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[学位论文] 金晔上海交通大学 2016年博士导师: 陈亚青共117页

摘要 : 目的：探讨多模态影像技术量化诊断非酒精脂肪性肝病(nonalcoholic fatty liver disease，NAFLD)诊断效能。方法：①40只雄性SD大鼠随机分2组，对照组10只，喂标准鼠料，高脂组30只，喂高脂饲料。对照组于第4周和第10周各对5只大鼠、高脂组于第... 展开目的：探讨多模态影像技术量化诊断非酒精脂肪性肝病(nonalcoholic fatty liver disease，NAFLD)诊断效能。方法：①40只雄性SD大鼠随机分2组，对照组10只，喂标准鼠料，高脂组30只，喂高脂饲料。对照组于第4周和第10周各对5只大鼠、高脂组于第4，6，8，10，12和16周分别对5只大鼠进行常规超声，声触诊组织定量(Virtual Touch tissue quantification，VTQ）技术、CT和1HMRS扫查。常规超声半定量判断脂肪肝程度，超声VTQ技术检测肝脏剪切波速度(shear wave velocity，SWV)值，CT扫查测量肝脏和腰大肌CT值，计算肝腰大肌密度比；1HMRS扫查检测肝内脂肪含量（intrahepatic contant of lipid，IHCL）。完成所有影像检查后检测谷草转氨酶(Aspartate aminotransferase，AST)、谷丙转氨酶(Alanine aminotransferase，ALT)、胆固醇(Total cholesterol，TC)和甘油三酯（triglycerides，TG）。最后处死大鼠，取肝脏组织块 HE染色行组织学分析，依据 Brunt's组织学诊断。②参照中国肥胖问题工作组（WGOC）推荐的“中国学龄儿童青少年超重、肥胖体重指数值分类标准”和2006年NAFLD诊疗指南推荐的诊断标准，将100例肥胖儿童分为：非NAFLD组，单纯性脂肪肝（nonalcoholic simple fatty liver，NAFL）组和非酒精脂肪性肝炎（nonalcoholic steatohepatitis，NASH）组，设立24例正常儿童为对照组，检测所有入选者形体学参数、生化检查、肝脏常规超声和VTQ扫查。应用SPSS19.0和 MedCalc for Windows，version15.10统计分析软件。结果：①高脂饮食诱发的NAFLD大鼠模型造模方法简单，成模率高，但存在造模时间长的缺点；②常规超声诊断脂肪肝程度的准确率欠佳；③超声VTQ技术，CT和1H MRS技术诊断重度脂肪肝和NASH均具有较好的诊断效能，而应用VTQ技术诊断轻中度脂肪肝的诊断效能不如CT，本实验中1H MRS扫查成功率低、耗时；④VTQ技术评价肥胖儿童NASH的诊断效能较高。结论：超声VTQ技术诊断重度脂肪肝和NASH的诊断效能与CT扫查相近；超声VTQ技术有助于临床诊断肥胖儿童NASH，具有一定的临床指导意义。前言：肝脏是人体摄取、转运、代谢及排泄脂质的主要器官，其中的任何一个环节发生异常均可导致肝实质细胞内甘油三酯蓄积。当光镜下单位面积的脂肪变肝细胞超过5%以上或肝内脂肪含量蓄积超过肝湿重的5%~10%时形成脂肪肝。肝小叶是脂肪肝病变的主体，随着脂质在肝细胞内量的蓄积增加和持续时间延长，肝细胞发生坏死、气球样变、Mallory小体、炎症反应和肝纤维化。因此，NAFLD包括NAFL，NASH和非酒精脂肪性肝硬化三个类型。肝脏组织学检查是非酒精肝脂肪变、非酒精脂肪性肝炎和非酒精脂肪性肝纤维化分级分期诊断金标准，但其存在标本取样误差及检查方法有创性等不足。常规超声、CT和MRI是目前用于诊断脂肪肝的主要的影像学诊断方法，但各自存在一定程度缺陷。组织的弹性(或硬度)与其生物学特性紧密相关，即组织器官发生病理改变后，组织器官内的组织成分和结构相应发生改变，其弹性特征亦会随之而改变。VTQ技术利用超声探头发射短时程、高能量的聚焦脉冲推力激励组织，组织受力后在与聚焦脉冲推力平行的方向（纵向）发生位移，并在与其垂直（横向）的方向产生剪切波，获取组织内感兴趣区的剪切波并测量剪切波速度值，随后通过公式计算可获得生物组织的弹性模量，从而判断组织弹性（硬度）。目前应用VTQ技术分期诊断肝纤维化已获得较为肯定的结果，但肝纤维化已经无法逆转，导致临床干预治疗后的疗效欠佳。NASH是在肝细胞脂肪变的基础上发生肝细胞坏死（主要表现为肝细胞气球样变）、Mallory小体、炎症细胞浸润和肝纤维化，肝纤维化不是诊断NASH的必备组成条件。伴或不伴肝纤维化NASH的病理组成及结构均已不同于NAFL，组织的弹性（硬度）亦相应发生改变，此为本研究应用超声弹性成像技术诊断NAFL和NASH的理论基础。本实验拟分别应用常规超声、超声VTQ技术、CT和1H MRS研究NAFLD大鼠，探讨多模态影像技术各自量化诊断NAFLD的诊断效能。第一部分：建立NAFLD大鼠模型目的：建立高脂肪饮食诱导的NAFLD动物模型。方法：40只SD大鼠，雄性，50天龄，体重170-180g。适应性喂养1周后编号，随机分为2组：正常对照组10只，标准鼠料喂养；高脂组30只，高脂饲料喂养，两组大鼠均自由进水。高脂饲料为45%脂肪肝动物饲料，饲料原料组成如下：繁殖鼠料，猪油，胆固醇，胆盐，蔗糖，酪蛋白，麦芽糖精和预混料；饲料能量组成如下：脂肪45%；粗蛋白18%，碳水化合物37%。正常对照组分别于第4周和第10周随机抽取5只大鼠，高脂组分别于第4周，6，8，10，12和16周随机抽取5只大鼠心脏取血，检验AST、ALT、TC和TG。实验结束处死动物肝脏称重，计算肝脏指数(HI)=肝脏湿重(LW)/动物体重(BW)x100%。完成全部影像检查后，空气栓塞处死实验动物，取与影像学检查位置基本相同的肝脏组织块，常规苏木素伊红（Hematoxylin Eosin，HE）染色行病理分析，根据Brunt's组织学标准诊断。