摘要: 背景及目的： 变应性鼻炎（Allergic Rhinitis，AR）是全球最常见的以Th2型免疫反应为主的非传染性慢性上呼吸道疾病之一，病程反复难以治愈而严重影响患者的生活与工作。更重要的是，AR是许多并发症的基础以及哮喘控制不良的主要危险因素。目前，... 展开 背景及目的： 变应性鼻炎（Allergic Rhinitis，AR）是全球最常见的以Th2型免疫反应为主的非传染性慢性上呼吸道疾病之一，病程反复难以治愈而严重影响患者的生活与工作。更重要的是，AR是许多并发症的基础以及哮喘控制不良的主要危险因素。目前，AR的临床治疗仍主要为对症治疗，如鼻内类固醇激素和抗组胺药。特异性免疫治疗的应用仍存在诸多局限性。因此，阐明 AR 的发病机制，寻找AR的潜在治疗靶标势在必行。 MicroRNAs（miRNAs）是一类非编码小分子单链RNA，其通过与靶mRNA结合以促进mRNA降解或阻断蛋白质翻译而参与转录后基因表达的调控。越来越多的研究表明miRNA可以通过调节免疫细胞的功能来影响变应性炎症。在免疫系统相关的miRNAs中，miR-155与免疫调节关系最密切。2型固有淋巴细胞（Group 2 innate lymphoid cells，ILC2s）表面缺乏与T细胞，B细胞和其他白细胞相关的常见谱系标志物，但可以产生大量的Th2类细胞因子如IL-4，IL-5和IL-13，而参与促进Th2型免疫反应。但是，miR-155和ILC2在AR中的相互作用机制尚不明确。因此，本研究探讨了AR发病中miR-155调控ILC2功能的作用和机制，研究结果将有助于理解AR的发病机理，为建立可能的干预手段寻找新的分子靶点。 方法： 1、收集26例AR患者和28例对照者的鼻黏膜组织和外周血样本。使用实时定量聚合酶链式反应（Quantitative real timepolymerase chainreaction， qRT-PCR）测定鼻黏膜组织中miR-155，IL-25和IL-33的mRNA表达水平。通过流式细胞术检测外周血中ILC2的比例。然后分析miR-155和ILC2的相关性； 2、通过经鼻滴入IL-33在雌性Balb/C小鼠中建立AR模型，并用miR-155激动剂（miR-155 agomir）或miR-155拮抗剂（miR-155 antagomir）进行干预，对照组小鼠经鼻腔滴入等量无菌生理盐水。在最后一次滴鼻后观察小鼠行为学变化。苏木素-伊红（Hematoxylin and eosin，HE）染色观察小鼠鼻黏膜组织病理学情况； 3、qRT-PCR检测小鼠鼻黏膜中miR-155，IL-4，IL-5，IL-9和IL-13的mRNA水平。蛋白质印迹法（Western Blot）检测小鼠鼻黏膜中IL-4，IL-5，IL-9和IL-13的蛋白水平。酶联免疫吸附试验（Enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）检测小鼠血清中IL-4，IL-5，IL-9和IL-13的蛋白水平。流式细胞术检测小鼠鼻黏膜中ILC2的比例。 结果： 1、与对照组相比，AR患者鼻黏膜组织中miR-155（0.571± 0.068 vs 1.778 ± 0.247，P＜0.001），IL-25（0.228± 0.069 vs 0.434± 0.048，P＜0.05）和IL-33 （2.013 ± 0.781 vs 30.480± 5.782，P＜0.001）的mRNA表达水平均升高。ILC2在AR患者外周血中高表达（0.128%± 0.013% vs0.033%± 0.003%，P＜0.0001）。此外，外周血中ILC2的比例与鼻黏膜中的miR-155表达显着相关（Spearman's method.r = 0.4803，P= 0.013）。 2、造模结束后小鼠行为学评分分别为1.833 ± 0.307（对照组）、5.667 ± 0.333 （AR组）、7 ± 0.365（miR-155上调组）、3.5 ± 0.224（miR-155下调组）。HE染色显示，鼻黏膜充血、水肿、上皮脱落，基底膜增厚和基底细胞排列紊乱不规则，病理性腺体增生，血管增生、扩张，嗜酸性粒细胞等炎性细胞浸润，这些病理改变在miR-155上调组中更加明显，而在miR-155下调组中明显减轻。 3、与对照组相比，AR组小鼠鼻黏膜中miR-155的表达明显增加（2.339 ± 0.206vs1.017 ± 0.052，P＜0.0001）；与AR组相比，鼻内滴入miR-155agomir后，miR-155的表达显着增加（68.1 ± 12.9vs2.339 ± 0.206，P＜0.0001），鼻内滴入miR-155antagomir后，miR-155的表达降低（1.429 ± 0.272vs2.339 ± 0.206， P ＜ 0.05）。与对照组相比，AR组小鼠中IL-4，IL-5，IL-9和IL-13的mRNA和蛋白水平均明显上升（P＜ 0.05）。上调miR-155的表达后，上述细胞因子的表达更加明显（P＜ 0.05）。而下调miR-155的表达后，上述细胞因子的表达显著下降（P＜ 0.05）。与临床标本测试结果一致，与对照组相比，ILC2在AR小鼠的鼻黏膜中高表达（3.347%± 0.234% vs1.767%±0.087%，P＜0.0001）。与AR小鼠相比，miR-155上调组小鼠（6.053%± 0.447% vs3.347%± 0.234%，P＜0.001）显示出更高比例的ILC2，而miR-155下调组小鼠中ILC2比例则明显降低（2.403%± 0.2249% vs3.347%± 0.234%，P＜0.05）。 结论: miR-155和ILC2在AR中高表达，并且高表达的miR-155可以通过调节ILC2表达Th2细胞因子来促进AR免疫应答，对AR的预防和控制具有重要意义。 收起