中国科学技术信息研究所--国家工程技术数字图书馆

[学位论文] 于洁中国科学技术大学 2021年博士导师: 谢志刚共164页

摘要 : 癌症免疫疗法是一种新兴的治疗策略，可以调控免疫系统来对抗癌症。虽然临床上已经使用了几种免疫治疗药物来治疗癌症，但是某些患者存在的“冷”肿瘤的情况导致对免疫治疗的响应率低，同时潜在的免疫脱靶等不良事件也使肿瘤的免疫治疗面临巨大挑战。... 展开癌症免疫疗法是一种新兴的治疗策略，可以调控免疫系统来对抗癌症。虽然临床上已经使用了几种免疫治疗药物来治疗癌症，但是某些患者存在的“冷”肿瘤的情况导致对免疫治疗的响应率低，同时潜在的免疫脱靶等不良事件也使肿瘤的免疫治疗面临巨大挑战。凭借肿瘤内蓄积和释放等方面的优点，纳米药物为促进安全有效的免疫疗法的临床转化提供可能。纳米医学得益于EPR效应介导的被动靶向和肿瘤表面高表达的特异性受体介导的主动靶向。免疫类药物纳米化可以显著增加药物在肿瘤内的蓄积量，提高药物的作用效率，同时降低药物可能存在的全身毒性，减少不良事件的发生率。纳米药物还能够合理控制药物的释放时间，显著提升药物的作用效率。纳米药物可以将多种治疗手段(放疗，化疗和光疗等)与免疫治疗药物相结合，在引发的肿瘤细胞的免疫原性死亡(ICD)的同时，进一步利用免疫刺激药物系统调节免疫抑制的微环境，有效增加免疫治疗的效果。在传统的消除肿瘤的基础上，联合疗法利用免疫系统消除残余的肿瘤细胞，防止癌症复发，同时还可以杀死转移的肿瘤细胞，防止向其他器官的扩散。因此，我们利用可逆的Diels-Alder反应，在PEG末端修饰PD-L1抑制剂(BMS-1)，并进一步制备表面修饰了抑制剂的I-PtNPs。在NIR激光照射下，I-Pt NPs消融肿瘤细胞，暴露抗原，纳米粒表面的温度也达到了逆Diels-Alder反应进行的温度，BMS-1被释放，同时暴露马来酰亚胺(Mal)。I-PtNPs具有类佐剂功能，可以促进树突状细胞(DCs)成熟，暴露的Mal也可以捕获抗原。I-PtNPs的两个佐剂功能可以促进DCs向T细胞的抗原呈递，提高免疫响应。释放的BMS-1可以偶联PD-L1受体，减少T细胞耗竭，提高免疫治疗的效果。同时，我们利用温敏的脂质体担载光敏剂(IR780)、奥沙利铂(OXA)和BMS-1。利用光热治疗(PTT)和OXA产生协同的ICD效果，诱导细胞凋亡的同时暴露抗原，引起免疫响应。采用温敏的脂质体，光热达到的温度正好与磷脂的相转变温度相同。光热进行的同时可以释放担载的0XA和BMS-1。释放的BMS-1进一步增加了T细胞的浸润，引发免疫响应清除肿瘤细胞。其次，我们对奥沙利铂进行亲疏水修饰，进一步担载双氢青蒿素(DHA)后，组装形成纳米胶束，在肿瘤部位蓄积。在酸性条件下，pH响应的基团可以控制BMS-1在细胞外部分释放，有利于BMS-1在细胞外发生作用，偶联细胞表面的PD-L1受体。在释放BMS-1后，纳米结构不发生改变，继续被细胞内吞，细胞内GSH高表达诱导OXA和DHA释放，产生ICD效果。联合ICD与免疫调节的BMS-1可以协同增强免疫响应，清除肿瘤组织，有效抑制肿瘤的生长。收起

关键词 : 药物载体免疫响应抗肿瘤效果

2. 基因枪介导的neu基因DNA疫苗抗肿瘤作用的实验研究

[学位论文] 查园园北京协和医学院(中国医学科学院) 2002年博士导师: 林晨;吴旻共100页

摘要 : 在该论文工作中,我们使用基因枪作为转基因工具,对人Her-2/neu基因胞外区DNA疫苗pWRG-neu在预防和治疗实验小鼠肿瘤及抗转移的作用和机制进行了研究.对基因枪介导的in vitro和in vivo转基因效率、转基因的表达时间进行研究表明,基因枪能够有效的对体外... 展开