结果：①40只大鼠均成功完成实验，成模率为100%(40/40)；②依据 Brunt's组织学标准诊断肝脏脂肪变程度：40只大鼠中正常肝脏组（F0，9只），轻度脂肪肝组（F1，11只），中度脂肪肝组（F2，8只），重度脂肪肝组（F3，12只）；依据脂肪性肝炎诊断标准：40只大鼠中正常肝脏组9只，NAFL组19只，NASH组12只，所有大鼠（40只）均未出现肝纤维化的组织学改变；③ TC，TG，ALT，AST在重度脂肪肝组显著高于正常肝脏组、轻度和中度脂肪肝组(P<0.05)；④肝脏湿重和肝脏指数在中度和重度脂肪肝组显著高于正常肝脏组和轻度脂肪肝组(P<0.05)。结论：超营养诱发的NAFLD大鼠模型造模方法简单、成本低、死亡率低，成模率高，其病理和病理生理变化变化符合NAFLD的发病特点和病程进展，是研究NAFLD的理想模型，但该模型存在造模时间长的缺点，有待进一步的研究改良造模方法，寻求更为理想的研究NAFLD动物模型。第二部分：声触诊组织量化技术评价NAFLD大鼠实验研究目的：探讨VTQ技术量化诊断NAFLD大鼠的诊断效能。方法：40只雄性 SD大鼠随机分2组，对照组10只，喂标准鼠料，高脂组30只，喂高脂饲料。对照组于第4周和第10周各对5只大鼠、高脂组于第4，6，8，10，12和16周分别对5只大鼠进行常规超声和VTQ扫查。VTQ扫查使用Siemens ACUSOA2000彩色多普勒超声诊断仪，9L4线阵探头。常规扫查观察肝脏、肾皮质回声强度，包膜、横隔及肝内血管显示清晰程度，根据非酒精脂肪性肝病诊疗指南分级诊断脂肪肝程度。随后在二维图像观察的基础上，将 ROI置于大鼠肝脏右叶的位置，距体表约1-1.5cm处，ROI大小5 mm×5mm，启动VTQ技术，测量SWV值，重复操作3次，计算SWV的平均值并用于分析。完成所有影像检查后处死大鼠，取肝脏组织块 HE染色行组织学分析，依据 Brunt's组织学诊断标准作出诊断。应用SPSS19.0和 MedCalc for Windows，version15.10统计分析软件。结果：①依据肝脏组织学检测结果，肝脏常规超声扫查诊断准确率为55%（22/40），低估了42.5%（17/40）大鼠的脂肪肝程度诊断，高估了2.5%（1/40）大鼠的脂肪肝程度诊断；②正常肝脏组、轻度脂肪肝组，中度脂肪肝组和重度脂肪肝组SWV分别为1.02±0.12m/s，1.12±0.10m/s，1.21±0.07m/s和1.46±0.16m/s，SWV在重度脂肪肝组高于正常肝脏组、轻度和中度脂肪肝组（P<0.05)，以SWV构建诊断重度脂肪肝（F3)的ROC曲线下面积（Az值）为0.993，对应的SWV界值为1.27 m/s，敏感性为100%，特异性为92.9%；③正常肝脏组，NAFL组和NASH组的SWV值分别为1.02±0.12m/s，1.16±0.10m/s和1.46±0.16m/s，SWV值在3组间有显著差异，以SWV构建诊断NASH的ROC曲线的Az值为0.993，对应的SWV界值为1.27m/s，敏感性为100%，特异性为92.9%；④ SWV与肝脏脂肪变程度和NASH呈显著正相关，相关系数分别为0.863和0.833（P<0.05）。结论：应用超声 VTQ技术检测 NAFLD大鼠肝脏组织硬度诊断重度脂肪肝和NASH的诊断效能高，优于常规超声。第三部分：CT评价NAFLD大鼠实验研究目的：评价CT量化诊断NAFLD的诊断效能。方法：40只雄性 SD大鼠随机分2组，对照组10只，喂标准鼠料，高脂组30只，喂高脂饲料。对照组于第4周和第10周各对5只大鼠、高脂组于第4,6,8,10,12，16周分别对5只大鼠进行 CT扫查。CT扫查使用Siemens公司 Somaton definition型CT扫描机，纱带加压固定腹部抑制其呼吸运动。扫描参数：管电压120kV，管电流50mA，层厚：2.4mm，扫描时间2.0s，CT扫查范围为自膈顶至盆腔。扫查前先利用水模进行严格的调零处理，以标化 CT测量值。测量肝脏CT值的ROI置于肝右叶，ROI大小10mmx10mm。测量右侧腰大肌CT值的ROI大小同为10mmx10mm，分别测量肝CT值(Liver CT value)和腰大肌CT值(Psoas CT value)。重复测量3次，取3次测值的平均值，计算肝腰大肌密度比(1iver-Psoas density ratio)。完成所有影像检查后处死大鼠，取肝脏组织块 HE染色后行组织学分析，依据Brunt's组织学标准诊断。应用SPSS19.0和 MedCalc for Windows，version15.10统计分析软件。结果：①正常肝脏组，轻度脂肪肝组，中度脂肪肝组和重度脂肪肝组肝CT值分别为71±3.3HU，45±11HU，29±11HU和17±9HU；肝腰大肌密度比分别为1.00±0.04，0.67±0.14，0.43±0.17和0.26±0.13，组间两两比较差异显著（P<0.05)；②以肝脏CT值和肝腰大肌密度比构建诊断≥轻度脂肪肝(F1)，ROC曲线Az值分别为1和0.998，诊断≥中度脂肪肝(F2) ROC曲线的Az值分别为0.965和0.956；诊断=重度脂肪肝(F3) ROC曲线的Az值为0.949和0.943；③正常肝脏组，NAFL组和NASH组的CT值分别为71±3.3HU，38±14HU和17±9HU；肝腰大肌密度比分别为1.00±0.04，0.57±0.20和0.27±0.13；④以肝脏CT值和肝腰大肌密度比构建诊断NASH的ROC曲线Az值分别为0.935和0.933；⑤SWV值，肝脏CT值和肝腰大肌密度比诊断=重度脂肪肝（F3）和NASH的ROC曲线下面积经Z检验，差异无统计意义，P>0.05；⑥肝脏CT值和肝腰大肌密度比与肝脂肪变程度呈显著负相关，相关系数分别为r=-0.908，r=-0.897；肝脏CT值和肝腰大肌密度比与NASH呈显著负相关，相关系数分别为r=-0.856，r=-0.854（P<0.05）。结论：CT扫查和超声VTQ技术诊断重度脂肪肝和NASH的诊断效能相近，CT扫查诊断轻度和中收起

