中国科学技术信息研究所--国家工程技术数字图书馆

[学位论文] 潘晓东浙江大学 2009年博士导师: 吴天星共172页

摘要 : 功能性寡糖是一类不被机体消化酶降解的低聚糖，进入肠道后，能够被共生的微生物选择性地作为碳源，进而可促进肠道有益菌增殖，与此同时，还具有抑制肠内病原菌的黏附、增加肠粘膜免疫应答的作用。目前，已有寡糖类产品如果寡糖、甘露寡糖、壳寡糖等... 展开功能性寡糖是一类不被机体消化酶降解的低聚糖，进入肠道后，能够被共生的微生物选择性地作为碳源，进而可促进肠道有益菌增殖，与此同时，还具有抑制肠内病原菌的黏附、增加肠粘膜免疫应答的作用。目前，已有寡糖类产品如果寡糖、甘露寡糖、壳寡糖等作为肠道保护剂应用到人及动物上。然而由于人们对寡糖作用机理缺乏深入的系统的研究，寡糖类产品的功能常常被误导。本实验针对寡糖影响机体肠道生态和生理这一特性，探讨寡糖对乳酸杆菌生长特性的影响，并以肠道上皮细胞为实验模型，从细胞水平，研究寡糖对肠道病原菌及有益菌黏附抑制的作用，此外还采用小鼠实验模型，探讨寡糖的对肠道生理代谢，免疫调节、肠道微生态及急性肠炎的保护作用。主要内容包括以下几个方面：(1)寡糖的理化性质初步分析；随后选取两株乳酸杆菌，嗜酸乳杆菌和德氏乳杆菌，并分别对其生长、凝集及抗菌特性进行测定；研究四种寡糖作为碳源对乳杆菌生长、代谢的影响，以及冷藏、高温、冷冻干燥、人工肠胃液等应激环境下的保护作用。(2)采用HT-29细胞模型，评价嗜酸乳杆菌、大肠杆菌及金黄色葡萄球菌的黏附能力，研究寡糖及乳酸菌对两株肠道病原菌黏附的抑制作用，及其影响因素。(3)选用Balb/c小鼠，通过灌胃的方法研究寡糖对小鼠肠粘膜组织形态、微生态、矿物质吸收、短链脂肪酸、消化酶、粘膜免疫应答的影响。(4)使用葡聚糖硫酸钠(DSS)对Balb/c小鼠进行急性肠炎的造模，选用FOS和GOS寡糖以及嗜酸乳杆菌探讨对小鼠肠道的保护作用，研究小鼠生长、肠道组织损伤、疾病活动指数(ADI)、肠道免疫细胞的变化。主要结果如下： (1)所选的四种寡糖分子量在450-800范围内，红外光谱图呈现典型的低聚糖特性，具较强的热稳定性、吸湿和保湿能力；两株乳酸杆菌，嗜酸乳杆菌和德氏乳杆菌对大肠杆菌、嗜水气单胞菌和副溶血性弧菌的生长具有抑制作用，在菌体各组分(培养上清液，SCS；胞外粗多糖，EPS;细胞质，CP;细胞壁，CW)中，SCS抑制效果最为明显；四种寡糖，FOS、GOS、COS和MOS均能被两株乳酸杆菌作为碳源很好地利用，在抗应激的实验中，寡糖的添加对菌体的存活率有所影响；在人工胃液和人工肠液中与空白对照组相比，添加FOS和GOS能够明显提高乳酸菌的存活率（P＜0.05），且效果优于葡萄糖组，在高温、冷冻干燥、及冷藏处理下，与对照组相比，各寡糖均能提高菌体存活率（P＜0.05）。 (2)嗜酸乳杆菌、大肠杆菌及金黄色葡萄球菌在HT-29细胞上的黏附率分别为14%,25%和22%，侵袭率分别为0,5%和2%，细胞损伤率分别为0.71％,6.8%和4.14％；嗜酸乳杆菌的SCS能够显著的抑制大肠杆菌及金黄色葡萄球菌的黏附；四种寡糖对两株病原菌的黏附有一定的抑制能力，其中与对照组相比GOS对大肠杆菌的黏附抑制最为显著(P＜0.01),MOS对金黄色葡萄球菌的黏附抑制最为显著(P＜0.01)，同时存在剂量效应，GOS和MOS分别在20mg ml-1和15mg ml-1达到最高。 (3)灌胃1000mg/kg·d糖后，其中FOS、MOS和COS可以提高小鼠的胸腺指数，四种寡糖对小鼠肠道钙镁铁的吸收均有不同程度的提高，且提高盲肠内的SCFA含量，增加盲肠和结肠内容物，提高盲肠的肠壁重量，盲肠内肠杆菌和肠球菌减少，双歧杆菌和乳杆菌增加；此外灌胃含嗜酸乳杆菌(108CFU ml-1)各寡糖组，对盲肠SCFA、肠道菌群，脾脏指数影响更为明显。 (4)7%DSS饮用水造模过程中，与生理盐水组相比，FOS、GOS、嗜酸乳杆菌及其混合组均能降低小鼠ADI(P＜0.05)，其中与治疗组(SASP)相比，嗜酸乳杆菌及其混合组的ADI要低(P＜0.05）；与生理盐水水对照组相比，处理组还能降低结肠组织髓过氧化物酶(MPO)活性(P＜0.05）；寡糖及乳酸菌处理组的结肠组织切片观察，其损伤程度比生理盐水组轻综上所述，FOS、COS、MOS和GOS四种寡糖能够作为所选乳酸菌的增殖底物，且提高乳酸菌的抗应激能力，增强菌体的存活力。同时，四种寡糖不同程度的抑制肠道病原菌大肠杆菌和金黄色葡萄球菌在肠细胞上的黏附定植，其中FOS、MOS分别对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌黏附抑制效果最佳。此外，寡糖能够提高小鼠的免疫水平，增加肠内SCFA，优化肠内菌群，增强钙镁铁的吸收，起到改善肠道生理的作用。与此同时，在DSS急性炎症造模过程中，FOS、GOS及与嗜酸乳杆菌的混合物的添加能够减轻肠道的损伤，降低疾病活动指数。收起