关键词 : DNA疫苗基因枪基因佐剂抗肿瘤效果

3. 基于锰元素的纳米药物构建及抗肿瘤研究

[学位论文] 朱阳中国科学技术大学 2021年博士导师: 刘扬中共189页

摘要 : 癌症，又称恶性肿瘤，是严重危害人类健康的主要公共卫生问题之一。目前癌症的治疗方法主要包括化学疗法、手术切除、放射性疗法等。手术切除是通过直接切除肿瘤组织，临床上一般用于治疗实体肿瘤，治疗效果非常显著;放疗是指用各种不同种类的射线照射... 展开癌症，又称恶性肿瘤，是严重危害人类健康的主要公共卫生问题之一。目前癌症的治疗方法主要包括化学疗法、手术切除、放射性疗法等。手术切除是通过直接切除肿瘤组织，临床上一般用于治疗实体肿瘤，治疗效果非常显著;放疗是指用各种不同种类的射线照射肿瘤，以灭杀或抑制过度增殖的癌细胞的一种治疗方法;化疗是指化学药物进入血液和肿瘤组织来杀伤肿瘤细胞，目前化疗是最常用的手段之一。但传统的化疗存在缺陷，化疗药物作用于整个身体对正常组织造成严重的毒副作用，对病灶的药效却随之大幅度降低，这是目前化疗患者的主要死亡原因。因此，合理设计开发生物安全性好和高效率的癌症治疗策略尤为重要。论文在第一章对癌症治疗的新策略以及锰元素在治疗癌症中的相关研究进行了综述，主要涉及纳米材料运输蛋白、光热治疗、光动力治疗、纳米酶催化治疗等新策略以及多种方式协同增强肿瘤治疗;然后介绍了锰元素在纳米酶中催化治疗和成像中的应用;最后介绍了二氧化锰的纳米酶在肿瘤微环境中基于催化产生氧气改善肿瘤的乏氧微环境，进而增强肿瘤治疗功效。第二章介绍了我们设计的双功能纳米反应器(GOx-MSN@MnPc-LP)，亲水性葡萄糖氧化酶通过静电作用负载在介孔二氧化硅中，疏水性锰酞菁通过疏水相互作用负载在脂质体的磷脂双分子层中，最后介孔硅和脂质体再通过静电相互作用自组装得到纳米反应器。体外和体内实验均表明纳米反应器不仅可以催化葡萄糖转变成有毒的过氧化氢，而且可以在730 nm激光照射下产生单线态氧，进而协同抑制肿瘤生长。苏木精-伊红(H&E)实验则显示纳米反应器对小鼠的主要器官没有影响，进而证明纳米反应器的生物安全性。该工作通过设计合适的载体用于细胞内递送蛋白，不仅有效地保护蛋白质不变性，而且显著地降低毒副作用。第三章我们设计和开发了一种基于锰的单原子纳米酶(Mn/PSAE)，用于协同纳米催化和光热治疗肿瘤。Mn/PSAE可以在肿瘤微环境中特异性催化过氧化氢分解为有毒的羟基自由基和超氧阴离子，进而诱导细胞凋亡。Mn/PSAE还具有光热效应，协同纳米催化治疗显著提高单原子酶的抗肿瘤效果。我们通过生化实验来验证Mn/PSAE抑制肿瘤生长的机理，其中包括多种酶活性的测定、活性氧的检测、线粒体膜电位变化、溶酶体膜的完整性以及细胞内的脂质过氧化。体外和体内实验显示Mn/PSAE可以有效地抑制肿瘤生长，且生物安全性高。该工作利用材料的化学特性构建出绿色、高效的纳米催化剂，提高在生理环境的催化效率，并降低对患者的毒副作用。第四章我们设计和制备了一种纳米花型的硫化锰铜(PCMS NFs)纳米颗粒，用于多模态成像介导的纳米催化治疗和二区光热治疗。PCMS NFs在肿瘤的微环境（TME）中特异性地将肿瘤过表达的过氧化氢转变成有毒的超氧阴离子，进而诱导癌细胞凋亡;在近红外二区激光照射下，PCMS NFs可高效地产生热效应，协同纳米催化治疗有效地抑制肿瘤生长。此外，PCMS NFs还可以进行多模态成像，包括热成像、光声成像和磁共振成像，实时检测肿瘤的部位和生长情况，实现诊疗一体化。第五章我们通过生物矿化法构建了肿瘤微环境（低pH/过表达的H2O2）响应增强光动力的诊疗平台-负载二氧化锰纳米颗粒和二氢卟吩的铁蛋白(Ce6/Ftn@MnO2)。Ce6/Ftn@MnO2催化肿瘤内源性过氧化氢原位产生氧气来缓解光动力治疗中肿瘤低氧引起的耐药。该设计充分利用了蛋白和颗粒固有特性，包括良好的生物降解性，良好的生物相容性和较高的肿瘤富集能力。同时，Ce6/Ftn@MnO2也可用于荧光成像，在体内精确跟踪药物富集和肿瘤位置。体外实验证明显示在近红外光照射后，Ce6/Ftn@MnO2有效的改善肿瘤部位的乏氧环境进而显著提高抑制肿瘤生长的效率，且生物安全性高。这项工作为生物矿化合成提供了新的见解，构建了一种肿瘤微环境响应的治疗平台，通过持续催化氧气产生，改善肿瘤的缺氧环境来提高光动力治疗功效。收起

