中国科学技术信息研究所--国家工程技术数字图书馆

[学位论文] 尚杰河南大学 2008年硕士导师: 李建伟共44页

摘要 : 新闻内参是我国新闻队伍中的一支特殊“兵种”。一般意义上的新闻(公开报道)被认为是党和政府的“喉舌”，主要的职能是将党的方针、路线以及新闻事实传播给广大受众，信息往往是从上层流向普通受众；而内参则被看作是党和政府的“耳目”，职能更多的... 展开新闻内参是我国新闻队伍中的一支特殊“兵种”。一般意义上的新闻(公开报道)被认为是党和政府的“喉舌”，主要的职能是将党的方针、路线以及新闻事实传播给广大受众，信息往往是从上层流向普通受众；而内参则被看作是党和政府的“耳目”，职能更多的是收集舆情，为各级领导决策提供依据，信息往往是从下层流向上层。新闻内参同样是由通讯社、电台、电视台、报社等各级媒体单位提供，但其在编印、分发、目标等方面都与公开报道有所区别。这种区别一方面为内参蒙上了神秘的面纱，以至于其内容、功能都不容易被接触和把握，另一方面又赋予了内参更多的优越性，决定了其在反映敏感问题、热点问题上的便利。我国的新闻内参机制是伴随着中国共产党的成长壮大而逐步完善的。从中国共产党发轫的瑞金时期开始萌芽，到今天建立起以新华社为代表的多层级、多样化的内参体系，新闻内参的发展经历了一个漫长的历史过程。它之所以能够在中国出现并获得长足发展，是由我国的政治体制、新闻事业属性和国情决定的。新闻内参在中国的建立和发展中发挥了无可替代的作用。它凭借印发环节少、传送迅速、针对性强等优越性以及被赋予的特许权，发挥着巨大作用：反映不成熟的探索和经验，为经济、社会发展提供决策；反映关系国计民生、人民群众强烈关注的热点和难点，促使民间关注上升为党和政府的意志；全面反映改革发展深层次问题，进行舆论监督。它冲开了当前新闻体制下公开报道的诸多“禁区”，弥补了公开报道所缺失的部分功能，为媒体规避了一定风险，也避免了公开报道带来的混乱。从上世纪90年代中期开始，随着社会生活尤其是政治生活开放的程度越来越大，社会与民众对信息公开的要求不断增强。媒体也从单一的党报党刊，政府管理的电台、电视台发展成为投资主体多元化、多头管理的机构，媒体竞争的激烈使众多突发性事件、敏感性事件不再仅仅依靠新闻内参，而是更多地通过公开报道反映出来。加上近些年网络媒体的兴起，给内参的保密和操作都带来了挑战。笔者认为，新闻内参要更集中于反映社会宏观的难点、热点、焦点问题，并加强采编队伍的建设，与公开报道结合起来形成合力，来强化内参机制的无可替代性，保持其健康持续的发展。收起

关键词 : 中国新闻内参

2. 蛋白质免疫印迹WB2.0体系的建立与应用研究

[学位论文] 张柳河北农业大学 2018年硕士导师: 刘国振；尹长城共47页

摘要 : 背景:蛋白质免疫印迹(Western Blot，WB)是重要的基于抗体的蛋白质检测技术，可了解特定蛋白质的丰度及其变化。传统的WB有多种局限性，如人工操作多，试验流程不规范;WB产生的是模拟信号，所以对结果一般只能做定性和相对比较;样品间信号的比较一般是... 展开背景:蛋白质免疫印迹(Western Blot，WB)是重要的基于抗体的蛋白质检测技术，可了解特定蛋白质的丰度及其变化。传统的WB有多种局限性，如人工操作多，试验流程不规范;WB产生的是模拟信号，所以对结果一般只能做定性和相对比较;样品间信号的比较一般是基于总蛋白质浓度的一致性，但总蛋白质浓度的一致性往往难以做到;不同WB间、不同实验室间的WB结果难以相互比较;没有建立研究群体共同接受的可共享的数据库;除蛋白质丰度外，对其它表达特征关注不多。目的:提出WB2.0的概念，总结建立WB2.0体系，在此基础上调查水稻重要蛋白质的表达特征。材料与方法:本研究以水稻蛋白质样品为材料，利用水稻蛋白质特异的抗体，进行免疫印迹分析，使用Lane1D软件采集各样品的信号值，通过设定上样内参、共同内参等进行数据分析。结果:提出了WB流程中重要参数的规范性报告要求，采用Lane1D软件采集样品的信号值，实现了WB分析结果数字化。同一WB内设置上样内参，根据上样内参的信号值按比例折算目的蛋白质的信号值，从而比较不同样品间蛋白质丰度。不同WB间设置共同内参，将共同内参的信号值设定为同一值，其它样品按比例折算即可比较不同WB间样品的丰度。重复试验间按每张WB的总值进行归一化，按比例折算每个样品的信号值，计算平均值和方差，用已知浓度标准样品的信号值绘制标准曲线，得到线性回归方程，根据待测样品的信号值可计算其浓度。结论:定义了WB2.0的概念，初步建立了WB2.0体系，通过设置上样内参实现了同一WB检测中的不同样品信号强度的比较，通过共同内参实现了不同WB检测中样品间信号强度的比较，通过采集WB的数字化信号对样品中蛋白质浓度进行定量比较，在此基础上提出了WB数据库建设的框架，并进行了初步的尝试。收起