关键词 : 多模态影像非酒精脂肪性肝病动物模型鉴别诊断

2. AR和c-Met激酶中蛋白-配体相互作用的分子动力学模拟研究

[学位论文] 金晔苏州大学 2019年硕士导师: 李有勇；侯廷军共109页

摘要 : 随着肿瘤分子生物学的深入研究，人们对肿瘤发生和发展的分子机制有了进一步认识，分子靶向抗肿瘤药物为恶性肿瘤的治疗提供了新的手段。靶向药物是以已知参与肿瘤发展转移过程的异常蛋白和基因为靶标（“分子靶标”）进行专门设计和研发的，能够干预... 展开随着肿瘤分子生物学的深入研究，人们对肿瘤发生和发展的分子机制有了进一步认识，分子靶向抗肿瘤药物为恶性肿瘤的治疗提供了新的手段。靶向药物是以已知参与肿瘤发展转移过程的异常蛋白和基因为靶标（“分子靶标”）进行专门设计和研发的，能够干预肿瘤细胞中相关信号传导通路。雄激素受体(androgen receptor，AR)和间充质上皮细胞转化因子(mesenchymal-epithelial transition factor，c-Met)均是抗肿瘤药物设计和研发的重要靶标。大多数分子靶向抗肿瘤药物的长期使用会导致药效降低甚至临床疗效丧失，从宏观角度来看通常表现为药物对突变靶标亲和力降低。因此，研究药物与靶标间相互作用模式以及药物的耐药性机理对新药设计和开发具有重要的指导价值。无论是早期的前列腺癌还是复发的去势抵抗型的前列腺癌，AR信号通路的异常激活在它们的发生和发展过程中都起到重要的生理作用。迄今为止，还无法通过实验方法获得野生型AR与拮抗剂复合物的晶体结构，这给研究拈抗剂与AR之间的相互作用机制以及揭示拮抗剂与AR共激活因子之间的相互调控机制带来了极大困难。在第二章中，采用了分子动力学(molecular dynamics，MD)模拟技术从已知的突变型AR与拮抗剂复合物的晶体结构出发，搜索可能的AR拮抗构象，再进一步分析不同配体（激动剂DHT、拮抗剂HFT和共激活因子SRC3）的结合对AR活性位点（LBP和AF2）构象的影响。MM/GBSA结合自由能计算表明SRC3与AF2的相互作用会增强激动剂DHT对AR的结合能力，但却削弱拮抗剂HFT的结合能力。同时，还发现了“SRC3→H3/H4→L1-3/H5→HFT”这样一条共激活因子-拮抗剂的别构路径。临床研究发现在多种实体肿瘤中HGF/c-Met信号通路异常激活，以c-Met激酶为靶点的小分子抑制剂的开发已成为抗肿瘤药物研究热点之一。但多靶点酪氨酸激酶抑制剂Crizotinib或新型高选择性的c-Met激酶抑制剂SAR125844对Y1230H突变型c-Met激酶仅具有较弱的抑制活性。在第三章中，采用分子动力学模拟、MM/GBSA结合自由能计算及自由能分解等技术对c-Met激酶（野生型和Y1230H突变型）与小分子抑制剂（SAR125844和Crizotinib）间相互作用的分子原理进行了研究。计算结果表明，由于SAR125844的三唑并哒嗪和苯并噻唑基团与c-Met的铰链和A-loop区域之问独特的结合模式，因而SAR125844具有高度的c-Met激酶选择性。与野生型c-Met激酶相比，Y1230H突变体中A-loop区域开口幅度更大，ATP结合口袋扩大。TYR1230残基原本能与抑制剂形成较强疏水相互作用和π-π堆积相互作用，Y1230H的突变直接导致了抑制剂SAR125844和Crizotinib结合能力的下降。目前，计算生物学领域的分子动力学模拟软件比较多，但大多仅支持shell脚本和命令行操作。原则上，这些经典的动力学模拟软件进行MD模拟的流程基本相同，其中第一步搭建的初始体系的合理性直接决定动力学模拟结果的成败。在第四章中开发了一个方便易用的工具(MDBuilder)，它可以完成生物大分子MD模拟前体系准备的工作。MDBuilder可以实现力场参数和相关拓扑信息的解析、蛋白晶体结构的清理、氢原子的添加、二硫键的处理、水盒子和抗衡离子的添加等功能，最终MDBuilder生成体系的拓扑文件和坐标文件。MDBuilder作为PyMOL插件还提供了一个友好灵活的图形用户界面，从而降低MD新手用户的学习成本。收起

