中国科学技术信息研究所--国家工程技术数字图书馆

[学位论文] 郭建忠上海交通大学 2006年博士导师: 沈建康共73页

摘要 : 背景与目的：β一榄香烯是从莪术中提取的有效抗肿瘤成分，在肿瘤治疗中获得了良好的效果。本研究通过观察β一榄香烯对血管内度细胞的增殖抑制及诱导凋亡作用，检测其对血管内皮细胞碱性成纤维细胞生长因子受体mRNA表达的影响，探讨β一榄香烯抗血管... 展开背景与目的：β一榄香烯是从莪术中提取的有效抗肿瘤成分，在肿瘤治疗中获得了良好的效果。本研究通过观察β一榄香烯对血管内度细胞的增殖抑制及诱导凋亡作用，检测其对血管内皮细胞碱性成纤维细胞生长因子受体mRNA表达的影响，探讨β一榄香烯抗血管生成作用的机制，并利用兔角膜移植瘤血管生成模型，检测β一榄香烯体内抗血管生成效应。方法：MTT法检测β-榄香烯对EcV一3O4细胞的Ic<,50>值，利用PI染色进行流式细胞仪凋亡检测及细胞周期分析，电镜及DNA凝胶电泳观察不同浓度β-榄香烯作用后的改变。利用Annexinv～FITc／PI联合标记，行荧光相差显微镜观察及流式细胞仪早期凋亡分析。MTT法观察bFGF及β-榄香烯对EcV一3O4细胞增殖的影响；半定量RT—PcR检测β-榄香烯作用下EcV一3O4细胞bFGF受体mRNA表达的变化。裸鼠皮下种植人脑胶质瘤细胞系sHG44细胞，形成实体胶质瘤。将所得胶质瘤实体小块移植于兔角膜，建立角膜移植瘤血管生成模型。经兔耳缘静脉注射β一榄香烯，干预两周后应用Ⅷ因子相关抗原免疫组化染色及图像分析技术，检测移植胶质瘤组织内微血管密度变化。结果：MTT法检测显示β一榄香烯对EcV一304细胞有显著的增殖抑制作用，Ic<,50为(s8.3±8.1)μg／ml。流式细胞分析发现，β一榄香烯在60ug／ml即可明显地将细胞阻滞于Gα／G<,1>期(P<0．05)，并可见到“亚G<,1>峰”。电镜观察到典型的凋亡细胞超微形态改变，DNA凝胶电泳则可见特征性的“梯形带”。30μg／ml β-榄香烯作用24h即可诱导ECV-304细胞早期凋亡，而大剂量(100 ug／ml)则引起现明显细胞毒作用。20ug／ml β一榄香烯可以抑制单纯由bFGF引起的ECV-304细胞增殖，并可以降低ECV-304细胞bFGF受体的mRNA表达。兔角膜移植瘤血管生成模型成功建立；β-榄香处理组移植胶质瘤微血管密度明显低于对照组。结论：小剂量的β一榄香烯即可以诱导EVC-304血管内皮细胞发生早期凋亡。较小剂量的β一榄香烯就可以通过干扰细胞周期、诱导凋亡对EVC-304细胞产生明显的增殖抑制作用。β-榄香烯可以通过降低bFGF受体的mRNA表达影响ECV-304血管内皮细胞增殖活性。兔角膜血管生成模型是定量研究肿瘤血管生成的良好工具；β-榄香烯具有良好的体内抗肿瘤血管生成作用。收起

关键词 : &beta -榄香烯抗血管生成血管生成

3. 人类肺腺癌细胞系血管生成因子及血管生成抑制剂与多药耐药关系的研究

[学位论文] 李西平四川大学 2002年硕士导师: 王曾礼共143页

摘要 : 化疗目前仍是肺癌综合治疗的主要手段,多药耐药则是导致化疗失败的主要因素,众多机制参与肿瘤细胞耐药与恶性表型的形成.近年发现肿瘤血管生成是肿瘤发生,发展,浸润,转移的关键环节,多种生长因子参与肿瘤的血管生成,血管内皮生长因子（VEGF）与碱性成... 展开