关键词 : 蛋白质免疫印迹上样内参共同内参数据库

3. 蕙兰内参基因的筛选与A类花发育基因的表达特性研究

[学位论文] 田云芳河南农业大学 2013年博士导师: 苏金乐共131页

摘要 : 蕙兰(Cymbidium faberi)，花姿秀丽，香味浓郁，具有很高的观赏价值。利用基因工程技术培育出新的花卉品种，是世界观赏园艺植物育种的主要研究热点之一。迄今为止，已经分离和克隆了许多观赏植物相关的花器官发育基因，但是关于蕙兰的研究鲜有报道。... 展开蕙兰(Cymbidium faberi)，花姿秀丽，香味浓郁，具有很高的观赏价值。利用基因工程技术培育出新的花卉品种，是世界观赏园艺植物育种的主要研究热点之一。迄今为止，已经分离和克隆了许多观赏植物相关的花器官发育基因，但是关于蕙兰的研究鲜有报道。本研究以蕙兰为试材，通过同源克隆和RT-PCR，以TUA、TUB、ACT、GAPDH、18S rRNA、UBQ、EF1a作为候选基因，用绝对定量的方法进行内参基因的筛选，再结合RACE技术，从花葶中成功分离了蕙兰CfAP11、CfMADS1花发育相关基因的cDNA全长，并通过相对荧光定量PCR的方法，对这些基因在不同器官及不同发育过程中的时空表达特性进行了分析。同时，构建了CfAP11基因的正义、反义植物表达载体，转化烟草，经过RT-PCR、Southern blot鉴定检测后，得到部分阳性植株。主要研究结果如下： 1．以TUA、TUB、ACT、GAPDH、18S rRNA、UBQ、EF1a作为候选基因进行克隆，绝对定量表达分析后利用GeNorm、Normfinder进行分析，并进行功能基因的进一步验证。综合内参基因筛选的分析，对所有时期所有器官来说，可以选用ACT、UBQ3和GAPDH三个内参基因同时作为内参用于蕙兰其他功能基因相对表达水平的研究，可以得到相对准确的差异表达结果；对于营养期，可选用两个内参基因UBQ2和UBQ3进行基因表达的归一化处理；对于花蕾期，选用ACT和UBQ3即可进行功能基因的表达分析；对于盛花期，在进行归一化处理功能基因的相对差异表达时可以引入ACT、UBQ3和UBQ2三个内参基因；对于营养器官，宜用UBQ2和ACT两个内参基因；对于生殖器官，宜用ACT、UBQ3和UBQ2三个基因做内参进行数据处理；对于根，可用两个基因UBQ2和ACT做为内参；对于叶，可用两个基因ACT和UBQ3同时作为内参进行数据的分析；对于葶，宜用两个基因ACT和UBQ2作为内参即可；对于花，ACT和UBQ2同时作为花器官不同组织的内参基因时基因表达分析较为准确。 2．根据NCBI已知基因的保守序列设计简并引物，采用RT-PCR并结合RACE的方法，从蕙兰的花葶中成功获得了2个花器官发育相关基因，分别命名为CfAP11、CfMADS1，GenBank登录号分别为：JQ031272、KC148540。序列分析表明，这两个基因均含有MADS结构域和植物所特有的K结构域，属于MADS-box基因家族。CfAP11没有C末端保守基序，CfMAADS1有C末端保守基序LPPWML。经过生物信息学分析表明，二者均属于不稳定的亲水性蛋白，三级结构相似。 3．采用相对荧光定量的方法对花发育相关基因CfAP11、CfMADS1在蕙兰不同时期不同器官的时空表达特性进行分析表明，不同的基因在不同时期不同器官中有不同的表达模式，具有一定的组织特异性。 CfAP11在营养期叶中表达较为强烈，可能与花的诱导有关。在花蕾期叶中中度表达，根中表达很弱。很显著的是，CfAP11基因在盛花期子房和花葶中高度积累，其表达水平明显增加，很可能CfAP11基因与蕙兰果实的形成关系密切，且通过花葶向子房中积累，逐渐形成果实。 CfMADS1在营养期叶、根和花蕾期叶器官均有表达，表明该基因与花的诱导和花的起始有关；在花蕾期葶、花蕾中都有较高水平的表达，这可能与花器官的发育和花器官的形成有关，也可能花蕾中该基因的部分mRNA是通过花葶运输而进行表达的；在盛花期叶中高度表达，葶中表达水平也较高，说明盛花期该基因与前两个时期相比得到了较高水平的表达；盛花期子房中也有一定水平的表达，说明该基因以某种机制参与蕙兰果实的形成。 4．成功构建了CfAP11基因的正义、反义植物表达载体，采用叶盘转化法转化烟草，经基因组PCR检测和Southem blot鉴定，初步得到部分阳性植株。收起

