中国科学技术信息研究所--国家工程技术数字图书馆

[学位论文] 杨静中国医科大学 2005年硕士导师: 曹志伟共29页

摘要 : 目的：探讨电动鼻窦切割钻(以下称HUMMER)和微波切除部分下鼻甲对鼻黏膜纤毛清除系统的影响，为临床选择合理术式提供理论依据。方法：选择2004年4月至2004年6月就诊于中国医科大学附属第一临床医院耳鼻咽喉科的两组病例，每组10例。第一组... 展开

关键词 : 电动鼻窦切割钻微波切除下鼻甲鼻黏膜纤毛清除系统鼻黏膜损伤

2. USP25抑制鼻黏膜上皮细胞TSLP表达在变应性鼻炎中的作用及机制的初步研究

[学位论文] 常文川武汉大学 2021年博士导师: 许昱共88页

摘要 : 目的：变应性鼻炎（allergicrhinitis,AR）是一种常见的变应性疾病。泛素化是细胞介导选择性蛋白质降解的主要途径。泛素特异性蛋白酶（Ubiquitin-specificprotease,USP）是人类去泛素化酶（DUBs）中的最大家族。既往发现，泛素特异性蛋白酶25（USP25... 展开目的：变应性鼻炎（allergicrhinitis,AR）是一种常见的变应性疾病。泛素化是细胞介导选择性蛋白质降解的主要途径。泛素特异性蛋白酶（Ubiquitin-specificprotease,USP）是人类去泛素化酶（DUBs）中的最大家族。既往发现，泛素特异性蛋白酶25（USP25）参与病毒免疫和肿瘤发生等免疫相关病理和生理过程。但USP25在AR等变应性疾病中的作用及机制尚不清楚。近期文献表明USP25可通过去泛素化作用维持肿瘤坏死因子受体作用因子3（TNFreceptor-associatedfactor3，TRAF3）的高表达，而TRAF3作为NF-κB通路的负调节因子，在免疫调控中有重要作用。本研究旨在探究USP25在AR免疫失衡中的作用及在鼻黏膜上皮细胞中的调控机制。方法： 1.搜集AR患者和对照者的鼻黏膜组织，用免疫组化法和蛋白质印迹法检测鼻黏膜组织中USP25的表达情况，并用蛋白质印迹法检测鼻黏膜组织中胸腺基质淋巴细胞生成素（ThymicStromalLymphopoietin,TSLP）的表达情况； 2.构建卵清蛋白（Ovalbumin,OVA）致敏的野生型小鼠和USP25基因敲除鼠的AR小鼠模型，用ELISA法检测小鼠鼻腔灌洗液和血清中IL-4、IL-5、IL-10、IL-13、IFN-γ的表达水平，用HE染色法对小鼠鼻黏膜组织鼻黏膜组织进行观察，应用蛋白质免疫印迹法(WesternBlot,WB)和免疫组化法检测小鼠鼻黏膜组织中USP25和TSLP的表达情况； 3.OVA刺激HNEpC细胞模拟变应性炎症环境，并分别用siRNA抑制USP25或TRAF3表达，用pcDNA过表达TRAF3或USP25；WB检测细胞中USP25，TRAF3和TSLP的表达情况。结果： 1.AR患者鼻黏膜组织中USP25表达明显较低，而TSLP表达明显较高。2.对比生理盐水刺激的野生型对照组小鼠，OVA致敏的AR小鼠模型鼻腔灌洗液和血清中IL-4、IL-5、IL-10、IL-13的表达水平明显升高，而IFN-γ的表达水平明显降低；AR小鼠鼻黏膜组织中有嗜酸性粒细胞数目明显增多；鼻黏膜中UPS25表达减少，TSLP表达增加。对比野生型AR小鼠，OVA致敏的USP25基因敲除鼠鼻腔灌洗液和血清中IL-4、IL-5、IL-10、IL-13的表达水平明显升高；而IFN-γ的表达明则显著降低；鼻黏膜中UPS25表达缺失，而TSLP表达进一步增加。 3.相对于空白对照组，OVA的刺激使得HNEpC细胞USP25表达减少，TRAF3表达减少，而TSLP表达升高；siRNA抑制USP25表达后，TRAF3也同步表达减少，而TSLP进一步表达升高；在此基础上，加入pcDNA使TRAF3过表达，相对于NECs+OVA+USP25siRNA+TRAF3pcNC组，USP25表达无明显改变，但TSLP表达明显减少。而在OVA刺激后，加入pcDNA使USP25过表达后，TRAF3也同步表达增加，而TSLP表达下降；在此基础上，加入siRNA抑制TRAF3表达，相对于NECs+OVA+USP25pcDNA+TRAF3siRNA组，USP25表达无明显改变，但TSLP表达明显增加。结论： 1.在AR患者中鼻黏膜组织中USP25呈明显低表达，TSLP呈明显高表达。2.USP25的缺失使得鼻黏膜上皮中TSLP表达进一步增加，并加重了AR 小鼠的变应性炎症反应。 3.体外培养的人鼻黏膜上皮细胞中，USP25通过维持TRAF3的表达从而抑制TSLP，从而在变应性炎症中起关键的调控作用。收起

