摘要: 背景及目的： 变应性鼻炎（allergicrhinitis,AR）是一种由过敏原暴露于鼻粘膜后由IgE介导引起的症状性鼻炎。目前，尽管治疗AR有许多药物选择，但仍未取得较好的效果，因此，对AR的发病机制进行深入探究，以寻求更加有效的治疗手段，具有重要的意... 展开 背景及目的： 变应性鼻炎（allergicrhinitis,AR）是一种由过敏原暴露于鼻粘膜后由IgE介导引起的症状性鼻炎。目前，尽管治疗AR有许多药物选择，但仍未取得较好的效果，因此，对AR的发病机制进行深入探究，以寻求更加有效的治疗手段，具有重要的意义。Th2细胞在AR的发病机制中至关重要，主要分泌细胞因子IL-4、IL-5和IL-13。研究表明，miR-138-5p与多种人类疾病密切相关，尤其是炎症性疾病，但目前对miR-138-5p是否参与调节AR中Th2细胞因子的表达尚不清楚，而GNAI2作为抑制型G蛋白家族的成员之一，是一种极其重要的信号传导分子，同时生物信息学预测到GNAI2是miR-138-5p的靶标。因此，本研究主要探讨miR-138-5p和GNAI2在AR中的表达及其对AR疾病中Th2细胞因子表达的影响，并进一步探讨其影响AR的具体机制。 方法： （1）收集AR患者、AR小鼠和相应对照组的鼻粘膜组织。采用实时定量聚合酶链式反应（Quantitativerealtimepolymerasechainreaction,qRT-PCR）方法检测鼻黏膜组织中miR-138-5p的表达。 （2）通过卵清蛋白和氢氧化铝建立AR小鼠模型，采用miR-138-5p激动剂（miR-138-5pagomir）或miR-138-5p拮抗剂（miR-138-5pantagomir）对AR小鼠进行干预，对照组小鼠则用等量无菌生理盐水进行处理，并观察各组小鼠的行为学变化。小鼠鼻黏膜组织的病理学改变通过苏木素-伊红（Hematoxylinandeosin,HE）染色观察，小鼠鼻黏膜中miR-138-5p、IL-4、IL-5和IL-13的表达水平采用qRT-PCR检测，小鼠血清中IL-4、IL-5、IL-13和OVA-slgE的水平由酶联免疫吸附试验（Enzyme-linkedimmunosorbentassay,ELISA）获得。 （3）从miRBD、TargetScan、miRTarBase、ENCORI四个数据库分别预测miR-138-5p的靶基因并取交集，结果通过qRT-qPCR和双荧光素酶实验进一步验证。 （4）qRT-PCR、免疫蛋白印迹（Westernblot,WB）及免疫组化检测AR患者、AR小鼠和相应对照组鼻粘膜组织中GNAI2的表达水平。 （5）将构建完成的腺相关病毒HBAAV2/9-m-GNAI2-3xflag-ZsGreen经鼻腔滴入处理AR小鼠，通过miR-138-5pagomir促进miR-138-5p的表达，采用qRT-PCR分别检测小鼠鼻黏膜中GNAI2、IL-4、IL-5、IL-13的表达水平。 结果： （1）AR患者及小鼠鼻黏膜中miR-138-5p的相对表达量较对照组明显增加。（2）造模结束后各组小鼠行为学评分分别为：对照组（1.25±0.4629）、AR组（5.625±0.744）、miR-138-5pagomir组（7.5±0.756）和miR-138-5pantagomir组（2.625±0.744）。HE染色结果显示，上调miR-138-5p后粘膜肿胀更加明显，纤毛部分脱落，病理性腺体增生加重，炎性细胞浸润也较AR组增多；而下调miR-138-5p可见粘膜水肿及炎性细胞浸润等较AR组明显减轻。qRT-PCR和ELISA结果进一步显示上调miR-138-5p后促进了小鼠鼻黏膜及血清中IL-4、IL-5、IL-13、OVA-slgE表达。 （3）通过生物信息学预测得到了GNAI2与DNAJB6两个miR-138-5p较为可信的靶基因。靶基因的qRT-PCR检测结果显示，与对照组相比，DNAJB6在对照组与AR组中表达无明显差异，而GNAI2在AR中的表达比对照组降低，且差异具有统计学差异。双荧光素酶报告实验结果表明miR-138-5p可以靶向结合GNAI23''UTR。 （4）利用qRT-PCR、WB和免疫组化检测AR患者与AR小鼠鼻黏膜中GNAI2的表达水平。结果显示，GNAI2的表达量在AR患者与AR小鼠鼻黏膜中较对照组更低。 （5）在应用腺相关病毒的基础上，通过促进GNAI2的表达，并采用OVA和氢氧化铝构建AR小鼠模型，同时加入miR-138-5pagomir促进miR-138-5p的表达。结果发现，与对照组相比，上调GNAI2后降低了小鼠鼻黏膜中IL-4、IL-5和IL-13mRNA的表达水平；而同时上调miR-138-5p和GNAI2后，可以抑制因GNAI2上调导致的AR小鼠鼻粘膜Th2细胞因子水平降低。 结论： miR-138-5p可以通过靶向GNAI23’UTR抑制GNAI2的表达，从而调控变应性鼻炎中Th2细胞因子的表达。MiR-138-5p有望成为AR新的的治疗靶点，为AR的治疗提供新的途径。 收起