关键词 : 蕙兰内参基因花发育基因表达特性

4. 铝毒胁迫下大豆内参基因的筛选及相关基因表达分析

[学位论文] 侯高杰广西大学 2015年硕士导师: 董登峰共89页

摘要 : 大豆(Glycine max L.，soybean)是豆科植物，在人类的生产、生活中起着重要的作用。研究表明在广西地区影响作物高产的主要因素是酸性土壤，而铝毒是酸性土壤的主要作用因子。在对大豆中ALMT和MATE基因、谷胱丙肽代谢相关基因以及胼胝质代谢相关基因表... 展开大豆(Glycine max L.，soybean)是豆科植物，在人类的生产、生活中起着重要的作用。研究表明在广西地区影响作物高产的主要因素是酸性土壤，而铝毒是酸性土壤的主要作用因子。在对大豆中ALMT和MATE基因、谷胱丙肽代谢相关基因以及胼胝质代谢相关基因表达分析时需要用到内参基因作校准。而近几年的研究表明，没有任何一个内参基因在所有的实验条件下都稳定表达，因此在实验中需要对内参基因的稳定性进行验证。本实验以巴西10号（简称BX10）和本地2号（简称BD2）大豆为材料，采用1/5 Hoagland水培法对大豆进行0 mmol/L（对照）、0.5 mmol/L AlCl3处理，取处理6h、2d和12d的大豆根尖做材料，筛选出铝毒胁迫下大豆22个内参基因(18s rRNA、ABC、ACLB-2、 Actin、 CRK、CYP、ELF1A、ELF1B、F-box、G6PDH、Letin、MTP、Pept_S16、Peptidase_S10、PP2A、RBO、SUBI-2、TIF、TUB、UBC2、UNK1、UNK2)中稳定表达的基因，用ΔCt值分析、GeNorm、NormFinder和BestKeeper这四种方法对内参基因进行分析，结果如下: (1)用ΔCt值分析法分析内参基因的稳定性，在所有的样品中MTP基因稳定性最好，ABC基因是最不稳定的基因;(2)用GeNorm软件分析内参基因的结果为:在所有的样本里面最稳定的是Peptidase_S10和MTP，最不稳定的是UNK1，分别对基因在BX10和BD2品种表达进行分析，结果显示，在BX10里面最稳定的是Peptidase_S10和CYP基因，最不稳定的是UNK1，在BD2里面最稳定的是RBO和UBC2，最不稳定的基因是ABC;(3)用NormFinder软件分析的结果为:对整体样本进行分析时结果显示，UBC2基因在整体样本中表达最稳定;UNK1在整体样本中的表达是最不稳定的。对BX10的样本进行分析结果发现，MTP基因在BX10样本中的表达很稳定，UNK1基因BX10样本中的表达最不恒定;对BD2样本进行分析，结果显示ELF1A基因在BD2的样品中表达最稳定，Letin基因在BD2中是最不稳定的;(4) BestKeeper法分析结果为:在整体样本中最稳定的是Pept_S16稳定的，最不稳定的是ABC，在BX10里面最稳定的是TIF，最不稳定的是UNK1，在BD2样品里面最稳定的是F_box，最不稳定的是ABC。选用MTP和UBC2这两个基因作为内参基因校准ALMT和MATE基因、谷胱丙肽代谢相关基因(hGSHS、hPCS、γ-ECS、GPX、 GR、GST)以及胼胝质代谢相关基因(CalS2、CalS3、CalS5、CalS7、CalS8、CalS9、CalS10、CalS11、CalS12、BG1、BG2)的表达，结果表明ALMT、GST、CalS7、CalS8等基因在铝毒胁迫下的表达与对照相比变化明显，说明这些基因参与了植物的耐铝机制。以不同的基因为内参时发现，同一个基因的在相同的样本中的表达结果存在着差异，因此在分析基因表达时使用多个内参基因会使结果更可靠。收起