关键词 : 恶性肿瘤纳米药物锰元素抗肿瘤效果

4. 调控肿瘤活性氧水平的纳米体系的构建及用于肿瘤治疗的研究

[学位论文] 涂雅兰华南理工大学 2022年博士导师: 袁友永共170页

摘要 : 与正常细胞相比，肿瘤细胞内的活性氧（reactiveoxygenspecies，ROS）水平显著上升。为避免胞内过高活性氧水平引起的氧化应激损伤，肿瘤细胞的抗氧化系统水平会相应地上调以调节活性氧。因此，这种处于高水平的氧化还原稳态使肿瘤细胞对活性氧升高更... 展开与正常细胞相比，肿瘤细胞内的活性氧（reactiveoxygenspecies，ROS）水平显著上升。为避免胞内过高活性氧水平引起的氧化应激损伤，肿瘤细胞的抗氧化系统水平会相应地上调以调节活性氧。因此，这种处于高水平的氧化还原稳态使肿瘤细胞对活性氧升高更敏感，更容易受到外源性活性氧引起的损伤。选择性地提升肿瘤细胞内活性氧水平，已被证明是实现肿瘤细胞杀伤的一种有效策略。近年来，随着纳米技术的快速发展，其在肿瘤活性氧调控中的应用潜力受到广泛关注。本论文围绕如何选择性调控肿瘤活性氧水平，设计了多种纳米体系用于增强肿瘤治疗的研究。本论文研究内容主要分为三个部分： 1.作为光动力疗法的基本组成部分，光敏剂在肿瘤组织中的分布与光动力疗效息息相关。我们提出了一种增强光敏剂肿瘤靶向和渗透的策略用于提升肿瘤细胞活性氧水平，实现肿瘤的高效治疗。将叠氮（N3）基团修饰的非天然糖（Ac4ManNAz）递送至肿瘤细胞，通过细胞的糖代谢工程将叠氮基团表达于肿瘤细胞的细胞膜上作为外源性配体，进而将二苯并环辛炔（DBCO）修饰的光敏剂Ce6（DBCO-Ce6）通过DBCO与N3之间的生物正交反应将光敏剂递送至肿瘤细胞。此外，通过细胞外囊泡的配体转运使叠氮基团在细胞间转运，实现远离血管肿瘤细胞的叠氮基团标记及光敏剂的有效递送，在激光照射下显著抑制了荷瘤小鼠的肿瘤生长。 2.基于肿瘤活性氧响应的刺激响应型聚合物在胞内的响应降解受限于内源性活性氧水平，我们构建了活性氧响应的具有循环放大降解性质的聚硫代缩醛（PEG-PTA1-MT）用于提升胞内活性氧水平并用于增强肿瘤免疫治疗。该聚合物由肉桂醛（CA）和ROS响应的硫代缩醛键（TA）组成，侧链修饰吲哚胺2,3-双加氧酶1（IDO-1）的抑制剂1-甲基-DL-色氨酸（1-MT）。该聚合物自组装的纳米颗粒（SANP1-MT）被肿瘤细胞摄取后，TA键发生ROS响应降解并释放CA，CA扰乱线粒体功能，进一步升高胞内ROS水平，实现聚合物的循环放大降解。同时，升高的活性氧水平打破细胞氧化还原稳态，诱导肿瘤细胞的免疫原性死亡（ICD），侧基修饰的1-MT同时释放逆转肿瘤免疫抑制性微环境，协同增强了肿瘤免疫治疗效果。 3.进一步地，我们提出了协同干预肿瘤氧化还原稳态，有效提升肿瘤细胞活性氧水平的策略。以肉桂醛和二硫键为基本结构单元合成得到了树枝状聚合物pCASS-PEG，肉桂醛可引起胞内活性氧水平的升高，而二硫键通过与胞内谷胱甘肽（GSH）的置换反应降低胞内GSH含量，从而协同破坏细胞内氧化还原稳态，进而诱导肿瘤细胞产生ICD。此外，为抑制肿瘤细胞ICD负反馈调节引起的程序性死亡-配体1（PD-L1）上调，我们将该树枝状聚合物通过静电作用负载靶向PD-L1的小干扰RNA（siPD-L1），通过同时激活体内抗肿瘤免疫反应和抑制PD-1/PD-L1通路，实现了高效的肿瘤免疫治疗，并有效抑制了肿瘤转移。总而言之，本论文构建了一系列调控肿瘤活性氧水平的纳米体系，提出了协同放大肿瘤氧化应激的治疗策略，发展了破坏肿瘤细胞内氧化还原稳态的多功能纳米材料，为纳米体系在肿瘤治疗中的应用提供了新思路。收起

关键词 : 纳米材料活性氧选择性调控抗肿瘤效果

5. 海洋活性肽CS-piscidin及其修饰肽抗卵巢癌效果研究

[学位论文] 邱小菊广东医科大学 2022年硕士导师: 张颖共55页

摘要 : 【目的】 1.研究证明海洋多肽CS—piscidin体外能杀伤抑制卵巢癌活性及毒性； 2.对CS-piscidin进行修饰，合成靶向肽RGD修饰的CS-p-rgd及及豆蔻酸修饰的CS-p-rgd-myr的CS-piscidin修饰肽并对其抗肿瘤活性进行分析。 3.建立小鼠卵巢癌腹... 展开【目的】 1.研究证明海洋多肽CS—piscidin体外能杀伤抑制卵巢癌活性及毒性； 2.对CS-piscidin进行修饰，合成靶向肽RGD修饰的CS-p-rgd及及豆蔻酸修饰的CS-p-rgd-myr的CS-piscidin修饰肽并对其抗肿瘤活性进行分析。 3.建立小鼠卵巢癌腹腔扩散模型，检测海洋活性肽及其他修饰肽的体内抗肿瘤效果。【方法】 1.CCK8评估条纹锯鮨来源活性肽NK、HIS-2及CS-piscidin的抗癌活性； 2.将CS-piscidin多肽C端的第一个氨基酸上的羧基与Cyclo-rgdfk多肽侧链的氨基连接,获得CS-p-rgd多肽;CS-rgd多肽N端的第一个氨基酸上的氨基与豆蔻酸上的羧基连接，获得CS-p-rgd-myr多肽; 3.CCK8检测上述CS-piscidin及其修饰多肽对卵巢癌细胞活性及正常细胞毒性； 4.克隆形成实验评价上述CS-pscidin及其修饰多肽对不同卵巢癌的克隆形成能力的影响； 5.球囊形成实验评价上述CS-piscidin及其修饰多肽对不同卵巢癌细胞球囊形成能力的影响； 6.AnnexinV/PI标记结合流式分析法检测上述CS-piscidin及其修饰多肽对卵巢癌细胞死亡的影响； 7.建立卵巢癌腹腔扩散模型，利用活体成像检测和腹水量比较，小鼠体内评价海洋活性肽及其修饰肽的抗癌效果。【结果】 1.海洋多肽NK、HIS-2抑制ID8细胞活力作用不明显,但CS-piscidin可以剂量依赖性抑制ID8细胞的活力，CS-picidin对ID8细胞的IC50为14.6μM,差异有统计学意义（P＜0.05）。 2.CS-piscidin及其修饰肽CS-p-rgd-myr、CS-p-rgd剂量依赖性抑制卵巢癌细胞系ID8、A2780、OVCA429的活力，CS-piscidin及其修饰肽CS-p-rgd-myr、CS-p-rgd对ID8的IC50分别为14.6μM、24.7μM、9.1μM；对A2780的IC50分别为17.7μM、25.8μM、10.6μM；对OVCA429的IC50分别为9.1μM、18.5μM、7.4μM；CS-piscidin及其修饰肽CS-p-rgd-myr、CS-p-rgd对正常卵巢细胞的IC50分别为15.2μM、31.8μM、7.5μM；对静脉上皮细胞的IC50分别为25.8μM、39.6μM、10.7μM。 3.CS-piscidin、CS-p-rgd-myr、CS-p-rgd剂量依赖性促进卵巢癌细胞的凋亡，促进细胞凋亡能力从强到弱的依次为CS-p-rgd、CS-piscidin、CS-p-rgd-myr，差异有统计学意义（P＜0.05）。 4.CS-piscidin、CS-p-rgd-myr、CS-p-rgd剂量依赖性抑制卵巢癌的克隆及球囊形成能力，其中CS-p-rgd抑制克隆及球囊形成的能力最强差异有统计学意义（P＜0.05)，CS-piscidin与CS-p-rgd-myr相近。 5.实验组小鼠与空白对照组相比较，多肽及修饰肽处理的小鼠，代表肿瘤的荧光信号值和腹水体积明显减少，抑瘤能力由强到弱依次为：CS-p-rgd-myr、CS-p-rgd、CS-piscidin，差异有统计学意义（P＜0.05）。【结论】 1.CS-piscidin具有良好的体内外抗卵巢癌效果，同时具有一定的细胞毒性。 2.将CS-piscidin与肿瘤靶向肽Cyclo-rgdfk融合，抗卵巢效果增强的同时对正常细胞毒性也增强，体内抗肿瘤作用稍强于原肽，但有一定的组织毒性，小鼠腹水形成明显。 3.将合成的CS-p-rgd进行豆蔻酸修饰后，多肽的毒性减弱，体外抗卵巢癌活性及促进凋亡能力弱于原肽，抑制克隆及球囊形成的能力与原肽相近，而体内抗卵巢癌效果更佳，腹水产生更少，安全性更高。收起