关键词 : 功能性寡糖肠道生理生态调控机制功能特性

2. 设施草莓大棚内环境对蜜蜂活动及生理机能和肠道微生态的影响

[学位论文] 刘绿峰山东农业大学 2023年硕士导师: 刘振国共72页

摘要 : 养蜂业是维系农牧业绿色可持续发展的关键纽带，具有重要的经济、社会和生态效益。蜜蜂授粉所带来的经济价值约占农业总产值的9.5％,被誉为“农业之翼”。设施农业作为现代农业的重要组成部分，为人类食物多元化消费提供保障，得益于蜜蜂授粉发挥的巨... 展开养蜂业是维系农牧业绿色可持续发展的关键纽带，具有重要的经济、社会和生态效益。蜜蜂授粉所带来的经济价值约占农业总产值的9.5％,被誉为“农业之翼”。设施农业作为现代农业的重要组成部分，为人类食物多元化消费提供保障，得益于蜜蜂授粉发挥的巨大作用。但授粉蜂群的健康状况不佳成为制约设施农业经济效益的重要瓶颈，如何评价、改善设施农业授粉蜂群健康水平成为重要研究课题。本研究将9箱群势一致的意大利蜜蜂(Apismelliferaligustica)置于3个草莓大棚中，对授粉蜂群的温湿度、重量、巢门进出口量、声音等参数进行持续记录，并以进入大棚前(1d组，2021年12月6日)作为对照组、进入大棚100天(100d组，2022年3月16日)为试验组，探究其肠道微生物、蜂体病毒载量、抗氧化能力等指标的变化，以探究蜜蜂在设施农业环境下影响其健康状况的因素。主要研究结果如下: (1)不同大棚蜂群整体变化趋势相似，变差幅度有差别。蜂群的重量随着时间的推移呈明显的下降趋势，重量损失超过50％。蜂群群势也显著下降(P＜0.05);蜂巢内每天平均温度稳定在10℃～20℃之间，昼夜温差大(平均温差19.70℃～31.94℃,最大温差42.75℃～45.15℃),不同大棚巢内湿度差距很大，湿度变化趋势与温度变化呈相反趋势，巢内温湿度并不是蜂群生存的最佳环境。蜂群进出量在试验初期呈下降趋势，随后上升，达峰后急剧下降;各蜂群进出量的变化趋势相似，但变化幅度有差别,蜂群进出量最高的2号大棚相较1号和3号大棚分别高出2.67倍和2.83倍。蜂群巢内的声音变化与昼夜温差高低呈相反趋势，与进出量变化呈相似趋势，随着试验时间的延长声音逐渐增强。 (2)相较于1d组，100d组蜜蜂后肠肠道菌群组成发生显著变化。前者(1d组)核心菌属为Bartonella(58.37％)、Lactobacillus(21.31％)、Snodgrassella(5.20％)和Gilliamella(6.37％)、Commensalibacter(2.97％)、Frischella(2.18％)、Morganella(0.77％)、Pantoea(0.66％)、Streptococcus(0.26％)、Pseudomonas(0.14％),后者(100d组)核心菌属为Gilliamella(25.66％)、Snodgrassella(21.91％)、Lactobacillus(18.35％)、Morganella(8.66％)、Commensalibacter(5.49％)、Frischella(3.12％)、Pantoea(2.64％)、Bifidobacterium(0.98％)、Bartonella(0.39％)、Streptococcus(0.28％)。相较于1d组，100d组中Bartonella的丰度极显著(P＜0.001)的下降，Lactobacillus和Morganella菌群的丰度没有显著的差异(P＞0.05);Gilliamella、Snodgrassella和Pantoea相对丰度在100d组中极显著上升(P＜0.001),Gilliamella和Sniodgrassella也成为蜜蜂后肠中丰度最高的两种菌属，同时Commensalibacter和Frischella的相对丰度也显著上升(P＜0.01和P＜0.05);但Bifidobacterium的相对丰度显著下降(P＜0.01)。 (3)相较于1d组，100d组蜂体残翅病毒(DWV)和慢性麻痹病毒(CBPV)载量总体上显著上升(DWV:P＜0.05,CBPV:P＜0.01),100d组蜂体DWV病毒载量是1d组的65.65倍，CBPV病毒载量是1d组的2.3×104倍。通过对抗氧化基因表达量的测定，CYP9Q1(P＜0.001)、CYP6AS14(P＜0.001)、CYP306A1(P＜0.01)、CRBXase(P＜0.001)相对表达量均有显著下降，说明在大棚内环境下会导致蜜蜂患病的风险的增加以及蜜蜂抗氧化能力下降，进而影响到蜜蜂的健康状态。综上所述，冬季草莓大棚环境下导致蜂群的群势、重量下降，蜂群肠道菌群变化大，蜂体病毒载量升高，抗氧化能力下降等，对授粉蜂群的健康有不利影响。本研究对开展设施农业中蜂群健康状况研究具有一定指导意义。收起