关键词 : 大豆内参基因基因表达铝毒胁迫

5. 黄瓜CsFBXL基因启动子的克隆及黄瓜生长育中实时荧光定量PCR分析内参基因筛选

[学位论文] 李楠楠河南农业大学 2015年硕士导师: 李建吾共74页

摘要 : FBXL亚家族是F-box蛋白中的一个大家族，研究表明FBXL亚家族的不同成员参与经历了蛋白泛素化蛋白水解途径，对植物生长发育及生物和非生物胁迫响应发挥着重要作用。CsFBXL是FBXL亚家族中的一员，经初步的研究结果表明该CsFBXL的转录表达可能受激素和盐... 展开 FBXL亚家族是F-box蛋白中的一个大家族，研究表明FBXL亚家族的不同成员参与经历了蛋白泛素化蛋白水解途径，对植物生长发育及生物和非生物胁迫响应发挥着重要作用。CsFBXL是FBXL亚家族中的一员，经初步的研究结果表明该CsFBXL的转录表达可能受激素和盐胁迫等因素的影响，对这些因素的诱导有不同程度的应答，但对这些诱导机制还不清楚。所以为了进一步的研究CsFBXL基因受逆境胁迫诱导机制，本研究从黄瓜基因组DNA中成功克隆分离出CsFBXL基因相应的启动子序列，并且利用农杆菌介导烟草叶片瞬时表达系统，通过缺失体进一步分析CsFBXL对不同逆境胁迫应答和可能的顺式作用元件。随着黄瓜生长发育分子生物学机制的研究深入，对于基因表达的探索也由定性分析阶段发展到定量分析阶段。基因表达模式检测都倾向 qRT-PCR应用技术检测，为获取精确的qRT-PCR实验结果，选适合的内参基因很关键。但是内参基因在不同的植物和不同的实验处理等条件下的表达都不是恒定的。因此，使用 qRT-PCR前，需对内参基因进行表达稳定的验证评估。主要研究结果如下： 1.根据已测序完成的黄瓜基因组序列和CsFBXL基因序列，使用DNMAN软件分析，预测启动子序列。采用PCR技术获得CsFBXL基因上游的启动子全长序列2.2kb。 2.通过使用plantCARE等数据库分析分离启动子元件，结果显示，该启动子含有TATA-box和CAAT-box等核心启动子区域，且TATA-box位于转录起始位点的上游-30bp处，符合真核基因启动子的特点。同时该启动子还含有AE-box、ARE、CGTCA-motif、P-box、SARE等元件。 3.为进一步分析上述启动子元件作用机制，使用不同片段长度的启动子片段区域（232bp、551bp、849bp、1518bp、2.2kb）分别替代Pcambia1301表达载体上的CaMV35S，构建不同长度片段的表达载体，分别为 CsFBXLp232、CsFBXLp551、CsFBXLp849、CsFBXLp1518和CsFBXLp2200。 4.使用农杆菌介导的烟草叶片瞬时表达系统结果显示：启动子全长区域片段在SA和MeJA诱导下可强烈激活诱导报告基因GUS基因；同时存在SA(TCA-element)和MeJA(CGTCA-motif)元件的区域片段在SA和MeJA的诱导下可强烈诱导GUS基因表达；启动子全长序列存在干旱元件MBS时，在PEG-6000和NaCL处理下可诱导GUS基因表达，当缺失干旱元件MBS时，则其GUS活性不表达；启动子全长序列在低温诱导时，则不足于诱导GUS表达或表达较弱，而在缺失了SA元件和其他一些元件时，位于上游-534bp的干旱元件LTR反而诱导了GUS报告基因；启动子全长区域在高温诱导下，不足于诱导GUS的表达，当缺失了其他元件只有MeJA(CGTCA-motif)存在时，反而诱导了GUS表达，这与MeJA可延缓高温胁迫。 5. geNorm-M软件分析，在根样品中，EF1a-1、ACT和UB1-ep是最合适的内参基因；在叶片样品中，TUA-1、TUA和ACT3是合适的内参基因；在果实样品中分析显示，UBQ、UB1-ep和ACT2是最合适的内参基因；在种子样品中分析显示，TUA-1、UBQ和ACT3是最合适的内参基因。 6. NormFinder软件分析，UB1-ep、ACT3和TUA-1分别是根、茎和叶片样品的最合适的内参基因；TUA-1、ACT3和EF1a-1分别是花、果实和种子样品的最合适的内参基因。 7.Stabillty Index软件分析，ACT1是整个生长发育期最合适的内参基因。收起