关键词 : 卵巢癌海洋活性肽豆蔻酸修饰抗肿瘤效果

6. 光响应性纳米载药系统的制备及其抗肿瘤效果研究

[学位论文] 张旭武燕山大学 2019年博士导师: 高大威共133页

摘要 : 癌症以其高发病率和高致死率严重威胁着人类的生命健康。刺激响应性纳米载药系统作为新兴的化疗药物递送载体，得到研究人员的广泛关注。其中，由于近红外光极强的组织穿透能力，使得近红外光响应性纳米载药系统在肿瘤治疗领域展现出良好的应用前景。... 展开癌症以其高发病率和高致死率严重威胁着人类的生命健康。刺激响应性纳米载药系统作为新兴的化疗药物递送载体，得到研究人员的广泛关注。其中，由于近红外光极强的组织穿透能力，使得近红外光响应性纳米载药系统在肿瘤治疗领域展现出良好的应用前景。我们以近红外光作为触发媒介，分别选取纳米脂质体（Lip）和氧化石墨烯（GO）作为药物载体，以纳米金球壳（AuNS）和吲哚菁绿（ICG）作为光热转换剂和光敏剂，构建了四种不同的光响应性纳米载药系统，并对其各自的响应机制进行探究，具体研究内容如下：（1）利用乙醇注入法制备了一种包载天然抗肿瘤活性成分蟛蜞菊内酯（Wed）的纳米脂质体（Wed-Lip），然后结合晶种生长法合成了纳米金球壳包覆的载药脂质体AuNS-Wed-Lip。基于纳米金粒子的表面等离子共振（SPR）效应，该工作所得到的金球壳结构在近红外光区显现出特征吸收峰。在808 nm近红外光照射下，AuNS有效的转化光能为热能，促使局部温度迅速升高，一方面实现近红外刺激下的光热（PTT）治疗；另一方面，导致内部脂质体膜结构发生相变，磷脂膜流动性和通透性增强，8小时药物释放量达到97.34%，实现了近红外光响应性的药物控制释放。通过体外细胞实验和体内动物实验对AuNS-Wed-Lip的抗肿瘤效果进行表征，结果表明了AuNS-Wed-Lip在近红外光照射下，具有良好的肿瘤抑制效果；（2）通过将ICG和Wed共同包载到纳米脂质体中，成功获得了一种新的近红外光响应性纳米载药系统ICG-Wed-Lip。作为近红外吸收染料，ICG在近红外光区具有显著的特征吸收峰，从而赋予了 ICG-Wed-Lip 良好的光热转换性能，近红外光照射12分钟，溶液温度可升高至43℃。这使得ICG-Wed-Lip在实现PTT治疗的同时，通过促使脂质体磷脂膜相变的方式实现近红外光响应性的药物控制释放，光照处理8小时，药物释放量达到96.74%。MTT细胞实验结果表明，ICG-Wed-Lip在近红外光照射下，实现了化疗与PTT治疗的协同作用，通过诱导细胞凋亡的方式，抑制肿瘤细胞生长。动物实验结果同样证明了其良好的肿瘤抑制效果；（3）选取 GO 作为药物载体，利用 π-π 堆积以及疏水作用作用实现对 ICG 和Wed 的双重负载，得到具有化疗、光热治疗和光动力（PDT）治疗三者协同作用的光响应性纳米载药系统ICG-Wed-GO。在近红外光照射下，ICG-Wed-GO表现出良好的光热性能，照射10分钟，温度可升高至79.4 ℃，满足PTT治疗的需要，同时由于局部温度升高，减弱Wed分子与GO之间的结合作用，进而实现近红外光响应性的药物控制释放。此外，由于GO的电子供体淬灭作用，减弱了光诱导的ICG分解，从而提高ICG的光热稳定性。作为光敏剂，ICG在近红外光照射下，从基态被激发到三线态，处于三线态的ICG将其能量转移至附近的三线态氧并产生大量的活性氧（ROS），进而对肿瘤细胞造成氧化损伤，诱导细胞凋亡，实现PDT治疗。三种治疗手段的协同作用，使得 ICG-Wed-GO 在体外和体内实验中均表现出优异的肿瘤抑制效果，同时证明了其良好的生物相容性和生物安全性；（4）在ICG-Wed-GO研究的基础上，通过将MnO2纳米粒子与GO载体相结合，然后利用π-π堆积和疏水作用负载ICG和化疗药物阿霉素（DOX），得到PDT增强型近红外光响应性药物载体 DOX-ICG-GO@MnO2。实验结果表明，MnO2纳米粒子能够在肿瘤局部酸性条件下，实现对肿瘤组织内部过量的H2O2进行催化分解，产生氧气，一方面缓解肿瘤组织缺氧状态，另一方面为PDT治疗提供氧气来源，提高其治疗效果。在近红外光刺激下，该体系借助ICG良好的光热性能，实现了PTT治疗和药物分子的响应性控制释放；同时，由于MnO2纳米粒子催化H2O2分解，产生氧气，使得ROS产生量显著提高，增强了PDT治疗效果。体外及体内抗肿瘤实验均证明了该体系良好的肿瘤抑制能力。综上所述，我们以近红外光作为触发媒介，合成了四种近红外光响应性纳米载药系统，不仅实现了药物的光响应性控制释放，还实现了化疗、PTT治疗和PDT治疗之间的协同作用，并深入探究了不同载药系统的光响应机制。本研究工作将为光响应性纳米载药系统在肿瘤治疗领域的应用提供理论依据。收起