关键词 : 蜜蜂草莓大棚授粉蜂群生理机能肠道微生态

3. 三种微生态制剂对草鱼（Ctenopharyngodon idellus）生长性能、生理机能及肠道黏膜的影响

[学位论文] 邱燕苏州大学 2010年硕士导师: 叶元土共78页

摘要 : 本研究以我国重要的经济养殖鱼类草鱼(Ctenopharyngodon idellus)为研究对象,在基础饲料中添加不同水平的微生态制剂,研究了棉子糖、枯草芽孢杆菌、酵母培养物三种重要的微生态制剂对草鱼生长性能、生理机能及肠道黏膜的影响,为微生态制剂在草鱼饲料中... 展开本研究以我国重要的经济养殖鱼类草鱼(Ctenopharyngodon idellus)为研究对象,在基础饲料中添加不同水平的微生态制剂,研究了棉子糖、枯草芽孢杆菌、酵母培养物三种重要的微生态制剂对草鱼生长性能、生理机能及肠道黏膜的影响,为微生态制剂在草鱼饲料中的应用提供依据。试验选取初均重69.51±6.29 g的草鱼624尾,随机分为13组,每组三个重复,每个重复16尾鱼,分别饲喂基础饲料,基础饲料中添加4 mg/kg黄霉素的饲料,基础饲料中添加200mg/kg、400 mg/kg、800 mg/kg、1200 mg/kg、2000 mg/kg棉子糖的试验饲料,基础饲料中添加1000mg/kg、1500 mg/kg、2000 mg/kg、2500mg/kg枯草芽孢杆菌的试验饲料和添加1000mg/kg、2000 mg/kg酵母培养物的试验饲料,经过70 d的池塘网箱养殖试验。试验一为棉子糖对草鱼生长性能、生理机能及肠道黏膜的影响。结果显示:与基础饲料组相比,添加棉子糖能够提高草鱼的特定生长率(SGR),降低饲料系数(FCR),其中1200 mg/kg组与基础组差异显著(P<0.05),除400 mg/kg组外,其它各试验组脂肪沉积率(FDR)均显著高于基础组(P<0.05)。各试验组血清甘油三酯(TG)浓度显著升高(P<0.05),高密度脂蛋白(HDL-C)、低密度脂蛋白(LDL-C)均显著降低(P<0.05)。各试验组淀粉酶、蛋白酶活力与棉子糖的添加量呈正相关,相关系数达0.80以上。各试验组微绒毛密度除了2000 mg/kg组,其余组均显著高于基础组(P<0.05)。与黄霉素组相比:添加棉子糖能够提高草鱼的特定生长率,降低饲料系数,促进鱼体对脂肪的沉积(P<0.05),增强肠道组织淀粉酶、蛋白酶活力,并增加肠道微绒毛密度(P<0.05)。以上结果表明:棉子糖可以通过改善草鱼肠道黏膜形态,促进肠道淀粉酶、蛋白酶活力增强,调节脂质代谢,从而促进鱼体对蛋白质、脂肪的沉积,进而促进生长:本试验条件下,棉子糖适宜添加范围为200 mg/kg～1200 mg/kg。试验二为枯草芽孢杆菌对草鱼生长、生理机能及肠道黏膜的影响。结果显示:与基础饲料组相比,添加枯草芽孢杆菌能够提高草鱼的特定生长率(SGR),降低饲料系数(FCR),其中2000 mg/kg组与基础组差异显著(P<0.05),除2500 mg/kg组外,其它各试验组脂肪沉积率(FDR)均显著高于基础组(P<0.05)。各试验组血清甘油三酯(TG)浓度显著升高(P<0.05)。各试验组淀粉酶、蛋臼酶活力与枯草芽孢杆菌的添加量呈正相关,相关系数达0.89以上。各试验组肠道微绒毛宽度均显著高于基础组(P<0.05),微绒毛密度均高于基础组(P>0.05)。与黄霉素组相比:添加枯草芽孢杆菌能够提高草鱼的特定生长率,降低饲料系数,促进鱼体对脂肪的沉积(P<0.05),增强肠道组织淀粉酶、蛋白酶活力,并增加肠道微绒毛宽度和密度(P<0.05)。以上结果表明:枯草芽孢杆菌可以通过改善草鱼肠道黏膜形态,促进肠道淀粉酶、蛋白酶活力增强,调节脂质代谢,从而促进鱼体对蛋白质、脂肪的沉积,进而促进生长；本试验条件下,枯草芽孢杆菌适宜添加范围为1000 mg/kg~2000 mg/kg。试验三为酵母培养物对草鱼生长、生理机能及肠道黏膜的影响。结果显示:与基础饲料组相比,添加酵母培养物能够提高草鱼的特定生长率(SGR),降低饲料系数(FCR),其中1000 mg/kg组与基础组差异显著(P<0.05),各试验组脂肪沉积率(FDR)均显著高于基础组(P<0.05)。各试验组血清甘油三酯(TG)浓度显著升高(P<0.05)。各试验组肠道组织淀粉酶、蛋白酶活力均高于基础组,肠道皱襞高度均显著高于基础组(P<0.05)。肠道微绒毛高度、密度均高于基础组(P>0.05)。与黄霉素组相比:添加酵母培养物能够提高草鱼的特定生长率,降低饲料系数,促进鱼体对脂肪的沉积(P<0.05),增强肠道组织淀粉酶、蛋白酶活力(P<0.05),并增加肠道微绒毛宽度、密度(P<0.05)。以上结果表明:酵母培养物可以通过改善草鱼肠道黏膜形态,促进肠道淀粉酶、蛋白酶活力增强,调节脂质代谢,从而促进鱼体对蛋白质、脂肪的沉积,进而促进生长；本试验条件下,酵母培养物最适添加量为1000 mg/kg。全文结论:棉子糖、枯草芽孢杆菌和酵母培养物在适宜添加情况下,均能够通过改善草鱼肠道黏膜形态,促进草鱼的生长。收起

