开始的体重减轻，该变化与子宫重、胎仔重量、胎仔大小相关指标变化一致;同时，胎仔的外观检查、内脏检查和骨骼检查中均可见明显毒性反应。孕鼠于GD6-GD15给予Neo后，均未见明显的母体毒性反应;对胚胎-胎仔的主要毒性影响为延缓顶骨、第六胸骨骨化，可能影响下颌骨、颈椎、腰椎、耻骨、枕骨、第一胸骨、第三胸骨、第四胸骨的骨化程度、肋骨骨化形态以及脑部和食管发育。 (3)Neo对大鼠围产期的影响亲代母鼠给予CP后，主要的母体毒性为产后的体重摄食下降，;CP对于F1代动物的存活、体格发育、平衡协调能力、生殖系统器质性及功能均可能有一定的毒性影响。亲代母鼠给予0.45、0.9、1.8g/kg的Neo后，体重、摄食、分娩以及哺乳情况均未见明显改变;CP对F1代动物的存活、体格发育、神经反射功能、四肢运动功能、平衡协调能力、自发活动检查、学习和记忆能力以及生殖功能方面均未见明显毒性。结论: 在本试验条件下，SD大鼠灌胃给予0.45、0.9、1.8g/kg剂量Neo后，对生育力与早期胚胎发育以及围产期未见明显毒性反应，对胚胎-胎仔的发育具有一定的毒性反应，主要毒性可能为延缓骨骼骨化以及影响脑和食管发育。收起

关键词 : 新橙皮苷生育力胚胎发育生殖毒性动物实验

6. 贵州省余庆县卫健系统事业编制人员职业倦怠研究

[学位论文] 何玺贵州大学 2022年硕士导师: 丁玲共79页

摘要 : 党的十九大将健康中国建设提升到国家战略地位，十九届五中全会也将建成健康中国列为2035年基本实现社会主义现代化国家的远景目标。健康中国的建设，给新时期卫健系统指明了新的方向、提出了新的要求，卫健系统工作人员承担着建设健康中国的重任，其... 展开党的十九大将健康中国建设提升到国家战略地位，十九届五中全会也将建成健康中国列为2035年基本实现社会主义现代化国家的远景目标。健康中国的建设，给新时期卫健系统指明了新的方向、提出了新的要求，卫健系统工作人员承担着建设健康中国的重任，其工作能力水平和工作态度将极大影响着健康中国的建设步伐。由于工作本身、家庭方面以及社会层面的种种因素，系统内的工作人员难免产生职业倦怠，在一定程度上减缓了健康中国建设的进度。尤其是2019年年末新冠肺炎疫情的爆发，进一步加速了卫健系统内各医疗卫生机构工作人员的职业倦怠。本文以贵州省余庆县卫健系统事业编制人员为研究对象，采用基本信息+MBI—GS（修订版）+影响因素的内容设计调查问卷，通过微信问卷星发放问卷，进行问卷调查。统计分析结果显示：一是他们在玩世不恭、个人成就感两个维度出现了轻度倦怠，但在情绪衰竭维度出现了中度倦怠；二是在所有影响因素中，大家对于办公设备设施是否齐全、工作量是否适中、奖金分配以及监管是否合理、工作是否得到领导认可、培训机会是否充足、工作内容是否单调枯燥、工作地位是否高等方面是处于不确定状态，对于晋升机会更是普遍不看好；三是除少数影响因素与个人成就感维度的某些方面无显著相关性外，其余与三个维度都具有显著相关性。再结合结构性访谈以及个案分析的结果，从保健因素层面和激励因素层面分析发现造成职业倦怠的主要原因包括工作量偏大、奖金分配差距大、社会压力大、缺乏正向舆论引导、个人合理需求得不到满足、个人动力不足、个人心理期望与实际预期不符、培训机会不均、工作内容单调枯燥、晋升渠道窄等。基于此，本文根据分析出的原因，逐一对症下药，从保健因素层面提出“灵活调整人员配置、缩小奖金分配差距、构建社会支持系统、强化正向舆论引导”，从激励层面提出“重视心理引导、公平分配培训机会、有条件进行轮岗、竞争性选拔干部”等相应缓解职业倦怠的对策建议。收起