关键词 : 纳米载药系统光响应性抗肿瘤效果

7. 高分子多功能纳米微球的构建与抗肿瘤研究

[学位论文] 陈瑞南京大学 2013年博士导师: 蒋锡群共114页

摘要 : 近年来随着肿瘤发病率的不断上升，发展新型的肿瘤治疗方法具有重要的意义。传统的治疗手段有手术、放疗、化疗等，发展中的新型治疗方法有热疗、光动力疗法、免疫疗法等。虽然这些治疗手段在目前的肿瘤治疗上发挥了重要的作用，但仍存在自身的弊端和... 展开近年来随着肿瘤发病率的不断上升，发展新型的肿瘤治疗方法具有重要的意义。传统的治疗手段有手术、放疗、化疗等，发展中的新型治疗方法有热疗、光动力疗法、免疫疗法等。虽然这些治疗手段在目前的肿瘤治疗上发挥了重要的作用，但仍存在自身的弊端和无法完全抑制肿瘤的缺点，因此发展两种或多种肿瘤治疗手段联合起来共同抗击肿瘤，成为肿瘤医学研究的热点。联合治疗的研究除了临床实践的经验积累，还依赖于医学材料的多功能性的设计，来满足各种联合治疗的不同需求。随着纳米科学的发展，纳米技术越来越多地应用到生物医学领域。金纳米棒拥有表面等离子体共振性质，有着特殊的辐射和非辐射特性，有望成为一种新型的纳米结构，广泛地应用于生物和生物医学领域，包括生物传感、生物医学成像、基因和药物输送、疾病检测、诊断和治疗。金纳米棒很容易被与其纵向等离子体共振吸收峰波长相近的近红外光的诱导产生热量，因此在肿瘤的光热治疗中具有特殊的优越性。因为近红外光的组织穿透能力强，采用近红外激光作为光源，能够诱导皮下深层组织的金纳米棒产生热量而升温，对皮下深层组织的癌细胞能同时起到成像诊断和光热治疗的双重作用。本论文利用具有良好生物相容性和可生物降解性的壳聚糖为基质材料，通过与金纳米棒的高效复合，制备了尺寸可控且稳定的复合纳米微球，发挥金棒的光热效应来抑制肿瘤。并且，纳米微球与化疗药物、光动力药物分别复合，进行了热疗/化疗、热疗/光动力疗法的联合治疗，考察了它们的协同效应以及在抗肿瘤方面的效果。对于光动力疗法而言，以过氧化氢分子为响应信号，进行肿瘤信号的化学发光成像和内源性的光动力激发，将医学诊断和治疗共同结合。具体工作内容如下: (1)水溶液中带有正电荷的低分子量水溶性壳聚糖与带有负电荷的乙二胺四乙酸(EDTA)，在不良溶剂乙醇的辅助下发生静电络合，形成纳米微球的同时高效地对金纳米棒进行包裹复合，制备了壳聚糖-金纳米棒(CS-AuNR)复合纳米微球。抗肿瘤药物顺铂被负载在纳米微球的壳聚糖壳体空间当中，形成多功能的壳聚糖-金纳米棒-顺铂(CS-AuNR-Pt)复合纳米微球。我们重点关注了金棒的光热效应和顺铂药物的协同作用，并由此带来的增强的抗肿瘤效果。这种复合微球提供了一种用多功能纳米载体作为热疗和化学疗法结合治疗的途径。 (2)在制备的CS-AuNR复合纳米微球的基础上，光动力药物吲哚菁绿利用静电吸附作用，被复合在壳聚糖微球的壳体空间当中，形成壳聚糖-金纳米棒-吲哚菁绿(CS-AuNR-ICG)复合纳米微球。我们研究了壳聚糖微球对吲哚菁绿分子的水解保护作用以及微球的增强渗透治疗效应（EPR效应）对体内分布的影响，重点关注了金棒的光热效应和吲哚菁绿的光动力效果，以及它们的协同作用。这种多功能材料提供了一种被单一近红外光激发，同时触发光热/光动力双重治疗模式的途径。 (3)利用两亲性的嵌段共聚物同时包裹过氧草酸酯低聚物、荧光染料和光动力药物，制备多功能纳米胶束进行低浓度过氧化氢的成像检测。胶束一方面可以保护过氧草酸酯低聚物避免与水直接接触而延迟水解，另一方面草酸酯和过氧化氢反应的能量可以有效地转移到相邻的荧光染料上，然后染料释放光能用于光动力治疗，将肿瘤的诊断和治疗结合。采用内源性的化学发光来激发光动力治疗，不论肿瘤是深入的还是靠近皮肤的，都可以采用此法进行光动力治疗，提供了一个解决光动力治疗不能深入体表的方案。收起