关键词 : 生理机能肠道黏膜微生态制剂草鱼生长性能

4. 利用高效离子交换色谱分离分析动物肠道菌群方法初探

[学位论文] 陈章捷福州大学 2005年硕士导师: 饶平凡共60页

摘要 : 高效离子交换色谱已被证明能根据细菌细胞的荷电性及表面构造快速而高分辨率地分离不同种属的细菌。该法用于分析动物肠道菌群这样的复杂细菌生态体系，有可能克服现有研究方法所存在的效率低而结果不直接的不足，将把与宿主营养和健康关系密切的肠道... 展开高效离子交换色谱已被证明能根据细菌细胞的荷电性及表面构造快速而高分辨率地分离不同种属的细菌。该法用于分析动物肠道菌群这样的复杂细菌生态体系，有可能克服现有研究方法所存在的效率低而结果不直接的不足，将把与宿主营养和健康关系密切的肠道菌群研究推向新的高度。本课题首次尝试建立小白鼠肠道菌群的高效离子交换色谱分析分离法，并应用该法考察服用益生菌对小白鼠肠道菌群的影响，奠定了高效离子交换色谱分析肠道菌群方法的基础。首先，选用昆明种小白鼠作为首个实验动物对象,考察了各种粪便预处理方法对肠道菌群提取效果，比较杂质去除效果和细菌回收率两个因素，确定过滤法为粪便中提取肠道菌群的最佳方法。其次，采用TSKgelSuperQ-TOYOPEARL650C强阴离子交换树脂分离菌群，外联激光光散射仪配合高效液相色谱的紫外检测器联合检测流出液。确立了小鼠肠道菌群最佳分离条件：采用0.02mol/L哌嗪盐酸(pH8.0)缓冲体系，每次处理量为0.1g小鼠粪便粗品，洗脱盐浓度为1mol/LNaCl。流速为1mL/min，梯度0～50％/60min，然后50％～75％/20min，最后100％高盐/15min。光散射谱图上得到20个洗脱组分，配合紫外检测谱图可以初步判断洗脱峰的组成，进一步对各洗脱峰涂片镜检，发现其中17个光散射谱图上的峰是细菌峰，各细菌峰的镜下形态差别初步说明了本方法对不同表面性质的肠道菌群的分离是有效可行的。对各细菌峰面积和细菌峰组分平板菌落计数结果进行分析，发现两者呈现较好的线性关系，证明光散射谱图可以用于肠道菌群的定量分析，将来可用于确定不同种属的肠道菌在整个肠道菌群体系中的丰度。在成功建立肠道菌群的色谱分离法的基础上，应用该法分析服用双歧杆菌对小鼠肠道菌群的影响，对小鼠粪便细菌的色谱分析结果表明小鼠双歧杆菌活菌制剂后，其粪便中双歧杆菌含量显著增加，除第8，15，16峰减少之外，其余细菌峰面积增加，这和双歧杆菌的益生效果相符，这是迄今双歧杆菌对肠道菌群作用的第一个直接证据，表明该方法可以直观准确地指示由于动物体生理状态的改变而引起的肠道菌群数量和组成的变化。用相同方法对家兔肠道菌群进行分离，其谱图同小鼠肠道菌群分离谱图有较大的不同，说明本方法针对不同种属动物具有较大的结果差异性，可以用于不同动物肠道菌群体系之间的比较研究。总之，本课题所确立的高效液相离子交换色谱从动物粪便中分离分析肠道菌群的方法有效可行，可以用于肠道菌群及其分离组分的定量分析，同一个体在不同生理条件下的肠道菌群状态研究和不同个体肠道生态的比较研究，可望为阐明动物肠道菌群与其宿主的健康营养的关系发挥重要作用。收起

