摘要: 目的:研究不同浓度唑来膦酸（ZOL）对成骨前体细胞系MC3T3-E1细胞活力和功能的影响，探索可能与之相关的双膦酸盐相关性下颌骨坏死（BRONJ）的发病机制。 方法:使用含不同浓度（100μM、10μM、1μM、0.1μM、0.01μM）ZOL的成骨诱导培养基干预MC3T3-E1... 展开 目的:研究不同浓度唑来膦酸（ZOL）对成骨前体细胞系MC3T3-E1细胞活力和功能的影响，探索可能与之相关的双膦酸盐相关性下颌骨坏死（BRONJ）的发病机制。 方法:使用含不同浓度（100μM、10μM、1μM、0.1μM、0.01μM）ZOL的成骨诱导培养基干预MC3T3-E1细胞，用不含ZOL的培养基作为对照，在培养1、3、5、7天后，采用CCK-8法观察ZOL对成骨细胞增殖的影响；培养3天后，检测各组活性caspase-3蛋白表达；在培养第1、4、7天后采用Annexin V/PI双染色流式细胞法检测早期凋亡细胞和晚期凋亡细胞/坏死细胞百分比，观察ZOL对成骨细胞凋亡的影响。用较低浓度（1μM、0.1μM、0.01μM）ZOL干预成骨细胞，不含ZOL的培养基作对照，第10天行ALP染色，第7天、第14天检测细胞内ALP的活性，第21天行茜素红钙结节染色、用ELISA法检测第7天细胞培养液中BMP-2的浓度，Real-time qPCR检测Runx2、Col I、ALP、OCN、BMP-2基因的表达，Western blot检测ALP、OCN、Runx2、BMP-2、ERK1/2、P-ERK1/2、p38、P-p38蛋白的表达，观察低浓度ZOL对成骨细胞的影响。 结果:当ZOL浓度≥10μM时，CCK-8实验，Annexin V/PI双染色流式细胞试验和Western blot检测活性caspase-3蛋白表达试验表明细胞活力受到抑制且诱导凋亡加强，差异有统计学意义，而当ZOL浓度≤1μM时各组间细胞活力和凋亡无统计学差异。低浓度（≤1μM）干预时，随着ZOL浓度的升高ALP染色和茜素红染色逐渐变浅，ALP活性逐渐降低，成骨分化相关基因Runx2、Col I、ALP、 OCN的表达逐渐降低，成骨分化相关蛋白ALP、OCN、Runx2的表达逐渐降低。成骨细胞分化的抑制与BMP-2的表达降低有关，其下游通路ERK1/2和p38磷酸化水平降低。 结论:在较高浓度时ZOL引起对MC3T3-E1的细胞毒性作用，在较低浓度时ZOL通过下调BMP-2的表达而抑制MC3T3-E1细胞的分化。这个结论可以帮助我们理解BRONJ可能的发病机制。 收起