摘要: 正常妊娠过程中，胎盘对于保障胎儿生长发育和母亲健康发挥重要作用。胎盘滋养层细胞通过改建子宫螺旋动脉，确保母胎界面血流灌注;胎盘可分泌多种激素和因子，保证母胎界面免疫豁免环境的建立，并调节母体多个脏器和系统发生生理性变化，即妊娠适应性... 展开 正常妊娠过程中，胎盘对于保障胎儿生长发育和母亲健康发挥重要作用。胎盘滋养层细胞通过改建子宫螺旋动脉，确保母胎界面血流灌注;胎盘可分泌多种激素和因子，保证母胎界面免疫豁免环境的建立，并调节母体多个脏器和系统发生生理性变化，即妊娠适应性;此外，越来越多的证据显示，以胎盘为主体的宫内环境对子代远期健康具有重要影响。 胎盘发育或功能异常与子痫前期等妊娠疾病直接关联。子痫前期是妊娠期间发生的多系统综合征，临床表现为妊娠20周以后突发高血压并伴随蛋白尿或母体多脏器损伤，严重威胁母儿健康。已有证据显示子痫前期母胎界面上的病理改变主要表现为滋养层细胞功能异常、免疫耐受环境受损、胎盘血流灌注不足等，而患者呈现异常的超凝血状态。深入研究这些病理改变之间的分子关联是阐明疾病发病机制的重要策略。 本实验室前期的研究发现，子痫前期患者外周血促凝因子SerpinF2水平较正常妊娠显著升高，体外转录分析揭示雄激素和炎性因子TNFα可分别正向调节肾脏和肝脏中SerpinF2表达。基于此，我们假设胎盘源性的炎性因子和类固醇激素可能通过影响母体肝、肾凝血因子的表达而调节母体凝血-纤溶系统的妊娠适应性变化，进而影响妊娠结局和子代健康。为验证这一假说，本工作构建了孕期慢性炎症和高雄激素的小鼠模型，探讨母体凝血状况、母胎界面血流灌注、妊娠结局及子代的远期健康。 CD1孕鼠随机分为LPS组和对照组，从E7.5至E17.5每日腹腔注射LPS或者等体积生理盐水;孕期每日上午以尾套法检测小鼠血压，并于不同时间点采集血样和尿样，E13.5或E18.5处死小鼠并收集肝脏、肾脏、胎盘等标本。研究结果显示，孕期10μg/kg LPS处理可使小鼠外周血中TNFα水平显著升高;相比于对照组，LPS组孕鼠于E8.5开始表现为血压升高并持续至分娩，孕晚期出现蛋白尿，脐带血流显著降低，胎儿表现为生长受限(FGR)，这些都是典型的子痫前期表征。实时定量PCR和Western blotting结果显示，LPS组母鼠肝脏和胎盘组织中SerpinF2的表达显著高于对照组;ELISA结果显示，外周循环中PAP（Plasmin-α2-antiplasmin复合物）水平从孕中期开始显著高于对照组，并持续至孕晚期;母鼠肝脏、肾脏和胎盘组织中呈现明显的纤维蛋白沉积;子宫动脉搏动指数显著减小，胎盘迷路层胎儿血管面积显著减小，表明胎盘血流灌注受阻、胎儿血管发育不完善。这些结果表明，妊娠期间促炎因子可通过增强促凝因子表达破坏凝血-纤溶平衡，导致母体出现超高凝状态，干扰胎盘/胎儿发育。这从母体凝血系统的妊娠适应性角度为阐释子痫前期的病理提供了新见解。 为探讨宫内不良环境对于子代远期健康的编程效应，我们对孕期LPS处理和对照组小鼠的雌性子一代（F1-LPS和F1-CTRL）进行了血压、生育能力、胰岛素敏感性和脂代谢等方面的长期监测。结果显示，正常饲喂条件下，F1-LPS可以健康存活，生育能力未见异常。进而对F1-LPS和F1-CTRL进行高脂饲喂刺激，即从出生后6周起对F1仔鼠随机分组，分别以45％高脂饲料和正常饲料饲喂8-10周（LPS-HFD、CTRL-HFD、LPS-CD和CTRL-CD组）。结果显示，与正常饲喂相比，高脂饲喂刺激可导致小鼠血糖升高、胰岛素敏感性降低，但LPS-HFD组和CTRL-HFD组之间并未见明显差异。有趣的是，与CTRL-HFD组小鼠相比，LPS-HFD组小鼠发生肥胖的现象更加明显，其肝脏中脂滴沉积显著增多。为探讨肝脏脂肪代谢异常的宫内编程机制，我们对E18.5胎鼠肝脏中脂肪酸转运载体进行检测，并未发现异常表达，而LPS组胎鼠肝脏中Dnmt3a表达的显著下降，促使我们进一步对胎肝DNA甲基化谱进行了测序分析。这部分研究结果提示，孕期遭遇炎性环境的雌性胎儿可能发生脂肪代谢的表观遗传编程，出生后受到高脂饮食刺激时会发生更加显著的脂肪代谢异常。 我们同时构建了孕期高雄激素的小鼠模型，从E6.5至E17.5每日皮下注射1-4mg/kg丙酸睾酮(Testosterone Propionate，TP)或等体积医用蓖麻油，对出生雌性子一代（F1-TP和F1-Oil）进行了血压、生育能力、胰岛素敏感性等方面的长期监测。结果显示，孕期TP处理使子代小鼠的生育能力受到严重影响，当TP剂量≥2mg/kg时，所有F1-TP鼠的阴腔均闭合，导致完全不育;当TP剂量降至1mg/kg时，约33％F1-TP鼠的阴腔闭合，而43％F1-TP鼠的阴腔张开时间较F1-Oil组明显推迟。TP剂量与F1仔鼠的肛门-生殖器距离(Anogenital Distance，AGD)呈现明显的正相关性。可见孕期过度高雄可导致雌性子代发生生殖道畸形。后续拟深入研究1mg/kg TP剂量下雌性子代的远期健康情况。 最后，我们对子痫前期胎盘中雌、雄激素合成失衡的机制进行了探索。与正常妊娠对照相比，子痫前期胎盘组织中雄激素合成酶17β-HSD3异常高表达，而雌激素合成酶芳香化酶却显著低表达，同时miR-22呈现明显上调。以人胎盘滋养层细胞系JEG-3为模型，发现ERα，而非芳香化酶，是miR-22的直接靶基因;睾酮可通过上调miR-22表达来抑制ERα，削弱了E2/ERα信号对芳香化酶的促进作用，从而抑制雌二醇的合成。这一结果揭示了人类胎盘滋养层细胞中雌、雄激素合成的平衡机制，而miR-22可能介导了子痫前期胎盘中激素合成的失衡。 综上所述，本研究针对子痫前期患者中观察到的炎症反应、高雄激素、超凝血等异常，构建了孕期LPS小鼠模型和TP小鼠模型，明确了孕期炎症和高凝表型之间的关联;并就宫内不良环境对雌性子代的远期健康进行了初步探究。为深入探索子痫前期的干预策略奠定了基础。 收起