关键词 : 卫健系统医疗卫生机构事业编制人员职业倦怠

7. 磷脂混杂酶1和中期因子在原发性肝细胞癌发生发展中作用的研究

[学位论文] 楼亚玲浙江大学 2017年硕士导师: 丁玲共75页

摘要 : 目的：通过检测PLSCR1与MK在肝癌组织及癌旁肝正常组织中的基因表达差异并分析PLSCR1与MK和肝癌病理特征的相关性及两者之间的相关性，并运用Cox回归模型分析临床基础资料对患者总生存期的影响;构建重组质粒，在细胞水平探讨PLSCR1与MK相互作用在肝癌... 展开目的：通过检测PLSCR1与MK在肝癌组织及癌旁肝正常组织中的基因表达差异并分析PLSCR1与MK和肝癌病理特征的相关性及两者之间的相关性，并运用Cox回归模型分析临床基础资料对患者总生存期的影响;构建重组质粒，在细胞水平探讨PLSCR1与MK相互作用在肝癌发生发展中可能的作用机制。方法：⑴收集我院2009年1月至2013年6月期间收治的原发性肝细胞癌手术切除患者肝癌组织和对应癌旁肝正常组织标本各40例，所有病例确诊为原发性肝细胞癌，所有病例均为初诊，术前均未接受过放化疗、中医及免疫治疗，临床资料完整。每例标本均留取肿癌组织和癌旁正常肝组织。手术标本切除后于30min内取样本并液氮速冻，保存于-80℃冰箱备用。采用Real-Time PCR技术(Q-PCR)检测40例肝癌组织与癌旁正常组织中PLSCR1与MK表达量，统计分析其与患者临床病理特征关系，采用Cox回归模型分析临床基础资料对患者总预后生存期的影响以及分析PLSCR1和MK表达水平之间的相关性。⑵根据质粒pET28a(+)-PLSCR1、pGEX-4T1-MK、pcDNA3.1/myc-His(-)A-PLSCR1和pcDNA3.1-MK设计引物，构建质粒;然后将测序确认的重组质粒pET28a(+)-PLSCR1和pGEX-4T1-MK重组表达质粒分别转入BL21菌株中，分别将上述重组表达质粒转化菌株中加入IPTG进行诱导表达，利用GST-pull down技术和免疫共沉淀(CO-IP)技术验证PLSCR1与相互作用蛋白MK之间的相互作用。⑶研究PLSCR1和MK相互作用对肝癌细胞增殖的影响。分别构建PLSCR1和MK的siRNA干扰质粒，分组转染HepG2细胞:MK-siRNA组，PLSCR1-siRNA组，MK+PLSCR1-siRNA共转组和未加任何处理的对照组，借助酶联免疫检测仪测定并记录各孔在450nm波长下对应的吸收值。⑷检测PLSCR1和MK相互作用对肝癌细胞迁移的影响:将MK-si-RNA-HepG2，PLSCR1-siRNA-HepG2细胞、MK+PLSCR1-siRNA-HepG2细胞、Control-siRNA-HepG2细胞及HepG2细胞接种于小室内，培养48h后进行细胞染色，通过普通倒置显微镜下对细胞的迁移情况进行观察，在560nm下测定细胞裂解液的吸收值，并定量计算其含量。结果：①肝癌组织中PLSCR1和MK基因的表达量明显高于癌旁组织，PLSCR1的ΔΔCt值分别为-2.36±1.49，2-ΔΔCt值（RQ值）均值为8.55±7.67; MK的ΔΔCt值为-2.97±0.86，RQ值为9.05±3.97，具有差异有统计学意义（P＜0.05）。依据40例患者RQ值均值将PLSCR1和MK进行分组，RQ值＞10为高表达组，RQ值＜10为低表达组进行分析，结果表明PLSCR1与MK的表达与患者的年龄、是否伴随肝硬化、血液AFP值、肿瘤大小及是否包膜侵犯无关（P＞0.05），而与患者的性别、肿瘤分化程度、肿瘤数目、血管浸润及临床分期相关性显著（P＜0.05）。②通过Kaplan-meier生存分析PLSCR1和MK的癌/癌旁组织的倍数变化(RQ值)对肝癌术后总生存期的影响，发现PLSCR1和MK高表达组的生存率明显低于低表达组，Breslow法检验水平间的两两比较具有显著性差异(P＜0.05)。运用Cox回归模型分析患者临床基础资料及患者PLSCR1和MK基因的表达量与肝癌术后生存期相关风险因素，发现包膜侵犯、血管浸润、Ki-67值、性别、肝硬化及PLSCR1和MK高表达是评估总生存期的风险因素(P＜0.05)，包膜侵犯风险系数最高为8.04(P=0.001);肝癌组织中PLSCR1和MK表达水平Spearman相关性分析结果显示r=0.30(P=0.03)，两者存在弱正相关性。③对成功构建的质粒进行酶切鉴定，测序结果表明，构建四个质粒的外源片段按正确的阅读框架连入pET28a(+)、pGEX-4T1、pcDNA3.1/myc-His(-)A和pcDNA3.1载体，阳性克隆经测序无误的抽提质粒;融合蛋白、蛋白沉降分析及CO-IP试验结果显示，PLSCR1和MK蛋白可以发生相互作用。④成功构建MK和PLSCR1干扰细胞株，通过转染细胞干扰PLSCR1和MK的表达后，用CCK-8检测HepG2细胞的增殖情况，HepG2细胞的增殖效率显著降低，并同时干扰PLSCR1和MK对HepG2细胞增殖抑制作用更为显著(P＜0.01);PLSCR1和MK相互作用同样对HepG2细胞迁移具有抑制作用，侵移实验表明干扰PLSCR1可以明显影响HepG2细胞的迁移作用，并且同时干扰PLSCR1和MK对HepG2细胞的迁移抑制作用更显著(P＜0.01)。结论：⑴PLSCR1与MK在肝癌组织中的表达明显高于癌旁组织，其表达水平与患者临床病理特征相关性表明与患者的性别、肿瘤分化程度、肿瘤数目、血管浸润及临床分期相关性显著（P＜0.05）。⑵Cox回归模型分析患者临床基础资料及患者PLSCR1和MK基因的表达量与肝癌术后生存期相关风险因素，发现包膜侵犯、血管浸润、Ki-67值、性别、肝硬化及PLSCR1和MK高表达是评估总生存期的风险因素（P＜0.05）;肝癌组织中PLSCR1和MK表达水平Spearman相关性分析两者存在正相关性（P＜0.05）。⑶融合蛋白、蛋白沉降分析、CO-IP实验及GST-Pull down实验结果表明，PLSCR1和MK蛋白可以发生相互作用。⑷PLSCR1与MK蛋白相互作用影响HepG2细胞增殖和迁移，干扰PLSCR1可抑制HepG2细胞的增殖和迁移效果，同时干扰PLSCR1和MK对HepG2细胞的增殖和迁移的抑制作用更为显著（P＜0.01）。收起