关键词 : 变应性鼻炎鼻黏膜 USP25 TRAF3 TSLP

3. 慢性鼻-鼻窦炎患者窦口鼻道复合体黏膜病理形态学观察

[学位论文] 胡丽敏河北医科大学 2007年硕士导师: 张勋共54页

摘要 : 目的：目前对慢性鼻窦炎鼻息肉患者窦口鼻道复合体(ostiomeatal complex，OMC)显微和超微结构的研究较多，但大多依据海口标准(1997年)的分型分期进行研究，并且证明慢性鼻窦炎鼻息肉临床分型分期具有一定的病理学基础，能代表慢性鼻窦炎鼻息肉... 展开目的：目前对慢性鼻窦炎鼻息肉患者窦口鼻道复合体(ostiomeatal complex，OMC)显微和超微结构的研究较多，但大多依据海口标准(1997年)的分型分期进行研究，并且证明慢性鼻窦炎鼻息肉临床分型分期具有一定的病理学基础，能代表慢性鼻窦炎鼻息肉发生发展及转归规律。随着人们对疾病认识的不断加深，认为由于鼻腔黏膜与鼻窦黏膜相连续，鼻炎时鼻窦黏膜常有不同程度的炎症，并且鼻窦炎也常因鼻炎引起。因此，目前推荐使用的名词是鼻．鼻窦炎，以替代鼻窦炎一词。近年来在I临床实践过程中发现，仍有部分慢性鼻-鼻窦炎(chronic rhinosinusitis，CRS)患者鼻内镜术后症状无明显好转，迁延不愈，反复发作。因此有学者提出变应性因素在CRS发病和复发中可能起着重要作用。本文将CRS患者分为由感染因素和由变态反应引起的两组，观察其显微及超微结构的变化及区别，希望从病因学为CRS的重新分类及制定合理的治疗方案提供一个新的思路。方法：用光镜和扫描电镜(scanning electron microscope，SEM)观察正常对照组、感染组和变应组OMC黏膜的病理形-态学变化及区别。具体步骤如下： 1病例选择选取2006年3月至2006年9月在我科住院接受鼻内镜鼻窦手术的CRS患者为病例组，排除真菌感染、原发性黏膜纤毛结构和功能障碍、囊性纤维病、嗜酸性粒细胞增多性非变应性鼻炎、全身免疫性疾病及鼻内镜鼻窦手术后复发等所致的CRS病人。根据Table 1所示进行加权积分制将其分为三组：1-6分为感染组，7-15分为混合组，16-23分为变应组，取感染组和变应组各20例，对其OMC区黏膜行光镜检查；上述各组中随机各取5例进行SEM观察。另取因单纯外伤性鼻中隔偏曲行矫正手术患者20例OMC区黏膜(排除患鼻部其他疾病的患者)作为对照组行光镜检查；其中随机选5例做SEM观察。 2 标本的制作及观察2.1光镜标本术中取OMC黏膜标本用10％中性福尔马林固定，自动脱水，常规石蜡包埋，连续切片3张，片厚4μm。分别进行HE染色、van gieson(VG)染色和阿尔辛蓝．过碘酸．雪夫(alcianblue-periodic acid-schiff,AB-PAS)染色。光镜下观察OMC黏膜纤毛细胞、杯状细胞、基底膜、黏膜间质、炎症细胞和黏液腺体的改变；用VG染色切片测量基底膜厚度；用AB-PAS染色切片测量黏液腺体的面积。 2．2扫描电镜标本术中取OMC黏膜，4℃生理盐水振荡冲洗后快速置2.5％戊二醛中固定2h，然后用磷酸缓冲液清洗3次，每次10min，乙醇梯度脱水，干燥，金属镀膜。SEM观察纤毛数量、脱落、紊乱、黏液附着情况。 3统计处理采用完全随机单因素方差分析及两两比较的SNK法检验分析处理数据，以α=0.05作为差异显著性水准。结果：三组OMC黏膜的病理形态学变化有所不同，在各种染色中的变化和SEM中观察结果如下： 1 常规HE染色下CRS患者OMC区黏膜形态改变正常对照组黏膜表面平整光滑，上皮主要以纤毛细胞为主，纤毛整齐直立，基底膜无增厚，间质无水肿，炎症细胞极少。CRS患者OMC区黏膜均有不同程度的改变，包括杯状细胞增多、基底膜增厚、炎症细胞浸润、黏液腺体增生和纤维组织增生等。变应组中的这些改变均比感染组明显、多见。 2 VG染色下基底膜厚度值各组基底膜厚度(x±s)分别为：对照组(8.574±0.624)μm，变应组(14.552±0.641)μm，感染组(12.561±0.493)μm。与对照组黏膜比较，CRS患者各组基底膜均增厚，厚薄不均匀。在VG染色切片上更清楚，以变应组最显著，统计结果表明与感染组有显著性差异(P<0.05)。 3 AB-PAS染色下黏液腺体面积值测得各组黏液腺体的面积为(x±s)：对照组(0.082±0.006)mm，感染组(0.137±0.005)mm收起

