摘要: 第一部分抗磷脂抗体在增生性和膜性狼疮性肾炎患者中的作用 目的:抗磷脂抗体(aPLs)是一组以磷脂和/或磷脂结合蛋白为靶抗原的自身抗体总称，以往认为抗磷脂综合征肾病(APSN)是抗磷脂抗体肾损伤最主要的形式，实质为非炎症性血栓性血管病，但aPLs在... 展开 第一部分抗磷脂抗体在增生性和膜性狼疮性肾炎患者中的作用 目的:抗磷脂抗体(aPLs)是一组以磷脂和/或磷脂结合蛋白为靶抗原的自身抗体总称，以往认为抗磷脂综合征肾病(APSN)是抗磷脂抗体肾损伤最主要的形式，实质为非炎症性血栓性血管病，但aPLs在肾小球的免疫性相关炎症性损伤中的作用尚未被充分研究。而狼疮性肾炎(LN)是典型自身免疫复合物性肾炎，本研究以其为研究对象，探讨aPL是否在自身免疫性炎症损伤中发挥作用。 方法:选取2014年7月至2017年12月住院的完成肾活检的LN患者。在肾活检前同一时期获得以下的数据:包括患者的一般特征;尿检指标;血清肌酐等生化指标;血清补体C3等免疫指标;血清IgG、IgA、IgM-aCL:抗β2-GPI抗体和狼疮抗凝物;SLE疾病活动度指数(SLEDAI)等项目。比较增生性LN患者(Ⅲ型和Ⅳ型)和非增生性LN患者(Ⅴ型)的一般特征和临床特征;增生性和非增生性狼疮性肾炎患者各类aPL抗体的阳性率;增生性LN中伴或不伴有aPL抗体患者之间的临床和病理特征。 结果:我们总共分析了75例增生性LN和31例膜性LN患者，发现增生性LN组血肌酐水平和SLEDAI评分更高，有更多的血尿发生率(p值均＜0.001)，两组间aCL抗体检出率(45.3％vs22.7％，p=0.029)和IgG-aCL抗体检出率(40％对12.9％，p=0.007)比较，结果均有显著的差异。增生性LN患者中抗心磷脂抗体阳性者(n=34)与阴性者(n=41)相比，血清补体C3和C4水平更低(p=0.010和P=0.021)和肾组织中沉积的补体C1q有更高的免疫荧光强度(p=0.003)。多元线性回归分析显示aCL抗体为肾组织病理上补体C1q沉积免疫荧光强度的影响因素(P＜0.001)。 结论:我们的研究结果显示抗心磷脂(aCL)抗体，尤其是IgG-aCL抗体可能在增生性LN肾损伤中发挥作用，这一过程可能涉及到补体经典途径的激活。 第二部分TCONS_00483150是一种潜在的SLE新的诊断生物标志物 目的:长链非编码RNA(longnon-codingRNA，lncRNA)是一类长度超过200nt的非编码RNA，具有高度的异质性和多功能性。差异表达的IncRNA参与多种自身免疫性疾病的病理生理反应，第一部分研究中我们发现aPLs在肾小球的自身免疫性相关炎症性损伤中发挥了一定的作用，过程可能涉及补体激活的经典途径，进一步挖掘SLE相关的lncRNA，并鉴定分析候选的差异表达lncRNAs与aPLs及低补体血症等临床特征的的可能相关性，探讨其在SLE中的作用，寻找潜在的SLE新的诊断生物标志物，从lncRNA角度探索调控SLE发生发展的新机制。 方法:2018年1月至2019年7月，入选温州医科大学第一附属医院36名系统性红斑狼疮患者(发现期、训练期和验证期队列);2018年6月至2019年6月，入选64名SLE患者和50名RA患者作为外部验证阶段队列。收集患者的外周血白细胞(PBMCs)在发现阶段用于NGS分析，在训练期、验证和外部验证阶段用于qRT-PCR分析。NGS在发现阶段进行，一微克总RNA的RNA完整性系数大于7用于NGS文库制备。我们对NGS结果进行基因本体富集分析，应用miRanda软件预测lncRNA与靶mRNA关联，通过MiRTarget2、catRAPID组学和Bedtools/blast/Pearson分析差异表达的lncRNAs，荧光定量qRT.PCR分析lncRNAs的表达水平。并研究它们的预后价值和潜在功能。 结果:这项研究共包括244名参与者，分为以下四个阶段的队列:发现阶段(n=20)、训练阶段(n=10)、验证阶段(n=42)和外部验证阶段(n=172)。在发现阶段，我们首先对10例SLE患者(5例稳定期SLE患者和5例活动期SLE患者)和10例HCs的PBMCs进行了下一代测序(NGS)，共检测到12705个lncRNAs，其中143个lncRNAs在SLE患者而非HCs患者中有显著差异表达(adj.p值＜0.05，倍数变化≥2)，其中97个lncRNAs上调，46个下调。聚类筛选以确定与SLE状态相关的lncRNAs，结果显示19个lncRNAs显著上调，12个lncRNAs显著下调。通过训练期队列(5例SLE患者和5例HCs样本)的qRT-PCR分析，评估来自这些PBMC的12个lncRNAs的表达水平，结果显示9个lncRNAs的表达趋势与测序结果相似，其中只有TCONS_00483150(P=0.002)和TCONS_00026072(P=0.022)在训练期队列中SLE患者的表达显著降低。最后两个候选lncRNAs，TCONS_00483150和TCONS_00026072，对验证阶段队列中的42名受试者(8名稳定期SLE患者、13名活动期SLE患者和21名HCs)进行进一步评估，TCONS_00483150在验证期队列中稳定期或活动期SLE患者和HCs之间的表达均有显著差异，TCONS_00026072表达仅在活动期SLE患者和HCs之间差异明显，而在稳定期SLE组和HCs之间则不明显，后续外部验证阶段予排除。最后，本研究在外部验证阶段独立评估TCONS_00483150的诊断作用(172名额外受试者;64名SLE患者、58名HCs和50名RA患者)。结果显示TCONS_00483150可用于鉴别SLE与HCs、类风湿关节炎、活动期/稳定期SLE与HCs。TCONS_00483150用于区分SLE患者和HCs的诊断敏感性和特异性分别为61.90和95.00，结果表明，TCONS_00483150可以作为SLE的诊断生物标志物。进一步与临床特征的分析显示，TCONS_00483150低表达与抗Rib-P抗体阳性和低补体C3水平显著相关，但未发现与aPLs相关。生物信息学分析显示TCONS_00483150与HNRNPA1、FUS和ELAVL1相互作用，TCONS00483150的表达异常可能主要与SLE患者RNA的加工、剪接、转运、翻译以及RNA和蛋白质的代谢有关。 结论:本研究为SLE患者异常表达的lncRNAs提供了转录组范围的概述，通过逐层递进的四个阶段的队列研究，结果显示TCONS_004831500是一种潜在的SLE新的诊断生物标志物，本研究为SLE的发病机制探索提供了新的见解。 收起