关键词 : 肝细胞癌磷脂混杂酶蛋白表达病理细胞学

8. 雷山县D镇乡镇工作人员职业倦怠问题研究

[学位论文] 杨洋贵州大学 2020年硕士导师: 丁玲共72页

摘要 : 近年来，中国各项政策方针聚焦基层，中央提出要加快农业现代化步伐，调整优化产业结构，保障和改善民生，推进扶贫攻坚、加快小城镇建设等内容。而社会主要矛盾的转变使得大众对政府有更高的期盼，乡镇政府面临着巨大的挑战。乡镇工作人员是公共权力... 展开近年来，中国各项政策方针聚焦基层，中央提出要加快农业现代化步伐，调整优化产业结构，保障和改善民生，推进扶贫攻坚、加快小城镇建设等内容。而社会主要矛盾的转变使得大众对政府有更高的期盼，乡镇政府面临着巨大的挑战。乡镇工作人员是公共权力的第一级行使者，他们承担着服务群众，落实政策，维护社会稳定的重要职责，其职责履行情况和管理水平决定着民生问题是否能够有效解决。然而，乡镇工作人员面临着任务多待遇差，压力大而晋升空间狭窄等问题，在诸多因素的相互作用下，职业倦怠现象日益凸显。通过学习有关职业倦怠的研究后发现，国内外对职业倦怠的研究主要以医生、警察、教师等作为职业倦怠的研究对象，虽然近年来国内也出现了不少针对政府部门的研究，但是研究对象大多数以公务员为主，对乡镇工作人员这一特殊群体的研究和讨论还不充分。因此，结合乡镇工作人员的特点，深入了解他们职业倦怠的基本状况，找出原因并探讨干预对策具有重要的理论和现实意义。本文把雷山县D镇工作人员为研究对象，以职业倦怠三维度理论、双因素理论、公平理论作为理论指导基础，对D镇工作人员的职业倦怠情况进行调查。使用SPSS25.0数据处理软件进行频率分析、基本描述性分析和人口变量学上的差异分析等方法处理调查数据。从研究结果上来看，雷山县D镇工作人员的职业倦怠处于中等职业倦怠水平，其中情绪耗竭倦怠程度比较明显；不同性别、年龄、工作年限、婚姻状况、薪资收入、职务的职业倦怠程度存在明显差异。通过个人的深度访谈，探寻D镇工作人员职业倦怠的深层原因，并对如何干预职业倦怠进行了探讨，总体来说，对D镇工作人员职业倦怠的干预措施可以从保健、激励两个层面展开，在消除负面情绪的基础上，结合优化的激励措施来使得干预取得最优效果，从而为该地区乡镇工作人员职业倦怠的预防和缓解提供帮助。收起

