摘要: 由辣椒疫霉菌（Phytophthora capsici）引起的辣椒疫病（Phytophthora blight）是一种毁灭性的土传病害，在世界范围内传播，是导致辣椒减产的主要因素之一。广东地区由于高温高湿气候条件的影响，辣椒疫病尤为严重，一旦爆发，就能导致辣椒大面积绝收... 展开 由辣椒疫霉菌（Phytophthora capsici）引起的辣椒疫病（Phytophthora blight）是一种毁灭性的土传病害，在世界范围内传播，是导致辣椒减产的主要因素之一。广东地区由于高温高湿气候条件的影响，辣椒疫病尤为严重，一旦爆发，就能导致辣椒大面积绝收。辣椒疫病根据病原菌侵染部位的不同分为根腐（root rot）、果腐、（fruit rot）茎枯（stem blight）和叶枯（foliar blight）等不同症状，其中，辣椒根腐疫病（Phytophthoraroot rot）的发生通常直接导致植株不可逆死亡，对辣椒生产的损害最为严重。国内外学者研究结果表明根腐疫病的抗性遗传机制从广义上可分为2种类型，分别为数量抗性和特异抗性。数量抗性表现为多基因控制，目前多项研究结果鉴定并定位的主效根腐疫病抗性基因位于辣椒第5号染色体；特异抗性为单基因控制，表现为对某种或少数几个特定生理小种具有完全抗性，而对其它生理小种不具有抗性。目前为止，国内外还未见根腐疫病特异抗性基因定位的报道。 前期，本课题组从国外引进国际公认辣椒抗疫病材料CM334和高世代纯合感病材料 NMCA10399，对根腐疫病抗性遗传规律的研究结果表明：在广东省辣椒疫霉菌优势生理小种 Byl4（Race3）侵染下，根腐疫病抗性性状为显性单基因控制（李智军等2008）。随后，基于SLAF-seq技术将抗性基因定位在辣椒第10号染色体末端约2.6 Mb区域内。本试验在此基础上利用BC1F1群体，并加密标记筛选重组株，进一步将抗性基因限定在1.5Mb的物理距离内，接下来对该区域内基因进行生物信息学分析，并在辣椒疫霉菌胁迫条件下对预测到的抗病相关基因进行基因表达分析，寻找差异表达基因；另外，本试验还对10个常用内参基因的稳定性进行了评价，筛选出了辣椒疫霉菌胁迫条件下最适合用于辣椒RT-qPCR的内参基因。主要结论如下： 1、在前期研究基础上，在2.6 Mb区间内筛选到SSR多态标记P52-11-34，利用该标记及其它10个现有的连锁标记分析122株BC1F1群体的基因型，并结合Byl4菌株灌根接种后的表型调查，将根腐疫病抗性基因进一步定位在标记 P52-11-34和P52-11-41之间约1.5 Mb的范围内，与两侧相邻标记的遗传距离分别为0.3 cM和1.1 cM。 2、选择了10个常用内参基因（ACT、UBI-1、GAPDH、UBI-3、EIF5A2、β-TUB、α-TUB、EF1-α、UBQ、TEF1α），以 CM334和NMCA10399在疫霉菌处理及无菌水处理后不同时间点（0 h、12 h、24 h、36 h、48 h）所取幼苗根部的cDNA为模版，利用RT-qPCR方法分析了这10个基因表达差异，并通过geNorm、NormFinder和BestKeeper三个软件进行内参稳定分析，最终确定EF1-α为疫霉菌胁迫条件下表达最稳定的内参基因。 3、对定位区段内基因进行生物信息学分析，共预测到94个基因，其中有26个抗病相关基因。在疫霉菌灌根接种后不同时间点（0 h、12 h、24 h、36 h、48 h）取CM334和NMCA10399幼苗根部，以其cDNA为模版，以无菌水处理为对照，EF1-α为内参，通过RT-qPCR对26个抗病相关基因进行表达分析，结果表明，在26个抗病相关基因中，有8个基因（CA10g20770、CA10g20470、CA10g20540、CA10g20570、CA10g20630、CA10g20740、CA10g20750和CA10g21040）在抗病材料CM334接菌处理后表达量上调，有1个基因（CA10g21120）在感病材料NMCA10399接菌处理后表达下调，推测这9个基因可能参与辣椒抗疫病反应过程，或为目标候选基因。 收起