关键词 : 肠道菌群离子交换色谱光散射仪益生菌肠道生态动物生理

5. 东北地区豚草(Ambrosia L.)的生理生态学研究

[学位论文] 刘静玲东北林业大学 1998年博士导师: 祖元刚;张文辉共68页

关键词 : 豚草东北地区生理生态学种子生理生态学光蒸腾生理生态学抗性生理生态学

6. 红砂的解剖结构及生理生态特征对干旱环境的响应

[学位论文] 白琰甘肃农业大学 2005年硕士导师: 龙瑞军;王刚共49页

摘要 : 为确定红砂(Reaumuria soongorica)的解剖结构及生理生态特征对干旱地区气候的适应性,以红砂为研究对象.结果如下:①红砂具有典型的旱生植物结构,以减少水分散失,抵御风沙.如:角质层发达,叶肉组织内栅栏组织发达,茎内木质部发达、具有木栓形成层等特点... 展开

关键词 : 红砂生态解剖干旱胁迫生理指标生理生态

7. 紫芪方对肠道屏障功能保护作用的实验研究及机制探讨

[学位论文] 史成和第三军医大学 2005年博士导师: 陆松敏共156页

摘要 : 背景：肠道是机体遭受创伤后最早发生病理生理变化的器官。Wilmore称肠道为“外科应激条件下的中心器官”；Meakins称之为“MOF”的动力器官。肠道因其在体内独特的生理环境及特殊的生理构造而参与了几乎所有危重病的病理生理过程。肠道是肌体除体表以... 展开背景：肠道是机体遭受创伤后最早发生病理生理变化的器官。Wilmore称肠道为“外科应激条件下的中心器官”；Meakins称之为“MOF”的动力器官。肠道因其在体内独特的生理环境及特殊的生理构造而参与了几乎所有危重病的病理生理过程。肠道是肌体除体表以外隔绝外环境的主要屏障，又是体内最大的细菌储源，肠道细菌或内毒素易位进入淋巴或直接引流入肝而成为炎症反应的启动者。因此在MODS的发生中，肠道既是受损的“靶”器官，又是损伤的“激发”器官。近年来在“肠道靶学说”牵引下开展了大量化学、生化药物防止内毒素移位、保护肠粘膜屏障功能等方面的药物研究，但仍存在诸如疗效、副作用、价格昂贵等不利因素，限制了临床使用。近年研究表明，中药制品不仅在毒副作用、环境污染等方面有化学、生物药品无法比拟的优势，同时对机体遭受严重外来损伤时肠道损伤的保护具有多靶位效应，诸如，改善微循环、清除自由基及抑制细胞凋亡等保护效应。由于目前开展的研究局限于中药单方、单一成分或少数传统方剂注射剂对肠道的保护研究，对于新的复方药物的研究缺少足够的重视，没有充分体现传统中医药整体施治疾病的医疗思想。因此，以加强内源性抗损伤的医疗思想为指导，在中医传统方剂及现代中药研究成果基础上开展中药复方保护肠道屏障功能的基础研究，无疑对研制开发复方制剂研究的模式及临床使用具有重要的意义。目的：构建保护肠道屏障功能的复方中药-紫芪方；探讨紫芪方对肠上皮细胞(IEC-6)缺氧再复氧损伤的保护效应；阐述紫芪方对失血性休克肠道屏障功能的保护作用及其机制，为中药复方制剂保护肠道屏障的研究构建技术平台及提供理论依据。方法：一、应用大鼠小肠上皮细胞(IEC-6)体外缺氧再复氧损伤模型，观察不同浓度参附方血清对细胞LDH释放的影响，建立药物血清的制备和血清药理学研究技术；采用均匀设计法，设计组分不同用量配比的中药复方，观察不同设计方案配比的中药复方对缺氧再复氧损伤细胞LDH释放量的影响，从而获取最佳组分配比的中药复方-紫芪方。二、采用上述血清药理学技术，以参附汤作为阳性对照药物，观察紫芪方及参附方药物血清对缺氧再复氧损伤IEC-6小肠上皮细胞LDH释放量、细胞活力、细胞凋亡率、脂质过氧化、能量代谢、细胞内游离钙浓度、线粒体膜电位及Bcl-2抗凋亡基因及目的蛋白表达的影响，探讨紫芪方对肠上皮细胞缺氧再复氧损伤的保护效应。三、实验采用Wistar实验大鼠，按照改良Wiggers法复制失血性休克模型，实验分为正常对照组、失血性休克组、紫芪方治疗组、参附治疗组、蒸馏水对照组，除正常和休克对照组外，其余各组均给予二倍失血量液体复苏后分别经口服给予不同干预药物。观察了实验药物治疗后对失血性休克大鼠活存率、血压、器官血流量、颈动脉A血流量、肠道蠕动速率、体内外抑菌、血浆内毒素、细菌移位、肠组织DAO和D-乳酸含量、线粒体呼吸功能、线粒体膜电位、Na+-K+ATP酶的活性、组织内MDA含量和SOD活性、细胞色素C活性、Bcl-2基因表达及COXⅠ、Ⅱ、Ⅲ基因的表达。结果：一、通过细胞形态学观察及缺氧再复氧后细胞培养上清液中LDH的变化，确定了缺氧90min再复氧60min处理后的IEC-6小肠上皮细胞的损伤模型。