关键词 : 黄瓜生物学机制 CsFBXL基因内参基因

6. 辣椒根腐疫病抗性基因的标记加密及候选基因分析

[学位论文] 程雪丽华中农业大学 2016年硕士导师: 李颖;叶志彪共67页

摘要 : 由辣椒疫霉菌（Phytophthora capsici）引起的辣椒疫病（Phytophthora blight）是一种毁灭性的土传病害，在世界范围内传播，是导致辣椒减产的主要因素之一。广东地区由于高温高湿气候条件的影响，辣椒疫病尤为严重，一旦爆发，就能导致辣椒大面积绝收... 展开由辣椒疫霉菌（Phytophthora capsici）引起的辣椒疫病（Phytophthora blight）是一种毁灭性的土传病害，在世界范围内传播，是导致辣椒减产的主要因素之一。广东地区由于高温高湿气候条件的影响，辣椒疫病尤为严重，一旦爆发，就能导致辣椒大面积绝收。辣椒疫病根据病原菌侵染部位的不同分为根腐（root rot）、果腐、（fruit rot）茎枯（stem blight）和叶枯（foliar blight）等不同症状，其中，辣椒根腐疫病（Phytophthoraroot rot）的发生通常直接导致植株不可逆死亡，对辣椒生产的损害最为严重。国内外学者研究结果表明根腐疫病的抗性遗传机制从广义上可分为2种类型，分别为数量抗性和特异抗性。数量抗性表现为多基因控制，目前多项研究结果鉴定并定位的主效根腐疫病抗性基因位于辣椒第5号染色体；特异抗性为单基因控制，表现为对某种或少数几个特定生理小种具有完全抗性，而对其它生理小种不具有抗性。目前为止，国内外还未见根腐疫病特异抗性基因定位的报道。前期，本课题组从国外引进国际公认辣椒抗疫病材料CM334和高世代纯合感病材料 NMCA10399，对根腐疫病抗性遗传规律的研究结果表明：在广东省辣椒疫霉菌优势生理小种 Byl4（Race3）侵染下，根腐疫病抗性性状为显性单基因控制（李智军等2008）。随后，基于SLAF-seq技术将抗性基因定位在辣椒第10号染色体末端约2.6 Mb区域内。本试验在此基础上利用BC1F1群体，并加密标记筛选重组株，进一步将抗性基因限定在1.5Mb的物理距离内，接下来对该区域内基因进行生物信息学分析，并在辣椒疫霉菌胁迫条件下对预测到的抗病相关基因进行基因表达分析，寻找差异表达基因；另外，本试验还对10个常用内参基因的稳定性进行了评价，筛选出了辣椒疫霉菌胁迫条件下最适合用于辣椒RT-qPCR的内参基因。主要结论如下： 1、在前期研究基础上，在2.6 Mb区间内筛选到SSR多态标记P52-11-34，利用该标记及其它10个现有的连锁标记分析122株BC1F1群体的基因型，并结合Byl4菌株灌根接种后的表型调查，将根腐疫病抗性基因进一步定位在标记 P52-11-34和P52-11-41之间约1.5 Mb的范围内，与两侧相邻标记的遗传距离分别为0.3 cM和1.1 cM。 2、选择了10个常用内参基因（ACT、UBI-1、GAPDH、UBI-3、EIF5A2、β-TUB、α-TUB、EF1-α、UBQ、TEF1α），以 CM334和NMCA10399在疫霉菌处理及无菌水处理后不同时间点（0 h、12 h、24 h、36 h、48 h）所取幼苗根部的cDNA为模版，利用RT-qPCR方法分析了这10个基因表达差异，并通过geNorm、NormFinder和BestKeeper三个软件进行内参稳定分析，最终确定EF1-α为疫霉菌胁迫条件下表达最稳定的内参基因。 3、对定位区段内基因进行生物信息学分析，共预测到94个基因，其中有26个抗病相关基因。在疫霉菌灌根接种后不同时间点（0 h、12 h、24 h、36 h、48 h）取CM334和NMCA10399幼苗根部，以其cDNA为模版，以无菌水处理为对照，EF1-α为内参，通过RT-qPCR对26个抗病相关基因进行表达分析，结果表明，在26个抗病相关基因中，有8个基因（CA10g20770、CA10g20470、CA10g20540、CA10g20570、CA10g20630、CA10g20740、CA10g20750和CA10g21040）在抗病材料CM334接菌处理后表达量上调，有1个基因（CA10g21120）在感病材料NMCA10399接菌处理后表达下调，推测这9个基因可能参与辣椒抗疫病反应过程，或为目标候选基因。收起

