摘要: 目的：变应性鼻炎（allergicrhinitis,AR）是一种常见的变应性疾病。泛素化是细胞介导选择性蛋白质降解的主要途径。泛素特异性蛋白酶（Ubiquitin-specificprotease,USP）是人类去泛素化酶（DUBs）中的最大家族。既往发现，泛素特异性蛋白酶25（USP25... 展开 目的：变应性鼻炎（allergicrhinitis,AR）是一种常见的变应性疾病。泛素化是细胞介导选择性蛋白质降解的主要途径。泛素特异性蛋白酶（Ubiquitin-specificprotease,USP）是人类去泛素化酶（DUBs）中的最大家族。既往发现，泛素特异性蛋白酶25（USP25）参与病毒免疫和肿瘤发生等免疫相关病理和生理过程。但USP25在AR等变应性疾病中的作用及机制尚不清楚。近期文献表明USP25可通过去泛素化作用维持肿瘤坏死因子受体作用因子3（TNFreceptor-associatedfactor3，TRAF3）的高表达，而TRAF3作为NF-κB通路的负调节因子，在免疫调控中有重要作用。本研究旨在探究USP25在AR免疫失衡中的作用及在鼻黏膜上皮细胞中的调控机制。 方法： 1.搜集AR患者和对照者的鼻黏膜组织，用免疫组化法和蛋白质印迹法检测鼻黏膜组织中USP25的表达情况，并用蛋白质印迹法检测鼻黏膜组织中胸腺基质淋巴细胞生成素（ThymicStromalLymphopoietin,TSLP）的表达情况； 2.构建卵清蛋白（Ovalbumin,OVA）致敏的野生型小鼠和USP25基因敲除鼠的AR小鼠模型，用ELISA法检测小鼠鼻腔灌洗液和血清中IL-4、IL-5、IL-10、IL-13、IFN-γ的表达水平，用HE染色法对小鼠鼻黏膜组织鼻黏膜组织进行观察，应用蛋白质免疫印迹法(WesternBlot,WB)和免疫组化法检测小鼠鼻黏膜组织中USP25和TSLP的表达情况； 3.OVA刺激HNEpC细胞模拟变应性炎症环境，并分别用siRNA抑制USP25或TRAF3表达，用pcDNA过表达TRAF3或USP25；WB检测细胞中USP25，TRAF3和TSLP的表达情况。 结果： 1.AR患者鼻黏膜组织中USP25表达明显较低，而TSLP表达明显较高。2.对比生理盐水刺激的野生型对照组小鼠，OVA致敏的AR小鼠模型鼻腔 灌洗液和血清中IL-4、IL-5、IL-10、IL-13的表达水平明显升高，而IFN-γ的表达水平明显降低；AR小鼠鼻黏膜组织中有嗜酸性粒细胞数目明显增多；鼻黏膜中UPS25表达减少，TSLP表达增加。对比野生型AR小鼠，OVA致敏的USP25基因敲除鼠鼻腔灌洗液和血清中IL-4、IL-5、IL-10、IL-13的表达水平明显升高；而IFN-γ的表达明则显著降低；鼻黏膜中UPS25表达缺失，而TSLP表达进一步增加。 3.相对于空白对照组，OVA的刺激使得HNEpC细胞USP25表达减少，TRAF3表达减少，而TSLP表达升高；siRNA抑制USP25表达后，TRAF3也同步表达减少，而TSLP进一步表达升高；在此基础上，加入pcDNA使TRAF3过表达，相对于NECs+OVA+USP25siRNA+TRAF3pcNC组，USP25表达无明显改变，但TSLP表达明显减少。而在OVA刺激后，加入pcDNA使USP25过表达后，TRAF3也同步表达增加，而TSLP表达下降；在此基础上，加入siRNA抑制TRAF3表达，相对于NECs+OVA+USP25pcDNA+TRAF3siRNA组，USP25表达无明显改变，但TSLP表达明显增加。 结论： 1.在AR患者中鼻黏膜组织中USP25呈明显低表达，TSLP呈明显高表达。2.USP25的缺失使得鼻黏膜上皮中TSLP表达进一步增加，并加重了AR 小鼠的变应性炎症反应。 3.体外培养的人鼻黏膜上皮细胞中，USP25通过维持TRAF3的表达从而抑制TSLP，从而在变应性炎症中起关键的调控作用。 收起