中国科学技术信息研究所--国家工程技术数字图书馆

[学位论文] 单乃玉南京大学 2015年硕士导师: 姚祝军；王少仲共81页

摘要 : Neoamphimedine是一种从海绵中提取的吡啶并吖啶(pyridoacridine)生物碱。研究发现，neoamphimedine是人类拓扑异构酶Ⅱα中ATP酶的ATP竞争抑制剂，在体内和体外均有非常好的抗癌活性。但是，目前neoamphimedine天然来源有限，极大限制了neoamphimedi... 展开

关键词 : 生物碱化学合成拓扑异构酶

2. 藤黄酸结合于人拓扑异构酶Ⅱα的ATPase结构域并抑制其催化活性

[学位论文] 秦玉新中国科学院上海生命科学研究院 2007年博士导师: 丁健共103页

摘要 : 藤黄酸(Gambogic acid，GA)是中国传统中药藤黄的主要活性成分。近几年的研究发现藤黄酸具有显著的体内外抗肿瘤活性，目前由该化合物和某些碱性氨基酸组成的复方注射剂用作肿瘤的治疗已经进入临床II期的研究，有望成为具有中国自主知识产权的一类抗肿... 展开藤黄酸(Gambogic acid，GA)是中国传统中药藤黄的主要活性成分。近几年的研究发现藤黄酸具有显著的体内外抗肿瘤活性，目前由该化合物和某些碱性氨基酸组成的复方注射剂用作肿瘤的治疗已经进入临床II期的研究，有望成为具有中国自主知识产权的一类抗肿瘤新药。对于其作用机理的研究表明该化合物可能通过诱导细胞凋亡、抑制端粒酶活性和干扰细胞周期蛋白的功能而发挥杀伤肿瘤细胞的作用。尽管前期研究揭示了藤黄酸的一些药理作用机制，但其具体的细胞内作用靶点尚不清楚。本研究首先证实了GA在体外的抗肿瘤活性，并进一步阐明了GA的药理作用与DNA拓扑异构酶的关系。本文作者应用磺酰罗丹明B蛋白染色法(SRB)和四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT)评价了GA对21株肿瘤或正常细胞的体外增殖抑制作用。结果显示GA对各种不同组织来源的肿瘤或正常细胞有广泛的细胞毒作用，且没有明显的选择性，其平均IC50值约为1.23μM。此外本文作者选用三株多药耐药细胞株(K562/A02，MCF7/ADR和KBNCR)，初步检测了GA对多药耐药细胞的增殖抑制活性。结果表明该化合物能显著抑制这三株多药耐药细胞的生长，其相应的耐药系数分别为1.24、3.24和1.17，明显低于阿霉素(Adriamycin，ADR)、长春新碱(Vincristine，VCR)和依托泊甙(Etoposide，VP16)的耐药系数。上述结果表明GA具有较强的体内外抗肿瘤活性和抗多药耐药的作用。 GA在本实验室初步的筛选中显示具有抑制DNA拓扑异构酶活性(Topos)的作用。本研究检测了GA对DNA拓扑异构酶I/II活性的影响，并迸一步对其可能的作用机制作了探讨。DNA拓扑异构酶I/II介导的pBR322解螺旋实验和Topo II介导的kDNA去连环实验结果表明，GA对DNA拓扑异构酶I/II的活性均有抑制作用，其中对Topo II的抑制作用明显强于对Topo I的抑制。根据作用机制拓扑异构酶抑制剂可被分为催化抑制剂和毒剂两类，其中毒剂通过稳定拓扑酶和DNA的可切割复合物，造成DNA损伤；而催化抑制剂则通过作用于其它的一些步骤影响酶活性。通过Topo I/II介导的DNA切割实验发现，GA并不能诱导可切割复合物的形成，相反GA可以抑制CPT诱导的Topo I/DNA的可切割复合物。此外，GA可以抑制VP16引起的DNA形成的彗星拖尾和H2A.X的磷酸化，提示GA能够抑制VP16导致的DNA的损伤。进一步通过集落形成实验我们进一步发现GA能够拮抗VP16的细胞增殖抑制作用。这些结果提示GA是一个全新的拓扑异构酶II的催化抑制剂。本文作者发现应用RNA干扰(RNAi)的方法下调Topo IIα的表达能够降低GA诱导的HeLa细胞的凋亡和c-Jun的磷酸化，而同样的方法下调Topo IIβ和TopoI的表达则对GA引起的效应没有影响，表明Topo IIα是GA在细胞内的一个主要靶点。为了进一步阐明GA作用于Topo IIα的机制和特点，本文作者检查了GA对Topo II催化循环中各个步骤的影响。因为DNA嵌入剂也可以影响拓扑酶的活性，因此首先需要检测GA是否是一个DNA嵌入剂。通过DNA伸展实验和EB替代分析本文作者发现GA是一个DNA非嵌入剂。荧光偏振分析也表明GA不能阻碍Topo II和DNA的结合。GA可以抑制链转移前和转移后Topo II介导的DNA链的切割，而对于切割后的DNA链的再连接则没有影响。此外通过应用33P标记的ATP，测定在药物存在的情况下其水解速度，发现GA也可以抑制ATP的水解。表面等离子共振(SPR)分析表明GA可以直接与Topo IIα ATPase域结合，虚拟模拟分析显示这种结合可能影响ATP与Topo IIa的结合。因此我们发现GA能够抑制Topo IIα介导的DNA链的切割和ATP的水解，其分子机制可能在于GA能够竞争ATP结合于Topo IIα的ATPase结构域，从而影响酶的活性。综合上述，本研究确认了GA的体外抗肿瘤活性，并进一步证实GA是一个新的DNA非嵌入型Topo II催化抑制剂，它能够抑制Topo II介导的DNA链的切割和ATP的水解。其分子机制可能在于GA能够竞争ATP结合于Topo Ilα的ATPase结构域。收起