关键词 : 恶性肿瘤雄激素受体间充质上皮细胞转化因子蛋白-配体相互作用病理机制

3. 天津海事局政府采购问题研究

[学位论文] 金晔天津大学 2021年硕士导师: 张忠利;张霁星共98页

摘要 : 政府采购发展至今已经有二百多年的历史，它是市场经济时代对政府财政支出的重要管控手段。尽管我国政府采购管理相比西方国家起步较晚，但是伴随着治国理念的深入贯彻，政府采购的规模在我国已经显著的扩大，采购制度日渐完善，采购管理愈发科学，采... 展开政府采购发展至今已经有二百多年的历史，它是市场经济时代对政府财政支出的重要管控手段。尽管我国政府采购管理相比西方国家起步较晚，但是伴随着治国理念的深入贯彻，政府采购的规模在我国已经显著的扩大，采购制度日渐完善，采购管理愈发科学，采购效益明显提升，政府采购在市场经济中发挥了越来越大的作用，也受到了政府、企业和社会各方的广泛关注。在政府采购高速发展的进程中，我们也可以看到，由于该领域的建立时间还尚短，与欧美等先进国家相比，我国政府采购的机制还不够健全，政府采购实践经验和依法治理的经验还有所欠缺，政府采购人才队伍还没有建设完成，政府采购管理的发展还任重而道远。本文以天津海事局政府采购问题研究为主题，在全面总结我国政府采购的发展历史和发展现状的基础上，采用文献研究法、问卷调查法和对比分析法等对天津海事局政府采购管理进行分析。首先梳理了天津海事局近五年来的政府采购规模和成效，结合调查问卷的结果剖析出政府采购管理存在配套制度不完善、采购价格偏高、从业人员素质有待提升、采购效率较低、监管未能充分发挥作用、信息化平台建设使用程度较差和预算编制有待提升等问题，在对问题成因进行进一步分析的基础上，本文借鉴了美国、新加坡等国家和我国杭州等地区的政府采购管理先进经验，结合实际情况，从完善制度建设，发挥政策指导功能、推行政府采购供货方式市场化，多种渠道降低采购价格、加强人才队伍建设，打造优质采购队伍、完善流程体系，提升采购效率、强化政府采购监管，内外部监督双管齐下、拓展电子政务，发展现代化政府采购、完善预算编制，合理规划政府采购、完善内部控制体系建设，强化政府采购内部控制这八个方面梳理总结出推动改进和加强天津海事局政府采购管理的对策建议，从而推动天津海事局政府采购管理更加完善。收起

关键词 : 政府采购政策指导渠道管理人才队伍监管机制

4. 世博会浦西片区机电工程项目管理模式分析研究

[学位论文] 金晔东华大学 2014年硕士导师: 周建亨;江强共92页

摘要 : 随着经济全球化进程的加快，高新技术日新月异，项目管理也日趋完善，工程总承包规模逐渐大型化、形式逐渐多样化，也促使产业结构发生了相应变化。国际投资商和业主对承包商的要求和期望越来越高，希望承包商能够提供形成建筑产品全过程甚至更为广泛... 展开