关键词 : 辣椒根腐疫病分子标记内参基因

7. 檀香倍半萜合成调控机制的研究

[学位论文] 闫海锋中国科学院大学 2018年博士导师: 马国华共139页

摘要 : 檀香为檀香科檀香属(Santalum)植物的总称，是分布于太平洋热带地区的半寄生常绿小乔木。檀香是世界上最珍贵林木之一，其经济价值最高的部分是心材，具有芳香气味并可提取精油。檀香精油的主要成分是伐-檀香醇、β-檀香醇、epi-β-檀香醇、α-exo-香... 展开檀香为檀香科檀香属(Santalum)植物的总称，是分布于太平洋热带地区的半寄生常绿小乔木。檀香是世界上最珍贵林木之一，其经济价值最高的部分是心材，具有芳香气味并可提取精油。檀香精油的主要成分是伐-檀香醇、β-檀香醇、epi-β-檀香醇、α-exo-香柠檬醇和甜没药醇等倍半萜类化合物。目前，檀香倍半萜合成的调控机制并不清楚，本研究主要围绕这个科学问题而展开，并取得以下研究成果: 1.为了筛选檀香实时荧光定量PCR(RT-qPCR)研究中稳定表达的内参基因，首先对已经公布的檀香不同组织的转录组数据库进行了分析，初步筛选了包括檀香Actin基因在内的13个候选内参基因。以七年生檀香的根、茎、叶片和愈伤组织以及分别以水杨酸(SA)、赤霉酸(GA3)和茉莉酸甲酯(MeJA)处理后的愈伤组织为材料，利用geNorm、NormFinder、BestKeeper和RefFinder计算方法系统筛选和鉴定了檀香不同器官和愈伤组织在不同激素处理下能够稳定表达的内参基因。结果表明:ODD和Fbp在水杨酸处理中、CSA和Fbp3在MeJA处理中、PP2C和Fbp2在GA处理中以及Fbp1和Fbp2在这三种激素处理中分别为最稳定表达的内参基因;FAB1A和PP2C是四种不同组织器官中最稳定表达的内参基因。 2.利用Tail-PCR的方法克隆了檀香油主要倍半萜甜没药烯合成基因SaBS起始密码子ATG上游1390 bp的启动子序列。同时分别在不同顺式作用元件位点进行了截断，分别构建GUS载体并转化拟南芥(Arabidopsis thaliana)，经过筛选获得了相应的转拟南芥纯合体株系。GUS组织化学染色和荧光活性检测表明，SaBS启动子在拟南芥的根、茎秆、叶片、花絮和角果中均有较高的表达活性，并且其表达活性明显受到SA的诱导;在SaBS启动子-978 bp到-404 bp之间的区段GUS活性很低，推测有抑制因子结合元件的存在;起始密码子ATG上游171 bp的片段具有和克隆的全长启动子相同的活性。 3.利用Tail-PCR的方法成功克隆了檀香油主要成分倍半萜α-檀香烯、β-檀香烯、epi-β-檀香烯和α-exo-香柠檬烯合成基因SaSSy起始密码子ATG上游1437bp的启动子序列。同时在不同顺式作用元件位点进行了截断，分别构建GUS载体并瞬时表达烟草，GUS活性检测发现不同长度的启动子序列均具有较强的GUS活性，并且其表达活性显著受到MeJA的诱导;起始密码子ATG上游264 bp的片段具有和克隆的全长启动子相同的活性。 4.对MeJA处理后的檀香愈伤组织进行了转录组测序。共筛选到410个差异表达的基因，其中上调表达基因有294个，下调表达基因有136个。KEGG富集分析发现这些差异基因主要参与了植物激素信号转导、半胱氨酸和蛋氨酸代谢等过程。进一步分析发现MeJA途径相关基因的表达量均出现显著变化，并且檀香主要倍半萜合成基因SaSSy和SaCYP736A167等的表达量显著上调。通过分析，我们筛选了在MeJA途径中可能参与檀香倍半萜合成的调控基因，利用RACE技术成功进行了克隆并命名为SaMYC2a。此基因具有典型的bHLH结构域，与茶树（Camellia sinensis）CsMYC2、长春花（Catharanthus roseus）CrMYC2以及拟南芥(Arabidopsis thaliana)AtMYC2有较近的系统进化关系。亚细胞定位表明SaMYC2a定位于细胞核中。SaMYC2a在檀香的根、心材、叶片和愈伤组织中均有较高水平的表达，并且其表达量受到MeJA的快速诱导。通过构建SaMYC2a超表达载体，分别遗传转化拟南芥AtMYC2的突变体jin1-8和野生型拟南芥植株表明，在jin1-8中过表达SaMYC2a后出现对MeJA较为敏感的表型，说明SaMYC2a能互补AtMYC2的突变体的部分功能;在jin1-8和野生型拟南芥中，SaMYC2a过表达能够提高转化拟南芥植株倍半萜合成酶基因TPS11的表达量，但对TPS21的表达没有显著影响。双荧光素酶报告基因检测表明，SaMYC2a可以结合到SaSSy基因的启动子上，正向调控SaSSy的表达。通过构建SaMYC2a超表达载体，利用基因枪法将该基因轰击到檀香愈伤组织中，通过荧光检测和RT-qPCR分析表明，SaMYC2a在檀香体内可以正调控SaSSy基因的表达。以上结果证明SaMYC2a是SaSSy基因的直接调控基因，其在JA介导的檀香倍半萜合成过程中发挥着重要作用。收起