关键词 : 鼻炎鼻窦炎鼻黏膜鼻息肉

4. 变应性鼻炎鼻黏膜组织病理特征的实验研究

[学位论文] 刘建国南昌大学 2008年硕士导师: 刘月辉共50页

摘要 : 变应性鼻炎(allergic rhinitis AR)是发生在鼻粘膜的变态反应性疾病，主要是由IgE介导的I型变态反应。其发病率占世界人口的10-25％；在美国成人发病率达20％左右，儿童发病率则近40％。然而，导致其发病不断增加的原因仍未完全阐明。但不论原因如何，... 展开变应性鼻炎(allergic rhinitis AR)是发生在鼻粘膜的变态反应性疾病，主要是由IgE介导的I型变态反应。其发病率占世界人口的10-25％；在美国成人发病率达20％左右，儿童发病率则近40％。然而，导致其发病不断增加的原因仍未完全阐明。但不论原因如何，全球每年直接或间接花费在变应性鼻炎上的费用约为63-79亿美元，同时变应性鼻炎严重影响患者的日常生活，该病的发病率出现逐年上升的趋势[1]因此，变应性鼻炎诊治受到了广泛的关注。变应性鼻炎病理生理基础的中心环节是以嗜酸粒细胞(EOS)浸润为主的鼻腔粘膜慢性炎症[2]，变态性炎症引起的下气道病理组织重塑已有比较深入的研究，2001年Bousquet等总结了变应性鼻炎研究现状后，提出“一个气道，一种疾病(one airway-one disease)”观点后，AR鼻黏膜病理组织重构及相关问题又引起了人们极大兴趣。国内有以豚鼠为实验模型研究了其特点，但尚未对鼻黏膜病理组织重构的机制进行更深入的研究。明确变应性鼻炎鼻腔黏膜在疾病过程中的重构机制以及影响因素，对于该疾病的防治必产生重要的影响。血红素加氧酶(HO-1)是机体内的一种重要的抗氧化、抗炎保护性表达的酶，在国内研究发现HO-1表达量与AR豚鼠鼻黏膜中浸润的EOS数呈显正相关，然而HO-1在AR中抗变态性炎症引起的损伤机制尚不清楚，其次在AR鼻黏膜中生长因子对病变黏膜的转归也很重要，大量研究发现转化生长因子(TGF-β1)、碱性纤维生长因子(FGF-2)在下呼吸道变态性炎症引起的气道重构中起到很重要的作用，而在AR鼻黏膜中的研究尚少。为此，我们运用'SD大鼠以卵清蛋白激发建立了实验动物模型即脱离变应原和持续暴露于变应原的动物模型，动态观察变态性炎症反应病变过程鼻黏膜病理组织重构过程特点，同时检测粘膜中的EOS和HO-1、TGF-β1、FGF-2的变化，探讨其在变应性鼻炎鼻黏膜组织病理改变过程中的意义。收起

关键词 : 变应性鼻炎鼻黏膜组织病理特征

5. 聚焦超声对鼻黏膜形态和黏液纤毛系统清除功能影响的实验研究

[学位论文] 张友岩重庆医科大学 2007年硕士导师: 白晋;朱瑾共47页

摘要 : 目的：探讨聚焦超声对鼻黏膜的形态和黏液纤毛系统清除功能的影响。方法：①运用CZB型超声波鼻炎治疗仪辐照活体黄羊下鼻甲黏膜，观察聚焦超声辐照前后下鼻甲黏膜大体形态及光镜、透射电镜和扫描电镜下组织形态学的改变。②选择下鼻甲黏膜，用机... 展开目的：探讨聚焦超声对鼻黏膜的形态和黏液纤毛系统清除功能的影响。方法：①运用CZB型超声波鼻炎治疗仪辐照活体黄羊下鼻甲黏膜，观察聚焦超声辐照前后下鼻甲黏膜大体形态及光镜、透射电镜和扫描电镜下组织形态学的改变。②选择下鼻甲黏膜，用机械法直接将上皮层与上皮下组织小心分离，然后采用胰酶消化，建立鼻黏膜上皮细胞体外培养模型，观察聚焦超声辐照前后下鼻甲鼻黏膜上皮细胞生物学特性的变化。③从临床上168例接受聚焦声治疗的变应性鼻炎患者，随机选择45例患者作为研究对象，用糖精试验法检测聚焦超声辐照前30min和辐照后30min鼻腔黏液纤毛清除时间(Nasal mucociliaryclearance time，NMCT)，采用配对的T检验观察NMCT在治疗前后有没有统计学意义。结果：①聚焦超声辐照后即刻，下鼻甲鼻黏膜外观和色泽无明显改变。辐照后第3天，光镜下显示鼻黏膜上皮层完好，黏膜下层出现散在、点状的凝固性坏死。凝固性坏死区内血管内皮细胞变性、部分血管内血栓形成，神经细胞空化变性或坏死，腺体细胞部分或完全坏死。扫描电镜下显示鼻黏膜呼吸区上皮层的杯状细胞、纤毛柱状上皮细胞和无纤毛柱状上皮细胞结构正常。透射电镜下显示纤毛或微绒毛无破坏，细胞间紧密连接完整，纤毛超微结构正常，上皮细胞的细胞核及线粒体结构完整的。辐照后第7天凝固性坏死区出现少许胶原纤维增生和肉芽组织形成。辐照后第14天凝固性坏死区开始溶解吸收，部分切片显示坏死组织吸收后鼻黏膜下层基结构本恢复正常。②采用改进的胰酶消化法，成功建立了鼻黏膜上皮细胞体外培养模型。该方法可获得大量鼻黏膜上皮细胞，提高了细胞数量与细胞活性，避免了DispaseⅡ长时间消化对上皮细胞的损伤，缩短了细胞原代培养时间；并发现一定剂量的聚焦超声对鼻黏膜上皮细胞的生长、纤毛的摆动以及杯状细胞的分泌功能无明显改变。③聚焦超声辐照前30min和辐照后30min采用糖精试验检测NMCT，配对资料的T检验P=0.893>0.05，说明NMCT在辐照前后差别没有统计学意义。结论：①一定剂量的聚焦超声可以将超声能量特异性的沉积于黏膜下层，使富含血管、神经和腺体的鼻黏膜下层组织变性坏死，但不破坏鼻黏膜上皮层等非靶点区的结构，同时，对鼻黏膜上皮细胞生物学特性及黏液纤毛系统的清除功能也无影响，因此，是一种定向作用于鼻黏膜下层的微创治疗方法。②改进的酶消化法是一种快速、有效、简单的鼻黏膜上皮细胞原代培养方法。收起