二、通过观察实验大鼠灌服不同剂量和不同给药次数的参附药液而制备的药物血清对缺氧再复氧损伤IEC-6细胞LDH漏出量的影响，确定了采取间隔1h两次给予大剂量(11.25g/kg)参附药液1h后，经颈动脉无菌条件下采集血浆及制各药物血清的方法；建立中药复方对缺氧再复氧细胞损伤保护作用的血清药理学研究方法；并经过对不同配比方案制备的中药复方及其不同组分药材的药物血清对损伤细胞LDH释放量影响的血清药理学研究结果，优化了中药复方组分配比方案，确定了紫芪方组分配比。三、与缺氧再复氧组比较，紫芪方和参附血清治疗组能够降低缺氧再复氧IEC-6细胞损伤程度，主要表现以下几个方面：(1)减少细胞培养液上清LDH释放量；(2)提高细胞生长活力；(3)抑制细胞异常凋亡；(4)提高细胞抗自由基损伤的能力；(5)线粒体膜电位显著增高，肠上皮细胞内ATP含量及能荷显著升高；(6)降低细胞钙离子超载损伤程度。四、采用RT-PCR及WesternBlot方法，检测了紫芪方和参附血清治疗后，缺氧再复氧损伤IEC-6细胞Bcl-2基因及其目的蛋白的表达，结果显示，紫芪方能够显著提高Bcl-2的基因及其目的蛋白的表达。五、与失血性休克对照组比较，紫芪方能够显著提高失血性休克10小时大鼠活存率；休克5h，紫芪方组血压显著高于液体复苏组(P＜0.05)，9h后差异非常显著(P＜0.01)，呼吸呈现同样趋势。单纯复苏对照组大鼠平均存活时间是9.84h；紫芪方组是13.8h，参附组是12.56h，显著优于与单纯复苏对照组(P＜0.05)。六、紫芪方及参附治疗均可改善休克大鼠的肠道屏障功能，与休克对照组比较：(1)能够显著改善休克大鼠肠黏膜微循环血流量；(2)提高正常和休克状态实验大鼠肠道蠕动速率；(3)显著降低血浆中D-乳酸、DAO及内毒素水平；(4)降低大鼠肠粘膜组织MDA含量并提高SOD活性，减轻组织脂质过氧化损伤；(5)改善休克大鼠肠上皮细胞线粒体功能，紫芪方能治疗组提高休克肠上皮细胞线粒体膜电位水平，改善线粒体呼吸功能，提高组织Na+-K+ATP酶及细胞色素C氧化酶的活性；(6)提高肠道免疫功能，紫芪方显著提高休克大鼠肠道内容物、血浆中IgA的含量，并且提高CD3、CD4细胞数量和CD4/CD8的比值。七、采用RT-PCR及WesternBlot方法，检测不同组别细胞Bcl-2、线粒体COX基因及目的蛋白的表达，与休克和蒸馏水对照组比较，紫芪方治疗组提高了Bcl-2、COXⅠ、及COXⅡ的表达。讨论：紫芪方是一中药复方，内含多种药物成分，对肠道屏障功能损伤具有多靶位保护效应，其保护作用的机制可能主要包括以下几个方面：一、紫芪方能够抑制脂质过氧化对线粒体的损伤：线粒体既是氧自由基产生的重要场所，又是氧化损伤的主要靶细胞器；同时mtDNA定位于线粒体基质，不与组蛋白结合，“裸露”于线粒体所产生的自由基周围，对自由基攻击十分敏感，可导致mtDNA碱基缺失或环状结构破坏，影响其正常转录，可能与细胞延迟死亡有关。紫芪方通过提高肠上皮细胞SOD酶活性降低MDA含量，减少细胞损伤后导致的TNF的升高，提高机体对氧自由基清除能力，从而使线粒体免受脂质过氧化的损伤。同时，由于稳定了线粒体膜电位，提高了线粒体质子转运和ATP合成，从而增加了Na+-K+-ATPase泵功能，抑制了Ca2+内流而导致的Ca2+超载对线粒体的损伤，减轻了MPT的发生及细胞异常凋亡或坏死。二、紫芪方提高损伤细胞Bcl-2基因及其目的蛋白的表达：Bcl-2是一个广义的抗细胞凋亡的基因，其功能是通过阻止细胞凋亡的早期环节而阻止凋亡的发生。它不能降低药物诱导的DNA损伤，而是加速DNA的修复，即通过防止受损DNA转录出对细胞凋亡相关基因有激活作用的信号或阻止这些相关产物的作用，通过抑制自由基产生、抑制细胞内钙超载、抑制线粒体膜的通透性、阻止细胞色素C释放及抑制caspase激活等机制发挥抑制细胞凋亡的作用。因此提高损伤细胞Bcl-2基因及其目的蛋白的表达是紫芪方抑制细胞异常凋亡、发挥保护肠道屏障功能重要作用机制。三、紫芪方增强实验大鼠肠道蠕动功能：失血性休克导致肠道性缺血，肠道蠕动功能下降，引起肠内菌群内稳失调，肠黏膜通透性增加，细菌或内毒素移位，使肠道从正常时的屏障防护变为全身炎症反应的启动者。正常的肠蠕动功能能够减少病原菌在肠道的黏附与定殖，对于抑制病原菌的异常繁殖及减少病菌对机体的损伤十分重要。因此，紫芪方增强实验大鼠肠道蠕动功能是其肠道屏障功能保护重要机制之一。四、此外，正常的肠道免疫功能及肠道微循环血流量等对于维护正常肠道功能十分重要，因此，紫芪方提高了实验动物的肠道免疫功能，并改善了肠道微循环血流量的作用也是其发挥其保护肠道屏障功能的重要机制。结论：本研究成功构建了保护肠道屏障功能的中药复方-紫芪方；于体外和体内模型上验证了紫芪方对损伤所致的肠上皮细胞、线粒体、肠屏障功能损伤的保护效应；并从抗自由基损伤、线粒体功能保护、抑制细胞凋亡、提高Bcl-2基因及其目的蛋白表达几个方面阐明紫芪方的作用机制。该课题研究不仅为开发研制紫芪方奠定了理论和实验基础，而且为相关研究构建了技术平台。收起