关键词 : 多功能纳米微球制备方法抗肿瘤效果

8. 星型序列明确聚氨酯的合成与表征

[学位论文] 赵登位四川大学 2021年硕士导师: 李洁华共96页

摘要 : 恶性肿瘤严重威胁全人类的生命健康，现已成为造成人类死亡的主要原因之一。随着纳米技术与生物科学的蓬勃发展，促进了聚合物纳米载体在肿瘤治疗领域的应用研究。然而，人体复杂的生理环境对药物的有效递送带来了极大的阻碍。为了进行有效的药物递送... 展开恶性肿瘤严重威胁全人类的生命健康，现已成为造成人类死亡的主要原因之一。随着纳米技术与生物科学的蓬勃发展，促进了聚合物纳米载体在肿瘤治疗领域的应用研究。然而，人体复杂的生理环境对药物的有效递送带来了极大的阻碍。为了进行有效的药物递送，纳米载体需要具有长循环、肿瘤靶向与渗透、细胞内化、控制释药等多种功能与一身。尽管国内外学者在癌症治疗载体方面做出了大量研究，所设计出的药物载体的结构与功能越来越多种多样，但是真正通过临床批准使用的少之又少。而这些获得批准的结构大多数单一、靶向、内化和控释均较差。主要原因是聚合物载体存在多分散性，为克服生物屏障而引入的基团在聚合物链中的数目和位置不确定，产品批次差异大。这些缺点限制了多功能聚合物载体在临床上的应用。本文旨在从微观分子结构层面，合成一种序列结构明确的聚氨酯药物载体。借鉴多肽合成技术，选用甲氧基聚乙二醇（mPEG）作为可溶性聚合物载体，通过对硝基苯基氯甲酸酯（NPC）作为活化连接剂，顺序连接各种功能基团，以达到合成序列明确聚合物的目的，但是通过这种液相迭代合成方法合成的具有规整分子结构的聚氨酯的分子量较低，导致胶束的稳定性较差，载药量较低，血液循环过程中也存在漏药的风险。本论文利用具有良好生物相容性的环糊精作为星型聚合物的核，通过点击反应将序列明确的线性聚氨酯连接到环糊精核上，从而制备了一种序列明确的星型聚氨酯。并系统研究了线性聚合物与星型聚合物的自组装性能、载药能力、药物释放行为、体外毒性、细胞内化、体外抗肿瘤效果等。主要研究结果如下： 1.通过mPEG作为液相载体，对硝基苯基氯甲酸酯作为连接剂，采用液相迭代合成的方法，成功合成了4种不同结构的线性序列明确聚合物，分别为TA、TKA、TQA、TKQA。首先通过1H-NMR、GPC、FT-IR证明了其成功合成；DLS和TEM结果显示，4种聚合物均能在水溶液中形成球形胶束，胶束粒径大小为16.94nm-27.05nm，胶束CMC值为1.60-6.48ug/ml；研究了4种聚合物对抗肿瘤药物紫杉醇和阿霉素的包载，结果显示，所有的聚合物胶束对阿霉素均有较好的包载能力，对阿霉素的最大载药量为13-24％；药物释放结果表明，聚合物胶束的释放行为均表现出pH依赖性；细胞毒性试验证明了聚合物胶束均具有良好的生物相容性；激光共聚焦和流式细胞术结果显示，带季铵盐的TQA与TKQA具有更好的细胞内化能力，体外抗肿瘤结果显示TQA与TKQA的体外抗肿瘤结果优于TA。 2.通过叠氮和炔的点击反应，将TA与TKQA点击到环糊精核上，成功合成了TA-CD和TKQA-CD，通过1HNMR、FT-IR和GPC证明了其成功合成；通过DLS和TEM研究了胶束在水溶液中的自组装行为，结果表明TA-CD和TKQA-CD在水溶液中均能形成球形胶束，胶束粒径呈双峰分布，平均粒径分别为26.8±1.7nm和68.9±6.8nm；星型聚合物对阿霉素的包载能力大于对应的线性聚合物，其中TKQA-CD具有更好载药能力；聚合物胶束的DOX释放行为均表现出pH依赖性；流式激光共聚焦和流式细胞术结果显示TKQA-CD具有更好的细胞内化能力。通过MTT法研究了聚合物胶束的生物相容性和体外抗肿瘤效果，结果表明两种星型聚合物胶束具有良好的生物相容性；载DOX胶束的细胞毒性表现出剂量依赖性，且TKQA-CD的体外抗肿瘤效果好于TA-CD。收起