关键词 : 聚焦超声治疗鼻黏膜形态鼻黏膜上皮细胞黏液清除功能超声波鼻炎治疗仪

6. TLR2、TLR3和TLR4在变应性鼻炎大鼠鼻黏膜组织中的表达

[学位论文] 方建林福建医科大学 2011年硕士导师: 赵德安共30页

摘要 : 背景与目的变应性鼻炎（Allergic Rhinitis，AR）又称过敏性鼻炎，是一种由变应原刺激引起的鼻黏膜免疫反应性炎症。其发病率高，根治困难，发病机制还有待进一步研究。近来研究显示，Toll样受体(Toll-like receptors, TLRs)及其介导的天然免疫... 展开背景与目的变应性鼻炎（Allergic Rhinitis，AR）又称过敏性鼻炎，是一种由变应原刺激引起的鼻黏膜免疫反应性炎症。其发病率高，根治困难，发病机制还有待进一步研究。近来研究显示，Toll样受体(Toll-like receptors, TLRs)及其介导的天然免疫在鼻黏膜防御反应中发挥重要作用。Toll 样受体主要表达于免疫细胞表面，能识别大量的病原相关分子模式（pathogen-associated molecular patterns，PAMP），如：细菌的脂多糖，病毒RNA、非甲基化CpG DNA基序和鞭毛蛋白等，快速启动天然免疫应答；同时还激发免疫细胞合成共刺激分子和细胞因子，参与T细胞等启动和增值，在宿主适应性免疫中起重要的作用。变应性鼻炎是机体Thl细胞免疫和Th2细胞免疫反应失衡而引发的以鼻腔黏膜Th2免疫反应为主的变应性炎症，调节Th1和Th2免疫反应的平衡对其具有预防和治疗作用。本研究用免疫组化SP的方法检测TLR2、TLR3和TLR4在实验性变应性鼻炎大鼠鼻黏膜组织中的表达，以探讨TLRs表达与AR的关系。材料与方法 1. 制作变应性鼻炎大鼠动物模型。Wistar大鼠46只，随机分3组，即A组：模型组，20只，以卵清蛋白腹腔注射、雾化及滴鼻。B组：生理盐水对照组，20只，以生理盐水代替卵清蛋白腹腔注射、雾化及滴鼻。C组：空白对照组：6只，未予给药。 2. 实验前及处死前分别观测大鼠的鼻部症状（抓鼻、喷嚏及流涕等）。 3. 免疫组化SP的方法检测TLR2、TLR3和TLR4在三组大鼠鼻黏膜组织中的表达。结果 1.变应性鼻炎大鼠动物模型造模成功，模型组大鼠均有抓鼻、喷嚏及流涕等鼻部症状出现，说明卵清蛋白致敏后大鼠确实有AR症状发作。 2.三组鼻黏膜中均有TLR2表达；TLR3在三组鼻黏膜中均无明显表达；TLR4于实验组表达，于生理盐水对照组及空白对照组未见明显表达。三组间TLR2、TLR3的表达差异无统计学意义（P＞0.05)；模型组与生理盐水组及空白对照组TLR4的表达差异有统计学意义（P<0.05)。结论 1.用症状评分方法证实了卵清蛋白致敏后变应性鼻炎大鼠动物模型造模成功。 2.AR大鼠有TLR4的表达增高，说明TLR4可能参与AR的发病。TLR2、TLR3在AR大鼠中的表达未见增高，其与AR的关系有待进一步研究。收起