关键词 : 机电工程项目管理组织架构投资控制

5. 轻稀土硫氰酸盐与双二苯乙烯-18-冠-6配合物的合成、性质及ZPS研究

[学位论文] 金晔武汉大学 1993年硕士导师: 钟金昌;王静秋共92页

6. 茭白茎部膨大前后应激响应的蛋白质组分析

[学位论文] 金晔中国计量学院 2015年硕士导师: 叶子弘;崔海峰共87页

摘要 : 茭白为多年生水生宿根草本植物，主要分布于亚洲东部，在我国有大量栽培，是国内第二大水生蔬菜，深受人们喜爱。茭白肉质茎的形成与菰黑粉菌侵染密切相关。茭白肉质茎的膨大过程是菰黑粉菌侵染茭白植株，并在其中生长从而诱发茭白植株产生系列应激响... 展开茭白为多年生水生宿根草本植物，主要分布于亚洲东部，在我国有大量栽培，是国内第二大水生蔬菜，深受人们喜爱。茭白肉质茎的形成与菰黑粉菌侵染密切相关。茭白肉质茎的膨大过程是菰黑粉菌侵染茭白植株，并在其中生长从而诱发茭白植株产生系列应激响应的过程。本研究显微观察和比较了菰黑粉菌在正常茭白（龙茭2号和梭子茭）与雄茭不同发育时期茎部组织中侵染分布情况，并采用蛋白双向电泳（two-dimensional polyacrylamide gel electrophoresis,2-DE）和基质辅助激光解析电离飞行时间质谱（matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight/time-of-flight mass spectrometry，MALDI-TOF-TOF MS）等技术筛选鉴定了茭白茎部膨大前后的差异蛋白，初步分析了茭白茎部膨大可能的应激响应机制。一、茭白茎部膨大前后菰黑粉菌侵染分布差异分析雄茭与正常茭白茎部的显微观察发现：雄茭中未检测到菰黑粉菌存在；正常茭白5叶期时茎部已经有菰黑粉菌存在，并以少量的小菌丝簇的形式分布于茭白茎部生长点附近；8叶期时茭白薄壁组织中小菌丝簇数量增多，维管束内菌丝数量明显增加，菰黑粉菌沿着维管束轴向生长；菰黑粉菌在膨大初期的茭白茎部中大量增殖并在维管束周围形成网状结构，而茎部薄壁组织中散布有大量大小不等的菌丝簇。二、正常茭白茎部膨大前后的差异蛋白的筛选鉴定通过蛋白双向电泳技术对正常茭白与雄茭不同时期（5叶期、8叶期与膨大初期）茎部蛋白质组进行比较分析，筛选获得120个差异蛋白，质谱成功鉴定90个。根据差异蛋白的功能预测将它们分为7类：23个蛋白与转录与翻译相关，18个蛋白涉及糖类合成代谢，9个蛋白与脂肪酸合成代谢相关，15个蛋白与植物抗逆相关，5个蛋白与细胞分裂相关，9个蛋白参与蛋白酶体泛素途径，5个蛋白与能量合成代谢有关，6个蛋白为其他功能与未知功能。58.9%的差异蛋白涉及转录翻译、糖类合成代谢及抗逆反应。以5叶期正常茭白茎部蛋白质组为对照，比较分析了正常茭白膨大过程中蛋白应激响应变化，排除正常茭白与雄茭在不同发育阶段中表达变化一致的蛋白点后，筛选获得与茭白膨大相关的差异蛋白：在8叶期，龙茭2号中筛选到32个差异蛋白点，梭子茭中筛选到30个差异蛋白点；在膨大初期，龙茭2号筛选到16个，梭子茭筛选到17个；8叶期时茭白应激响应蛋白数量明显多于膨大初期。在这些应激响应差异蛋白中，在两个茭白品种中表达趋势一致的有13个，包括8叶期上调蛋白5个（丙糖磷酸异构酶、乙醇脱氢酶、苯丙氨酸解氨酶、真核翻译起始因子3亚基2、甘油醛-3-磷酸脱氢酶3）、8叶期下调蛋白2个（甘氨酸-tRNA连接酶1、60s酸性核糖体蛋白质）、膨大初期调蛋白4个（细胞分裂素、L-抗坏血酸过氧化物酶7、磷酸甘油酸激酶、AT P合酶β亚基）、膨大初期下调蛋白2个（谷胱甘肽-S-转移酶F8、蛋白磷脂酶A-2）。三、茭白菰黑粉菌侵染相关应激响应差异蛋白以相同发育时期的雄茭为对照，比较筛选2个正常茭白品种中与菰黑粉菌侵染相关的应激响应的差异蛋白，分别在5叶期筛选到32个差异蛋白点，8叶期筛选到15个差异蛋白点，膨大初期筛选到16个差异蛋白点；抗逆反应相关蛋白在3个发育时期均有大量分布，比例分别为22%、33%和27%。该结果说明茭白茎部对菰黑粉菌侵染的应激响应调控在发育早期已经启动，这可能与茭白5叶期时菰黑粉菌已经侵染茎部有关，且茭白植株对菰黑粉菌的应激响应在茭白茎部膨大的过程中具有重要地位。综合分析不同发育时期的应激响应蛋白的功能，结果表明：不同发育时期间的应激响应蛋白种类存在明显差异，糖类合成代谢相关蛋白主要在5叶期和8叶期被检测到，而与茎部膨大直接相关的细胞分裂蛋白在8叶期与膨大初期较多；8叶期的应激响应蛋白（转录翻译、糖合成代谢、抗逆、细胞分裂）大多与茎部膨大相关，因此推断8叶期可能是茭白孕茭的重要时期。四、菰黑粉菌与茭白愈伤组织互作后差异蛋白点筛选鉴定为研究与茭白互作过程中，菰黑粉菌的应激响应，本研究进一步开展了菰黑粉菌与茭白愈伤组织互作的体外模拟试验，并对互作前后的菰黑粉菌进行了双向电泳分析，筛选获得7个差异蛋白点，其中6个为下调蛋白点，1个为上调蛋白点，功能主要与细胞分裂有关。初步探讨了与茭白愈伤组织互作后的菰黑粉菌的应激响应变化。收起