关键词 : 肺癌多药耐药血管生成体外实验抗血管生成

4. uNK细胞在人类早孕蜕膜血管生成中的作用

[学位论文] 李国华四川大学 2006年硕士导师: 黄薇共49页

摘要 : 目的：通过研究子宫自然杀伤细胞(uNK)、血管内皮生长因子(VEGF)、促血管生成素2(Ang2)在人类早孕子宫蜕膜中的表达及相关性分析，明确uNK细胞在人类早孕蜕膜血管生成中的作用机制。方法：收集2005年9月-2005年10月在四川大学华西附二院妇产科拟... 展开

关键词 : uNK细胞早孕子宫蜕膜血管生成血管生成素2

5. 血管生成素对miR-141的调控作用及其在血管生成中的功能

[学位论文] 董豪杰浙江大学 2014年博士导师: 许正平共109页

摘要 : 血管生成贯穿了肿瘤发生、生长和转移的全过程，抗血管生成已被公认为是肿瘤治疗的有效途径。血管生成素（Angiogenin/RNase-5，ANG）是促血管生成的一个关键因子，在血管生成和肿瘤发生、发展过程中起重要作用，是抗血管生成治疗的潜在靶标，但目前对... 展开血管生成贯穿了肿瘤发生、生长和转移的全过程，抗血管生成已被公认为是肿瘤治疗的有效途径。血管生成素（Angiogenin/RNase-5，ANG）是促血管生成的一个关键因子，在血管生成和肿瘤发生、发展过程中起重要作用，是抗血管生成治疗的潜在靶标，但目前对其作用机制的认识并不全面和深入。miRNA是一类高度保守的非编码小分子RNA，通过转录后水平调控基因表达或蛋白质翻译而在很多生命活动中发挥重要作用。为此，本论文从miRNA的视角研究了ANG促血管生成的分子机制，并初步探索了ANG调控miR-141表达的分子机制。本课题组已经利用miRNA芯片，筛选获得了一批在脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)中响应ANG刺激的miRNAs。为进一步筛选出血管生成相关miRNAs，本论文将ANG与另一个重要的促血管生成因子bFGF的芯片结果进行了对比分析，最终获得了6个能够共同响应ANG和bFGF刺激的miRNAs，包括5个下调的miRNAs（miR-141、miR-299-3p、miR-329、miR-541和miR-589*）和1个上调的miRNA(miR-381)。通过体外血管生成模型分析，确定了两个血管生成相关miRNAs（miR-141和miR-381）。在此基础上，本学位论文对miR-141进行了深入研究。在HUVEC中，外加或过表达ANG能够下调miR-141的水平，而抑制ANG表达则能够上调miR-141的表达，提示ANG能够下调miR-141的表达水平。利用体外细胞水平和体内动物水平的血管生成分析模型，发现miR-141不仅能够抑制HUVEC的增殖、迁移以及管腔形成等能力，而且也能够抑制动物体内的血管生成，说明miR-141可以通过抑制血管内皮细胞的血管生成相关功能而抑制血管生成。为探索miR-141抑制血管生成的分子机制，本论文通过数据库预测以及进一步的功能注释、文献检索分析，筛选到6个与血管生成密切相关的候选靶基因（其中2个靶基因TGFB2和CXCL12β最近已被报道为miR-141的靶基因）。通过RT-qPCR、western blot以及双荧光素酶报告基因分析等实验手段，最终确定TGFB2、CXCL12β、GAB1、GATA6以及NRP1为miR-141的靶基因。体外管腔形成功能回复实验结果显示，TGFB2、CXCL12β和GAB1能够部分回复miR-141抑制的血管生成效应;遗憾的是，由于GATA6和NRP1的全长基因尚未获得，我们目前并不能证明这两个基因在miR-141抑制血管生成中的作用。以上实验结果显示，ANG不仅能够下调miR-141的表达，而且miR-141可以通过对下游TGFB2、CXCL12β和GAB1等靶基因的调控而抑制血管生成，提示ANG可以通过抑制miR-141进而上调其下游靶基因从而促进血管生成。为阐明ANG下调miR-141表达的分子机制，我们在转录和转录后水平分析了ANG对miR-141生物发生过程的影响。结果显示，ANG不改变miR-141的初始转录本pri-miR-141和前体pre-miR-141的水平，提示ANG应该是作用于成熟miR-141，即可能是促进降解。考虑到ANG具有核糖核酸酶活性，我们利用体外生化实验分析了ANG对成熟miR-141的酶切作用。结果显示，野生型ANG以内切酶的形式在体外直接降解成熟miR-141，但其酶活性突变体却未能降解miR-141;体内细胞生物学实验也显示ANG的酶活性突变体不能下调miR-141的表达。以上实验结果证实了ANG对miR-141的下调作用是通过其内切酶活性实现的。综上，本学位论文的研究结果证明ANG能够通过降解成熟的miR-141进而提高其下游靶基因TGFB2、CXCL12β、GAB1、GATA6和NRP1的表达，从而促进血管生成。结合国内外的文献资料，我们认为本学位论文不仅揭示了一条ANG通过下调miR-141而促进血管生成的新机制，而且发现了第一个参与高等生物中miRNAs降解途径的核酸内切酶。收起