关键词 : 鼻炎变应性 Toll 样受体鼻黏膜 Wistar

7. DDA复合物脂质体流感疫苗鼻黏膜免疫效应及作用机制探讨

[学位论文] 于蕊宁夏医科大学 2019年硕士导师: 杨建宏共66页

摘要 : 目的：流感是由流感病毒引起的急性呼吸道传染病，严重危害人类健康，接种流感疫苗仍是现阶段预防流感最有效的措施。现用流感疫苗多为灭活疫苗，其副反应多且免疫原性差，为提高疫苗的安全性及免疫原性，本研究选择DDA阳离子脂质作为疫苗佐剂，构建D... 展开目的：流感是由流感病毒引起的急性呼吸道传染病，严重危害人类健康，接种流感疫苗仍是现阶段预防流感最有效的措施。现用流感疫苗多为灭活疫苗，其副反应多且免疫原性差，为提高疫苗的安全性及免疫原性，本研究选择DDA阳离子脂质作为疫苗佐剂，构建DDA复合物脂质体流感疫苗，以期通过鼻黏膜免疫获得较高的免疫效力，从而有效预防流感，为新型疫苗及其佐剂的开发提供有价值的参考。方法：1以DDA阳离子脂质作为脂质膜的主要成分，以中性磷脂DSPC作为辅助脂质，TPGS及PEG作为免疫调节剂，通过薄膜分散法制备DDA-DSPC、DDA-DSPC-TPGS和DDA-DSPC-PEG脂质体并包载流感抗原，考察粒径、Zeta电位、包封率(EE)、载药量(LE)等重要指标，对所制备的各脂质体流感疫苗进行特性评价。并通过筛选冻干保护剂及冻干条件，对脂质体流感疫苗的冻干处方及工艺进行初步探索。 2体外培养小鼠骨髓树突状细胞（BMDCs），通过细胞毒性试验考察DDA阳离子脂质体复合物对树突细胞的毒性，通过流式细胞仪（Flow Cytometer，FCM）考察未成熟BMDCs对包载荧光标记蛋白的不同脂质体的摄取情况，评价不同脂质体与抗原提呈细胞（APCs）相互作用并呈递抗原的能力。并以MHCII、CD80、CD86为指标，考察各组脂质体流感疫苗刺激DC2.4细胞分化成熟的能力。 3以C57BL/6小鼠为动物模型，通过鼻黏膜免疫，采用酶联免疫吸附试验（Enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）检测小鼠黏液分泌型IgA（sIgA）、血清IgG1及小鼠脾脏细胞因子IFN-γ、IL-4的表达水平，对DDA复合物脂质体流感疫苗的免疫效应进行初步评价。结果：1采用薄膜分散法制备的脂质体流感疫苗，分散介质为pH7.4的Tris-buffer，所得DDA-DSPC脂质体流感疫苗粒径685.0±17.8nm，PDI0.522±0.342，zeta电位25.4±1.9mV，EE65.7±2.0%，LE6.2±0.2%；DDA-DSPC-TPGS脂质体流感疫苗粒径337.3±2.4nm，PDI0.555±0.061，zeta电位15.4±2.1mV，EE78.5±1.5%，LE4.2±0.2%；DDA-DSPC-PEG脂质体流感疫苗的粒径591.4±19.3nm，PDI0.470±0.023，zeta电位6.9±0.8mV，EE45.8±3.0%，LE3.0±0.3%。透射电镜观察，以上各组脂质体疫苗外观均呈圆球形或椭球形。此外，通过对脂质体疫苗进行冻干处方及工艺的考察，优化得到脂质体疫苗冻干的最佳处方为5%的蔗糖和5%的乳糖按质量比1:1合用，冻干条件为预冻温度-80℃，预冻时间8h，在此条件下脂质体疫苗冻干效果比较良好。 2体外摄取实验结果显示未成熟的BMDCs和DC2.4与包载FITC-BSA的各组脂质体孵育2小时后，DDA-DSPC脂质体组摄取率最高，与其他各组相比，有极显著性差异（p＜0.01）。游离抗原FITC-BSA组摄取率最低，其他两组DDA-DSPC-TPGS和DDA-DSPC-PEG组摄取率低于DDA-DSPC组，但与抗原组相比，均有一定程度的提高。DCs细胞成熟实验结果显示，各组DDA复合物脂质体均能显著上调DCs表面共刺激分子CD86及MHC-II的表达水平（p＜0.05），表明DDA复合物脂质体能够促进DCs的分化成熟。 3DDA-DSPC组脂质体流感疫苗经鼻黏膜免疫后，可显著提高鼻黏液中IgA抗体滴度，DDA-DSPC-TPGS组脂质体流感疫苗可显著提高血清IgG1及小鼠脾脏细胞因子IFN-γ的表达水平（p＜0.05），但各组脂质体流感疫苗均未有效诱导IL-4的表达。结论：采用薄膜分散法制备了包封率较高的DDA复合物脂质体流感疫苗，外观呈圆球形或椭球形，并对其冻干处方及工艺进行了初步考察。体外摄取实验结果显示，DDA复合物脂质体能够提高DCs对其的摄取，尤其是DDA-DSPC组，其摄取效果明显高于其他两组。DCs成熟实验结果显示，和抗原组相比，DDA复合物脂质体能够上调DCs表面共刺激分子CD80、CD86及MHC-II的表达水平，表明DDA复合物脂质体能够刺激诱导DCs分化成熟。动物实验结果显示，三组DDA复合物脂质体流感疫苗经鼻黏膜免疫后，能够诱导较高水平的血清IgG1抗体、鼻黏液IgA抗体及IFN-γ，体现了DDA复合物脂质体良好的佐剂特性，尤其是DDA-DSPC-TPGS组脂质体流感疫苗，其诱导的小鼠血清IgG1及脾细胞分泌上清中IFN-γ的表达水平高于其他各组，表明TPGS具有一定的免疫调节作用。收起

