摘要: 目的：化疗是临床治疗恶性肿瘤的重要方法之一，但是，大多数抗肿瘤药物对肿瘤细胞和人体正常细胞的选择性差别不大，因此，在临床应用过程中不良反应广泛且严重，加之不同的肿瘤细胞对药物的敏感性不同以及耐药性的产生，以致使恶性肿瘤的化疗效应受... 展开 目的：化疗是临床治疗恶性肿瘤的重要方法之一，但是，大多数抗肿瘤药物对肿瘤细胞和人体正常细胞的选择性差别不大，因此，在临床应用过程中不良反应广泛且严重，加之不同的肿瘤细胞对药物的敏感性不同以及耐药性的产生，以致使恶性肿瘤的化疗效应受到很大的限制。近年来，植物来源的抗肿瘤药物重新引起重视。植物来源的化合物不仅对发现新药有巨大潜力，而且还可以为设计更理想的新药提供独特的新的化学结构，后者更可以被用做创造新药的先导化合物。因此，植物来源的抗肿瘤药物越来越受到很大的重视。 肺癌是最常见的恶性肿瘤之一，严重威胁人们健康和生命的一种疾病。半个世纪以来，肺癌的发病率和死亡率都有明显增高的趋势，然而肺癌的治疗效果尚不令人满意。Iso是一种已知的黄酮类化合物，在沙棘中含量较高，是沙棘中的主要单体之一，通常也作为标准品用于测定黄酮含量。lso和槲皮素同属黄酮类化合物，近年研究发现其有较好的抗心肌缺氧、缺血，缓解心绞痛，抗心律失常，抗氧自由基，降低血清胆固醇等多种心血管效应。不少研究组报道槲皮素具有良好抗肿瘤效应；Iso与槲皮素结构相似，但作为单体对肿瘤的抑制作用还未见国内外其他研究组的报道。紫杉醇(paclitaxel，PTX)是从红豆杉属植物中分离的一种天然抗癌活性物质，对多种肿瘤比如乳腺癌、卵巢癌、胃癌等有较好的治疗效果，已经在临床治疗中推广应用，尽管PTX对多数肿瘤有效，但也有一些肿瘤容易产生耐药，其机制比较复杂，一般认为与多药耐药(MDR)有关，此外尚涉及微管蛋白亚型表达的改变和细胞周期机制等有关。因此，寻找与紫杉醇联合应用的药物，增强紫杉醇的抗肿瘤作用，减少紫杉醇的毒副作用，对恶性肿瘤治疗具有重要意义。 本文研究Iso单独及联合紫杉醇对Lewis肺癌的抗肿瘤作用及其可能的作用机制，为今后的临床应用奠定基础。 方法： 1、动物模型的建立 常规培养Lewis肺癌细胞，接种于含10％小牛血清的DMEM培养基中，置于37℃、5％CO2孵箱中培养，于对数生长期用生理盐水制成1×10<'7>/ml浓度的细胞悬液，接种于C57BL/6小鼠的右前肢腋皮下，0.2 ml/只。生长7～10 d，取生长良好的Lewis肺癌种鼠的肿瘤，在无菌条件下操作，剔除包膜和坏死部分，将完好的瘤块置于玻璃匀浆器内，生理盐水1：3(g/ml)制成匀浆，调整细胞数为1×10<'7>/ml，接种于小鼠右前肢腋皮下，0.2 ml/只(含细胞数1×10<'7>/ml)。 2．分组 (一)将30只C57BL/6小鼠分为3组，每组10只，均为雌性：组Ⅰ为对照组，隔日腹腔注射生理盐水0.1ml，共7次；组Ⅱ为Iso组，隔日灌胃20 mg/(kg．d)，共7次；组Ⅲ为阿霉素阳性对照组，隔日腹腔注射阿霉素2.5mg/(kg．d)，共7次。 (二)84只小鼠随机分为7组，每组12只。1)空白对照组(NS组)，给予生理盐水，方法相同；2)紫杉醇小剂量组(0.10 ml/10 g．d)，接种后的24小时开始给药，连续5天，腹腔注射；3)紫杉醇大剂量组(0.15ml/10g．d)，接种后的24小时开始给药，连续5天，腹腔注射：4)Iso1小剂量组(0.10 ml/10g．d)，接种后的24小时开始给药，连续5天，腹腔注射；5)Iso1大剂量组(0.15 ml/10g．d)，接种后的24小时开始给药，连续5天，腹腔注射； 6)复方PTX即(PTX+Iso1)小剂量组(0.10 ml/10g.d)，接种后的24小时开始给药，连续5天，腹腔注射；7)复方PTX即(PTX+Iso1)大剂量组(0.15 ml/10g.d)，接种后的24小时开始给药，连续5天，腹腔注射。 3、肿瘤的观察在停药后第5天脱颈处死小鼠，称取瘤质量。肿瘤抑制率按以下公式计算： 肿瘤抑制率(％)=(1-治疗组瘤质量)/对照组瘤质量×100％。 4、荷瘤鼠Lewis细胞HE染色检测：取材；10％福尔马林固定24-48h；选材；组织脱水；包埋；切片：染色(HE)；树脂封片。 5、荷瘤鼠Lewis细胞周期和凋亡率的检测样品制备及检测参照文献进行：肿瘤组织匀浆，离心收集细胞，弃上清，用PBS洗涤1次后，70％乙醇固定，上机前离心去除固定液，PBS洗涤1次，调细胞浓度为1×10<'9>/ml，采用溴乙啶(EB)一步插入法，DNA定量荧光染色。0～4℃染色30 min后FACS-420流式细胞仪检测，DNA检测以线性方式采集数据，输入HP-Consort30计算机进行处理并打印结果，根据细胞周期各时相分布，进行细胞周期分析，低于G1期细胞DNA含量细胞为凋亡细胞。 6、统计学处理各组数据甩SPSS统计软件进行单因素的方差分析。 结果： Iso对荷瘤鼠Lewis肺癌有一定的抑制作用；Iso联合紫杉醇对荷瘤鼠Lewis肺癌有较明显的抑制作用，且各剂量组均可诱导Lewis细胞凋亡，并且凋亡细胞数和坏死面积依次有明显增多的趋势，与对照组比较有显著性差异(P<0.05)；而对细胞周期的影响不太明显，有待于今后做进一步的研究。 结论： Iso及其联合紫杉醇对荷瘤鼠Lewis肺癌均有抑制作用，其机制可能与诱导肿瘤细胞凋亡有关。 收起