关键词 : 檀香倍半萜转录调控内参基因

8. 水芹基因组研究及非生物胁迫下的响应因子分析

[学位论文] 蒋倩南京农业大学 2019年博士导师: 熊爱生共131页

摘要 : 水芹(Oenanthe javanica (BI.)DC.)是一种具有药用价值的多年生水生植物，隶属于伞型科水芹属，且富含蛋白质、膳食纤维、维生素和矿质元素。此外，水芹病虫害发生较少，对不同环境适应能力强。目前对水芹的研究主要集中于栽培方法和药理活性的探索，... 展开水芹(Oenanthe javanica (BI.)DC.)是一种具有药用价值的多年生水生植物，隶属于伞型科水芹属，且富含蛋白质、膳食纤维、维生素和矿质元素。此外，水芹病虫害发生较少，对不同环境适应能力强。目前对水芹的研究主要集中于栽培方法和药理活性的探索，缺少基因、miRNA等分子水平的研究。随着高通量测序技术的快速发展，基因组、转录组、小RNA、降解组、表达谱等大规模测序方法已广泛应用到了对蔬菜作物的遗传信息及生物量研究上。本研究主要内容如下: 1.在HiSeq2000测序平台上进行水芹基因组测序，构建水芹基因组数据库。基因组组装大小为1.28Gb，预测基因42，270条，其中93.92％的基因获得了功能注释。与其它物种的进化分析显示，水芹和胡萝卜的进化距离最近。分析基因家族扩增情况，发现水芹中有25个基因家族发生了扩增。 2.比较分析了非生物胁迫(冷、热、盐、干旱)和激素处理(赤霉素、水杨酸、茉莉酸甲酯、脱落酸)下水芹内参基因的表达稳定性。针对八个处理分别筛选了合适的内参基因。分组分析中:非生物胁迫下，ACT7和PP2A稳定性最好;激素处理后，PP2A和SAND稳定性最好。虽然PP2A在所有处理样本中的稳定性最好，但在特定处理条件下并非最稳定的内参基因。最后采用盐胁迫相关基因M6PR验证了盐胁迫下内参基因的选择是十分合适的。 3.识别水芹miRNA及其靶基因，挑选了其中10个miRNA及其靶基因，采用qPCR方法检测分析它们在高温、低温、干旱和盐胁迫下的表达相关性。发现Oja-miR49通过mRNA降解抑制了oja-16563基因的表达，Oja-miR37则通过翻译抑制抑制了与花发育相关的oja-36045基因的表达。 4.克隆、分析水芹和芹菜中的Lhcb1基因，并检测了高温、低温、干旱和盐胁迫下植物的光合作用及Lhcb1基因的表达。发现水芹Lhcb1基因表达以下调为主，而三个芹菜品种中的Lhcb1基因均有不同程度的上调。芹菜的光合作用受到胁迫的影响，而水芹的光合作用变化较小，可见水芹对环境的适应能力较好。水芹和芹菜中的Lhcb1基因序列相似性极高，但在胁迫下的基因表达与光合作用强度变化差异却很大。可见Lhcb1基因确实在植物抗非生物胁迫中发挥了作用。结合已有的研究我们推测Lhcb1基因的单核苷酸多态性显著影响了其功能表达及植物最终的性状。 5.观察水芹在不同水分环境中形态结构和分子水平的差异，发现水芹对水分胁迫有明显响应。水分的缺失导致植物发生了以下变化:植株绿色加深、叶柄变紫色、根纤维增多、木质部快速生长、淀粉粒增多。光合作用通路中的LHCP基因和核糖体通路中的基因多数均检测出表达下调。为应对水分胁迫，miR408下调，减少了对Oja15472基因表达的抑制，使其表达量上升。Oja47040基因则受到miR171的调控，与叶绿素积累和分枝发育有关。收起