关键词 : 茭白肉质茎菰黑粉菌蛋白质组学应激响应茎部组织

7. 肝脏富集转录因子在体外肝细胞分化过程中的作用研究

[学位论文] 金晔北京协和医学院(中国医学科学院) 2008年硕士导师: 曲强共87页

摘要 : 研究背景和目的：肝脏是体内进行物质代谢的重要器官，其中肝细胞约占肝脏组织的80%。肝细胞特异表达一系列编码血浆蛋白、凝血因子和多种肝脏解毒作用及维持糖类物质、脂肪和胆固醇代谢相关酶的功能基因。肝细胞特异表达基因的功能分析研究发现... 展开研究背景和目的：肝脏是体内进行物质代谢的重要器官，其中肝细胞约占肝脏组织的80%。肝细胞特异表达一系列编码血浆蛋白、凝血因子和多种肝脏解毒作用及维持糖类物质、脂肪和胆固醇代谢相关酶的功能基因。肝细胞特异表达基因的功能分析研究发现这些基因的调节区由结合不同家族的肝细胞转录因子的顺式作用元件组成。不同家族的肝脏富集转录因子形成蛋白复合物协同调控肝细胞特异基因表达的启动和维持。肝细胞核因子4α(HNF4α)在很多肝细胞功能基因的启动子或增强子上有结合活性，可以直接调控多达40%左右的肝细胞特异基因的表达。此外，HNF4α还可以通过调控多种其它家族肝细胞分化相关转录因子的表达间接调节肝细胞功能。因此，转录因子HNF4α很可能位于肝细胞相关转录因子调控网络的上游并对于肝细胞功能基因的表达起核心调控作用。目前，对于HNF4α的功能研究集中在胚胎肝脏发育和成熟肝细胞功能维持方面，但是对于肝细胞分化过程尤其是体外诱导分化过程中HNF4α的表达和尚未见报道。骨髓干细胞(bone marrow stem cells，BMSCs)可以分化为肝前体细胞和肝细胞，并具有取材容易，增殖能力强，体外培养、传代及扩增容易的特点，可以作为研究体外诱导分化肝细胞的可靠来源。但是骨髓干细胞诱导向成熟肝细胞分化的具体诱导机制目前尚不清楚。因此，本研究在骨髓间充质干细胞体外向肝细胞诱导分化过程中的培养细胞进行肝细胞标志基因及转录因子mRNA表达水平检测。在此基础上应用RNA干扰技术抑制转录因子HNF4α的转录水平，并深入研究大鼠骨髓间充质干细胞向肝细胞体外诱导分化过程中转录因子HNF4α调控的作用机制，深入了解细胞分化机制，并为临床促进肝细胞分化增殖提供理论基础。实验方法： 1、提取大鼠骨髓细胞诱导其向肝细胞分化。通过形态学表现，ALB免疫荧光染色定位，半定量逆转录—聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测肝细胞特征性标志ALB、AFP的mRNA的表达，生化方法检测白蛋白、尿素和ALT的在细胞培养液中的浓度以及PAS染色方法检测细胞糖原合成能力来验证大鼠骨髓间充质干细胞经过体外诱导分化培养后是否具有成熟肝细胞的功能。 2、应用半定量RT-PCR方法比较肝细胞分化过程中肝脏富集转录因子肝细胞核因子4α(HNF4α)，CCAAT增强子结合蛋白α和β(C/EBPα和C/EBPβ)在诱导分化组和对照组细胞中的mRNA表达水平和免疫荧光染色方法在荧光显微镜下观察HNF4α细胞中的表达定位，获得骨髓间充质肝细胞向肝细胞体外诱导分化过程中上述三种转录因子的表达特征。 3、分别在大鼠骨髓干细胞的诱导分化过程中的三个时间点应用RNA干扰技术抑制转录因子HNF4α的mRNA表达。应用Realtime RT-PCR及HNF4α免疫荧光染色方法检测HNF4α mRNA和蛋白水平的表达，检验RNA干扰的抑制效果。同时，应用Realtime RT-PCR，细胞培养液生化检测，ALB免疫荧光染色和PAS染色方法检测HNF4α表达抑制对于诱导分化细胞的肝细胞特异基因ALB、AFP和HNF1α的mRNA表达水平，白蛋白表达水平和分泌能力，合成尿素和储存糖原能力的影响。研究结果： 1、大鼠骨髓间充质干细胞经诱导分化培养后细胞具有成熟肝细胞的形态。在大鼠骨髓间充质干细胞向肝细胞诱导分化培养的7天、14天、18天和21天四个时间点，成熟肝细胞标志ALB和AFP mRNA的表达水平明显高于非诱导培养对照组细胞(p<0.05)。应用ALB的特异性抗体进行的免疫荧光染色显示，骨髓间充质干细胞在分化14天后，细胞质中充满了大量点状，或颗粒状的绿色的荧光染色。此外，诱导分化细胞产生白蛋白、尿素和ALT以及合成及储存糖原的功能要明显强于对照组细胞。 2、在骨髓间充质干细胞体外诱导分化培养细胞中，转录因子HNF4α、C/EBPα和C/EBPβ mRNA均有表达，其中诱导分化组HNF4α和C/EBPα在细胞分化早期、C/EBPβ在分化晚期表达分别显著高于对照组(p<0.05)。在HNF4α mRNA表达水平显著高于对照组的诱导分化14天时间点，免疫荧光染色显示诱导分化组细胞有HNF4α特异染色定位于分化细胞核内，而对照组细胞中并未观察到细胞核内有特异染色。 3、在骨髓间充质干细胞向肝细胞诱导分化的7天、14天和21天三个时间点，对诱导分化细胞瞬时转染HNF4α的siRNA后，HNF4α的mRNA表达水平相比于正常诱导分化细胞降低了40%，而HNF4α免疫荧光染色显示转染siRNA的细胞核内HNF4α的特异染色明显减少，说明转染HNF4α siRNA有效抑制了诱导分化细胞中HNF4α mRNA和蛋白水平的表达。在HNF4α表达下调的细胞中，成熟肝细胞标志AFP和HNF1α的mRNA表达水平、尿素产生及糖原合成储存能力显著低于同时间点正常诱导分化细胞。另一个肝细胞标志ALB mRNA和蛋白水平的表达则仅在诱导分化早期受HNF4α的调控。而在诱导分化进行至21天时，ALB的mRNA和蛋白水平的表达水平都与HNF4α表达下调无关。研究结论： 1、大鼠骨髓间充质肝细胞在生长因子HGF，EGF，bFGF，地塞米松和胰岛素的诱导培养下可以分化为具有成熟肝细胞功能和形态的肝细胞样细胞，可以作为体外诱导骨髓间充质干细胞向肝细胞的可靠模型。 2、肝细胞分化过程中转录因子HNF4α、C/EBPα和C/EBPβ呈特征性时序表达，表明骨髓间充质干细胞在向肝细胞分化时，肝细胞相关转录因子的表达与细胞分化的启动和维持密切相关。 3、HNF4α对骨髓间充质干细胞来源的肝细胞的特异标志和大部分生理功能有直接和间接的调控作用，是体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞向成熟肝细胞分化过程中的关键转录因子收起

