摘要:
研究背景: 卵母细胞冷冻是辅助生殖技术中女性生育力保存的一项重要技术，目前已被国内外各生殖中心广泛应用。卵母细胞冷冻技术开展初期，各生殖中心常用的卵母细胞冷冻方法多为慢速冷冻法，随着玻璃化冷冻技术的成熟，因其操作简单快速、存活率高...
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研究背景: 卵母细胞冷冻是辅助生殖技术中女性生育力保存的一项重要技术，目前已被国内外各生殖中心广泛应用。卵母细胞冷冻技术开展初期，各生殖中心常用的卵母细胞冷冻方法多为慢速冷冻法，随着玻璃化冷冻技术的成熟，因其操作简单快速、存活率高等优点，逐步替代了慢速冷冻法，同时获得了较为理想的效果。玻璃化冷冻过程中冷冻保护剂的使用以及降温升温过程对卵母细胞的损伤是学者们研究的热点，从分子层面到对细胞结构及胚胎发育潜能的影响有些相关的文献报道，而临床参考还需要实际意义的临床结局及子代随访调查。因数据有限，相关报道较少。 卵母细胞冷冻技术在各大中心实施以来，除帮助了罹患肿瘤、妇科疾病等有延缓生育需求的夫妇，也帮助了卵巢早衰、染色体异常等自身不能产生正常卵子的夫妇，借助卵母细胞捐赠生育了正常后代。卵母细胞捐赠是夫妇双方利用辅助生殖技术获取较多卵子，在保证其自身有足够可利用卵子的同时，夫妇双方愿意将剩余的卵子捐赠给他人使用。卵母细胞来源均为35岁及35岁以内的女性，卵母细胞捐赠的方式有两种:新鲜卵母细胞捐赠和冷冻卵母细胞捐赠。比较不同的捐赠方式对患者妊娠结局的差异性，卵母细胞冷冻在液氮中的冻存时长对受卵周期妊娠结局的影响以及对使用不同冷冻液冷冻卵母细胞所出生子代的随访调查，旨在帮助患者选择供卵方案的同时又可供临床医师为患者制定方案时提供参考，在避免过度依赖进口试剂的同时，为国产试剂研发提供依据。 研究方法: 第一部分收集2018年-2019年接受玻璃化冷冻卵母细胞捐赠的252个周期（冷冻组）和接受新鲜卵母细胞捐赠313个周期的患者（新鲜组），比较两者间的受精率、2PN（双原核）卵裂率、卵母细胞利用情况以及累积妊娠结局之间的差异。 进一步的将冷冻组按照冷冻时长分成6组（1年内组、1-2年组、2-3年组、3-4年组、4-5年组及5年以上组），对各组解冻卵母细胞的存活率、2PN率、2PN卵裂率、D3优质胚胎率、卵子利用率、临床妊娠率、活产率及产后胎儿畸形率进行比较。 第二部分筛选2012年到2017年接受玻璃化冷冻卵母细胞来源周期（有子代随访周期131例），将使用自配冷冻液冷冻卵母细胞患者（自配组）与使用成品冷冻液冷冻卵母细胞患者（成品组）进行比较，随访产后儿童在6个月、1岁及2岁阶段体格检查之间的差别，以及2-6岁儿童各项辅助检查指标的差异。 新鲜卵母细胞获卵后，或卵母细胞玻璃化冷冻解冻后，体外培养2-4小时行授精，16-18小时观察受精，受精后72小时观察胚胎质量并评分，选择优胚移植，剩余胚胎培养囊胚并冷冻优质囊胚。鲜胚移植后14天，采血检查HCG（绒毛膜促性腺激素）。冻胚移植12天后采血检查HCG。妊娠后黄体酮注射一直到12周，妊娠判断为7周见到妊娠囊即为临床妊娠，活产为生下存活新生儿。随访儿童检查项目包括:体格检查及采血检查。 结果: 新鲜组在2PN率(76.78％,71.25％,P=0.04）、2PN卵裂率（92.38％,99.61％,P＜0.01）、D3优胚率（45.98％,59.46％,P＜0.01）、及卵子利用率（34.03％,44.15％,P＜0.01）上显著高于冻卵组;但在周期累积移植率（71.24％,82.54％,P＜0.001）、累积临床妊娠率（58.30％,68.27％,P＜0.01）及累积活产率（43.95％,59.61％,P＜0.01）上较冷冻组低。两者在胎儿发育异常率上没有统计学差异。 不同冻存时长各组卵母细胞解冻后，各组受精2PN率、2PN卵裂率、D3优胚率、囊胚形成率、卵子利用率之间均无统计学差异（P＞0.05）,各组临床妊娠率、活产率、产后胎儿发育异常率均无统计学差异（P＞0.05）,不同冻存时间存活率（72.00％,84.50％,87.50％,88.44％,91.02％,93.87％,P=0.039）有统计学差异。为进一步分析具体差异，将临近两组的存活率使用卡方检验两两比较，除1年内组外，其余相邻各组结果之间均无统计学差异（p＞0.05）。 不同冷冻液冷冻卵母细胞来源的6个月、1岁、2岁儿童体格检查的比较中,随访儿童在6个月及1岁体格检查中，两组均无统计学差异，2岁儿童的身高存在显著性差异（自配组89.81±3.41,成品组86.92±1.89,P=0.045）,其余各项均无统计学差异。2-6岁儿童血液检查除血小板计数（自配组311.51±73.80,成品组361.78±88.11,P=0.007）呈现显著性差异外，其余各项检查均无统计学差异。再将血小板计数两组异常人群比例进行比较，无统计学差异，且平均值均在参考范围内。 研究结论: 本研究发现玻璃化冷冻会影响卵母细胞的发育潜能，但与冻存时间无相关性。不同卵母细胞捐献方式，分娩婴儿的健康情况未见显著差异。使用不同冷冻液冻存卵母细胞的患者，产后儿童体格发育指标、血常规及甲功生化项目检查未见显著差异。
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