关键词 : 肠道屏障功能保护紫芪方病理生理肠道靶学说中药制品

8. Lb.paracasei HD1.7对小鼠肠道微生态体系的影响

[学位论文] 付斌黑龙江大学 2008年硕士导师: 雷虹共78页

摘要 : 肠道微生物区系是由致病菌和非致病菌构成的一个极其复杂的生态系统，在人类的健康和疾病中起着十分重要的作用。因而，对这个复杂的微生物生态系统及其微生物多样性的探索已成为近年来的研究热点。本课题主要探讨了Lb.paracasei HD1.7菌对机体肠道内... 展开肠道微生物区系是由致病菌和非致病菌构成的一个极其复杂的生态系统，在人类的健康和疾病中起着十分重要的作用。因而，对这个复杂的微生物生态系统及其微生物多样性的探索已成为近年来的研究热点。本课题主要探讨了Lb.paracasei HD1.7菌对机体肠道内环境的耐受能力以及与其它肠道菌群的相互作用情况，并检测其对小鼠肠道微生态体系的调节作用，为后续功能性保健食品的开发奠定基础。论文首先摸索了Lb．paracasei HD1.7对胃肠环境的耐受性。结果表明，在空腹条件下，Lb．paracasei HD1.7对模拟人工胃液和肠液具有良好的耐受性，在pH>3的胃液和pH8.0的肠液中生长良好，且可以保持相对较高的存活率；在添加乳蛋白的模拟人工胃液中的存活率明显高于空腹情况，且存活时间延长；且食用液体早餐能明显增强Lb．paracaseiHD1.7的存活率。Lb．paracaseiHD1.7对0.1％-0.3％的胆盐环境中均有良好的耐受能力。其后探索了Lb．paracasei HD1.7在体外对肠道致病菌和肠道益生菌的作用情况。试验结果显示，Lb．paracasei HD1.7能够明显的抑制沙门氏菌、志贺氏菌、大肠杆菌和变形杆菌四种肠道致病菌的存活，并对青春双歧杆菌、婴儿双歧杆菌、嗜酸性乳杆菌和酵母菌四种肠道益生菌无影响。最后研究了Lb．paracaseiHD1.7对小鼠肠道微生态区系的影响。以昆明种小鼠作为研究对象，用细菌浓度为2x 1O8cfu/mL的Lb．paracasei HD1.7连续灌胃小鼠1Od，取其盲肠内容物，提取细菌总基因组DNA，PCR扩增16s rDNA V3可变区，通过对实验组和空白组小鼠肠道菌群。DGGE指纹图谱进行分析可知，每只小鼠个体的肠道内均存在一定数量的优势种群，而在灌胃Lb．paracaseiHD1.7后，小鼠肠道内的优势菌群发生了明显的变化，说明Lb．paracaseiHD1.7对肠道微生态有着重要的调节作用，它能够导致肠道内的微生物区系的改变，不仅可以使原肠道内的优势菌群和非优势种群相互间发生转变，而且也可以促进部分新菌种在肠道中的定植，也能够抑制某些菌株的生长甚至使其消失。收起