关键词 : 序列明确聚氨酯合成表征点击反应抗肿瘤效果

9. 金纳米棒的制备、修饰及其在肿瘤治疗中的应用

[学位论文] 夏凯湖南工业大学 2014年硕士导师: 何农跃共65页

摘要 : 尽管金纳米棒已经被广泛的研究和应用于生物医药以及传感等方面，而金纳米棒最传统的合成方法--晶种成长法则存在许多限制，该方法对还原剂（抗坏血酸）的浓度非常敏感，从而影响其可靠性以及产率（金离子转化成单质金的量不足20%）。同时，通过这种方... 展开尽管金纳米棒已经被广泛的研究和应用于生物医药以及传感等方面，而金纳米棒最传统的合成方法--晶种成长法则存在许多限制，该方法对还原剂（抗坏血酸）的浓度非常敏感，从而影响其可靠性以及产率（金离子转化成单质金的量不足20%）。同时，通过这种方法所合成金纳米棒的等离子共振吸收很难超过1000nm。基于以上问题，本论文以酚类为新型还原剂，发展了新型的金纳米棒制备方法，制备出粒径均一且高产的金纳米棒，并通过修饰对金纳米棒进行改性，使其能在生理条件下单一分散且无明显毒性，并以金纳米棒作为光热治疗材料，并在近红外激光的照射下，实现对肿瘤的光热治疗。主要研究内容如下：（1）以对苯二酚为还原剂种子法合成金纳米棒，并研究了不同的因素，硝酸银的浓度、对苯二酚的浓度以及种子用量对金纳米棒合成的影响。结果表明，通过控制实验条件，可合成长径比为1.5～7.3，纵向等离子共振吸收峰为550～1110nm，尺寸（长×宽）为30×4nm～90×13nm粒径均一的金纳米棒。（2）以对苯二酚、1,2,3-苯三酚、1,2,4-苯三酚这三种酚类物质为还原剂通过无种子法合成金纳米棒。研究了硝酸银的浓度和种子用量对金纳米棒合成的影响，并使用电感耦合等离子质谱检测分析了不同还原剂合成金纳米棒的产率（金离子转化为单质金）。结果表明，通过控制实验条件，可合成纵向等离子共振吸收峰为598～1110nm，尺寸为57.8×13.1～111×45.2 nm且粒子均一的金纳米棒，而使用三种酚类还原剂合成的金纳米棒的产率均要大于60%，有的甚至超过90%，金转化率显著高于抗坏血酸为还原剂制备的金纳米棒。（3）金纳米棒的表面修饰及其在肿瘤治疗中的应用。采用羧基化的牛血清蛋白对金纳米棒进行修饰，并对修饰前后金纳米棒的毒性以及特定吸收率进行了评估，测试了金纳米棒对胃癌细胞以及实体瘤的光热治疗效果。结果表明，经修饰过的金纳米棒具有很好的分散性且无明显毒性。在强度为4W/cm2的808nm近红外激光的照射下，金纳米棒对胃癌细胞以及小鼠身上的实体瘤均具有很好的抑制作用。收起

