摘要: 目的:研究成骨细胞与骨髓基质干细胞在混合培养状态下增殖、成骨能力的改变.从而为组织工程化骨种子细胞探讨一种促进细胞增殖、成骨能力加强的新方法.方法:将胎兔颅骨来源的第3代成骨细胞与母兔坐骨来源的第3代骨髓基质干细胞以及两者以1:1比率混合的... 展开 目的:研究成骨细胞与骨髓基质干细胞在混合培养状态下增殖、成骨能力的改变.从而为组织工程化骨种子细胞探讨一种促进细胞增殖、成骨能力加强的新方法.方法:将胎兔颅骨来源的第3代成骨细胞与母兔坐骨来源的第3代骨髓基质干细胞以及两者以1:1比率混合的细胞在相同条件下进行培养.实验组:取第3代成骨细胞与第3代骨髓基质干细胞以1:1的比例直接混合培养,调整细胞数量,使用于细胞计数的细胞密度为5×10<'4>/孔,用于测定细胞培养液上清中碱性磷酸酶含量、细胞碱性磷酸酶染色阳性率及钙结节计数的细胞密度为2×10<'5>/瓶.开始培养后8d内,每24h测定细胞的数量;培养第3、6、9d时分别测定细胞培养液上清中碱性磷酸酶含量;培养至第7d时行细胞碱性磷酸酶染色,计数细胞染色阳性率;培养至第21d时计数细胞在单位面积(0.5 cm×0.5cm)内形成的钙结节数目.对照组:分别取上述两种细胞在与混合培养细胞相同的条件下进行培养,调整细胞数量,使两种细胞的细胞数量与混合培养细胞总数相同,按测定混合培养细胞指标的方法分别测定该两种细胞的相应指标.将混合培养细胞的有关指标与同期两种对照细胞的相应指标的和的1/2(平均值)进行比较.结果:在培养开始后的8d内各天混合培养细胞的数量均高于相应平均值(p<0.05),培养至第7d时混合培养细胞碱性磷酸酶染色阳性率为74%,明显高于其相应平均值52%(p<0.05).第3、6、9d混合培养细胞培养液上清中碱性磷酸酶含量分别为1.90±0.08金氏单位/100ml、2.24±0.09金氏单位/100ml和2.56±0.03金氏单位/100ml;而相应平均值分别为1.56±0.09金氏单位/100ml、1.89±0.05金氏单位/100ml和2.23±0.04金氏单位/100ml,在各时间点上均是混合培养细胞的实际测得值高于平均值(p<0.05).培养至21d时,混合培养细胞在0.5 cm×0.5cm面积内形成的钙结节数目为9.33±1.03个,高于平均值7.83±1.43个(p<0.05).结论:将第3代的成骨细胞与骨髓基质干细胞以1:1的比例直接混合培养,通过细胞之间的相互作用,可以使其中的一种或两种细胞增殖加快,成骨能力加强.该方法可望成为组织工程化骨构建中促进种子细胞增殖、成骨能力加强的新方法. 收起