摘要: 目的：体外环境下，观察重组人生长激素(recombinant human growth hormone，rhGH)对生长激素受体(growth hormone receptor，GHR)不同表达状态的人肝癌细胞系增殖、凋亡及其胞膜表面GHR密度变化的影响，对与肝癌细胞同环境人脐静脉内皮细胞(ECV304)增... 展开 目的：体外环境下，观察重组人生长激素(recombinant human growth hormone，rhGH)对生长激素受体(growth hormone receptor，GHR)不同表达状态的人肝癌细胞系增殖、凋亡及其胞膜表面GHR密度变化的影响，对与肝癌细胞同环境人脐静脉内皮细胞(ECV304)增殖的影响，并初步探索相关机理。 方法：利用体外培养的Bel—7402、HepG2、SMMC7721、QGY—7701、Bel—7405和HCCLM3六种肝癌细胞，和人脐静脉内皮细胞株ECV304，用免疫细胞化学法检测人肝癌细胞系表面GHR的表达。然后把各肝癌细胞系分三组：对照组、rhGH浓度50ng/ml的rhGH1组和250ng/ml的rhGH2组；通过ELISA法、四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法、流式细胞术及荧光染色等手段，观察rhGH对肝癌细胞细胞生长、凋亡、细胞周期比例、IGF—1分泌等的影响；再设立ECV304单独培养组、SMMC—7721/ECV304共培养组和Bel—7402/ECV304共培养组。用上述干预方法/和联合贝伐单抗干预，描绘ECV304细胞生长曲线和流式细胞仪检测ECV304周期比例。分别单独培养SMMC—7721、Bel—7402，用逆转录聚合酶链式反应(RT—PCR)和酶联免疫吸附实验(ELISA)测定肝癌细胞VEGF mRNA表达和蛋白分泌情况；最后选取HepG—2、SMMC7721、和QGY—7701，每株细胞四种处理：未处理组，50ng/mlrhGH干预组，100ng/mlrhGH干预组，200ng/mlrhGH干预组。采用流式、放射性受体分析方法检测rhGH处理后细胞膜表面GHR的表达情况的变化情况。同时行四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法、羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂(CFSE)荧光染色、ELISA法分析不同浓度rhGH对人肝癌细胞系的细胞生长、增殖、IGF—Ⅰ分泌等的影响。 结果：Bel—7402、HepG2细胞过表达GHR，与对照组相比，rhGH体外明显促其分裂增殖，IGF—1分泌量增加(P<0．05)，且与rhGH浓度无关。SMMC7721可疑表达GHR，QGY—7701、Bel—7405和HCCLM3细胞均不表达GHR，rhGH对其细胞分裂增殖及IGF—1分泌变化均无明显影响(P>0．05)；与Bel—7402、SMMC7721分别共培养ECV304细胞与单独培养的ECV304细胞相比，生长速度加快，倍增时间缩短，S期升高(P<0．05)。与对照组比较，rhGH促Bel—7402的VEGF mRNA表达及蛋白分泌水平均增加，并且与ECV304共培养时细胞S期比例显著升高，且呈rhGH浓度依赖(P<0．05)，却未引起细胞株SMMC—7721发生相应变化(P>0．05)。贝伐单抗封闭VEGF，所有实验组均出现ECV304增殖参数下调(P<0．05)，联合高浓度rhGH无法逆转；50、100、200ng/ml rhGH干预后，流式细胞术检测HepG2细胞胞膜表面GHR密度，荧光强度较未处理组明显增加(P<0．05)，放射性受体分析法检测其胞膜表面GHR位点数分别为：8．4350±0．2396、9．3957±0．5143、8．3297±0．3133(10^3/cell)，较空白对照组7．5137±0．5352(10^3/cell)明显增加(P<0．05)；与未处理组比，rhGH干预细胞株SMMC7721及QGY—7701，均未引起胞膜表面GHR密度变化。 结论：体外环境下，rhGH可致过量表达GHR的人肝癌细胞株生长加速、提高其胞膜GHR密度，促其效应因子IGF—Ⅰ、VEGF的分泌增加，并促其同环境生长的血管内皮细胞生长加速；对不表达或微弱表达GHR人肝癌细胞则无类似作用。 收起