关键词 : 肝脏富集转录因子肝细胞分化肝细胞核因子骨髓间充质干细胞体外诱导分化

8. 城市父母家庭教育知识自我导向学习现状研究

[学位论文] 金晔南京师范大学 2013年硕士导师: 缪建东共81页

摘要 : 家庭是人成长的最初场所，家庭教育在人的成长过程中起着举足轻重的作用。在家庭教育过程中，父母担任着重要角色，是教育者、指导者，更是学习者。随着社会的进步，科技的发展，对子女的成长提出更多更新的要求，父母们则面临更高更重的挑战。要解决... 展开家庭是人成长的最初场所，家庭教育在人的成长过程中起着举足轻重的作用。在家庭教育过程中，父母担任着重要角色，是教育者、指导者，更是学习者。随着社会的进步，科技的发展，对子女的成长提出更多更新的要求，父母们则面临更高更重的挑战。要解决子女的家庭教育问题，父母们在困惑、疑问甚至焦虑的复杂情绪中寻找出路。父母和子女一样，也需要参与到新问题的学习中来，成为家庭教育的学习者。而父母的家庭教育知识学习，是为家庭服务的，是父母根据自身的需要，有选择的、自主性的学习，即是自我导向式的学习。笔者根据已有的研究，尝试对父母的自我导向学习内涵做出概括:父母的自我导向学习，以家庭中的成人作为父母身份所面临的问题为起始点，由父母决定学习内容，制定学习计划，确定学习目标，实施学习活动，协调家庭及家庭之外的学习支持，寻求学习的人力和物力资源，根据家庭的实际情况选择学习策略，以家庭成员的变化和子女行为变化作为学习结果进行评价的自我实践过程。本研究紧紧围绕城市父母在家庭教育知识自我导向学习方面的具体情况，从性别、学历、职业、年龄、子女情况和家庭情况等不同的个人背景，来看父母们参与自我导向学习的动机、目标性和计划性、途径、材料、方式、障碍、投入和维持等方面的现状。根据现状描述分析的差异，对作为家庭教育知识学习者的父母、家庭教育知识的指导者和家庭教育知识学习的外部环境支持者提出相应的建议，以期促进父母参与到家庭教育知识学习中来，成为家庭教育知识学习的自我导向学习者，提升其在家庭教育的素养。父母参与家庭教育知识的学习不同于正式正规教育中的学习，它是在尊重成人学习特点的基础上的学习，是要综合考虑父母角色特点的学习，也是激发父母自觉性、主动性的学习。因此，在家庭教育知识方面培养父母的自我导向学习习惯，提升父母的自我导向学习意识，增强父母的自我导向学习能力需要父母自身，社会机构和政府部门等多方的配合与协调。收起

关键词 : 家庭教育知识自我导向学习父母角色特点

9. 建立ddPCR技术检测AML常见基因突变及其临床应用

[学位论文] 金晔江苏大学 2022年硕士导师: 钱军共79页

摘要 : 目的：急性髓系白血病（acute myeloid leukemia，AML）是一种高度异质性疾病，其生物学特征多样，且发病机制复杂。多种基因突变被证实在AML中提示预后不良，且对AML的靶向治疗具有指导价值。NPM1基因突变已被证实为可检测残留病（measurable ... 展开目的：急性髓系白血病（acute myeloid leukemia，AML）是一种高度异质性疾病，其生物学特征多样，且发病机制复杂。多种基因突变被证实在AML中提示预后不良，且对AML的靶向治疗具有指导价值。NPM1基因突变已被证实为可检测残留病（measurable residual disease，MRD）监测标志。本研究旨在应用一种新型PCR技术——微滴式数字PCR（droplet digital PCR，ddPCR），建立AML中常见基因（NPM1、FLT3、IDH1、IDH2、U2AF1）突变的分子诊断平台，并对该方法进行优化，评价其特异性、灵敏度以及临床应用价值。 1.传统ddPCR方法建立及其临床应用方法：首先针对NPM1基因A型突变、FLT3-ITD的RNA序列以及U2AF1基因Q157P突变的DNA序列设计特异性引物及探针，使用内参基因ABL1或野生型序列作为参照，建立了传统ddPCR的检测方法，使用突变型、野生型质粒以及cDNA样本对该方法进行性能验证。应用ddPCR对87例初诊AML患者进行NPM1基因突变检测，与Sanger测序法进行比较，并使用二代测序（next-generation sequencing，NGS）进行验证。随后应用传统ddPCR对6例NPM1突变阳性以及2例伴NPM1突变的FLT3-ITD患者进行了MRD监测。结果： 1.传统ddPCR检测NPM1基因A型突变的空白限（limit of blank，LOB）为1.10拷贝/μl，检出限（limit of detection，LOD）为2.43拷贝/μl，灵敏度为0.02%，并对2拷贝/μl以上浓度样本检测的线性及重复性好； 2.检测FLT3-ITD的LOB为1.36拷贝/μl，LOD为2.65拷贝/μl，灵敏度为0.03%，并对2拷贝/μl以上浓度样本检测的线性及重复性好； 3.检测U2AF1基因Q157P突变的LOB为1.43拷贝/μl，LOD为2.80拷贝/μl，灵敏度为0.03%，并对2拷贝/μl以上浓度样本检测的线性及重复性好。 4.传统ddPCR及Sanger测序法检测87例初诊标本NPM1突变结果完全一致，阳性17例（19.5%），突变率为2.0%~2003.6%（中位563.5%）。NGS验证12例突变阳性样本，等位基因频率（variant allele frequency，VAF）为27.6%~45.8%（中位41.7%），其中，NPM1A型突变8例、D型突变2例、罕见型突变2例。因此，87例A M L患者中NPM1A型突变的真阳性为13例，假阳性为4例，真阴性为70例，假阴性为0例，传统ddPCR诊断NPM1A型突变的特异性为94.6%，灵敏度为100％。 5.6例NPM1突变阳性患者及2例FLT3-ITD患者MRD监测结果揭示，化疗达完全缓解（complete remission，CR）时NPM1及FLT3突变负荷水平明显下降甚至接近于0，而复发时再次明显增高。 2.drop-off ddPCR方法建立及其临床应用方法：进一步优化探针设计方法，针对NPM1、IDH1、IDH2、U2AF1的DNA序列设计了特异性引物及探针，使用野生型序列作为参照，建立了drop-off ddPCR检测方法，使用突变型及野生型样本对该方法进行性能验证。应用drop-off ddPCR对130例初诊AML患者进行NPM1基因突变检测，将检测结果与Sanger测序法进行比较，并使用NGS进行验证。随后应用drop-off ddPCR对5例NPM1突变阳性患者进行了MRD监测。结果： 1.drop-off ddPCR检测NPM1基因突变的LOB为3.36拷贝/μl，检测不同类型NPM1突变的LOD为5.00~5.37拷贝/μl，灵敏度为0.05%，并且对0.02%~0.05%以上浓度样本的检测具有良好的线性和重复性； 2.检测IDH1的LOB为3.23拷贝/μl，LOD为5.78拷贝/μl，灵敏度为0.06%，并且对0.05%以上浓度样本的检测具有良好的线性和重复性； 3.检测IDH2基因R140、R172突变的LOB分别为1.18、3.70拷贝/μl，LOD分别为2.99、5.74拷贝/μl，灵敏度分别为0.03%、0.06%，分别对0.02%、0.05%以上浓度样本的检测具有良好的线性和重复性； 4.检测U2AF1基因Q157、S34突变的LOB分别为2.10、3.59拷贝/μl，LOD分别为4.07、5.32拷贝/μl，灵敏度分别为0.04%、0.05%，并且分别对0.02%、0.05%以上浓度样本的检测具有良好的线性和重复性。 5.drop-off ddPCR检测130例初诊AML患者NPM1突变，结果与Sanger测序法完全一致，阳性33例（24.5%），突变率为14.0%~58.9%（中位47.0%）。NGS随机验证18例（其中9例包含于上述12例阳性中）突变阳性以及10例突变阴性样本，VAF为21.4%~47.5%（中位40.9%），结果与drop-off ddPCR完全符合。因此，130例AML患者中NPM1突变的真阳性为33例，假阳性为0例，真阴性为97例，假阴性为0例，drop-off ddPCR诊断NPM1突变的特异性、灵敏度均为100％。 6.使用drop-off ddPCR对5例NPM1突变阳性患者进行MRD监测，结果显示NPM1突变负荷水平与临床缓解复发一致。结论： 1.所建立的传统ddPCR以及drop-off ddPCR可用于NPM1、FLT3-ITD、IDH1、IDH2和U2AF1基因突变检测，特异性好、灵敏度高； 2.ddPCR可有效应用于AML患者化疗后MRD监测，指导缓解后治疗。收起