关键词 : 藤黄酸 DNA拓扑异构酶 ATPase结构域 DNA切割拓扑异构酶毒剂催化抑制剂抗肿瘤活性

3. TOP2α过表达与R0术后胃癌患者临床病理特征及预后关系

[学位论文] 郑方超青海大学 2017年硕士导师: 赵久达共49页

摘要 : 目的：已有研究证实探讨拓扑异构酶2α（TOP2α）过表达与实体肿瘤的临床病理特征及预后相关。然而少有研究报道 TOP2α过表达与胃癌临床病理特征及预后关联。本研究目的探讨 TOP2α过表达与胃癌患者病理特征之间的关系，以及对胃癌患者预后的影响。 ... 展开

关键词 : 胃癌拓扑异构酶2&alpha 临床病理术后化疗

4. 小剂量电离辐射与染色体不分离的关系及其机制

[学位论文] 李华复旦大学 2003年博士导师: 左伋共105页

摘要 : 论文以DS为例开展了以医院为基础的病例-对照研究,分离导致染色体不分离的可能因素;同时探讨小剂量电离辐射与染色体不分离的关系及其分子机制.该课题第一部分收集了自1999年10月起至2002年12月止的DS病例(就诊于上海新华医院、复旦大学附属儿科医院、... 展开

关键词 : 小剂量电离辐射染色体不分离拓扑异构酶Ⅱ&alpha 拓扑异构酶Ⅱ&alpha 抑制剂

5. 拓扑异构酶与卵巢癌预后及多药耐药关系的研究

[学位论文] 何静广西医科大学 2007年硕士导师: 李力共148页

摘要 : 卵巢癌是严重威胁妇女生命和健康的恶性肿瘤。近30年来卵巢癌患者的5年生存率一直徘徊于30％-50％之间，化疗对其总体生存率并无明显改善，这其中的主要原因是由于卵巢癌细胞对化疗产生了耐受性。拓扑异构酶是调节DNA空间构型动态变化的关键性核内酶，... 展开

关键词 : 卵巢癌多药耐药拓扑异构酶 RNA干扰 siRNA

6. HPLC/MS在天然来源生物活性成分快速筛选中的应用研究

[学位论文] 张虹浙江大学 2004年博士导师: 潘远江;陈耀祖共127页

摘要 : 该论文的研究旨在发展、建立一系列可应用天然来源生物活性成分快速筛选与分析的新方法.主要内容包括:拓扑异构酶作为靶分子的HPLC/MS—亲和超滤筛选;抗体作为靶分子的HPLC/MS—亲和超滤筛选;血管紧张素Ⅰ转换酶作为靶分子的HPLC/MS—高通量生物活性筛选.

关键词 : 生物活性拓扑异构酶靶分子抗体 MPLC MS

7. 两种大环抗肿瘤化合物的结构修饰及其活性研究

[学位论文] 季丽中国海洋大学 2004年硕士导师: 江涛共81页

摘要 : 该文选择了可以选择性抑制真菌中TopoI的活性化合物醌茜和迄今为止发现的唯一一类作用于TopoI的抗肿瘤化合物喜树碱作为先导化合物,研究了醌茜和喜树碱分别与一系列小分子通过不同的途径制备其衍生物的方法,并对衍生物进行了抗肿瘤活性研究.其中醌茜与... 展开