关键词 : 流感疫苗鼻黏膜免疫效应药理机制

8. miR-138-5p靶向GNAI2对变应性鼻炎中Th2细胞因子表达的影响

[学位论文] 沈光剑南昌大学医学部 2023年硕士导师: 刘月辉共61页

摘要 : 背景及目的：变应性鼻炎（allergicrhinitis,AR）是一种由过敏原暴露于鼻粘膜后由IgE介导引起的症状性鼻炎。目前，尽管治疗AR有许多药物选择，但仍未取得较好的效果，因此，对AR的发病机制进行深入探究，以寻求更加有效的治疗手段，具有重要的... 展开背景及目的：变应性鼻炎（allergicrhinitis,AR）是一种由过敏原暴露于鼻粘膜后由IgE介导引起的症状性鼻炎。目前，尽管治疗AR有许多药物选择，但仍未取得较好的效果，因此，对AR的发病机制进行深入探究，以寻求更加有效的治疗手段，具有重要的意义。Th2细胞在AR的发病机制中至关重要，主要分泌细胞因子IL-4、IL-5和IL-13。研究表明，miR-138-5p与多种人类疾病密切相关，尤其是炎症性疾病，但目前对miR-138-5p是否参与调节AR中Th2细胞因子的表达尚不清楚，而GNAI2作为抑制型G蛋白家族的成员之一，是一种极其重要的信号传导分子，同时生物信息学预测到GNAI2是miR-138-5p的靶标。因此，本研究主要探讨miR-138-5p和GNAI2在AR中的表达及其对AR疾病中Th2细胞因子表达的影响，并进一步探讨其影响AR的具体机制。方法：（1）收集AR患者、AR小鼠和相应对照组的鼻粘膜组织。采用实时定量聚合酶链式反应（Quantitativerealtimepolymerasechainreaction,qRT-PCR）方法检测鼻黏膜组织中miR-138-5p的表达。（2）通过卵清蛋白和氢氧化铝建立AR小鼠模型，采用miR-138-5p激动剂（miR-138-5pagomir）或miR-138-5p拮抗剂（miR-138-5pantagomir）对AR小鼠进行干预，对照组小鼠则用等量无菌生理盐水进行处理，并观察各组小鼠的行为学变化。小鼠鼻黏膜组织的病理学改变通过苏木素-伊红（Hematoxylinandeosin,HE）染色观察，小鼠鼻黏膜中miR-138-5p、IL-4、IL-5和IL-13的表达水平采用qRT-PCR检测，小鼠血清中IL-4、IL-5、IL-13和OVA-slgE的水平由酶联免疫吸附试验（Enzyme-linkedimmunosorbentassay,ELISA）获得。（3）从miRBD、TargetScan、miRTarBase、ENCORI四个数据库分别预测miR-138-5p的靶基因并取交集，结果通过qRT-qPCR和双荧光素酶实验进一步验证。（4）qRT-PCR、免疫蛋白印迹（Westernblot,WB）及免疫组化检测AR患者、AR小鼠和相应对照组鼻粘膜组织中GNAI2的表达水平。（5）将构建完成的腺相关病毒HBAAV2/9-m-GNAI2-3xflag-ZsGreen经鼻腔滴入处理AR小鼠，通过miR-138-5pagomir促进miR-138-5p的表达，采用qRT-PCR分别检测小鼠鼻黏膜中GNAI2、IL-4、IL-5、IL-13的表达水平。结果：（1）AR患者及小鼠鼻黏膜中miR-138-5p的相对表达量较对照组明显增加。（2）造模结束后各组小鼠行为学评分分别为：对照组（1.25±0.4629）、AR组（5.625±0.744）、miR-138-5pagomir组（7.5±0.756）和miR-138-5pantagomir组（2.625±0.744）。HE染色结果显示，上调miR-138-5p后粘膜肿胀更加明显，纤毛部分脱落，病理性腺体增生加重，炎性细胞浸润也较AR组增多；而下调miR-138-5p可见粘膜水肿及炎性细胞浸润等较AR组明显减轻。qRT-PCR和ELISA结果进一步显示上调miR-138-5p后促进了小鼠鼻黏膜及血清中IL-4、IL-5、IL-13、OVA-slgE表达。（3）通过生物信息学预测得到了GNAI2与DNAJB6两个miR-138-5p较为可信的靶基因。靶基因的qRT-PCR检测结果显示，与对照组相比，DNAJB6在对照组与AR组中表达无明显差异，而GNAI2在AR中的表达比对照组降低，且差异具有统计学差异。双荧光素酶报告实验结果表明miR-138-5p可以靶向结合GNAI23''UTR。（4）利用qRT-PCR、WB和免疫组化检测AR患者与AR小鼠鼻黏膜中GNAI2的表达水平。结果显示，GNAI2的表达量在AR患者与AR小鼠鼻黏膜中较对照组更低。（5）在应用腺相关病毒的基础上，通过促进GNAI2的表达，并采用OVA和氢氧化铝构建AR小鼠模型，同时加入miR-138-5pagomir促进miR-138-5p的表达。结果发现，与对照组相比，上调GNAI2后降低了小鼠鼻黏膜中IL-4、IL-5和IL-13mRNA的表达水平；而同时上调miR-138-5p和GNAI2后，可以抑制因GNAI2上调导致的AR小鼠鼻粘膜Th2细胞因子水平降低。结论： miR-138-5p可以通过靶向GNAI23’UTR抑制GNAI2的表达，从而调控变应性鼻炎中Th2细胞因子的表达。MiR-138-5p有望成为AR新的的治疗靶点，为AR的治疗提供新的途径。收起