关键词 : 小鼠肠道生态体系

9. 以肠道菌群为靶点的代谢综合征膳食干预的临床效果及其生理生态学作用机制研究

[学位论文] 肖水明上海交通大学 2013年博士导师: 赵立平共192页

摘要 : 近几十年来，全球范围内肥胖、胰岛素抵抗和2型糖尿病等代谢性疾病呈爆发性流行趋势。研究表明，结构失衡的肠道菌群可能参与了肥胖等代谢性疾病的发生、发展过程。肠道中革兰氏阴性菌细胞壁组分脂多糖（lipopolysaccharides,LPS）具有内毒素活性并激... 展开近几十年来，全球范围内肥胖、胰岛素抵抗和2型糖尿病等代谢性疾病呈爆发性流行趋势。研究表明，结构失衡的肠道菌群可能参与了肥胖等代谢性疾病的发生、发展过程。肠道中革兰氏阴性菌细胞壁组分脂多糖（lipopolysaccharides,LPS）具有内毒素活性并激活宿主免疫反应。高脂、高热量等不良饮食导致的菌群结构失衡，革兰氏阴性菌含量增加，肠通透性与宿主循环水平LPS升高，即“代谢性内毒素血症”可能是诱发系统慢性炎症、胰岛素抵抗和肥胖的重要机制之一。该机制的提出为通过营养/膳食干预等方式调节肠道菌群结构组成或代谢活性，防治代谢性疾病提供了理论基础。本论文分析以肠道菌群为靶点的膳食干预对肥胖人群代谢异常的改善作用，并以体外Caco-2细胞模型探讨菌群结构变化在该过程中的可能作用机理。首先，基于肠道菌群在肥胖等代谢性疾病发病过程中的作用及饮食对其结构的可塑性，本研究设计了一套由全粮、中医药食同源食品和益生元组成的膳食配方，该配方可满足人体自身的营养需求，又有益于平衡肠道菌群结构。本研究招募123名中心性肥胖志愿者（身体质量指数，body mass index,BMI≥28kg/m2），其中93名完成为期23周（0-9周为严格干预期，10-23周为观察维持期）的自身对照（self control design）膳食干预实验。至干预结束，人群平均减重5.79±4.64kg（减重百分比为6.62±4.94%），同时胰岛素敏感性、糖代谢、脂代谢、血压和肝功能等代谢表型均得到显著改善。对粪便样本454焦磷酸测序发现，肠道中部分条件致病菌，包括肠杆菌科（Enterobacteriaceae）和脱硫弧菌科（Desulfovibrionaceae）数量在干预后显著下降；而具有肠屏障保护功能的双歧杆菌科（Bifidobacteriaceae）细菌含量增加。肠通透性指标乳果糖/甘露醇比例相比干预前下降，验证了肠屏障功能的增强。血清中脂多糖结合蛋白显著降低，同时伴随着C反应蛋白，促炎细胞因子肿瘤坏死因子α、白介素6的降低和抗炎细胞因子脂联素的升高。上述结果表明，该膳食干预可有效地改善肥胖患者的代谢综合征各类症状，并可能是通过调节肠道菌群结构以增强肠屏障功能，减轻循环水平抗原载荷量，最终改善慢性炎症反应和减轻胰岛素抵抗实现的。进一步地，粪便中的液相组分，即粪便提取液中含有食物成分、人体自身和肠道菌群代谢物及结构组分等物质，对肠道上皮细胞产生细胞毒性、遗传毒性、免疫毒性等生物活性作用，并影响肠屏障功能和相关基因表达等。因样本采集的非侵害性和对危险因素的灵敏性，粪便提取液成为营养、肠道菌群与人体健康研究中的重要生物标记物。本研究采用人结肠腺癌Caco-2细胞系建立粪便提取液生物活性评估模型，在优化粪便提取液制备过程基础上研究粪便提取液的细胞毒性、对肠屏障及组织损伤修复功能的影响、以及对炎性细胞因子和紧密连接蛋白表达的调节等，探讨膳食干预改善代谢综合征可能的生理生态学机制。以粪便提取液中总有机碳（total organic carbon,TOC）含量为浓度标记物，校正样本之间因个体饮食、生活方式、肠道菌群、粪便形态组成和提取方法、效率等因素导致的生物活性物质总量的差异。细胞毒性结果表明，膳食干预显著降低了粪便提取液对细胞代谢活性的损伤和细胞毒性。同时，干预前的粪便提取液对组织发生损伤后细胞迁移与损伤修复具有抑制性，而这种抑制作用在干预后明显减轻。通过对Caco-2细胞形态学、跨膜电阻值（transepithelial electrical resistance,TEER）、苯酚红通透率及肠道碱性磷酸酶活性等指标的监测，确定Caco-2细胞肠屏障模型构建成功。干预前的粪便提取液显著降低TEER值，破坏正常的肠屏障功能；膳食干预显著改善粪便提取液对TEER的影响。最后，mRNA水平发现干预上调了Caco-2细胞紧密连接蛋白，并抑制促炎细胞因子基因表达。至此，膳食干预不仅调节了肠道菌群结构，而且改变粪便提取液代谢物组成，增加短链脂肪酸含量，减轻其对Caco-2的细胞毒性，促进细胞迁移与组织损伤修复速率，并显著改善体外肠屏障功能。粪便提取液的生物学活性评估模型可应用于代谢性疾病的风险评估和食物成分或膳食干预防治效果评价。综上，本研究通过以肠道菌群为靶点的肥胖人群膳食干预，调节并平衡肠道菌群结构以增强宿主肠屏障功能，减轻抗原载荷量与炎症反应，最终改善代谢异常。粪便提取液的生物学活性评估对这一因果关系链中关键环节的分子机制做了初步探讨，并可作为营养、肠道菌群与人体健康关系研究，代谢性疾病风险和膳食干预效果评价的重要生物标记物。收起

关键词 : 代谢综合征肠道菌群内毒性血症膳食干预临床效果生理生态学

10. 慢传输型便秘(气虚型)便秘患者肠菌组成特点研究

[学位论文] 贾瀚泽辽宁中医药大学 2023年硕士导师: 柳越冬共33页

摘要 : 目的：肠道菌群失衡在慢传输型便秘的发生、发展中扮演着重要角色，肠道菌群及其代谢产物对肠道内环境、结肠蠕动、食物消化等方面起着至关重要作用。本研究的目的探究慢传输型便秘（气虚型）与肠道菌群之间的联系，并探讨核心菌群紊乱在慢传输型便秘... 展开

关键词 : 慢传输型便秘肠道微生态肠道菌群