关键词 : 醌茜喜树碱糖苷化拓扑异构酶合成

8. 羟基喜树碱联合吡柔比星抗腺样囊性癌肺转移的研究

[学位论文] 余杨上海交通大学 2003年硕士导师: 郭伟共42页

摘要 : 目的:该实验旨在研究羟基喜树碱(HydroxycamptothecineHCPT)和吡柔比星(TheprubicineTHP)在治疗裸鼠腺样囊性癌肺部转移中的合理用药序贯,希望在抑制肿瘤拓扑异构酶(TopoisomerasesTOPO)的理论基础上,通过大体标本的观察,转移结节计数和图像分析等方法... 展开

关键词 : 腺样囊性癌羟基喜树碱吡柔比星拓扑异构酶

9. 大肠杆菌拓扑异构酶Ⅳ的诱导表达及鉴定

[学位论文] 傅慧芳南开大学 2000年硕士导师: 黄熙泰共38页

摘要 : 大肠杆菌拓扑异构酶Ⅳ是近年来发现的拓扑异构酶家族中的一个新成员,是由二亚基(ParC蛋白和ParE蛋白)组成的四聚体,与大肠杆菌旋转酶同属Ⅱ型拓扑酶,是细菌生长必需的酶.研究人员使用过表达质粒pET-3c-parE和pET-3c-parC分别转化其宿主菌BL21(DE3)pLy... 展开

