摘要: 目的：利用大鼠创伤性脑损伤动物实验和体外大脑皮层神经细胞培养方法，观察神经生长因子对创伤性脑损伤后大脑皮质神经细胞的保护作用并探讨其作用机制，为临床应用NGF治疗创伤性脑损伤提供理论依据。 方法：1.动物实验：30只SD大鼠随机分为对照组... 展开 目的：利用大鼠创伤性脑损伤动物实验和体外大脑皮层神经细胞培养方法，观察神经生长因子对创伤性脑损伤后大脑皮质神经细胞的保护作用并探讨其作用机制，为临床应用NGF治疗创伤性脑损伤提供理论依据。 方法：1.动物实验：30只SD大鼠随机分为对照组、模型组、实验A组(NGF500μg/kg)、实验B组(NGF1000μg/kg)、实验C组(NGF2000μg/kg)，采用Feeney's自由落体撞击法建立中度创伤性脑损伤模型，应用光镜、电镜及末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL染色法)、Bcl-2、Bax免疫组化法分别观察各组大脑皮质神经细胞损伤的情况。2.体外大脑皮层神经细胞培养实验：用原代培养的SD大鼠胎鼠大脑皮质细胞，分为对照组、模型组、实验A组(NGF5μg/L)、实验B组(NGF50μg/L)、实验C组(NGF100μg/L)，采用机械划痕法建立机械损伤模型，各治疗组加入不同剂量的NGF。通过MTT法测定各组细胞代谢情况；应用Nissl's染色观察各组神经细胞形态学改变；采用琼脂糖凝胶电泳法观察各组神经细胞DNA分子水平的变化。 结果：1.动物实验：模型组大鼠大脑皮层神经细胞有明显形态学损伤，TUNEL染色示大脑皮质模型组神经细胞凋亡率为32.5％，而实验B、C组神经细胞结构损伤明显减轻，凋亡细胞率分别为17.2％和15.1％，较模型组明显降低(P＜0.05)；模型组Bcl-2/Bax比值为2.02，实验B、C组分别为2.27和2.36，均较模型组明显提高(P＜0.05)。2.体外大脑皮质神经细胞培养实验：培养10天的神经细胞行机械性损伤，光镜下观察神经细胞皱缩，突起消失，神经网络减少，胞浆内尼氏颗粒减少、溶解、消失；琼脂糖凝胶电泳出现典型的DNA梯状断裂带；给予NGF后，实验B、C组倒置显微镜下及尼氏染色后观察细胞形态结构损伤减轻；MTT比色法数值增高；琼脂糖凝胶电泳无梯状断裂带出现。 结论：给予外源性NGF能够明显减轻创伤性脑损伤后大鼠大脑皮质神经细胞的损伤，其机制可能是通过影响神经细胞的凋亡过程而发挥NGF对神经细胞的保护作用。 收起