关键词 : 血管生成素 miR-141 血管生成靶基因 miRNA降解

6. 胶质瘤促血管生成素2基因表达的意义及与血管生成的关系

[学位论文] 罗望池福建医科大学 2005年硕士导师: 石松生;杨卫忠共42页

摘要 : 目的：探讨胶质瘤促血管生成素2(angiopoietin2,简称Ang2)表达与血管生成的关系。　　方法：采用RT-PCR和SABC法检测52例人脑胶质瘤和8例正常脑组织中Ang2基因及蛋白表达；CD34单克隆抗体组织化学染色显示微血管，用微血管计数(MVC)测定肿瘤血管生成... 展开

关键词 : 胶质瘤促血管生成素基因表达血管生成

7. 血管生成素与颗粒蛋白前体相互作用的研究

[学位论文] 肖渝浙江大学 2006年硕士导师: 许正平共58页

摘要 : 血管生成素(ANG)是迄今为止唯一一个基于其促进血管新生能力而被发现和分离纯化的血管生成因子(angiogenicfactor)，由123个氨基酸残基组成，分子量为14kDa。研究表明，ANG在肿瘤血管生成中发挥重要作用，但是目前对ANG促血管生成机制的认识还不全面，... 展开血管生成素(ANG)是迄今为止唯一一个基于其促进血管新生能力而被发现和分离纯化的血管生成因子(angiogenicfactor)，由123个氨基酸残基组成，分子量为14kDa。研究表明，ANG在肿瘤血管生成中发挥重要作用，但是目前对ANG促血管生成机制的认识还不全面，有待进一步研究。蛋白质相互作用在生命活动中扮演关键角色。据此，认为血管生成素与其他蛋白质的相互作用介导了血管生成的一系列细胞生物学过程。为此，实验室运用酵母双杂交技术对人心肌cDNA文库进行筛选，获得了一批与血管生成素相互作用的蛋白质，其中一个重要的蛋白就是颗粒蛋白前体(PGRN)。PGRN是分子量为68.5kDa的分泌性生长因子，在生长发育、损伤修复和肿瘤形成过程中发挥重要作用。然而作为研究蛋白质相互作用的宿主，酵母本身存在着一些无法克服的缺点，酵母双杂交系统显示的相互作用蛋白还需要利用其他研究蛋白质相互作用的方法进一步验证。为进一步证明血管生成素与颗粒蛋白前体之间相互作用的真实性，构建了融合表达质粒pEYFP-ANG和pECFP-PGRN，并且将以上两种质粒共转染入COS-7细胞中表达，利用荧光共振能量转移技术(FRET)验证两者在真核细胞内的相互作用。此外，还利用将PRGN和ANG与荧光蛋白融合的方法及间接免疫荧光技术研究了PRGN与ANG在HeLa、MCF-7这两种细胞内的共定位情况。结果表明，去除信号肽的成熟ANG蛋白单独表达主要定位于细胞核；而去除信号肽的成熟PGRN蛋白单独表达主要定位于细胞质；当ANG和PGRN共表达时，两者共同定位于细胞质，围绕细胞核呈环状不均匀分布。