关键词 : 拓扑异构酶Ⅳ 打结p4DNA 诱导表达

10. 对联三苯类拓扑异构酶抑制剂的合成及抗肿瘤活性研究

[学位论文] 邱进山东大学 2013年博士导师: 沈月毛;马玉道共229页

摘要 : 目前恶性肿瘤是威胁人类生命的主要重大疾病之一，攻克恶性肿瘤已经为全世界医药卫生工作者急需解决的一大问题。从活性天然产物中寻找抗肿瘤药物和先导化合物是目前国际上发现新型的抗肿瘤药物的主要途径之一。植物、动物、海洋生物和微生物中的活性... 展开目前恶性肿瘤是威胁人类生命的主要重大疾病之一，攻克恶性肿瘤已经为全世界医药卫生工作者急需解决的一大问题。从活性天然产物中寻找抗肿瘤药物和先导化合物是目前国际上发现新型的抗肿瘤药物的主要途径之一。植物、动物、海洋生物和微生物中的活性天然成分有的具有一定抗肿瘤作用，而且许多已经应用于临床。由于生长环境的特殊，微生物、海洋生物产生的次级代谢产物的结构也很特殊，这些化合物具有结构复杂性和活性多样性的特点。本研究从植物内生菌、海洋生物共附生菌获得了结构丰富、类型多样的天然产物，其中部分化合物的活性测试结果表现出较强的抗肿瘤活性，包括安莎霉素、16元大环内酯和联三苯类化合物。主要研究内容包括： ⑴从海洋真菌AF119的菌株中分离得到了对多种肿瘤细胞的增殖均有较强的抑制作用的8个联苯类化合物。为了寻找结构更简单、抗肿瘤活性更强的化合物，本研究从它们的结构出发采用有机合成的方法合成了一系列新的对联三苯衍生物H1-H8并研究了它们的抗肿瘤活性。抗肿瘤活性结果表明:细胞毒活性最强的是化合物H2，其对MDA-MB-435肿瘤细胞的IC50为0.39μmol/L，其作用与抑制DNA拓扑异构酶(TOP)活性有关。通过观察H2淀粉混悬液对S180肉瘤实体小鼠的抑瘤作用实验表明该化合物与阴性对照组没有区别，不表现抗肿瘤活性。可能原因为:一、化合物H2水溶性差，生物利用度低，没有被吸收利用;二、化合物H2有一定的毒性，给药剂量大的给药组小鼠死亡率高。所以化合物结构需要进一步优化。 ⑵TOP在细胞生命周期中起着重要的作用，参与了DNA复制、转录、重组和修复等不同生理过程，其主要功能是调节、催化DNA的断裂和重连接。通过抑制DNA拓扑异构酶的作用活性可以降低肿瘤细胞的过快增殖，从而在不同程度上杀死肿瘤细胞。化合物H2和H6对TOP具有较强的抑制作用，但化合物H6活性较H2低，而就结构而言两者区别仅仅是中间B环上酚羟基的取代不同。为了找寻活性更强的TOP抑制剂，我们以化合物H2的结构为模板进行优化得到不同的衍生物Y1-Y16、Q1-Q21、S1-S10、T1-T7和W1-W5。抗肿瘤活性结果表明化合物T2、T4、T5和W2的活性较高，另外化合物T1、T7也表现较好的活性。从这些化合物的结构不难看出联三苯中A环的邻二酚羟基是化合物活性强弱的关键因素;羧基使化合物的活性降低;硝基的取代对化合物活性的影响并不大;氨基取代产生了不同的活性影响，取代在C环上对化合物的活性影响不大，而取代在A环上则对活性产生较大影响:化合物Y1和Y2的氨基取代在C4位表现较好活性，而化合物W3和W4的氨基取代在C3位则活性较低。 ⑶TOPⅡ的结构为同源二聚体，有α和β两种亚型。TOPⅡα在快速增殖的细胞中增加的倍数比在静止的细胞中高很多，而TOPⅡβ在正常的细胞周期中的浓度保持基本恒定，没有明显的细胞周期特异性，这正是TOPⅡα抑制剂对肿瘤有特殊疗效的细胞生物学基础。TOPⅡα的抑制剂可分为TOPⅡα催化抑制剂和TOPⅡα毒剂两种。TOPⅡα毒剂的作用是通过捕获TOPⅡα中介的DNA断裂复合物，使DNA双链断裂产生大量的累积，抑制DNA的再连接进而引发细胞死亡。TOPⅡα催化抑制剂作用的机制不是通过稳定TOPⅡα-DNA复合物来完成的，所以此过程一般不产生DNA的损伤，不至于产生继发性的肿瘤。目前临床上使用的TOPⅡα靶向药物很多属于TOPⅡα毒剂，有一定的副作用。因此，寻找高效和低毒的TOPⅡα催化抑制剂是现在抗肿瘤药物研究的热点之一。在化合物H1-H8中，H8 B环上取代的是邻二酚羟基，H4 B环上取代只有一个酚羟基，化合物H2中间B环上没有酚羟基取代。就其细胞毒活性来说，H2虽然作用最强，但它对TOPⅡα没有选择性而H4和H8选择性抑制TOPⅡα活性。这些说明选择性抑制TOPⅡα的活性可能来源于中间B环上的酚羟基。H8对MDA-MB-435细胞的IC50为4.1μmol/L，其活性强于化合物H4。所以本研究以化合物H8为母核，用不同的取代基取代，设计并合成了17个衍生物D1-D17，同时得到5个副产物D18-D22。抗肿瘤活性结果表明衍生物中化合物D17活性最高，其结构也最接近化合物H8，活性也相当。这与化合物H2衍生物的活性结果相似，这些同样说明A环的邻二酚羟基是活性关键基团。酚羟基被保护后化合物的活性明显降低，但化合物D12和D15的结构与活性的差异使得取代位置与活性的关系有待进一步确认。含羧基的化合物D3、D4、D5、D6和D8的活性都很低，与H2含羧基衍生物的结果相似，且与羧基的取代位置关系不大。当羧基被甲酯化后，化合物D1和D2却表现出一定的活性且与酯化羧基的取代位置有关，取代在A环3位活性明显低于4位。另外在副产物中二联苯化合物D20表现出一定的抗肿瘤活性，而其他化合物的活性很低，其结构与活性的关系有待进一步研究。 ⑷含杂原子或杂环的的药物临床应用的非常多，代表性药物有安定（Diazepam）、苯巴比妥(Phenobarbital)、氯丙嗪（Chlorpromazine）、、吗啡（Morphine）、阿托品(Atropine)、利血平(Reserpine)、吲哚美辛(Indomethacin)、马来酸氯苯那敏(Chlorpheniramine Maleate)、奥美拉唑(Omeprazole)、氟尿嘧啶(Fluorouracil)、诺氟沙星(Norfloxacin)、青霉素(Benzylpenicillin)、维生素B6（Vitamin B6）等等。这些代表性的药物为本章衍生物的合成提供参考，本研究尝试引入杂环作为苯环的电子等排体来替代。依据化合物H2和H8衍生物活性和取代基的关系同时借鉴本课题组其他实验中以杂环替代苯环会提高化合物的细胞毒活性的结果，本研究内容合成主要考虑以含N、O、S的杂环替代化合物H8中的A环或C环，全新合成含杂环或杂原子的联三苯类似物，总共得到16个化合物Z1-Z16。不过，化合物Z8-Z15本身活性虽然不高，但是还是有希望在脱甲基后表现出较好活性。以化合物H2为代表的联三苯类化合物是新型的TOP抑制剂，经过结构改造得到的衍生物部分表现较强的活性。不过，这类化合物水溶性差，口服生物利用度低，所以今后还需在这些方面进行改进。以化合物H8为代表的联三苯是新型的TOPⅡα的选择性抑制剂。不过目前合成的衍生物的活性还没有得到较大的提高，今后有待进一步结构优化。收起

关键词 : 抗肿瘤药天然药物拓扑异构酶生化药理