关键词 : 乡镇政府工作人员职业倦怠干预策略

9. 石墨烯-碳量子点复合材料的制备及电化学性能研究

[学位论文] 彭泽泽武汉科技大学 2018年硕士导师: 丁玲共71页

摘要 : 近年来，随着纳米技术的发展与应用，由碳构成的纳米材料，如石墨烯(GP)、碳量子点(CQDs)和碳纳米管等，制备原料及方法不断创新，展现了良好的应用前景。将零维的碳量子点引入二维的石墨烯材料，有望增强石墨烯界面电子的传输速率和表面电化学活性，... 展开近年来，随着纳米技术的发展与应用，由碳构成的纳米材料，如石墨烯(GP)、碳量子点(CQDs)和碳纳米管等，制备原料及方法不断创新，展现了良好的应用前景。将零维的碳量子点引入二维的石墨烯材料，有望增强石墨烯界面电子的传输速率和表面电化学活性，对于构建高效灵敏的电化学传感材料具有重要的意义。本论文以焦粉为碳源，合成水溶性碳量子点，再以石墨烯为载体，负载碳量子点，制备石墨烯-碳量子点(G-CQDs)复合材料，并分别探讨碳量子点和石墨烯-碳量子点复合材料的电化学性能，从而获得性能优良的功能化石墨烯-碳量子点复合材料。具体研究内容如下: (1)以焦粉为原料，水热回流法制备了碳量子点，通过荧光量子产率确定最优制备条件。研究结果表明，当回流温度为100℃、反应时间为8h、混合酸（浓硫酸和浓硝酸）体积为16mL、pH=9时，所制得的碳量子点荧光量子产率最高可达34.27％。 (2)以石墨烯作为导电骨架，负载碳量子点，合成了石墨烯-碳量子点复合材料;采用循环伏安法(CV)测定阴、阳极峰值电势差|△Ep|确定最优复合条件。研究表明，当mGP∶mCQDs=50∶1、热处理温度为150℃、时间为60min时，所合成的石墨烯-碳量子点复合材料的电化学活性最高，其|△Ep|值约为584mV。作为锂离子电池负极材料使用时，经过近500次充放电，复合材料的电池容量保持率比纯石墨烯电池提高了约166.7％。 (3)以石墨烯-碳量子点复合材料作为电化学传感器，通过尿酸、抗坏血酸和双氧水等小分子的检测，研究了石墨烯-碳量子点复合材料电化学性能。结果表明，石墨烯-碳量子点复合材料电极对尿酸检测的线性范围为1-150μmol/L，最低检测限约为0.011μmol/L，灵敏度约为2319.4μA/(mmol/L·cm2);对抗坏血酸检测的线性范围为800-9000μmol/L，最低检测限约为31.579μmol/L，灵敏度约为53.1μA/(mmol/L·cm2);对双氧水检测的线性范围是1-180mmol/L，最低检测限约为0.213mmol/L，灵敏度约为25μA/(mmol/L·cm2)。收起

关键词 : 复合材料碳量子点石墨烯制备工艺电化学性能

10. 基于史密斯模型的G市B区城市生活垃圾分类政策执行研究

[学位论文] 王晓芳贵州大学 2023年硕士导师: 丁玲共69页

摘要 : 城市逐渐被垃圾包围是目前全球各国面临的发展困境之一，各国政府纷纷寻找有效的方法解决城市生活垃圾带来的一系列问题。我国近年来十分重视城市生活垃圾存在的问题和垃圾分类处理面临的困境，城市生活垃圾分类的成效已成为各地建设生态文明城市的重... 展开

关键词 : 城市生活垃圾分类政策执行史密斯政策执行过程模型