关键词 : 变应性鼻炎 Th2细胞因子鼻黏膜

9. 鼻黏膜放射损伤后转归规律的近期观察研究

[学位论文] 尹根蒂中山大学 2009年硕士导师: 熊观霞共50页

摘要 : 目的：通过观察和分析适形调强放射治疗后鼻黏膜损伤转归的近期特点，初步探讨鼻黏膜耐受剂量的问题。即当鼻腔所受射线在某一个剂量范围内时，鼻黏膜形态及功能损伤轻，观察期内各观察指标随时间持续恢复。资料与方法： 2006年10月... 展开目的：通过观察和分析适形调强放射治疗后鼻黏膜损伤转归的近期特点，初步探讨鼻黏膜耐受剂量的问题。即当鼻腔所受射线在某一个剂量范围内时，鼻黏膜形态及功能损伤轻，观察期内各观察指标随时间持续恢复。资料与方法： 2006年10月至2008年11月在中山大学肿瘤医院行适形调强放射治疗（Intensity Modulated Radiation Therapy，IMRT）的66名患者自愿参与研究。在IMRT计算机工作平台获取鼻腔所受放射剂量信息。放疗前、放疗后0、3、6和12个月行改良糖精实验、鼻内镜检查和鼻腔鼻窦结局测试20条（sino—nasal outcome test—20，SNOT—20）量表调查，放疗前、放疗后3和12个月行MRI检查。结果：共129侧鼻腔纳入研究。1年观察期内各时期改良糖精实验、鼻内镜检查和SNOT—20中鼻相关症状调查的主要观察指标与放射剂量关系的散点图显示，当放射剂量大于某一剂量时，各观察指标出现明显变化，此剂量即为各观察指标的阈剂量。利用分段回归模型客观确定不同时期各观察指标的阈剂量，放疗后0、3、6、12个月改良糖精实验观察的黏液传送速率比的阈剂量分别为37Gy，37Gy，39Gy和37Gy，鼻内镜评分差值的阈剂量分别为38Gy，37Gy，40Gy和38Gy，鼻相关症状评分的阈剂量分别为39Gy，37Gy，39Gy和39Gy。当鼻腔放射剂量小于或等于阈剂量时，观察期内鼻黏膜的各项观察指标从放疗后3个月起随时间推移持续恢复，放疗后0、3、6、12个月改良糖精实验检测的黏液传送速率分别为放疗前的62.62％，56.78％，64.05％和71.13％，鼻内镜评分差值分别为2.25±1.29，2.59±1.62，1.98±1.09和1.76±0.97，鼻相关症状评分分别为4.27±1.73，4.92±1.68，3.82±1.83和3.24±1.66，各数据间差异有统计学意义（p<0.05）。相反，当鼻腔放射剂量超过阈剂量，1年观察期内鼻黏膜的各项观察指标随时间无明显变化。放疗后各时期改良糖精实验检测的黏液传送速率分别为放疗前的15.41％，15.76％，16.57％和14.84％，鼻内镜评分差值分别为4.23±1.29，4.36±1.46，4.19±1.15和4.29±1.52，鼻相关症状评分分别为10.19±3.91，10.56±3.57，10.03±3.44和10.27±3.57，各数据间差异无统计学意义（p>0.05）。观察期内的改良糖精实验、鼻内镜评分和SNOT—20中的鼻相关症状结果表明，放疗后3个月时，黏液传送速率比为放疗前的38.27％，是观察期内的最低值；鼻内镜评分差值、鼻相关症状评分差值分别为3.94分和8.21分，分别是观察期内的最高值。结论：在放射治疗不可避免地对鼻黏膜造成损害的情况下，鼻腔所受的放射剂量控制在37Gy之内，观察期内放疗后3个月时，鼻黏膜的形态及功能损伤最重，之后随时间推移逐渐恢复。相反，如果超过此阈剂量，鼻黏膜形态及功能将很难恢复。建议在制定放疗计划时可前瞻性地将鼻黏膜所受放射剂量控制在37Gy以内。收起