共定位研究一方面进一步证实了两者的相互作用，另一方面提示PRGN可抑制ANG的核转位。在证实了PGRN与ANG相互作用的基础上，进一步利用酵母双杂交技术(Yeast-Two-Hybrid)对ANG与PGRN相互作用的位点进行了研究。首先将PGRN的基因根据其蛋白的结构特点切割成不同大小的片段，将ANG与PGRN片段共转化酵母，通过X-gal的方法来筛选与ANG相互作用的结构域。实验结果显示，片段GrnPGFBA、GrnCDE以及GrnDE中都包含有ANG的结合位点，并且GrnPGFBA、GrnCDE与ANG的相互作用略强于GrnDE与ANG的相互作用，而单独的GrnC片段与ANG无相互作用。肿瘤的形成受到细胞内外多种因素的调节，其中包括肿瘤组织血管新生和多种生长因子促进细胞过度增殖。近年来，大量文献报道PGRN在多种肿瘤系中高表达，并且与肿瘤的发生发展密切相关。通过验证ANG和PGRN的相互作用以及寻找它们的作用位点，将促进肿瘤生长的两条关键途径联系起来，为进一步研究肿瘤发生发展的分子机制提供了重要线索。收起

关键词 : 血管生成素颗粒蛋白前体酵母双杂交血管生成因子血管生成机制肿瘤组织

8. NDGA抗胶质瘤血管生成及其机理的实验研究

[学位论文] 孙慧勤第三军医大学 1999年博士导师: 陈意生共121页

摘要 : 恶性胶质瘤是最适宜于进行血管生成研究和抗血管生成治疗的肿瘤之一,找寻有效的抗胶质瘤及其血管生成的抑制剂则是解决问题的关键.去甲二氢愈创木酸(nordihydroguaiaretic acid,NDGA)是从常青灌木Larrea divaricata和Guaiacum kfficinale中提取的一种... 展开

关键词 : 抗血管生成血管生成胶质瘤细胞增殖细胞调亡

9. EGCG抑制人胃癌生长和血管生成及其机制研究

[学位论文] 朱宝和中山大学 2007年博士导师: 詹文华共87页

摘要 : 目的：探讨EGCG对胃癌生长的抑制作用及其相关机制。方法：裸鼠皮下接种SGC-7901人胃癌细胞建立异位移植瘤动物模型。肿瘤体积达到50 mm... 展开

关键词 : EGCG 血管生成胃癌

10. 大鼠肝细胞癌血管生成及其磁共振灌注成像初步定量评价

[学位论文] 李文政中南大学 2005年博士导师: 汤恢焕共88页

摘要 : 　本文对大鼠肝细胞癌血管生成及其磁共振灌注成像进行初步定量评价，文中研究肝细胞癌中Ang2、Tie2和VEGF在mRNA及蛋白水平的表达与肿瘤微血管密度的关系以及各因子之间的相关性，初步探讨肝细胞癌血管生成的调控机制；探讨肝细胞癌的磁共振灌注成像... 展开

关键词 : 癌肝细胞血管生成血管生成素磁共振成像