摘要: 选题依据：酸枣仁始载于《神农本草经》，具有养心补肝，宁心安神，敛汗，生津之功效。现代药理研究表明酸枣仁具有镇静催眠、抗焦虑、抗抑郁、抗炎和抗惊厥等广泛的药理作用。在天然药物化学分离模式下，已阐明了酸枣仁改善睡眠的部分药效物质。然而... 展开 选题依据：酸枣仁始载于《神农本草经》，具有养心补肝，宁心安神，敛汗，生津之功效。现代药理研究表明酸枣仁具有镇静催眠、抗焦虑、抗抑郁、抗炎和抗惊厥等广泛的药理作用。在天然药物化学分离模式下，已阐明了酸枣仁改善睡眠的部分药效物质。然而，以天然药物化学研究为手段，借鉴化学药品的质量控制模式与中药的整体作用特点不甚吻合，忽略了中药的复杂性与机体的整体性，割裂了化学成分与体内过程的相互关联。多数情况下，中药有效成分需要吸收入血，通过代谢转化生成活性产物后才能发挥整体药效作用。因此，选取有效成分时，应与药效和代谢关联分析才更精准、全面。那么酸枣仁中哪些成分被吸收进入体内，哪些被吸收进入体内的成分整体协调作用于机体的关键靶点等问题还不清楚。作为中医药临床治疗失眠的首选药味，酸枣仁在临床上多以汤剂的形式服用。综上，以酸枣仁水提取物为研究对象，基于体内过程研究其体内成分群，研究结果不仅对揭示酸枣仁治疗失眠的化学基础，且对其质量评价研究具有重要科学意义。 目的：全面表征酸枣仁水提取物口服给予失眠模型大鼠后体内化学成分群，明确体内主要原型成分及代谢产物，探讨不同类型化学成分代谢特点。 研究内容与研究方法：1.酸枣仁水提取物制备及质量评价 参照中药饮片标准汤剂的研究策略，对酸枣仁水提物的制备过程及质量评价进行研究。以酸枣仁水提取物的出膏率，斯皮诺素、酸枣仁皂苷A和B的含量为指标，对酸枣仁的破碎方法、提取时间和干燥方式进行考察，确定了最优的制备工艺；按照药典方法测定酸枣仁饮片及酸枣仁水提取物中指标成分，考察水提取物的转移率和浸膏率；建立了HPLC-UV/ELSD多维指纹图谱对酸枣仁水提取物进行一致性评价；建立了LC-MS/MS法同时测定酸枣仁水提取物中9种指标性成分的方法。 2.基于高分辨质谱的酸枣仁水提取物体内化学成分的深度表征 针对中药多成分体内过程研究缺乏体内成分及其代谢产物对照品的瓶颈问题，探索性地开展了酸枣仁多成分体内代谢过程所需分析新技术和新策略的研究。建立基于UPLCQOrbitrapMS的酸枣仁水提取物体外化学成分研究方法；复制PCPA诱导的大鼠失眠模型，并评价了酸枣仁改善睡眠的药效作用；从样本前处理、色谱质谱条件、数据采集等环节着手，获得高分辨质量数和多级质谱数据；利用特征诊断离子技术，识别靶向化合物并获得其母核信息；以此为基础建立非靶向原型和代谢产物的分析方法；开展了失眠模型大鼠体内复杂成分群研究，并探讨其代谢规律。 3.酸枣仁水提取物中六个主要成分药动学研究 应用UPLCQOrbitrapMS技术，以盐酸巴马汀、大豆苷和黄芪甲苷为内标，建立了酸枣仁水提取物中6种主要化学成分在大鼠体内的测定方法；并将该方法应用于酸枣仁水提取物口服给予正常和PCPA诱导的失眠模型大鼠的药动学比较研究。 研究结果：1.最终优选确定酸枣仁水提取物制备方法为机械粉碎的方式优于铜冲捣碎；加水煎煮两次，煎煮时间每次均为120min为优；提取液制备成冻干粉的形式保存为优。标准化工艺制备的提取物指纹图谱具有极高的相似性，均在0.9以上。10批酸枣仁水提取物的出膏率为19.28～21.96%，指标成分的转移率为64.10～90.11%，符合标准。LC-MS/MS同时测定9种成分的含量测定方法灵敏度高、专属性强。 2.根据所获得化合物以及精确分子量进行化合物分子式预测，结合不同类化合物的质谱裂解规律与多级质谱碎片信息特征，共鉴定了酸枣仁中41种化合物，包括19种黄酮、11种皂苷、9种生物碱和2种其他类型化合物。酸枣仁高剂量组(30g/kg)可显著升高模型大鼠血清中5-HT含量。基于所建立的体内成分分析策略，从失眠模型大鼠尿液中鉴定了30种原型成分和26种代谢产物；通过提取离子流方式鉴定血液中14个原型和17个代谢产物。PCPA致失眠大鼠体内主要发生的代谢反应类型包括氧化、还原、水解、硫酸酯化、葡萄糖醛酸化和甲基化。 3.UPLCQOrbitrapMS(FullMS模式)同时测定大鼠血浆中6种成分的含量测定方法基质效应干扰小，方法灵敏度较高。与正常大鼠相比，斯皮诺素和6'''-阿魏酰斯皮诺素的血浆暴露量减少，而两者的血浆清除率明显增加。此外，与正常组相比，模型组中酸枣仁皂苷A和B的Tmax显著降低，酸枣仁皂苷A的T1/2明显增加。对于乌药碱和木兰花碱而言，与正常组相比，两者的Cmax、AUC0-t和CL有弱的变化趋势，但无显著性差异。失眠模型条件下，显著影响了大鼠对这6个化学成分的吸收和体内暴露量。 结论：通过以上研究，本论文建立了酸枣仁水提取物质量评价方法，为体内过程研究提供了稳定可控的物质基础；在体内外化学成分群对应关系的基础上，提出了LC-HR/MS的靶向化学成分表征策略，为中药体内代谢复杂体系中目标成分的深度表征提供了有益参考；系统表征了血清和尿液中代谢产物，初步阐明了酸枣仁在病理模型条件下体内化学成分群；明确了酸枣仁中三类代表成分的药动学特征，为进一步研究酸枣仁的质量标志物奠定了基础，为构建科学合理的酸枣仁质量标准提供了科学依据。 收起