摘要: 背景:蛋白质免疫印迹(Western Blot，WB)是重要的基于抗体的蛋白质检测技术，可了解特定蛋白质的丰度及其变化。传统的WB有多种局限性，如人工操作多，试验流程不规范;WB产生的是模拟信号，所以对结果一般只能做定性和相对比较;样品间信号的比较一般是... 展开 背景:蛋白质免疫印迹(Western Blot，WB)是重要的基于抗体的蛋白质检测技术，可了解特定蛋白质的丰度及其变化。传统的WB有多种局限性，如人工操作多，试验流程不规范;WB产生的是模拟信号，所以对结果一般只能做定性和相对比较;样品间信号的比较一般是基于总蛋白质浓度的一致性，但总蛋白质浓度的一致性往往难以做到;不同WB间、不同实验室间的WB结果难以相互比较;没有建立研究群体共同接受的可共享的数据库;除蛋白质丰度外，对其它表达特征关注不多。 目的:提出WB2.0的概念，总结建立WB2.0体系，在此基础上调查水稻重要蛋白质的表达特征。 材料与方法:本研究以水稻蛋白质样品为材料，利用水稻蛋白质特异的抗体，进行免疫印迹分析，使用Lane1D软件采集各样品的信号值，通过设定上样内参、共同内参等进行数据分析。 结果:提出了WB流程中重要参数的规范性报告要求，采用Lane1D软件采集样品的信号值，实现了WB分析结果数字化。同一WB内设置上样内参，根据上样内参的信号值按比例折算目的蛋白质的信号值，从而比较不同样品间蛋白质丰度。不同WB间设置共同内参，将共同内参的信号值设定为同一值，其它样品按比例折算即可比较不同WB间样品的丰度。重复试验间按每张WB的总值进行归一化，按比例折算每个样品的信号值，计算平均值和方差，用已知浓度标准样品的信号值绘制标准曲线，得到线性回归方程，根据待测样品的信号值可计算其浓度。 结论:定义了WB2.0的概念，初步建立了WB2.0体系，通过设置上样内参实现了同一WB检测中的不同样品信号强度的比较，通过共同内参实现了不同WB检测中样品间信号强度的比较，通过采集WB的数字化信号对样品中蛋白质浓度进行定量比较，在此基础上提出了WB数据库建设的框架，并进行了初步的尝试。 收起