关键词 : 水芹内参基因非生物胁迫

9. 梭梭内参基因的克隆与筛选

[学位论文] 杜辉辉新疆农业大学 2015年硕士导师: 张桦共65页

摘要 : 梭梭（Haloxylon ammodendron）是一种在沙地中生长的防风固沙植物，具有非常强的抗逆特性。目前人们对梭梭的研究已逐渐从其生态学与生物学方面转向分子水平，但是对于其分子水平的研究还比较落后。要研究梭梭的生长发育和抗逆分子调控机制，就必须要... 展开梭梭（Haloxylon ammodendron）是一种在沙地中生长的防风固沙植物，具有非常强的抗逆特性。目前人们对梭梭的研究已逐渐从其生态学与生物学方面转向分子水平，但是对于其分子水平的研究还比较落后。要研究梭梭的生长发育和抗逆分子调控机制，就必须要有相应条件下表达稳定的内参基因作为参照，因此研究不同内参基因在不同条件下的表达稳定性，从而针对不同逆境条件筛选合适的内参基因，同时建立优化的实时定量表达体系，对研究梭梭的逆境分子机制具有重要的理论和现实意义。本研究根据梭梭转录组测序结果分析所得内参基因的部分序列设计荧光定量PCR引物，利用半定量及荧光定量PCR分析了梭梭不同组织及不同逆境胁迫下的内参基因的表达情况。具体的研究如下: (1)根据梭梭的转录组测序结果，分析了多条内参基因，最终筛选出了其中的8条内参基因作为研究对象，并根据拼接得到的核酸序列设计引物克隆内参基因序列。将所克隆的梭梭各内参基因与其他植物对应的内参基因进行同源性比对，发现它们与其它植物对应的内参基因的相似性均在80％以上，说明所选取的梭梭这8条内参基因具有高度的保守性，符合对内参基因选取的基本要求。并在此研究基础上，获得了HaACT1和HaACT2全长cDNA和基因组DNA序列。本研究作为梭梭内参基因的基础性研究，为后续实验提供了比较准确的数据信息，同时也为梭梭中其他内参基因的全长cDNA序列和基因组DNA序列的获得奠定了基础。 (2)对选取的梭梭8个内参基因设计荧光定量PCR引物，以不同基因的质粒标准品为模板，按10倍系列稀释为8个浓度梯度，建立了实时荧光定量PCR反应最优化体系。以实验所得的各质粒稀释品的Ct值为纵坐标、以不同质粒浓度拷贝数的对数为横坐标绘制标准曲线。结果表明，梭梭各内参基因的标准曲线较为理想，线性关系较好，可用于后续实验数据的分析。 (3)对梭梭内参基因在不同组织中的表达量进行半定量PCR分析。结果表明，这8个内参基因在梭梭同化枝、花、根、种子中均能够表达。对各种非生物胁迫下的梭梭各内参基因进行绝对荧光定量PCR实验，并运用生物统计学软件geNorm、BestKeeper、NormFinder综合分析了不同逆境胁迫下内参基因表达稳定性。结果表明，干旱胁迫、高温胁迫、高盐胁迫、低温胁迫及伤害胁下，梭梭最适内参基因分别为:Ha18SrRNA、Ha TUA5及HaUBQ10; Ha18SrRNA和HaGAPDH; HaACT7和HaUBQ10; HaACT1和HaTUA5; HaTUA5和HaGAPDH。收起

关键词 : 梭梭内参基因基因克隆基因筛选

10. 度量重构的分层求解

[学位论文] 汪世敏云南大学 2010年硕士导师: 赵越共35页

摘要 : 重构是计算机视觉模拟人眼功能所需要完成的最后一步，即恢复景物的三维信息。它是一个研究非常活跃的重要领域，被广泛应用于工业检测、军事、医学、航空航天、娱乐等多个领域。在摄像机内参数不变的情况下，重构的框架主要有两大类：第一类基于基本... 展开重构是计算机视觉模拟人眼功能所需要完成的最后一步，即恢复景物的三维信息。它是一个研究非常活跃的重要领域，被广泛应用于工业检测、军事、医学、航空航天、娱乐等多个领域。在摄像机内参数不变的情况下，重构的框架主要有两大类：第一类基于基本矩阵和对极几何来计算内参数，常用的方法是在两两图像之间建立Kruppa方程，解出摄像机内参数；第二类主要是分层逐步自标定重构，即首先对序列图像做射影重构，在此基础上在进行仿射重构和欧式重构。本文在重构的一般性框架的基础上，主要研究了基本矩阵的求解问题，无穷远单应的求解问题和二种框架下的求出的内参数和绝对二次曲线结果比较问题。通过对参考文献的分析发现：传统的八点算法并不能保证基本矩阵秩为2；求解无穷远单应需要求解消失点和消失线；二种求解框架求出的结果是否相似或者一致。主要的研究结果有： 1、改进线性计算基本矩阵的方法。抓住线性算法和非线性方法的优点和缺陷，提出了一种基本矩阵秩为2的线性求解方法，该方法首先利用了改进了的八点算法思想，先将图像匹配点的坐标归一化，然后结合基本矩阵秩为2的特性，提出基本矩阵秩为2的等价基本矩阵模型，最后依据对极点约束提供的几何关系，给出求解方程，采用线性的方法求解出参数和极点坐标，最后进行实验比较。 2、改进无穷远单应的计算。对对极几何进行了分析，得到了极点对无穷远单应的约束方程，这个方程体现了无穷远单应和极点、对应匹配的图像点之间的关系。并依据此约束方程求解出无穷远平面的单应矩阵。与参考文献中的方法相比，该方法避免了求解消失点和消失线，不需要知道有限远平面的信息，而且通过二幅图像就可求出无穷远的单应。仿射重构表明该算法真实可性，通过对图像添加噪声，内参数的绝对误差随噪声水平的变化曲线说明了该算法的鲁棒性较高。 3、二种框架下的重构比较。在实验条件不变的情况下，对二种框架下求解出的内参数和绝对二次曲线比较发现，这二种框架下求解出的结果相似。收起

关键词 : 度量重构内参数基本矩阵无穷远单应