关键词 : 急性髓系白血病疾病诊断基因突变微滴式数字PCR

10. 基于搜索引擎的恶意对象发掘系统的设计与开发

[学位论文] 金晔山东大学 2013年硕士导师: 戴鸿君共75页

摘要 : 恶意对象发掘系统是卡巴斯基公司针对现有的样本收集和分析处理系统的一次研究性尝试，其方向符合未来杀毒行业发展的基本趋势。其中涉及到多个学科和业行的技术，是一个典型的利用多学科知识交叉实现的系统。如搜索引擎技术、分布式系统并行处理架构... 展开恶意对象发掘系统是卡巴斯基公司针对现有的样本收集和分析处理系统的一次研究性尝试，其方向符合未来杀毒行业发展的基本趋势。其中涉及到多个学科和业行的技术，是一个典型的利用多学科知识交叉实现的系统。如搜索引擎技术、分布式系统并行处理架构、机器学习和虚拟机系统等。系统摒弃传统杀毒行业一直沿用的被动收集和感染后查杀的模式，采用主动检索，在大数据和海量文件的基础上进行挖掘和抽取。这种积极发现恶意程序并在恶意程序感染和扩散之前更新病毒库的方式，在第一时间阻断了可能感染用户的信息渠道。本文采用统一建模的工程方法，以面向对象的思想对系统进行需求分析和设计。在系统需求分析章节我们对总体业务系统的流程进行了详细说明，分析了四大模块的功能，对模块与模块之间的协作关系进行描述，样本收集为例，着重研究了对原始网页的采集，分类及分析过程。从活动图设计、类结构设计、数据库设计等方面详细描述系统的设计，得到了系统中的设计类和数据库模型;重点分析了样本基础信息库和网址分类库的表设计。全文通过对借助搜索引擎进行恶意软件传播的传播方式及特点的分析，有针对性的设计出一套精准有效的监测和自动查杀系统。在整体上系统使用了典型的C/S架构。因为涉及到大量现有的功能平台，系统使用跨平台的软件技术以兼容和驱动繁杂的异构系统，所以我们选用各种平台无关的脚本语言开发主要业务逻辑，例如Perl，PHP等。在病毒样本收集阶段，基于虚拟机实现了一个分布式系统检测环境。创建并引入恶意对象流的概念，在此基础上设计了系统对潜在恶意对象的智能判断以及自动化处理流程。其中重点介绍了如何基于搜索引擎发现恶意对象和恶意对象的分类处理，基于恶意对象特征库，采用支持向量机设计出一个恶意程序检测算法，并用实验实证的方法进行数据比对，分析该算法的理论可行性和实用性。最后进行软件测试对各项功能进行评测。该系统目前在实验室内稳定运行，根据现有的统计数据看，系统基本达到预期。系统已经开始为公司业务系统贡献了很多有价值的恶意程序样本。收起

关键词 : 搜索引擎恶意软件传播方式自动发掘系统软件设计