关键词 : 金纳米棒还原剂酚类物质抗肿瘤效果

10. 槐耳多糖对三阴性乳腺癌干性特征的抑制作用及机制研究

[学位论文] 胡保全陆军军医大学 2017年博士导师: 姜军共108页

摘要 : 目的：乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤，严重威胁女性健康，且其发病率呈逐年上升趋势。三阴性乳腺癌是乳腺癌中的预后较差的一种亚型，由于不表达雌激素受体，孕激素受体与人生长因子受体2，因此，在治疗上，不能给予内分泌治疗和靶向治疗，目前... 展开目的：乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤，严重威胁女性健康，且其发病率呈逐年上升趋势。三阴性乳腺癌是乳腺癌中的预后较差的一种亚型，由于不表达雌激素受体，孕激素受体与人生长因子受体2，因此，在治疗上，不能给予内分泌治疗和靶向治疗，目前，对三阴性乳腺癌的生物学行为特点和探寻新的药物治疗三阴性乳腺癌成为研究的热点。目前的研究结果认为，肿瘤干细胞是肿瘤发生的―种子细胞，具有比普通肿瘤细胞更强的放化疗及内分泌治疗抵抗能力，是肿瘤转移灶形成的主要原因。也是导致临床治疗后复发及影响患者无病生存率和总生存率的重要因素。由于乳腺癌干细胞具有多重耐药、易转移等生物学特性，在其治疗上往往缺乏有效的手段，因此，探寻能够抑制或者杀伤三阴性乳腺癌干细胞的药物成为研究重点。多糖，一种来源于植物或者菌类的提取物，具有增强免疫和杀伤肿瘤干细胞的作用。槐耳多糖是一种药用真菌，用于临床治疗具有悠久历史，目前主要用于对肿瘤的治疗，其主要活性成分为蛋白多糖，即6种单糖(L-岩藻糖、L-阿拉伯糖、D-甘露糖、D-木糖、D-葡萄糖和D-半乳糖)组成的杂多糖结合18种氨基酸构成的蛋白质。大量的临床和基础研究证实，槐耳多糖可以通过抑制肿瘤增殖，促进其凋亡发挥抗肿瘤作用，如在肝癌、肺癌、卵巢癌和乳腺癌等。还有研究报道，槐耳多糖能够抑制肿瘤干细胞。虽然目前关于槐耳多糖对三阴性乳腺癌的治疗作用已有初步临床和实验研究，但关于槐耳多糖三阴性乳腺癌细胞干性特征是否具有抑制作用以及其作用的机制尚不清楚。因此，本研究初步阐明槐耳多糖对三阴性乳腺癌干性特征的抑制作用及其机制，可以为槐耳多糖治疗三阴性乳腺癌提供理论基础和实验依据。针对上述问题，本研究主要以三阴性乳腺癌Mb436和为细胞模型，以槐耳多糖为原料进行初步探讨。首先纯化提取槐耳多糖，然后利用CCK-8检测槐耳多糖对三阴性乳腺癌的增殖抑制作用，确定其IC50值；为了验证槐耳多糖是否对三阴性乳腺癌细胞的干性特征具有抑制作用，将不同浓度的槐耳多糖加入细胞中，通过成球实验比较给药前后成球能力变化；利用流式细胞仪检测给药前后，ALDH1hing比例的变化；以及通过RT-PCR实验检测Nanog、Oct4、Bmi1等干性相关基因在给药前后的表达变化，初步阐明槐耳多糖对三阴性乳腺癌细胞的干性特征具有明显抑制作用。为明确其作用机制，进行了一下研究。乳腺癌是受体依赖型肿瘤，雌激素受体在乳腺癌发生、发展中发挥了重要作用，结合文献报道和实验组前期实验发现，雌激素受体α-36(ERα-36)是雌激素受体α(ERα-66,通常描述的ER)最新的一个亚型，在促进乳腺癌细胞增殖，维持乳腺癌干细胞的干性特征等方面具有重要作用。首先利用RT-PCR和western blot检测了乳腺癌、、MCF7和Mb231细胞中ERα-36表达情况；并比较了过表达ERα-36后，乳腺癌MCF7细胞的成球、ALDH1hing比例和干性相关基因等变化，明确ERα-36在乳腺癌细胞中维持干性的作用；同时再以三阴性乳腺癌（ERα-66阴性）Mb436为细胞模型，敲低ERα-36的表达，筛选稳转的Mb436/sh36细胞；然后再用不同浓度的槐耳多糖处理Mb436和Mb436/sh36细胞，比较对其成球、ALDH1hing比例和干性相关基因等变化，利用western blot检测ERα-36介导激活的Akt/β-catenin/Cyclin D1通路变化；最后以NOD/SCID鼠为动物模型，将Mb436和Mb436/sh36细胞接种小鼠皮下脂肪垫，分为对照组(未给药组)和给药组(槐耳多糖灌胃处理组)，并比较各组成瘤情况；待安乐处死小鼠后，将移植瘤行免疫组化检测ERα-36和ALDH1的表达变化。通过上述实验，初步明确槐耳多糖能够抑制三阴性乳腺癌细胞的干性特征及其作用的相关机制，为后期临床治疗研究提供基础实验依据。方法和结果： 1.槐耳多糖的分离以及对三阴性乳腺癌细胞抑制作用的研究方法：将槐耳清膏洗涤、透析后冻干，收集到粗多糖；然后在用DEAE-52离子交换柱洗脱，收集0.1—0.3Mol/L的洗脱液，得到纯化多糖。再用CCK-8试剂盒检测其对三阴性乳腺癌Mb436和SUM159的抑制作用，检测其48小时的IC50值。结果：槐耳多糖有效成分主要在洗脱液的0.1—0.3Mol/L。因此，收集0.1—0.3Mol/L的洗脱液中的多糖，共208.54mg，占总清膏的比例：4.17%；槐耳多糖对和SUM159细胞的抑制作用随着其剂量以及作用时间延长，逐渐增大,提示槐耳多糖是槐耳重要的抗肿瘤成分，其对细胞和细胞48小时的IC50值分别为205.12±36.41μg/ml和195.34±27.62μg/ml。提示治疗剂量的槐耳多糖具有抗肿瘤效果,且槐耳多糖的48小时的IC50值浓度远低于槐耳清膏浓度（文献报道多为8-10mg/ml）。 2.槐耳多糖对三阴性乳腺癌细胞干性特征抑制作用的研究方法：以不同浓度的槐耳多糖分别处理三阴性乳腺癌Mb436和SUM159细胞，观察对其成球的影响；再将槐耳多糖处理的以上细胞，再次行成球实验，观察槐耳多糖对三阴性乳腺癌和细胞第二代、第三代成球影响。流式细胞仪检测槐耳多糖处理后，和细胞中ALDH1阳性细胞的比例变化；以及利用RT-PCR和western blot检测槐耳多糖处理后，和细胞干性相关基因Nanog、Oct4、Bmi1的表达变化。结果：槐耳多糖抑制三阴性乳腺癌和细胞的成球能力，还能影响其第二代、第三代的成球率；降低和细胞中ALDH1阳性细胞的比例，以及下调三阴性乳腺癌和细胞中干性相关基因Nanog、Oct4、Bmi1的表达。 3.槐耳多糖对三阴性乳腺癌细胞干性特征抑制作用的机制研究方法：利用RT-PCR和western blot检测乳腺癌、、Mb231和MCF7中ERα-36的表达水平；利用质粒转染技术构建并筛选过表达ERα-36的MCF7细胞(MCF7/sh36)，以及敲低ERα-36的细胞(Mb436/sh36)；通过成球实验、流式细胞仪检测ALDH1阳性细胞的比例，以及RT-PCR检测干性相关基因的表达情况比较MCF7和MCF7/sh36细胞，以及Mb436和Mb436/sh36细胞的差异。以不同浓度的槐耳多糖处理Mb436和Mb436/sh36细胞后，观察对两株细胞在成球能力、ALDH1阳性细胞的比例以及干性相关基因的变化情况，同时利用western blot检测比较ERα-36、p-AKT、β-catenin和cyclin D1蛋白表达水平变化。在体内实验中，比较槐耳多糖给药前后，Mb436和Mb436/sh36细胞在NOD/SCID鼠中成瘤能力的变化情况。结果： 3.1.ERα-36高表达于三阴性乳腺癌（ERα-66,通常描述的ER）Mb436、SUM159和Mb231细胞中，较低表达于MCF7(Lumina型)细胞；过表达ERα-36能够促进MCF7细胞成球能力、上调ALDH1阳性细胞的比例以及高表达干性相关基因，敲低ERα-36后结果则反之。 3.2.槐耳多糖能够抑制三阴性乳腺癌Mb436细胞的成球能力、降低ALDH1阳性细胞的比例，下调干性相关基因的表达和抑制NOD/SCID鼠成瘤体积，但是在敲低ERα-36的Mb436/sh36中，上述结果在对照组和给药组均无明显差异；western blot检测发现，槐耳多糖能够抑制ERα-36、p-AKT、β-catenin和cyclin D1蛋白表达水平，但是槐耳多糖处理Mb436/sh36细胞前后比较发现，上述蛋白水平表达变化不明显。结论： 1、槐耳多糖具有抗肿瘤效果,且槐耳多糖的48小时的IC50值浓度远低于槐耳清膏浓度； 2、槐耳多糖能够抑制三阴性乳腺癌细胞干性相关特征； 3、ERα-36在维持三阴性乳腺癌（ERα-66阴性的乳腺癌）干性特征中具有重要作用；槐耳多糖抑制三阴性乳腺癌干性特征的作用与ERα-36的表达密切相关，并且是通过ERα-36介导的AKT/β-catenin/cyclin D1信号通路发挥作用的。收起

关键词 : 槐耳多糖三阴性乳腺癌干性特征抗肿瘤效果