关键词 : 鼻黏膜软组织损伤放射疗法

10. 鼻黏膜保湿微乳液的制备、质量评价及安全性研究

[学位论文] 荀波娜山西医科大学 2019年硕士导师: 毕小平;毕青玲共83页

摘要 : 目的：本文以薄荷油为主药，佐以甘油为保湿剂，制备鼻黏膜保湿微乳液。并对其处方及制备工艺进行优化，对微乳液的质量评价、稳定性、药效、毒性和刺激性进行相关研究。方法：（1）鼻黏膜保湿微乳液的制备：①处方筛选：通过HLB值... 展开目的：本文以薄荷油为主药，佐以甘油为保湿剂，制备鼻黏膜保湿微乳液。并对其处方及制备工艺进行优化，对微乳液的质量评价、稳定性、药效、毒性和刺激性进行相关研究。方法：（1）鼻黏膜保湿微乳液的制备：①处方筛选：通过HLB值、单因素试验和伪三元相图对鼻黏膜保湿微乳所需的油相（Oil，O）、表面活性剂（Surfactant，SF）、助表面活性剂（Cosurfactant，CoSF）、表面活性剂与助表面活性剂的质量比Km以及甘油用量进行考察，并确定制剂各组分及用量；②制备工艺优化：单因素试验考察搅拌时间、搅拌速度、加样方式对工艺的影响，通过多指标正交试验设计对制备工艺进行优化，制备鼻黏膜保湿微乳液。（2）鼻黏膜保湿微乳的质量评价：①通过对外观、离心试验、浊度、粘度、粒径及Zeta电势、pH、含量等各项指标的测定对鼻黏膜保湿微乳液进行质量评价，并通过染色法和电导率法对微乳的微观结构类型进行判断；②利用气相色谱法（GC）建立鼻黏膜保湿微乳液中薄荷醇的含量测定方法，并对该方法进行方法学验证；③依据2015版《中国药典》第四部项下“原料药物与制剂稳定性试验指导原则”对该制剂的稳定性进行考察，初步考察其储存条件。（3）鼻黏膜保湿微乳的药效、毒性、刺激性考察：①通过显微观察小鼠鼻黏膜上皮细胞形态、在体蟾蜍上颚黏膜黏附性试验对鼻黏膜保湿微乳的药效进行评价；②通过小鼠经口急性毒性试验，以及离体蟾蜍纤毛持续运动时间试验对鼻黏膜保湿微乳的毒性进行评价；③通过大鼠鼻黏膜刺激性试验、家兔眼黏膜刺激性试验对鼻黏膜保湿微乳的刺激性进行评价。结果：（1）筛选得到的油相为薄荷油，其最适HLB值为15，表面活性剂为PEG-40氢化蓖麻油（CO-40），助表面活性剂为无水乙醇，表面活性剂与助表面活性剂质量比Km为1∶1。其处方组成：薄荷油为1.5%，CO-40为18%，无水乙醇为18%，甘油为9%，蒸馏水为53.5%。最优制备工艺为：先将薄荷油加入CO-40搅拌均匀，随后按处方量加入其它组分，在1200r/min搅拌速度下搅拌2h即可。（2）制备得到的鼻黏膜保湿微乳液为具有薄荷清香味的无色透明、均一稳定的液体分散体系。透射电镜观察粒子形态均匀完整，粒径分布在10~100nm之间，在10000r/min转速下的离心15min不分层，平均浊度为（1.16±0.09）NTU，平均粘度为（34.6±6.75）mPa?s，pH在6.3~6.5范围内。染色法观察结果显示水溶性染料扩散较快；电导率试验测试结果显示微乳为双连续型（B.C）微乳，体系含水量大于69.70%时，体系形成O/W型微乳液。因而，本制剂的特点是以水包油型为主，且含有部分双连续型粒子。采用GC法测定鼻黏膜保湿微乳中薄荷醇的含量：薄荷醇的线性范围为0.183×10-3~2.745×10-3g/mL，日内精密度RSD值为1.34%~2.85%，日间精密度RSD值为1.19%~2.96%，回收率结果在94.44%~104.14%之间，平均回收率为98.73%，RSD值为3.26%。保湿微乳中以薄荷醇计薄荷油的平均含量为2.544mg/mL，RSD值为2.89%，每批次之间含量测定结果的RSD值在0.58%~2.33%之间。稳定性试验结果显示，在强光照射试验、高温试验、加速试验中，其含量测定结果，总RSD值分别为3.79%，3.69%，4.18%；-10℃、-80℃冻融和低温试验中，含量测定总RSD值分别为3.35%，2.85%，1.38%，粒径均小于100nm，其它各项指标均无明显变化。（3）药效试验：在小鼠鼻黏膜细胞形态学显微观察试验中，结果显示细胞经高渗盐水作用后，施以鼻黏膜保湿微乳后细胞可快速补水恢复原有饱满形态；黏膜黏附性试验中，自制保湿微乳高、中、低剂量组相对传输速率是生理盐水组的0.55、0.66、0.78倍，具有统计学差异（P＜0.05）。毒性试验：纤毛毒性试验中，鼻黏膜保湿微乳组高、中、低剂量组纤毛持续运动时间与生理盐水组相比，无显著性差异（P＞0.05），以及黏膜切片结果，均说明其基本无毒；小鼠急性经口毒性试验中，给予小鼠最大浓度最大灌胃剂量后，受试组小鼠均全部健康存活，肉眼观察其主要脏器均无明显病理变化。刺激性试验：大鼠鼻黏膜刺激性试验中，对大鼠体重以及日常行为活动均无明显影响，同时平均每日抓鼻和甩头次数与生理盐水组相比，无显著性差异（P＞0.05）；家兔眼黏膜刺激性试验中，鼻黏膜保湿微乳组角膜浑浊、结膜充血时间较短，有少量分泌物、轻微水肿，但较复方薄荷脑滴鼻液刺激性小。结论：本文通过处方筛选、制备工艺优化及质量控制，采用纳米化载药释放技术，将薄荷油包裹起来形成液-液纳米分散体系，降低了薄荷油的挥发性与刺激性，创新性的制备出了薄荷油鼻黏膜保湿微乳液；通过药效试验、毒性试验、刺激性试验等研究说明该微乳液保湿性佳、透气性好，无毒无刺激。以期为有效改善鼻黏膜干燥、减少和预防呼吸道疾病的发生提供科学依据。拟为临床治疗因鼻腔干燥而引发的干燥性、萎缩性、过敏性鼻炎以及上呼吸道感染等疾病提供一种安全、有效的新途径与新思路。对保护人体呼吸的第一道关口，提高人们生活质量，具有十分重要的实际应用价值。收起

关键词 : 鼻黏膜保湿微乳工艺优化质量评价安全性