摘要: 目的：本课题通过研究维甲酸对小鼠神经干细胞自噬和凋亡的影响，初步探讨在神经干细胞中自噬与凋亡的关系，为深入了解维甲酸在神经系统发育过程中的作用提供依据。 方法：从胎鼠脑中分离细胞并在选择性培养基中传代多次，通过形态学观察和免疫细... 展开 目的：本课题通过研究维甲酸对小鼠神经干细胞自噬和凋亡的影响，初步探讨在神经干细胞中自噬与凋亡的关系，为深入了解维甲酸在神经系统发育过程中的作用提供依据。 方法：从胎鼠脑中分离细胞并在选择性培养基中传代多次，通过形态学观察和免疫细胞化学方法进行鉴定以确定其是神经干细胞。在不含叶酸的培养基中接种上小鼠神经干细胞，分别加入不同剂量的维甲酸（0，10，20，40μM）处理细胞24 h，利用RT-PCR方法和Westernblot技术检测Beclin-1和LC3-Ⅱ表达情况，了解维甲酸对神经干细胞自噬的影响。然后用20μM维甲酸处理神经干细胞，利用流式细胞术在不同时间点(0，12h，24 h)检测细胞凋亡情况，了解维甲酸对神经干细胞凋亡的影响。最后按设计以下四组实验:①对照组②20μM维甲酸组③20μM维甲酸和自噬抑制剂3-MA组④自噬抑制剂3-MA组，处理时间为24 h，然后用流式细胞术检测维甲酸对细胞凋亡的影响，以此来了解自噬和凋亡的关系。 结果和结论： 1.通过形态学观察和免疫细胞化学方法得到的结果，证实从胎鼠脑分离出的细胞具有神经干细胞的特征。 2.维甲酸呈剂量依赖性抑制Beclin-1和LC3-Ⅱ蛋白表达水平，结果提示维甲酸抑制小鼠神经干细胞自噬发生。 3.维甲酸抑制自噬在一定程度上增加细胞凋亡的发生。 收起